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結(jié)核感染t細(xì)胞免疫的四聚體檢測(cè)方法

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結(jié)核感染t細(xì)胞免疫的四聚體檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種結(jié)核感染T細(xì)胞免疫的四聚體檢測(cè)方法,從全血樣本中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞,將其與結(jié)核桿菌特異性抗原一起孵育,當(dāng)外周血中存在針對(duì)結(jié)核桿菌的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞時(shí),結(jié)核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽復(fù)合物結(jié)合,借助生物素-鏈霉親和素系統(tǒng),將MHC-多肽復(fù)合物形成四聚體分子,單個(gè)MHC-多肽四聚體分子與T細(xì)胞表面的多個(gè)TCR結(jié)合,以提高了MHC-多肽復(fù)合物與TCR的親和力和穩(wěn)定性;再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體標(biāo)記有PE熒光染料;最后通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)特異T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)以對(duì)結(jié)核病進(jìn)行輔助診斷,本發(fā)明檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性和產(chǎn)品特異性高、應(yīng)用方便簡(jiǎn)單,安全可靠。
【專(zhuān)利說(shuō)明】結(jié)核感染T細(xì)胞免疫的四聚體檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生命科學(xué)領(lǐng)域,具體為一種針對(duì)結(jié)核感染T細(xì)胞免疫的四聚體檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]目前常用的對(duì)結(jié)核感染T細(xì)胞免疫的檢測(cè)方法有痰涂片檢查、痰培養(yǎng),這種方法的檢測(cè)周期長(zhǎng),痰液培養(yǎng)過(guò)程操作存在一定的傳染風(fēng)險(xiǎn);另外,還有X-ray、CT等檢測(cè)方法,這些方法如果使用過(guò)于頻繁,會(huì)對(duì)病人有一定的損傷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了解決核感染T細(xì)胞免疫檢測(cè)的周期過(guò)長(zhǎng)、安全性差的問(wèn)題,本發(fā)明提供一種檢測(cè)方法,其采用的技術(shù)方案為:從全血樣本中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞,即PBMCs,將其與結(jié)核桿菌特異性抗原一起孵育,當(dāng)外周血中存在針對(duì)結(jié)核桿菌的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞時(shí),結(jié)核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽復(fù)合物結(jié)合,借助生物素-鏈霉親和素系統(tǒng),將MHC-多肽復(fù)合物形成四聚體分子,單個(gè)MHC-多肽四聚體分子與T細(xì)胞表面的多個(gè)TCR結(jié)合,以提高了 MHC-多肽復(fù)合物與TCR的親和力和穩(wěn)定性;再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體標(biāo)記有PE熒光染料;最后通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)特異T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)以對(duì)結(jié)核病進(jìn)行輔助診斷。
[0004]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案的有益效果是:首先,產(chǎn)品中含有能夠和抗原特異性T細(xì)胞上TCR結(jié)合的4個(gè)MHC-多肽分子,使其與TCR的親和力大大提高。因此少量的樣本量,較低的T細(xì)胞比例,依然可以使用該產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè),提高了檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性;其次,利用基因工程手段,在不影響與抗原特異性T細(xì)胞結(jié)合能力的前提下,將MHC中與CD8分子相作用的區(qū)域進(jìn)行人為突變,打打降低了 MHC與CD8的非特異性結(jié)合,提高了產(chǎn)品特異性;再者,能根據(jù)客戶(hù)的檢測(cè)習(xí)慣,選用不同的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記,常用的PE、APC都可方便應(yīng)用;最后,本方法為體外檢測(cè),方便快捷,無(wú)需另外培養(yǎng)痰液,對(duì)病人身體無(wú)損傷。

【具體實(shí)施方式】
[0005]本發(fā)明應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對(duì)待檢者全血中分離出的T細(xì)胞進(jìn)行體外刺激,感染了結(jié)核分枝桿菌的待檢者的T細(xì)胞可對(duì)這種體外刺激產(chǎn)生特異性的反應(yīng),變成特異性效應(yīng)T細(xì)胞,再通過(guò)T細(xì)胞上的TCR與MHC-多肽復(fù)合物四聚體特異結(jié)合,對(duì)結(jié)核特異性效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)其反應(yīng)進(jìn)行計(jì)數(shù),從而判斷待檢者是否感染結(jié)核分枝桿菌。具體的方法為:從全血樣本中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞,即PBMCs,將其與結(jié)核桿菌特異性抗原一起孵育,當(dāng)外周血中存在針對(duì)結(jié)核桿菌的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞時(shí),結(jié)核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽復(fù)合物結(jié)合,借助生物素-鏈霉親和素系統(tǒng),將MHC-多肽復(fù)合物形成四聚體分子,單個(gè)MHC-多肽四聚體分子與T細(xì)胞表面的多個(gè)TCR結(jié)合,以提高了 MHC-多肽復(fù)合物與TCR的親和力和穩(wěn)定性;再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體標(biāo)記有PE熒光染料;最后通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)特異T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)以對(duì)結(jié)核病進(jìn)行輔助診斷。
[0006]本發(fā)明可用于結(jié)核分枝桿菌感染后特異性T細(xì)胞免疫的體外檢測(cè),適用于結(jié)核疑似病例的臨床輔助診斷和潛伏感染篩查。
[0007]上述的【具體實(shí)施方式】只是示例性的,是為了更好的使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解本專(zhuān)利,不能理解為是對(duì)本專(zhuān)利包括范圍的限制;只要是根據(jù)本專(zhuān)利公開(kāi)的技術(shù)方案所做出的技術(shù)內(nèi)容實(shí)質(zhì)相同或等同的任何的變更或修飾,均落入本專(zhuān)利包括的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種結(jié)核感染T細(xì)胞免疫的四聚體檢測(cè)方法,其特征在于:從全血樣本中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞,即PBMCs,將其與結(jié)核桿菌特異性抗原一起孵育,當(dāng)外周血中存在針對(duì)結(jié)核桿菌的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞時(shí),結(jié)核桿菌特異性抗原中的TCR與MHC-多肽復(fù)合物結(jié)合,借助生物素-鏈霉親和素系統(tǒng),將MHC-多肽復(fù)合物形成四聚體分子,單個(gè)MHC-多肽四聚體分子與T細(xì)胞表面的多個(gè)TCR結(jié)合,以提高了 MHC-多肽復(fù)合物與TCR的親和力和穩(wěn)定性;再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體標(biāo)記有PE熒光染料;最后通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)特異T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)以對(duì)結(jié)核病進(jìn)行輔助診斷。
【文檔編號(hào)】G01N33/569GK104422766SQ201310374904
【公開(kāi)日】2015年3月18日 申請(qǐng)日期:2013年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】李皚 申請(qǐng)人:上海印維實(shí)業(yè)有限公司
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