專利名稱：一套用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色及保存的載玻片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物實(shí)驗(yàn)裝置，尤其涉及一套用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的載玻片。
背景技術(shù)：
在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，采用不同抗體對(duì)組織進(jìn)行免疫化學(xué)染色，是檢測(cè)機(jī)體在生理或病理狀態(tài)下功能變化最常用的方法之一。在組織切片的免疫染色過(guò)程中，通常采用貼片法和漂片法對(duì)其進(jìn)行染色。采用貼片法染色首先是將石蠟組織或冰凍組織進(jìn)行切片后，粘貼于載玻片上，然后按照免疫組織化學(xué)染色的相關(guān)步驟檢測(cè)。目前該檢測(cè)方法通常存在以下問(wèn)題:1、檢測(cè)過(guò)程中對(duì)組織進(jìn)行反復(fù)沖洗，容易造成組織切片脫落；2、由于抗體一般比較昂貴，因此加入一抗和二抗的量有限。在實(shí)驗(yàn)添加抗體的操作過(guò)程中，由于載玻片或組織表面輕微的傾斜都可能導(dǎo)致抗體不能有效和組織接觸，影響抗體與抗原的特異性結(jié)合，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的失敗。3、目前在組織染色結(jié)束后，通常采用中性樹(shù)脂、石蠟油或甘油對(duì)組織進(jìn)行封片，以保存實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果，尤其是熒光陽(yáng)性結(jié)果的保存，通常都采用甘油對(duì)組織進(jìn)行封片，但該類封片劑容易造成蓋玻片的移位而不能很好的固定組織及保存染色結(jié)果。而漂片法染色則是將組織切片放置于一個(gè)容量裝置中完成染色的所有步驟。該染色方法可以避免組織切片脫落以及抗體與組織有效接觸等問(wèn)題，但是該方法所需抗體的量較大，且在染色完成后需要將組織切片從容器中轉(zhuǎn)移到載波片上進(jìn)行封片處理，方可觀察染色結(jié)果。然而在組織轉(zhuǎn)移過(guò)程中可導(dǎo)致組織破損和折疊，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察。因此理想的用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)的載玻片裝置應(yīng)該避免上述兩種染色方法存在的突出問(wèn)題。目前通過(guò)多聚賴氨酸對(duì)載玻片進(jìn)行處理后，可在一定程度上減少?zèng)_洗過(guò)程中組織切片的脫落，但對(duì)抗體的溢出及蓋玻片的移位尚無(wú)有效的解決方法。然而多聚賴氨酸是一種蛋白質(zhì)，在反應(yīng)過(guò)程中可能黏附大量的抗體而影響抗體與組織切片中抗原的結(jié)合。如中國(guó)專利申請(qǐng):特別用于熒光顯微鏡的載玻片(專利號(hào)03101482.8)、一種用于微生物檢測(cè)的微生物載玻片(申請(qǐng)?zhí)?00610163269.7)分別提出了利用具有吸收熒光特性或設(shè)有熒光光線的抗發(fā)射層來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光結(jié)果的保護(hù)作用以及通過(guò)對(duì)載玻片上特定區(qū)域進(jìn)行顏色標(biāo)識(shí)和面積限制以便于在顯微鏡下對(duì)微生物進(jìn)行直接定位和形狀及數(shù)量的計(jì)算。雖然上述方法在解決熒光衰減及組織定位方面有一定的作用，但是要解決目前在組織免疫熒光染色過(guò)程中所存在的組織脫片、抗體溢出及蓋玻片滑脫等問(wèn)題，仍需要對(duì)載玻片進(jìn)行特殊的設(shè)計(jì)與處理。其次，中國(guó)專利:通用型病理組織細(xì)胞化學(xué)染色載玻片(申請(qǐng)?zhí)?01020243434.1)，該實(shí)用新型專利較好的解決了免疫組化染色過(guò)程中切片脫落以及組織抗原與抗體結(jié)合的有效性問(wèn)題，但該裝置在染色前需對(duì)切片進(jìn)行多聚賴氨酸的預(yù)處理，同時(shí)需要將組織進(jìn)行轉(zhuǎn)移后封片方可進(jìn)行結(jié)果觀察。因此該專利未能避免組織切片轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能出現(xiàn)破損與折疊的缺陷，同時(shí)也不能避免甘油等封片劑封片后所引起的蓋玻片滑脫和移位等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有載玻片在對(duì)組織進(jìn)行免疫化學(xué)染色過(guò)程中容易造成切片脫落，抗體溢出、蓋玻片移位、組織轉(zhuǎn)移受損等問(wèn)題，提出一套可以用于石蠟或冰凍組織免疫化學(xué)染色及有效保存的載玻片，且通過(guò)與之匹配的封片單元可對(duì)組織細(xì)胞的大小進(jìn)行初步的測(cè)量。該載玻片結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低廉，能較好的保證組織切片和蓋玻片的穩(wěn)定性以及抗體與組織接觸反應(yīng)的有效性。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是:一套用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫化學(xué)染色及保存的載玻片，其包括透明玻璃材質(zhì)的載物單元和封片單元。所述載物單元承載面上具有600um-800um深度、不同形狀的凹槽，凹槽內(nèi)表面光滑，每個(gè)凹槽對(duì)應(yīng)有一個(gè)封片單元，封片單元厚度為200 um。封片單元上以其中心為基點(diǎn)，分布有縱橫垂直交叉的直線，劃分出邊長(zhǎng)10 um的多個(gè)方格,封片單兀的邊緣設(shè)置有一圈密封圈。在對(duì)組織進(jìn)行染色后，將封片單元蓋在載物單元對(duì)應(yīng)的凹槽中，通過(guò)封片劑將受檢測(cè)的組織固定在凹槽內(nèi)，并通過(guò)密封圈密封，實(shí)現(xiàn)對(duì)組織切片的固定與封片保存。染色過(guò)程中，載物單元凹槽形狀的選擇根據(jù)受檢組織的形狀、大小決定，可以為圓形、橢圓形、長(zhǎng)方形或正方形。載物單元的左側(cè)進(jìn)行磨砂處理，形成對(duì)組織切片進(jìn)行標(biāo)記的標(biāo)記部。本套載玻片在載物單元上制作不同形狀的凹槽是用于放置需要檢測(cè)的組織切片。采用的封片單元在檢測(cè)結(jié)束后可以與載物單元和受檢組織通過(guò)滴加封片劑后融合為一體，便于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的采集與保存。而且由于封片單元形狀及大小與載物單元相匹配，封片后通過(guò)周圍的密封圈可使其牢固的嵌在凹槽內(nèi)，從而對(duì)組織起良好的固定和防止空氣氧化等作用。同時(shí)該封片單元不會(huì)凸出在載物單元上，不會(huì)被碰歪或碰掉，可以保證對(duì)組織切片的良好保存。另外，由于該封片單元上具有刻度方格，因此在顯微鏡下觀察時(shí)，可初步測(cè)量組織細(xì)胞的大小與面積?？梢?jiàn)，本發(fā)明設(shè)計(jì)的載玻片，將載物單元和封片單元一體化，能較好的保證組織免疫化學(xué)染色過(guò)程中組織切片和封片的穩(wěn)定性以及抗體與組織接觸反應(yīng)的有效性，并有效的避免了組織脫落，抗體溢出、封片單元移位以及組織轉(zhuǎn)移受損等問(wèn)題。同時(shí)還可對(duì)組織細(xì)胞的大小和面積進(jìn)行測(cè)量。該套載玻片除用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)外，還可用于原位雜交及其相關(guān)的生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)。


圖1是免疫組化染色特制載物單元的平面視圖；圖2是載物單元和封片單元在使用中的操作過(guò)程的示意圖。具體實(shí)施方法下面結(jié)合附圖和具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。如圖1和圖2所示，本載玻片由載物單元I和封片單元2構(gòu)成。載物單元I為厚度1.2mm的玻璃，在其承載面上具有不同深度、不同形狀(如圓形、橢圓形、長(zhǎng)方形和正方形等)凹槽11，凹槽深度600um-800um，內(nèi)表面光滑，用于容納組織切片，每個(gè)凹槽都對(duì)應(yīng)有一片形狀與深度可與之匹配的封片單元2，封片單元厚度為200 um。封片單元上以其中心為基點(diǎn)，分布有縱橫垂直交叉的直線，劃分出邊長(zhǎng)10 um的多個(gè)方格21,封片單兀的邊緣還設(shè)置有一圈密封圈22。載物單元I的承載面的左側(cè)還有磨砂處理的標(biāo)記部12。參見(jiàn)圖2，在組織免疫組化檢測(cè)過(guò)程中，載物單元的凹槽內(nèi)表面光滑，不用涂具多聚賴氨酸，組織切片放置于凹槽內(nèi)，在整個(gè)染色過(guò)程中漂洗組織的緩沖液以及添加的各種試劑均滴加于凹槽內(nèi)。在免疫組化染色結(jié)束后，首先吸出多余液體，并將組織切片3晾干，然后在載物單元的凹槽內(nèi)滴加封片劑4，最后將與凹槽11匹配的封片單元2蓋到凹槽內(nèi)，使載物單元1、組織切片3與封片單元2構(gòu)成一個(gè)整體，便于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保存與觀察、采集。可見(jiàn)本發(fā)明提供了一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低廉，能較好的保證組織切片和封片單元的穩(wěn)定性以及抗體與組織接觸反應(yīng)有效性的特制載玻片。該裝置實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，可較好地避免目前組織免疫組化染色過(guò)程中存在的突出問(wèn)題，而且利用封片單元上的刻度可對(duì)染色組織的大小和面積進(jìn)行初步的計(jì)算與分析。
權(quán)利要求
1.套用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫化學(xué)染色及保存的載玻片，包括玻璃材質(zhì)的載物單元和封片單元；其特征在于，所述載物單元的承載面上具有不同深度、形狀的用于容納組織切片進(jìn)行染色的凹槽，凹槽內(nèi)表面光滑，每個(gè)凹槽對(duì)應(yīng)有一塊封片單元，封片單元與所述凹槽的形狀相匹配，厚度為200 um，封片單元上以其中心為基點(diǎn)，分布有縱橫垂直交叉的直線，劃分出邊長(zhǎng)10 um的多個(gè)方格，封片單元的邊緣設(shè)置有一圈密封圈；在對(duì)組織進(jìn)行染色后，將封片單元蓋在載物單元對(duì)應(yīng)的凹槽中，通過(guò)封片劑將受檢測(cè)的組織固定在凹槽內(nèi)，并通過(guò)密封圈密封，實(shí)現(xiàn)對(duì)組織切片的固定與封片保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫化學(xué)染色及保存的載玻片，其特征在于，所述凹槽為圓形、橢圓形、長(zhǎng)方形或正方形。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫化學(xué)染色及保存的載玻片，其特征在于，所述載物片的左側(cè)有磨砂處理的標(biāo)記部。
全文摘要
一套用于對(duì)組織切片進(jìn)行免疫化學(xué)染色及保存的載玻片，其載物單元的承載面上具有不同深度、形狀的用于容納組織切片的凹槽，凹槽內(nèi)表面光滑，每個(gè)凹槽對(duì)應(yīng)有一塊封片單元，封片單元片與所述凹槽的形狀相匹配，封片單元上以其中心為基點(diǎn)，分布有縱橫垂直交叉的直線，形成邊長(zhǎng)為10 um的每個(gè)方格，且封片單元的邊緣設(shè)有密封圈。該套載玻片有效避免了現(xiàn)有免疫組織化學(xué)檢測(cè)過(guò)程中容易造成組織切片脫落，抗體溢出、蓋玻片移位以及組織轉(zhuǎn)移受損等問(wèn)題，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低廉，能較好的保證組織切片和蓋玻片的穩(wěn)定性以及抗體與組織接觸反應(yīng)的有效性，同時(shí)通過(guò)封片單元上的刻度線可對(duì)受檢測(cè)組織的大小和面積進(jìn)行測(cè)算。
文檔編號(hào)G01N1/31GK103091826SQ201210562179
公開(kāi)日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月21日
發(fā)明者劉媛, 葉有義, 譚波濤, 王莉, 伍亞民, 王正國(guó) 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院