專利名稱：一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物和醫(yī)學檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種在同一反應(yīng)體系內(nèi)同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物指標CA125、CEA、CA153的時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，同時還涉及該試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳腺癌發(fā)病年齡分布在東西方國家有所不同，在高發(fā)區(qū)如北歐、北美等國家，乳腺癌從20歲左右開始出現(xiàn)，在絕經(jīng)期即45-50歲之前保持快速上升勢頭，大約年齡每增長10-20歲發(fā)病率上升I倍，絕經(jīng)期后上升相對緩慢，75-85歲達到最高。而在亞洲等低發(fā)地區(qū)，乳腺癌的發(fā)病率在絕經(jīng)后會略下降，一般乳腺癌的發(fā)病高峰在45-55歲之間，亞洲人移居西方國家后仍保持這種年齡分布特征。早期發(fā)現(xiàn)、確診乳腺癌，實施手術(shù)切除，依然是目前該疾病最有效的治療方法。因此，在早期、更加準確的確診乳腺癌依然是治療該疾病的關(guān)鍵。目前，診斷乳腺癌的常用檢測指標有CA125、CEA、CA153等幾種。在實際診斷乳腺癌時，一般是用CA125、CEA、CA153三種指標綜合確診乳腺癌，因為三項指標綜合分析在特異性和敏感度上明顯高于單一指標。目前常規(guī)實驗室或醫(yī)療單位用于檢測該三項指標通常分別采用單一試劑盒，即一個試劑盒針對一種腫瘤標記物進行檢測，此種方式存在的缺點是:1、檢測步驟繁多，費時費力；2、幾種標記物分別采用幾種單指標試劑盒檢測，由于不同生產(chǎn)廠家的試劑盒存在差異，且同一廠家的不同試劑盒由于檢測的標記物不同可能會存在控制條件、參數(shù)的差異而導致檢測結(jié)果存在誤差，此種誤差在綜合分析三種標記物的特異性和敏感性上會產(chǎn)生較大的影響，可能導致判斷結(jié)果相差甚遠。因此，開發(fā)一種能夠在相對同一的檢測條件下同時能夠檢測該三種腫瘤標記物的試劑盒，就能降低由于人為原因造成的檢測誤差，大大提高綜合分析檢測結(jié)果的特異性和敏感性，為下一步的研究或判斷做出準確的結(jié)論提供更充分的依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種在同一反應(yīng)體系內(nèi)同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物指標CA125、CEA、CA153的時間分辨熒光免疫檢測試劑盒。本發(fā)明的目的還在于提供一種該試劑盒的應(yīng)用。為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，把三種乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA> CA153綜合在同一微孔的同一反應(yīng)體系內(nèi)，采用時間分辨熒光免疫法檢測，該試劑盒包括:分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板；用Eu3+標記的抗CA125、Tb3+標記的抗CEA、Sm3+標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體；分析緩沖液；共用熒光增強劑；洗滌液；質(zhì)控品。所述的第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的制備方法為:把分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體用包被緩沖液稀釋，制得抗體包被液，然后向微孔板的每個孔中分別加入ΙΟΟμ I的所述抗體包被液，于37°C包被2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板三次，然后再向微孔板的每個孔中分別加入200μ I的封板液，于室溫封閉2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板兩次，冷凍干燥，制得第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板。其中，所述抗體包被液中，分別抗CA125、CEA、CA153的第一株單克隆抗體的濃度均為 0.009 0.014g/L。所述用Eu3+標記的抗CA125、Tb3+標記的抗CEA、Sm3+標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體中，用Eu3+標記的抗CA125抗體、Tb3+標記的抗CEA抗體、Sm3+標記的抗CA153抗體的質(zhì)量配比為:Eu3+標記的抗CA125抗體:Tb3+標記的抗CEA抗體:Sm3+標記的抗CA153抗體=(7 13): (6 11): (6.5 13)。分析緩沖液的制備方法為:向每升濃度為0.05mol/L、pH值為8.0的Tris-Hcl緩沖液中加入9g NaCU0.5g NaN3UOg BSA、0.1ml吐溫_40、5g聚乙二醇，混合均勻，即制得分析緩沖液。所述共用熒光增強劑的制備方法為:解離部分:將70 200 μ mol的PTA、2 7 μ mol的氧化乾、0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合,用水定容至I升,用乙酸調(diào)pH值至3.5，制得解離部分；增強部分:將0.1 0.4mmol的鄰菲羅啉和0.2mol的Tris混合，用水定容至1L，制得增強部分。所述洗滌液的制備方法為:在濃度為0.01mol/L、pH值為7.4的PBS緩沖液中加入吐溫-20，混勻，制得吐溫-20質(zhì)量百分比濃度為0.05%的PBS溶液，然后用質(zhì)量百分比濃度為0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得洗滌液。所述質(zhì)控品為CA125、CEA、CA153標準品的混合物。一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153 中的應(yīng)用。所述的試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用，包括以下步驟:(I)用分析緩沖液稀釋質(zhì)控品，制成具有系列濃度梯度包含有CA125、CEA、CA153標準品的混合溶液；(2)將待測樣品與步驟(I)制備的標準品混合溶液分別加入抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分別與CA125、CEA、CA153結(jié)合的標記有稀土離子螯合物的第二株單克隆抗體混合抗體，之后加入共用熒光增強劑，進行時間分辨熒光免疫檢測，得到發(fā)光值；(3)根據(jù)測定的具有系列濃度梯度的包含CA125、CEA、CA153標準品的混合溶液的發(fā)光值做標準曲線；(4)以測定的待測樣品中的CA125、CEA、CA153發(fā)光值和標準品中CA125、CEA、CA153各自的標準曲線的發(fā)光值做比較，得出待測樣品中CA125、CEA、CA153各自的含量。所述待測樣品為人體血清。進一步的，所述包被緩沖液的制備方法為:取濃度為0.05mol/L、pH值為8.5的碳酸鹽緩沖液，然后用質(zhì)量百分比濃度為0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得包被緩沖液。所述封板液的制備方法為:向濃度為0.02mol/L、pH值為7.4的PBS緩沖液中加入BSA,配制成BSA質(zhì)量百分比濃度為1%的BSA的PBS緩沖液，然后用質(zhì)量百分比濃度為0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得封板液。本發(fā)明提供的試劑盒，采用時間分辨熒光免疫檢測方法，實現(xiàn)同時綜合檢測三項乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153的目的。時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)是一種以稀土離子為標記物，根據(jù)稀土離子螯合物的發(fā)光特點，用時間分辨技術(shù)測定特異性熒光的技術(shù)方法。TRFIA利用稀土離子的激發(fā)光和發(fā)射光的波長不同，同時發(fā)射光具有長的衰減時間，這樣可以有效的排除非特異性熒光的干擾，具有線性范圍寬、靈敏度高和穩(wěn)定性好等優(yōu)點，另外，可以利用不同的稀土離子的不同的發(fā)射光波長和不同的衰減時間，實現(xiàn)同一反應(yīng)體系內(nèi)同時檢測多個標志物，這樣和單個指標分開檢測相比可以節(jié)約時間、人員、試劑等，這些特點正好適合本發(fā)明的同時在同一反應(yīng)體系內(nèi)檢測多指標。本發(fā)明提供的乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，具有非常好的線性范圍，檢測CA125的線性范圍為25U/ml 660U/ml，檢測限為IOU/ml ;檢測CEA的線性范圍為3ng/ml 580ng/ml，檢測限為lng/ml ;檢測CA153的線性范圍為20U/ml 300U/ml，檢測限為5U/ml。各檢測指標的正常參考值分別為:CA125為O 35U/ml ；CEA為O 6.5ng/ml ；CA153為O 30U/ml。本發(fā)明提供的乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153時間分辨熒光免疫檢測試劑盒可用于乳腺癌的臨床輔助診斷、療效觀察及預后判斷，對乳腺癌腫瘤的治療和預防具有重要意義。采用本發(fā)明提供的試劑盒可實現(xiàn)在同一反應(yīng)體系內(nèi)同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物指標CA125、CEA、CA153，檢測操作簡單，步驟少，所需時間短，方便快捷；檢測結(jié)果準確，避免了現(xiàn)有的采用三種單項試劑盒分別檢測指標CA125、CEA、CA153，再進行綜合判斷而引起的判斷誤差，大大提高了檢測結(jié)果的特異性和敏感性，為下一步的研究或判斷做出準確的結(jié)論提供了可靠依據(jù)。


圖1為本發(fā)明實施例1提供的試劑盒同一微孔內(nèi)同一反應(yīng)體系反應(yīng)原理不意圖；圖2為本發(fā)明實施例1提供的試劑盒與羅氏公司的單指標試劑盒測試CA125相關(guān)回歸分析圖；圖3為本發(fā)明實施例1提供的試劑盒與Abbott公司的單指標試劑盒測試CEA相關(guān)回歸分析圖；圖4為本發(fā)明實施例1提供的試劑盒與北京熱景生物公司的單指標試劑盒測試CA153相關(guān)回歸分析圖。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行詳細說明。實施例1本實施例提供的乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，包括:抗CA125的抗體M32112M、抗CEA的抗體MAM02-008、抗CA153的抗體ab28081三種單克隆抗體組成的混合抗體包被的微孔板；用Eu3+標記的M86306M抗體(抗CA125的抗體)、用Tb3+標記的MAM02-881抗體(抗CEA的抗體)、用Sm3+標記的ab70475抗體(抗CA153的抗體)三種單克隆抗體組成的混合抗體；分析緩沖液；共用熒光增強劑；洗滌液；CA125、CEA、CA153三種標準品混合組成的質(zhì)控品。該試劑盒還包括陰性對照、陽性對照、底物等其它相關(guān)試劑。所述試劑盒中，抗體ab28081、抗體ab70475購自abeam公司；抗體M32112M、抗體M86306M 和抗體 MAM02-008、抗體 MAM02-881 均購自 Meridian 公司。M32112M、MAM02-008、ab28081混合抗體包被的微孔板的制備方法為:把混合抗體用包被緩沖液稀釋，制得混合抗體包被液，混合抗體包被液中，分別抗CA125、CEA、CA153的第一株單克隆抗體的濃度均為0.010g/L,即混合抗體包被液中，抗體M32112M、MAM02-008、ab28081的濃度均為0.010g/L，然后向微孔板的每個孔中分別加入100 μ I的混合抗體包被液，于37°C包被2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板三次，然后再向微孔板的每個孔中分別加入200 μ I的封板液,于室溫封閉2小時,然后用生理鹽水沖洗微孔板兩次,冷凍干燥,制得混合抗體包被的微孔板，密封于鋁箔袋中，4°C保存?zhèn)溆?。其中，包被緩沖液的制備方法為:取濃度為0.05mol/L、pH值為8.5的碳酸鹽緩沖液，然后用質(zhì)量百分比濃度為0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得包被緩沖液。封板液的制備方法為:向濃度為0.02mol/L、pH值為7.4的PBS緩沖液中加入BSA，配制成BSA質(zhì)量百分比濃度為1%的BSA的PBS緩沖液，然后用質(zhì)量百分比濃度為0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得封板液。用Eu3+標記的M86306M抗體、用Tb3+標記的MAM02-881抗體、用Sm3+標記的ab70475抗體三種單克隆抗體組成的混合抗體的制備方法為:將Eu3+標記的M86306M抗體、Tb3+標記的MAM02-881抗體、Sm3+標記的ab70475抗體以質(zhì)量比:Eu3+標記的M86306M抗體:Tb3+標記的MAM02-881抗體:Sm3+標記的ab70475抗體=10:8:11混合，制得混合抗體。其中用Eu3+標記的M86306M抗體、用Tb3+標記的MAM02-881抗體、用Sm3+標記的ab70475抗體的制備方法為:每種抗體的標記流程步驟相同，只是分別抗CA125、CEA、CA153的抗體分別對應(yīng)的稀土離子螯合物標記物為N1-對異硫氰酸芐基-DTTA-Eu、N1-對異硫氰酸芐基-DTTA-Tb、Nl-對異硫氰酸芐基-DTTA-Sm。下面以N1-對異硫氰酸芐基-DTTA-Eu標記的M86306M抗體為例，其標記的具體制備方法和步驟為:(I)標記前應(yīng)用截留分子量為50kDa的離心柱對M86306M抗體進行標記前純化處理，具體步驟如下:懸空加入Img M86306M抗體于50kDa的離心柱中，9000rpm離心8分鐘，棄掉濾液；往離心柱中加入200 μ I標記緩沖液，9000rpm離心8分鐘，棄掉濾液，該步驟重復四次，最后一次將離心管取出，棄掉濾液；往離心柱中加入50 μ I標記緩沖液，讓其靜置I分鐘，然后將離心柱的濾膜反轉(zhuǎn)裝入離心管中，SOOOrpm離心6分鐘，收集濾液，即得到待標記的Μ86306Μ抗體；其中，標記緩沖液為50mmol/L、pH值為9.0的碳酸鹽緩沖液；(2)稱取稀土離子螯合物標記物N1-對異硫氰酸芐基-DTTA-Eu 0.2mg，W；V80yl超純水進行溶解，制成螯合試劑；將螯合試劑加入到盛有待標記抗體M86306M的EP管中，混合均勻；置于搖床上4°C過夜，制得標記好的抗體M86306M，即用Eu3+標記的M86306M抗體；用三倍柱體積的PBS緩沖液作為柱平衡液平衡Superdex 2001 X 30cm柱，用移液器吸取用Eu3+標記的M86306M抗體緩慢上樣，用洗脫液進行洗脫，流速控制在lml/min，蛋白檢測儀檢測到蛋白峰收集樣品，將收集的目的產(chǎn)物經(jīng)過0.22 μ m濾膜除菌；用比活度測定方法對標記抗體進行標記率的計算與分析。長期儲存標記抗體可以將高純度的BSA加入到標記抗體溶液中，BSA的終濃度為0.1%，可置于4°C或_20°C進行保存。分析緩沖液的制備方法為:向每升濃度為0.05mol/L、pH值為8.0的Tris-Hcl緩沖液中加入9g NaCU0.5g NaN3UOg BSA、0.1ml吐溫_40、5g聚乙二醇，混合均勻，即制得分析緩沖液。共用熒光增強劑的制備方法為:解離部分:將100 μ mol的ΡΤΑ、7 μ mol的氧化釔、
0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合,用水定容至I升,用乙酸調(diào)pH值至3.5,制得解離部分；增強部分:將0.1mmol的鄰菲羅啉和0.2mol的Tris混合,用水定容至I升，制得增強部分。洗滌液的制備方法為:在濃度為0.0lmol/L、pH值為7.4的PBS緩沖液中加入吐溫-20，混勻，制得吐溫-20質(zhì)量百分比濃度為0.05%的PBS溶液，然后用質(zhì)量百分比濃度為
0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得洗滌液。質(zhì)控品為CA125、CEA、CA153標準品的混合物。CA125、CEA購自Abnova公司，CA153購自abeam公司。實施例2本發(fā)明實施例1提供的試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用，即采用本發(fā)明實施例1提供的試劑盒，同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153時間分辨熒光免疫檢測方法，其反應(yīng)原理如圖1所示，采用雙抗體夾心法，包括以下步驟:(I)用分析緩沖液稀釋CA125、CEA、CA153蛋白標準品混合物，即質(zhì)控品，制成具有系列濃度梯度包含有CA125、CEA、CA153蛋白標準品的混合溶液；(2)分別取100μ I待測樣品人體血清和步驟(I)制備的蛋白標準品混合溶液，力口入抗體Μ32112Μ、抗體ΜΑΜ02-008、抗體ab28081三種單克隆抗體組成的混合抗體包被的微孔板的不同孔中，37°C溫育I小時，三次洗滌(洗滌時所用洗滌液的配制方法為:每升PBS緩沖液中加入9g氯化鈉、0.5ml吐溫-20，搖勻，即可)，之后加入100μ I混合標記抗體工作液(用分析緩沖液以體積比1:3000稀釋混合標記抗體儲存液，制得混合標記抗體工作液，每100 μ I該混合標記抗體工作液中含有Eu3+標記的Μ86306Μ抗體100ng、Tb3+標記的MAM02-881抗體80ng、Sm3+標記的ab70475抗體llOng，其余為分析緩沖液)，震蕩均勻，37°C溫育I小時，用洗滌液洗5次，在吸水紙上控干，加入200 μ I共用熒光增強劑的解離部分，震蕩5分鐘，加入20 μ I共用熒光增強劑的增強部分，震蕩8分鐘，在時間分辨熒光儀上測量熒光強度，激發(fā)光波長為315nm ;647nm、612nm、544nm分別為Sm3+、Eu3+、Tb3+的最強的發(fā)射光峰；500微秒、200微秒、50微秒分別為Eu3+、Tb3+、Sm3+的延遲時間；分別測量各自的發(fā)光值。把不同濃度的CA125、CEA、CA153蛋白混合標準品中各指標分別和各自的發(fā)光值做標準曲線，得到不同指標的各自標準曲線，待測樣品人體血清的濃度按標準曲線計算得出。得到試劑盒的精密度:CA125分析內(nèi)和分析間的變異系數(shù)分別為3.9% 5.8%、5.1% 7.8% ；CEA分析內(nèi)和分析間的變異系數(shù)分別為3.9% 5.9%、4.7% 8.3% ；CA153分析內(nèi)和分析間的變異系數(shù)分別為4.4% 6.5%、6.0% 8.9%。實施例3用本發(fā)明的試劑盒檢測40份血清樣本得到的CA125、CEA、CA153三個指標的數(shù)值和用同樣的40份血清樣本分別用羅氏公司的單指標試劑盒測試CA125、Abbott公司的單指標試劑盒測試CEA、北京熱景生物公司的單指標試劑盒測試CA153所得到的數(shù)據(jù)分別做回歸相關(guān)性分析，分別對應(yīng)附圖2、3、4，從附圖可以看出，本發(fā)明試劑盒測試得到的各指標數(shù)據(jù)和分別用單指標試劑盒測試得到的數(shù)據(jù)具有很好的相關(guān)性。
權(quán)利要求
1.一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，把三種乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153綜合在同一微孔的同一反應(yīng)體系內(nèi)，采用時間分辨熒光免疫法檢測，其特征在于:該試劑盒包括:分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板；用Eu3+標記的抗CA125、Tb3+標記的抗CEA、Sm3+標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體；分析緩沖液；共用熒光增強劑；洗滌液；質(zhì)控品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于:所述的第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的制備方法為:把分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體用包被緩沖液稀釋，制得抗體包被液，然后向微孔板的每個孔中分別加入100 μ I的所述抗體包被液，于37°C包被2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板三次，然后再向微孔板的每個孔中分別加入200μ I的封板液，于室溫封閉2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板兩次，冷凍干燥，制得混合抗體包被的微孔板。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于:所述抗體包被液中，分別抗CA125、CEA、CA153的第一株單克隆抗體的濃度均為0.009 0.014g/L0
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于:所述用Eu3+標記的抗CA125、Tb3+標記的抗CEA、Sm3+標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體中，用Eu3+標記的抗CA125抗體、Tb3+標記的抗CEA抗體、Sm3+標記的抗CA153抗體的質(zhì)量配比為:Eu3+標記的抗CA125抗體:Tb3+標記的抗CEA抗體:Sm3+標記的抗CA153抗體=(7 13): (6 11): (6.5 13)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于:所述共用熒光增強劑的制備方法為:解離部分:將70 200 μ mol的PTA、2 7 μ mol的氧化釔、0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合,用水定容至I升，用乙酸調(diào)pH值至3.5,制得解離部分；增強部分:將0.1 0.4mmol的鄰菲羅啉和0.2mol的Tris混合,用水定容至1L,制得增強部分。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于:所述洗滌液的制備方法為:在濃度為0.0lmol/L、pH值為7.4的PBS緩沖液中加入吐溫_20，混勻，制得吐溫-20質(zhì)量百分比濃度為0.05%的PBS溶液，然后用質(zhì)量百分比濃度為0.2%的NaN3溶液防腐處理，制得洗滌液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于:所述質(zhì)控品為CA125、CEA、CA153標準品的混合物。
8.—種權(quán)利要求1-7任一所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟: (1)用分析緩沖液稀釋質(zhì)控品，制成具有系列濃度梯度包含有CA125、CEA、CA153標準品的混合溶液； (2)將待測樣品與步驟(1)制備的標準品混合溶液分別加入抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分別與CA125、CEA、CA153結(jié)合的標記有稀土離子螯合物的第二株單克隆抗體混合抗體，之后加入共用熒光增強劑，進行時間分辨熒光免疫檢測，得到發(fā)光值； (3)根據(jù)測定的具有系列濃度梯度的包含CA125、CEA、CA153標準品的混合溶液的發(fā)光值做標準曲線； (4)以測定的待測樣品中的CA125、CEA、CA153發(fā)光值和標準品中CA125、CEA、CA153各自的標準曲線的發(fā)光值做比較，得出待測樣品中CA125、CEA、CA153各自的含量。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用，其特征在于:所述待測樣品`為人體血清。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物和醫(yī)學檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種在同一反應(yīng)體系內(nèi)同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物指標CA125、CEA、CA153的時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，同時還涉及該試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應(yīng)用。該試劑盒包括分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板；用Eu3+標記的抗CA125、Tb3+標記的抗CEA、Sm3+標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體；分析緩沖液；共用熒光增強劑；洗滌液；質(zhì)控品。本發(fā)明提供的試劑盒可用于乳腺癌的臨床輔助診斷、療效觀察及預后判斷，對乳腺癌腫瘤的治療和預防具有重要意義，同時檢測三個腫瘤標志物，簡化了檢測步驟，提高了檢測數(shù)據(jù)綜合分析的特異性和靈敏性。
文檔編號G01N33/577GK103105384SQ201210512730
公開日2013年5月15日 申請日期2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者王嘎, 程自卿 申請人:河南生生醫(yī)療器械有限公司