專利名稱：一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑)第十三冊WS3-B-2624_97提供的舒經(jīng)活血片由紅花80g、香附(制)300g、狗脊(制)400g、香加皮200g、絡(luò)石藤300g、伸筋草300g、澤蘭葉300g、槲寄生400g、雞血藤300g、自然銅(煅)50g制成，其質(zhì)量檢測方法單一，僅采用了顯微鑒別方法，對成品質(zhì)量的優(yōu)劣無法實(shí)現(xiàn)全方位的檢測，對產(chǎn)品質(zhì)量的要求較低，一定程度上增加了劣質(zhì)產(chǎn)品投入市場的可能性。本發(fā)明采用了顯微鑒別方法、四個(gè)薄層鑒別方法以及含量測定方法通過多點(diǎn)多面的多項(xiàng)檢測，該檢測方法穩(wěn)定可靠、且準(zhǔn)確度高，更有效的保證了投入市場的產(chǎn)品質(zhì)量，促進(jìn)了在制備過程中加強(qiáng)了對產(chǎn)品質(zhì)量的控制，保障了產(chǎn)品的有效性和穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，該質(zhì)量檢測方法穩(wěn)定可靠、且準(zhǔn)確度高，有效保證投入市場的產(chǎn)品質(zhì)量。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
本發(fā)明所述的中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草11.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成，該中藥制劑可以是藥劑學(xué)上所述的任一種劑型，其質(zhì)量檢測方法包括鑒別方法與含量測定方法: 鑒別:
(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊；
(2)取相當(dāng)于生藥材13.78 20.67g的本品，研細(xì)，加乙醚20 40ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材0.5g Ig,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ I,分別點(diǎn)于同一娃膠薄層板上，以正己燒-乙酸乙酯-二乙胺9 20:3 6:0 I為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
(3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每I ml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸15 25:1 4:0.1 0.8為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(4)取相當(dāng)于生藥材13.78 27.56g的本品，研細(xì)，加甲醇40 60ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸10 60:0 8:0 5:1 2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(5)取相當(dāng)于生藥材13.78 20.67g的本品，研細(xì)，加80%丙酮20 30ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖,濾過,濾液作為供試品溶液,另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮IOml,振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各IOy 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5 9:0.3 0.6:1 3:1 4為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
含量測定:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-醋酸(40: 60: 2)為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ；
對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成Iml含20 μ g的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液 的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，回流或超聲處理30 40分鐘，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為
0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，SP
得;
相當(dāng)于Ig生藥材的本品含香加皮以4-甲氧基水楊醛(C8H8O3)計(jì)，不得少于101.58Pg。該中藥制劑的質(zhì)量檢測方法可以是:
方法一:
鑒別:
(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊；
(2)取相當(dāng)于生藥材17.23g的本品，研細(xì)，加乙醚30ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯9:1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
(3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每I ml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸20:3:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(4)取相當(dāng)于生藥材20.67g的本品，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每
次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶
醛
對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ I，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸60:5:2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(5)取相當(dāng)于生藥材17.23g的本品，研細(xì)，加80%丙酮30ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液作為供試品溶液，另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮10ml，振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水7:0.4:2:3為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
含量測定:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲
醇-水-醋酸(40: 60: 2)為流 動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ；
對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制
成Iml含20 μ g的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約
1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率為250W，頻率為40kHz，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測
定，即得；
相當(dāng)于Ig生藥材的本品含香加皮以4-甲氧基水楊醛(C8H8O3)計(jì)，不得少于101.58Pg。
方法二:
鑒別:
(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊；
(2)取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，研細(xì)，加乙醚20ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯17:3為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
(3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸15:1:0.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(4)取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛對照品，力口甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸10:8:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(5)取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，研細(xì)，加80%丙酮20ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液作為供試品溶液，另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮10ml，振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5:0.3:1:1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
含量測定:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲
醇-水-醋酸(40: 60: 2)為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ；
對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成
Iml含20μ g的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約
1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40分鐘，功率為250W，頻率為40kHz，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測
定，即得；
相當(dāng)于Ig生藥材的本品含香加皮以4-甲氧基水楊醛(C8H8O3)計(jì)，不得少于101.58Pg。
方法三:
鑒別:
(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊；
(2)取相當(dāng)于生藥材20.67g的本品，研細(xì)，加乙醚40ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺20:6:1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
(3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸25:4:0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(4)取相當(dāng)于生藥材27.56g的本品，研細(xì)，加甲醇60ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛對照品，力口甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸60:5:2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(5)取相當(dāng)于生藥材20.67g的本品，研細(xì)，加80%丙酮30ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液作為供試品溶液，另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮10ml，振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水 9:0.6:3:4為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；
含量測定:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲
醇-水-醋酸(40: 60: 2)為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ；
對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制
成Iml含20 μ g的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約
1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，回流提取40分鐘，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為0.45μπι微孔濾膜濾過，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測
定，即得；
相當(dāng)于Ig生藥材的本品含香加皮以4-甲氧基水楊醛(C8H8O3)計(jì)，不得少于101.58Pg。本發(fā)明所述的一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，其中該中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草
I1.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成藥劑學(xué)上任一種劑型，通過舒經(jīng)活絡(luò)、活血散瘀，用于筋骨疼痛，肢體拘攣，腰背酸痛，跌打損傷。所提供的該制劑的質(zhì)量檢測方法穩(wěn)定、可靠，優(yōu)于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑)第十三冊WS3-B-2624-97所提供的檢測方法，更有效的保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。發(fā)明人對該中藥制劑中4-甲氧基水楊醛的含量做了如下研究:一、實(shí)驗(yàn)藥品
1.實(shí)驗(yàn)藥品的處方:
紅花21g醋香附78.6g燙狗脊104.8g
香加皮52.4g絡(luò)石藤78.6g伸筋草78.6g
澤蘭葉78.6g槲寄生104.8g雞血藤78.6g
煅自然銅13.1g
2.實(shí)驗(yàn)藥品的制備:以上十味，先將紅花、醋香附、燙狗脊、香加皮粉碎成細(xì)粉，過篩。煅自然銅加水煎煮2小時(shí)，然后加入絡(luò)石藤、伸筋草、澤蘭葉、槲寄生、雞血藤煎煮二次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并煎液，濾過。濾液靜置8 10小時(shí)，上清液濃縮成相對密度為1.25 1.35 (70°C)的稠膏，加入上述細(xì)粉混勻，加入淀粉適量、麥芽糖39g，制成顆粒，干燥，壓制成1000片，包薄膜衣，即得。二、研究過程:
1、儀器與試藥
儀器=Agilent 1100型高效液相色譜儀，G1314A型紫外檢測器(美國安捷倫科技公司)；BP21ID型電子分析天平(德國賽多利斯集團(tuán)公司);KQ250B型超聲波清洗器(功率250W，頻率40kHz)，(昆山市超聲儀器有限公司)；UV-1800型紫外可見分光光度計(jì)，(日本島津公司)。試劑:甲醇為色譜 純(美國Honeywell公司);水為二次蒸餾水；其余試劑均為分析純(西安化學(xué)試劑廠)。 對照品:4_甲氧基水楊對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號0790-200202 含量測定用)。2、測定波長的選擇取4-甲氧基水楊醛對照品溶液，用紫外可見分光光度計(jì)，在190 400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描測定。結(jié)果表明，4-甲氧基水楊醒最大吸收波長為278nm。3、色譜條件
色譜柱:Agilent TC-C18 (250mmX4.6mm 5μ)色譜柱；流動相:甲醇-水-醋酸(40:60:2);流速:lml/min ;柱溫:室溫；檢測波長:278nm ;進(jìn)樣量:10μ1。在選定條件下，4-甲氧基水楊醛與制劑中其它組分色譜峰可達(dá)到基線分離，4-甲氧基水楊醛與相鄰峰的分離度為3.26，5.81。理論板數(shù)以4-甲氧基水楊醛峰計(jì)為15806。4、供試品溶液的制備
(I)、提取溶媒的確定參考文獻(xiàn)及《中國藥典》2010年版一部香加皮藥材項(xiàng)下4-甲氧基水楊醛的含量測定，確定60%甲醇為提取溶媒。(2)、提取方法的確定取本品，研細(xì)，取約1.5g，二份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加60%甲醇25ml，稱定重量，一份超聲處理(功率250W，頻率40kHz ) 40分鐘，另一份回流提取40分鐘，放涼，稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過,測定，結(jié)果見表I。表I提取方法的比較
方法I 峰面積枳分均值 I峰面積枳分值原樣量(A/g)
回薇法1344.3341.2
S聲^ 1282.6I833.6結(jié)果表明，回流法與超聲法測定結(jié)果無明顯差異，故選簡便易行的超聲法作為提取方法。(3)、提取時(shí)間的確定取本品，研細(xì)，取約1.5g，四份，精密稱定，置具塞錐形瓶
中，精密加60%甲醇25ml，稱定重量，分別超聲處理(功率250W，頻率40kHz ) 10、20、30、40分鐘，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過,測定,結(jié)果見表2。表2提取時(shí)間的比較
權(quán)利要求
1.一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，該中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草11.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別方法與含量測定方法: 鑒別:(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊； (2)取相當(dāng)于生藥材13.78 20.67g的本品，研細(xì)，加乙醚20 40ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材0.5g Ig,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ I,分別點(diǎn)于同一娃膠薄層板上，以正己燒-乙酸乙酯-二乙胺9 20:3 6:0 I為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)； (3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸15 25:1 4:0.1 0.8為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)取相當(dāng)于生藥材13.78 27.56g的本品，研細(xì)，加甲醇40 60ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成 每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸10 60:0 8:0 5:1 2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (5)取相當(dāng)于生藥材13.78 20.67g的本品，研細(xì)，加80%丙酮20 30ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖,濾過,濾液作為供試品溶液,另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮IOml,振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各IOy 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5 9:0.3 0.6:1 3:1 4為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；含量測定: 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-醋酸40: 60: 2為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于 2000 ； 對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成Iml含20μ g的溶液，搖勻，即得； 供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，回流或超聲處理30 40分鐘，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為.0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，該中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草.11.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別方法與含量測定方法: 鑒別:(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊； (2)取相當(dāng)于生藥材17.23g的本品，研細(xì)，加乙醚30ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯9:1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)； (3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以以石油醚60 90°C-乙酸乙酯-冰醋酸20:3:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)取相當(dāng)于生藥材20.67g的本品，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每 次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛 對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸60:5:2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (5)取相當(dāng)于生藥材17.23g的本品，研細(xì)，加80%丙酮30ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液作為供試品溶液，另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮10ml，振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水7:0.4:2:3為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；含量測定: 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-醋酸40: 60: 2為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ；對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成1ml含20μ g的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約.1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率為250W，頻率為40kHz，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，該中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草.11.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別方法與含量測定方法: 鑒別:(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊；(2)取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，研細(xì)，加乙醚20ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯17:3為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)； (3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸15:1:0.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸10:8:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (5)取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，研細(xì)，加80%丙酮20ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液作為供試品溶液，另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮10ml，振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5:0.3:1:1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；含量測定:色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-醋酸40: 60: 2為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ；對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成Iml含20μ g的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40分鐘，功率為250W，頻率為40kHz，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，即得；`測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，該中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草I1.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成，其特征在于該中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別方法與含量測定方法: 鑒別:`(1)取本品，置顯微鏡下觀察:花冠碎片黃色，有紅棕色或黃棕色分泌管；分泌細(xì)胞類圓形，含淡黃色至紅棕色分泌物，其周圍細(xì)胞作放射狀排列；梯紋管胞淡黃色至金黃色，紋孔排列整齊； (2)取相當(dāng)于生藥材20.67g的本品，研細(xì)，加乙醚40ml，放置I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液，另取香附對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺20:6:1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)； (3)取4-甲氧基水楊醛對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液及上述(2)項(xiàng)下的供試品溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯-冰醋酸25:4:0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)取相當(dāng)于生藥材27.56g的本品，研細(xì)，加甲醇60ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用鹽酸調(diào)PH值至I 2，搖勻，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，另取原兒茶醛對照品，力口甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ I，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸`60:5:2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，放置至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)`； (5)取相當(dāng)于生藥材20.67g的本品，研細(xì)，加80%丙酮30ml，浸潰I小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液作為供試品溶液，另取紅花對照藥材0.5g,加80%丙酮10ml，振搖15分鐘，靜置，取上清液作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水9:0.6:3:4為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)； 含量測定: 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-醋酸40: 60: 2為流動相；檢測波長278nm，理論塔板數(shù)按4-甲氧基水楊醛峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000 ； 對照品溶液的制備取4-甲氧基水楊醛對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成Iml含20 μ g的溶液，搖勻，即得； 供試品溶液的制備取相當(dāng)于生藥材13.78g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約,1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，稱定重量，回流提取40分鐘，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液用孔徑為0.45μπι微孔濾膜濾過，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2、3、4所述的一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于相當(dāng)于I g生藥材的本品含香加皮以4-甲氧基水楊醛C8H8O3計(jì)，不得少于,101.58l^g0
全文摘要
本發(fā)明涉及一種舒筋活絡(luò)、活血散瘀的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，其中該中藥制劑由紅花3.05%、醋香附11.41%、燙狗脊15.21%、香加皮7.6%、絡(luò)石藤11.41%、伸筋草11.41%、澤蘭葉11.41%、槲寄生15.21%、雞血藤11.41%、煅自然銅1.9%制成藥劑學(xué)上任一種劑型，通過舒經(jīng)活絡(luò)、活血散瘀，用于筋骨疼痛，肢體拘攣，腰背酸痛，跌打損傷。本發(fā)明提供的質(zhì)量檢測方法穩(wěn)定、可靠，優(yōu)于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑)第十三冊WS3-B-2624-97所提供的檢測方法，更有效的保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
文檔編號G01N30/90GK103149319SQ201310068988
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月5日
發(fā)明者黃小華, 付彬, 張 浩, 耿小秀, 王海亮 申請人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司