專利名稱：一種食用油脂過氧化值測定組合試劑及檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及過氧化值的測定，尤其涉及一種食用油脂過氧化值測定組合試劑及檢測方法。
背景技術：
眾所周知，食用油脂或含油食品，從生產到消費需要一定時間，有時需要長期貯藏，而在貯存或使用期間，油脂或含油食品易受空氣中的氧氣、光照等的影響而進行以氧化為主體的反應，不僅在感官上發(fā)生變化，如色澤加深、產生令人不快氣味(主要是生成的過氧化物易部分分解形成的醛類物質引起的)，而且會使營養(yǎng)劣變，劣變程度嚴重甚至會產生有毒物質，威脅到消費者的身體健康。目前以油脂氧化產物為檢測對象的方法主要有以下這些:碘量法是過氧化物檢測的標準方法，其原理是在酸性介質中，過氧化物與碘離子反應生成單質碘，再用硫代硫酸鈉標準溶液滴定析出的碘，并根據(jù)消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積來計算油脂的過氧化值。此法操作繁瑣，靈敏度低，取樣量大，檢測費用高，僅適用于含0.2mEq/kg以上過氧化物的測定，同時易對環(huán)境造成污染。硫代巴比妥酸法是實驗室常用的油脂氧化檢測的方法，此方法已有檢測試紙的專利(專利號JP51151191)。丙二醛是油脂氧化產生的諸多不飽和醛酮產物中主要產物之一，它與硫代巴比妥酸生成的紅色化合物，在530nm處有最大吸收，測定有色物的吸光度值，以此來衡量油脂的氧化 程度。該方法的缺點主要為:因加熱使檢測結果有誤差。硫氰酸鐵法，它的原理是在酸性條件下二價鐵離子可被過氧化物氧化成三價鐵離子，當加入硫氰酸根離子時，則與鐵離子形成橙紅色的絡合物，在480-515 nm內有最大吸收值，通過比色即可測出過氧化物的含量。但該方法中，甲醇混合試劑溶解油脂樣品，有害于人體且污染環(huán)境。一種基于電導率的食用油過氧化值測定方法(專利申請?zhí)朇N201210324117.6)，其原理是稱取一定量的食用油樣品，加入一定量異辛烷和濃鹽酸，混合均勻，加入飽和碘化鉀溶液，振蕩后，立即加入一定量蒸餾水稀釋一定比例，振蕩后靜置時間，用電導率儀測定混合水相的電導率值。這類方法對操作人員要求高，同時設備復雜、成本過高，不利于推廣使用。綜上所述，各種檢測方法的靈敏度、精確度、檢測簡繁程度和成本等方面均存在較大差異，因而建立新的簡便易行、靈敏度高，準確性好，檢測條件溫和，成本低廉，耗時少的綠色檢測方法仍是社會的迫切要求和重要的研究目標。

發(fā)明內容
本發(fā)明為克服上述的不足之處，目的在于提供一種食用油脂過氧化值測定組合試齊U，組合試劑的使用簡單易行、靈敏度高，大大降低成本，對人體無公害。本發(fā)明的另一目的在于提供一種食用油脂過氧化值測定方法，基于對色法原理，通過組合試劑對待測樣品的過氧化值進行檢測，操作簡便快捷，準確率高，又環(huán)保安全。本發(fā)明是通過以下技術方案達到上述目的:一種食用油脂過氧化值測定組合試齊 ，包括:極性有機溶劑、還原劑、顯色試劑、顯色穩(wěn)定劑；所述極性有機溶劑按質量百分比記，包括乙醇的質量濃度為237 710g/L ；所述還原劑按重量百分比記,包括硫酸亞鐵的質量濃度為I 20g/L ；所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為300 1000 g/L ；所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為20 800 g/L。一種食用油脂過氧化值測定方法，包括以下步驟:(I)用移液槍移取液態(tài)待測樣品，所述的待測樣品的取樣體積為20 40 μ L,同時記錄下質量，加入極性有機溶劑和顯色穩(wěn)定劑的混合液，所述待測樣品與極性有機溶劑的體積比為1:15 1:25，極性有機溶劑與顯色穩(wěn)定劑的體積比為1:30 1:40，渦流震蕩；(2)在步驟(I)的混合液中加入還原劑，每克待測樣品滴加的還原劑體積為5 12mL，潤流震湯，室溫下靜直；(3)在步驟(2)的溶液中加入顯色劑，每克待測樣品滴加的顯色劑體積為0.1 2mL，溶液以10000r/min以上的轉速離心旋轉10分鐘；(4)取步驟(3)得到混合溶液的上清部分在500 550nm處測定吸光度值；(5)根據(jù)吸光度值 從鐵離子標準曲線圖上得到對應的鐵離子濃度，并換算成單位質量的鐵離子濃度作為過氧化值。作為優(yōu)選，所述待測樣品為液態(tài)。所述鐵離子標準曲線圖的制作包括以下步驟:(a)將還原鐵粉加入鹽酸和過氧化氫溶解后，加熱除去過氧化氫，冷卻后用水稀釋混勻，制得10mg/mL的鐵標準儲備液；(b)利用步驟(a)制得的溶液以蒸餾水稀釋的方法得到鐵離子濃度為0、0.2,0.5、1、1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/mL的一系列梯度溶液，分別加入所述極性溶劑和顯色穩(wěn)
定劑后震蕩30秒；(c)在步驟(b)得到的各溶液中加入還原劑后震蕩30秒反應3分鐘，再加入顯色劑；(d)將步驟(C)得到的各溶液以10000r/min以上的轉速離心10分鐘，以鐵離子濃度為O的反應管為參照在500 550nm處測定吸光度值；(e)分別以吸光度值、鐵離子濃度為橫、縱坐標繪制曲線，并用最小二乘法得到擬合的直線方程。本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明采用比色分析的方法，油脂樣本與組合試劑在常溫下發(fā)生反應并顯色，操作迅速簡便，減少了加熱對檢測結果的干擾，檢測結果直觀性好；所用檢測試劑種類較少，便于裝配攜帶；可同時對多個油脂樣本進行顯色和檢測，顯色均勻，方便快捷，易于現(xiàn)場檢測；所用檢測試劑均低毒甚至無毒，安全環(huán)保。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此:
實施例1:本實施例的組合試劑為極性有機溶劑、還原劑、顯色試劑、顯色穩(wěn)定劑；所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為3.6g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528 g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225 g/L。首先，需要制作鐵離子標準曲線圖。所述鐵離子標準曲線圖的制作包括以下步驟:(a)將還原鐵粉加入鹽酸和過氧化氫溶解后，加熱除去過氧化氫，冷卻后用水稀釋混勻，制得10mg/mL的鐵標準儲備液；(b)利用步驟(a)制得的溶液以蒸餾水稀釋的方法得到鐵離子濃度為0、0.2,0.5、1、1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/mL的一系列梯度溶液，分別加入350 μ L的極性溶劑和10 μ L的顯色穩(wěn)定劑，震蕩30秒；(C)在步驟(b)得到的各溶液中加入還原劑150 μ L后震蕩30秒反應3分鐘，再加入顯色試劑IOyL;(d)將步驟(C)得到的各溶液以10000r/min以上的轉速離心10分鐘，以鐵離子濃度為O的反應管為參照在510nm處測定吸光度值；(e)分別以吸光度值、鐵離子濃度為橫、縱坐標繪制曲線，并用最小二乘法得到擬合的直線方程。本實施例的采樣油脂為小磨香油，一種食用油脂過氧化值測定方法，具體包括以下步驟:(I)用移 液槍移取小磨香油20 μ L，記錄下質量，加入極性有機溶劑350 μ L和顯色穩(wěn)定劑10 μ L的混合液，渦流震蕩30秒；(2)在步驟(I)的混合液中加入還原劑150 μ L，渦流震蕩30秒，室溫下靜置3分鐘；(3)在步驟(2)的溶液中加入顯色試劑10 μ L后，以10000r/min以上的轉速離心旋轉10分鐘；(4)取步驟(3)得到混合溶液的上清部分在510nm處測定吸光度值；(5)根據(jù)吸光度值從鐵離子標準曲線圖上得到對應的鐵離子濃度，并換算成單位質量的鐵離子濃度作為過氧化值。最后測定得到小磨香油的POV值為4.820mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.087mmol/L。實施例2:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括30%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為20g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528 g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225 g/L。本實施例的采樣油脂為玉米油，用移液槍移取玉米油20 μ L，其他實施方式與實施例I相同。最后測定得到玉米油的POV值為1.051mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.094mmol/L。實施例3:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括90%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為lg/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225g/L。本實施例的采樣油脂為菜籽油，用移液槍移取菜籽油20 μ L，其他實施方式與實施例I相同。最后測定得到菜籽油的POV值為1.119mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.121mmol/L。實施例4:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為lg/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為1000g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225g/L。本實施例的采樣油脂為大豆油，用移液槍移取大豆油20 μ L，其他實施方式與實施例I相同。最后測定得到大豆油的POV值為0.960mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.134mmol/L。實施例5:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為20g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為300g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225g/L。本實施例的采樣油脂為花生油，用移液槍移取花生油20 μ L，其他實施方式與實施例I相同。
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最后測定得到花生油的POV值為1.910mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.1OOmmoI/Lο實施例6:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為3.6g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為1000g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為200g/L。本實施例的采樣油脂為谷物調和油，用移液槍移取谷物調和油20μ L，其他實施方式與實施例1相同。最后測定得到谷物調和油的POV值為0.920mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.115mmol/L。實施例7:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為3.6g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為300g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為800g/L。本實施例的采樣油脂為橄欖油，用移液槍移取橄欖油20 μ L，其他實施方式與實施例I相同。最后測定得到橄欖油的POV值為5.47mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.114mmol/L。實施例8:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為lg/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為800g/L。本實施例的采樣油脂為豆豉鯪魚罐頭中殘留油，用移液槍移取豆豉鯪魚罐頭中殘留油20 μ L，其他實施方式與實施例1相同。最后測定得到豆豉鯪魚罐頭中殘留油的POV值為2.960mmol/Kg。
用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.099mmol/Lo實施例9:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為3.6g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225g/L。本實施例的采樣油脂為花生油、菜籽油、橄欖油、小磨香油、谷物調和油、大豆油、玉米油按等比例混合的混合油，用移液槍移取混合油20 μ L，其他實施方式與實施例1相同。最后測定得到混合油的POV值為7.730mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.087mmol/L。實施例10:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為3.6g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225g/L。本實施例的采樣油脂為魚油，用移液槍移取魚油20 μ L，其他實施方式與實施例1相同。最后測定得到魚油的POV值為8.920mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.087mmol/L。實施例11:本實施例中，所述極性有機溶劑按體積百分比記，包括70%的乙醇；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為3.6g/L ;所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為528g/L ;所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為225g/L。
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本實施例的采樣油脂為豬油，用移液槍移取豬油20 μ L，其他實施方式與實施例1相同。最后測定得到豬油的POV值為3.810mmol/Kg。用乙醇逐級稀釋油樣，得到所述方法的靈敏度為0.087mmol/L。以上的所述乃是本發(fā)明的具體實施例及所運用的技術原理，若依本發(fā)明的構想所作的改變，其所產生的功能作用仍未超出說明書所涵蓋的精神時，仍應屬本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
1.一種食用油脂過氧化值測定組合試劑，其特征在于包括:極性有機溶劑、還原劑、顯色試劑、顯色穩(wěn)定劑； 所述極性有機溶劑按質量百分比記，包括乙醇的質量濃度為237 710g/L ； 所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為I 20g/L ； 所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為300 1000 g/L ； 所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為20 800 g/L。
2.一種食用油脂過氧化值測定方法，其特征在于包括以下步驟: (1)用移液槍移取液態(tài)待測樣品，所述的待測樣品的取樣體積為20 40μL，同時記錄下質量，加入極性有機溶劑和顯色穩(wěn)定劑的混合液，所述待測樣品與極性有機溶劑的體積比為1:15 1:25，極性有機溶劑與顯色穩(wěn)定劑的體積比為1:30 1:40，渦流震蕩； (2)在步驟(I)的混合液中加入還原劑，每克待測樣品滴加的還原劑體積為5 12mL， 渦流震蕩，室溫下靜置； (3)在步驟(2)的溶液中加入顯色劑，每克待測樣品滴加的顯色劑體積為0.1 2mL，溶液以10000r/min以上的轉速離心旋轉10分鐘； (4)取步驟(3)得到混合溶液的上清部分在500 550nm處測定吸光度值； (5)根據(jù)吸光度 值從鐵離子標準曲線圖上得到對應的鐵離子濃度，并換算成單位質量的鐵離子濃度作為過氧化值。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種食用油脂過氧化值測定方法，其特征在于，所述待測樣品為液態(tài)。
4.根據(jù)權利要求2所述的一種食用油脂過氧化值測定方法，其特征在于，所述鐵離子標準曲線圖的制作包括以下步驟: (a)將還原鐵粉加入鹽酸和過氧化氫溶解后，加熱除去過氧化氫，冷卻后用水稀釋混勻，制得10mg/mL的鐵標準儲備液； (b)利用步驟(a)制得的溶液以蒸餾水稀釋的方法得到鐵離子濃度為0、0.2,0.5、1、1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/mL的一系列梯度溶液，分別加入所述極性溶劑和顯色穩(wěn)定劑后震蕩30秒； (c)在步驟(b)得到的各溶液中加入還原劑后震蕩30秒反應3分鐘，再加入顯色劑； (d)將步驟(c)得到的各溶液以lOOOOr/min以上的轉速離心10分鐘，以鐵離子濃度為O的反應管為參照在500 550nm處測定吸光度值； (e)分別以吸光度值、鐵離子濃度為橫、縱坐標繪制曲線，并用最小二乘法得到擬合的直線方程。
全文摘要
本發(fā)明涉及過氧化值的測定，尤其涉及一種食用油脂過氧化值測定組合試劑及檢測方法，包括極性有機溶劑、還原劑、顯色試劑、顯色穩(wěn)定劑；所述極性有機溶劑按質量百分比記，包括乙醇的質量濃度為237～710g/L；所述還原劑按重量百分比記，包括硫酸亞鐵的質量濃度為1～20g/L；所述顯色試劑為磺基水楊酸溶液，質量濃度為300～1000g/L；所述顯色穩(wěn)定劑為鹽酸吡哆胺溶液，質量濃度為20～800g/L。本發(fā)明采用比色分析的方法，操作迅速簡便，減少了加熱對檢測結果的干擾；所用檢測試劑種類較少，便于裝配攜帶；可同時對多個油脂樣本進行顯色和檢測，顯色均勻；所用檢測試劑均低毒甚至無毒，安全環(huán)保。
文檔編號G01N21/78GK103245660SQ20131016621
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月7日 優(yōu)先權日2013年5月7日
發(fā)明者章宇, 陳景楠, 蔡丹倩 申請人:浙江大學