專利名稱：一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，尤其涉及一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
目前蔬菜和水果的農(nóng)藥殘留檢測(cè)一般采用氣相色譜法、液相色譜法和氣相色譜/質(zhì)譜法等，使用實(shí)驗(yàn)室的色譜分析儀，分析工作需要專業(yè)的人員完成。農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)，目前一般采用分光光度法，這種方法操作起來比較復(fù)雜，從采樣、樣品的處理得到分析結(jié)果往往需要數(shù)小時(shí)，甚至一兩天時(shí)間，而且分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，無法適用于現(xiàn)場(chǎng)快速的定性檢測(cè)。發(fā)光細(xì)菌是一類在正常的生理?xiàng)l件下能夠發(fā)射可見熒光的細(xì)菌，發(fā)光細(xì)菌與外來受試物接觸后，由于毒物具有抑光作用，發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度即有所變化，變化的程度與受試物的毒性大小呈相關(guān)關(guān)系，發(fā)光強(qiáng)度的變化可以用發(fā)光光度計(jì)測(cè)出。但青?；【鶴67菌株的穩(wěn)定發(fā)光時(shí)間有限，在一定程度上影響果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述技術(shù)問題，本發(fā)明設(shè)計(jì)開發(fā)了一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，目的在于縮短果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)時(shí)間，延長(zhǎng)青海弧菌Q67菌株的穩(wěn)定發(fā)光時(shí)間，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，包括以下步驟:步驟一、NaCl2.48 4.06g, NaH2PO4 0.07 0.25g, MgSO4.7H20 0.13 0.32g,MgCl2.6Η20 0.29 0.40g，CaCl2 0.03 0.16g, NaHCO3 2.27 4.19g，MgC030.34 0.62g，MgBr2 0.01 0.23g,KCl 0.01 0.05g，酵母膏3 6g，胰蛋白胨3 6g，瓊脂18 25g，甘油2 7g，溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)整pH 4 5，制成第一代斜面培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，第二代斜面培養(yǎng)基除第一代斜面培養(yǎng)基的相同成分外，再加入Na2HPO4 0.07 0.25g，調(diào)整pH 8 9，121。。滅菌 20min ；步驟二、將青?；【鶴67菌株的菌種移接到上述第一代斜面培養(yǎng)基上，15 25°C下培養(yǎng)12 18h，用生理鹽水將菌苔從第一代斜面培養(yǎng)基上沖刷下來，轉(zhuǎn)接到第二代斜面培養(yǎng)基上，相同條件培養(yǎng)，得到測(cè)試用菌液；步驟三、將待測(cè)果蔬搗碎成汁，加入蒸餾水并攪拌均勻，取其中IOmL作為待測(cè)樣品，對(duì)照選用國(guó)家質(zhì)量體系認(rèn)證的無農(nóng)藥全天然果蔬，同樣方法處理，取其中IOmL作為對(duì)照樣品；步驟四、分別取待測(cè)樣品和對(duì)照樣品ImL置于兩個(gè)小杯中，同時(shí)加入ImL濃度為1.2% 1.8%的NaNO3溶液，再加入0.1mL步驟二中制得的待試用菌液，放置30min，用發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定每杯的發(fā)光強(qiáng)度，按下式計(jì)算相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度=待測(cè)樣品發(fā)光強(qiáng)度/對(duì)照樣品發(fā)光強(qiáng)度若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度在90% 110%之間，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為安全；若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為110%以上或在80% 90%之間，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為可疑；若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為80%以下，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為不安全。優(yōu)選的是，所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟一第一代斜面培養(yǎng)基中NaH2PO4溶液調(diào)整第一代斜面培養(yǎng)基的pH為4. 5，第二代斜面培養(yǎng)基中NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液組成的緩沖溶液調(diào)整第二代斜面培養(yǎng)基的pH為8. 5。優(yōu)選的是，所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟二中青?；【鶴67菌株的菌種在兩代斜面培養(yǎng)基上均于20°C下培養(yǎng)16h。優(yōu)選的是，所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟四中NaNO3溶液的濃度為1.5%。優(yōu)選的是，所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟二中的生理鹽水為濃度為O. 85%的NaCl溶液。本發(fā)明所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，用NaH2PO4溶液調(diào)整第一代斜面培養(yǎng)基的PH，用NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液組成的緩沖溶液調(diào)整第二代斜面培養(yǎng)基的pH，青?；【鶴67菌株在兩代斜面培養(yǎng)基上相繼培養(yǎng)，并在檢測(cè)同時(shí)加入濃度為1. 2% 1.8%的NaNO3溶液，延長(zhǎng)了青海弧菌Q67菌株的穩(wěn)定發(fā)光時(shí)間，有利于果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)。本方法所采用的青?；【鶴67菌株對(duì)各類毒物均有靈敏的反應(yīng)，即使從未出現(xiàn)過的新的化學(xué)合成毒物，只要對(duì)生物體有毒，一定會(huì)對(duì)發(fā)光細(xì)菌產(chǎn)生影響，并靈敏地從發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)弱上反映出來，有效避免漏檢。


圖1是本發(fā)明所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法的流程示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。本發(fā)明提供一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，包括以下步驟步驟一、NaCl2. 48 4. 06g, NaH2PO4 O. 07 O. 25g, MgSO4 · 7H20 O. 13 O. 32g,MgCl2WH2O O. 29 O. 40g，CaCl2 O. 03 O. 16g, NaHCO3 2.27 4. 19g，MgC030 . 34 O. 62g，MgBr2 O. 01 O. 23g,KCl O. 01 O. 05g，酵母膏3 6g，胰蛋白胨3 6g，瓊脂18 25g，甘油2 7g，溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)整pH 4 5，制成第一代斜面培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，第二代斜面培養(yǎng)基除第一代斜面培養(yǎng)基的相同成分外，再加入Na2HPO4 O. 07 O. 25g，調(diào)整pH 8 9，121。。滅菌 20min ；步驟二、將青?；【鶴67菌株的菌種移接到上述第一代斜面培養(yǎng)基上，15 25°C下培養(yǎng)12 18h，用生理鹽水將菌苔從第一代斜面培養(yǎng)基上沖刷下來，轉(zhuǎn)接到第二代斜面培養(yǎng)基上，相同條件培養(yǎng)，得到測(cè)試用菌液；步驟三、將待測(cè)果蔬搗碎成汁，加入蒸餾水并攪拌均勻，取其中IOmL作為待測(cè)樣品，對(duì)照選用國(guó)家質(zhì)量體系認(rèn)證的無農(nóng)藥全天然果蔬，同樣方法處理，取其中IOmL作為對(duì)照樣品；步驟四、分別取待測(cè)樣品和對(duì)照樣品ImL置于兩個(gè)小杯中，同時(shí)加入ImL濃度為1.2% 1.8%的NaNO3溶液，再加入0.1mL步驟二中制得的待試用菌液，放置30min，用發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定每杯的發(fā)光強(qiáng)度，按下式計(jì)算相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度=待測(cè)樣品發(fā)光強(qiáng)度/對(duì)照樣品發(fā)光強(qiáng)度若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度在90% 110%之間，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為安全；若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為110%以上或在80% 90%之間，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為可疑；若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為80%以下，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為不安全。所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟一第一代斜面培養(yǎng)基中NaH2PO4溶液調(diào)整第一代斜面培養(yǎng)基的pH為4.5，第二代斜面培養(yǎng)基中NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液組成的緩沖溶液調(diào)整第二代斜面培養(yǎng)基的pH為8.5。所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟二中青?；【鶴67菌株的菌種在兩代斜面培養(yǎng)基上均于20°C下培養(yǎng)16h。所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟四中NaNO3溶液的濃度為1.5%。所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法中，所述步驟二中的生理鹽水為濃度為
0.85 % 的 NaCl 溶液。實(shí)施例一NaCl 3.67g, NaH2PO4 0.18g，MgSO4.7H20 0.18g, MgCl2.6Η20 0.39g, CaCl2 0.07g,NaHCO3 3.41g,MgC03 0.53g, MgBr2 0.07g，KCl 0.03g，酵母膏 5g，胰蛋白胨 5g，瓊脂 20g，甘油3g，溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)整pH為4.5，制成第一代斜面培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，第二代斜面培養(yǎng)基除第一代斜面培養(yǎng)基的相同成分外，再加入Na2HPO4 0.18g，調(diào)整pH為8.5，121°C滅菌20min ;將青?；【鶴67菌株的菌種移接到上述第一代斜面培養(yǎng)基上，20°C下培養(yǎng)16h，用0.85 %的生理鹽水將菌苔從斜面培養(yǎng)基上沖刷下來，然后轉(zhuǎn)接到第二代斜面培養(yǎng)基上，同樣方法培養(yǎng)，得到測(cè)試用的菌液。將從農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買的普通黃瓜IOg搗碎成汁，并加入40mL蒸懼水，IOOOOrpm的轉(zhuǎn)速下離心5min,取上清液備用；對(duì)照選用國(guó)家質(zhì)量體系認(rèn)證的無農(nóng)藥全天然黃瓜，用上述方法同樣處理，取上清液備用。分別取待測(cè)黃瓜樣品上清液和對(duì)照黃瓜樣品上清液ImL置于兩個(gè)小杯中，同時(shí)加入ImL濃度為1.5%的NaNO3溶液，再加入0.1mL制得的待試用菌液，放置30min，用發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定每杯的發(fā)光強(qiáng)度，本實(shí)施例中待測(cè)黃瓜樣品的相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為115%,農(nóng)藥殘留毒性為不安全。實(shí)施例二NaCl 3.15g, NaH2PO4 0.24g，MgSO4.7H20 0.29g, MgCl2.6Η20 0.31g, CaCl2 0.14g,NaHCO3 2.72g, MgCO3 0.47g, MgBr2 0.19g, KCl 0.02g，酵母膏 4g，胰蛋白胨 4g，瓊脂 23g，甘油5g，溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)整pH為4，制成第一代斜面培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，第二代斜面培養(yǎng)基除第一代斜面培養(yǎng)基的相同成分外，再加入Na2HPO4 0.24g，調(diào)整pH為8，121°C滅菌20min ;將青海弧菌Q67菌株的菌種移接到上述第一代斜面培養(yǎng)基上，23°C下培養(yǎng)15h，用0.85 %的生理鹽水將菌苔從斜面培養(yǎng)基上沖刷下來，然后轉(zhuǎn)接到第二代斜面培養(yǎng)基上，同樣方法培養(yǎng)，得到測(cè)試用的菌液。將從農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買的普通蘋果IOg搗碎成汁，并加入40mL蒸懼水，IOOOOrpm的轉(zhuǎn)速下離心5min,取上清液備用；對(duì)照選用國(guó)家質(zhì)量體系認(rèn)證的無農(nóng)藥全天然蘋果用上述方法同樣處理，取上清液備用。分別取待測(cè)蘋果樣品上清液和對(duì)照蘋果樣品上清液ImL置于兩個(gè)小杯中，同時(shí)加入ImL濃度為1.3%的NaNO3溶液，再加入O.1mL制得的待試用菌液，放置30min，用發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定每杯的發(fā)光強(qiáng)度，本實(shí)施例中待測(cè)蘋果樣品的相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為98%，農(nóng)藥殘留毒性為安全。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的圖例。
權(quán)利要求
1.一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟:步驟一、NaCl 2.48 4.06g, NaH2PO4 0.07 0.25g, MgSO4.7H20 0.13 0.32g,MgCl2WH2O 0.29 0.40g，CaCl2 0.03 0.16g, NaHCO3 2.27 4.19g，MgC030.34 0.62g，MgBr2 0.01 0.23g,KCl 0.01 0.05g，酵母膏3 6g，胰蛋白胨3 6g，瓊脂18 25g，甘油2 7g，溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)整pH 4 5，制成第一代斜面培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，第二代斜面培養(yǎng)基除第一代斜面培養(yǎng)基的相同成分外，再加入Na2HPO4 0.07 0.25g，調(diào)整pH 8 9，121。。滅菌 20min ； 步驟二、將青?；【鶴67菌株的菌種移接到上述第一代斜面培養(yǎng)基上，15 25°C下培養(yǎng)12 18h，用生理鹽水將菌苔從第一代斜面培養(yǎng)基上沖刷下來，轉(zhuǎn)接到第二代斜面培養(yǎng)基上，相同條件培養(yǎng)，得到測(cè)試用菌液； 步驟三、將待測(cè)果蔬搗碎成汁，加入蒸餾水并攪拌均勻，取其中IOmL作為待測(cè)樣品，對(duì)照選用國(guó)家質(zhì)量體系認(rèn)證的無農(nóng)藥全天然果蔬，同樣方法處理，取其中IOmL作為對(duì)照樣品; 步驟四、分別取待測(cè)樣品和對(duì)照樣品ImL置于兩個(gè)小杯中，同時(shí)加入ImL濃度為1.2% 1.8%的NaNO3溶液，再加入0.1mL步驟二中制得的待試用菌液，放置30min，用發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定每杯的發(fā)光強(qiáng)度，按下式計(jì)算相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度 相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度=待測(cè)樣品發(fā)光強(qiáng)度/對(duì)照樣品發(fā)光強(qiáng)度 若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度在90% 110%之間，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為安全；若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為110%以上或在80% 90%之間，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為可疑；若相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度為80%以下，則待測(cè)樣品的農(nóng)藥殘留毒性為不安全。
2.如權(quán)利要求1所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟一第一代斜面培養(yǎng)基中NaH2PO4溶液調(diào)整第一代斜面培養(yǎng)基的pH為4.5，第二代斜面培養(yǎng)基中NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液組成的緩沖溶液調(diào)整第二代斜面培養(yǎng)基的pH為8.5。
3.如權(quán)利要求1所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟二中青?；【鶴67菌株的菌種在兩代斜面培養(yǎng)基上均于20°C下培養(yǎng)16h。
4.如權(quán)利要求1所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟四中NaNO3溶液的濃度為1.5%。
5.如權(quán)利要求4所述的果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟二中的生理鹽水為濃度為0.8 5%的NaCl溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，尤其涉及一種果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)方法，其特征在于，包括發(fā)光細(xì)菌的準(zhǔn)備，檢測(cè)樣品的準(zhǔn)備和發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光檢測(cè)，將待檢測(cè)果蔬的樣品與青?；【鶴67菌種的菌液混合，通過檢測(cè)青?；【鶴67菌株的發(fā)光強(qiáng)度，判斷所檢測(cè)的果蔬中農(nóng)藥殘留的毒性。本發(fā)明所述方法縮短了果蔬中農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)時(shí)間，延長(zhǎng)了青?；【鶴67菌株的穩(wěn)定發(fā)光時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N21/76GK103076319SQ20121058142
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者黃山梅 申請(qǐng)人:通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司