專利名稱：一種煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明屬于農藥殘留分析技術領域，具體涉及一種煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法。
背景技術：
馬來酰肼(maleic hydrazide)又名抑芽丹，為煙草抑芽劑。馬來酰肼的log P=-0. 84，為強極性化合物，且煙草本身化學成分如糖類、煙堿、酚類、有機酸、蛋白質等易干擾分析檢測結果，因此在做該物質的殘留量檢測分析時，樣品的提取處理技術很關鍵。目前，煙草中馬來酰肼的殘留量分析方法，其中樣品的前處理多采用在酸性(或堿性)水溶液中加熱煮沸回流的方式提取馬來酰肼。楊昀等使用鹽酸水溶液，經沸水浴回流提取煙草中殘留的馬來酰肼，經SPE-C18柱層析凈化，HPLC法測定；張威等使用氫氧化鈉 水溶液，經蒸餾提取煙草中殘留的馬來酰肼，比色法吸光度測定。以中國煙草總公司鄭州煙草研究院牽頭起草的行業(yè)標準《煙草及煙草制品馬來酰肼殘留量的測定高效液相色譜法》中，使用鹽酸水溶液，經沸水浴回流提取煙草中殘留的馬來酰肼，經SPE-C18柱層析凈化后HPLC測定。上述幾種方法均存在如下幾個缺點(I)較難控制溶液pH值；(2)沸水浴蒸餾回流過程操作復雜，且需要高溫加熱，存在一定安全隱患；(3)部分方法需要對提取液進行酸堿中和，增加實驗操作步驟，不適合大批量樣品的分析測定。

發(fā)明內容
鑒于現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于通過大量試驗研究，提供一種煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法。該方法不需對樣品采取加熱蒸餾、回流等手段，不需對提取液進行酸堿中和，解決了現(xiàn)有技術方法中存在的缺點，樣本中殘留的馬來酰肼回收率高，且大大簡化了操作過程。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，包括樣品前處理、HPLC法測定步驟，所述的樣品前處理包括如下步驟(I)取煙草或煙草制品置于容器中，加入酸化甲醇溶液，震蕩提取lh，然后超聲提取lOmin，過濾，濾液轉入濃縮瓶后減壓濃縮蒸除甲醇，得濃縮物；所述酸化甲醇溶液是甲醇與0. 2mol/L鹽酸水溶液按80 20的體積比配制而成；(2)取SPE-C18固相萃取柱，先后用甲醇、水預淋洗，將步驟⑴所得濃縮物轉入SPE-C18固相萃取柱，用淋洗液分3次洗滌濃縮瓶，并轉入SPE-C18固相萃取柱，收集淋出液，用淋洗液定容后采用HPLC法測定；所述淋洗液為0. 3% (v/v)磷酸水溶液。進一步優(yōu)選地，所述煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，其中HPLC的測定條件為高效液相色譜儀為Waters Alliance e 2695/2487 ；色譜柱為Waters Sun Fire C18, 5. 0 U m, 4. 6 X 250mm ；
流動相為體積比=5 95的甲醇/0. I %磷酸水溶液；流速為0. 8mL/min ;柱溫30°C，測定波長205nm，進樣量IOy L。在本發(fā)明的一個最優(yōu)選地的實施例中，所述煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，包括如下步驟(I)稱取煙草或煙草制品4.0g，置于250mL磨口三角瓶中，加入40mL酸化甲醇溶液，于循環(huán)式震蕩器震蕩提取lh，再于超聲波提取器超聲提取lOmin，過濾后量取IOmL提取液，在旋轉蒸發(fā)儀上50°C減壓濃縮蒸除甲醇，得濃縮物；所述酸化甲醇溶液是甲醇與0. 2mol/L鹽酸水溶液按80 20的體積比配制而成；(2)取SPE-C18固相萃取柱(lg/6mL)，先后用5mL甲醇、5mL水預淋洗，然后將步驟
(I)所得濃縮物轉入SPE-C18固相萃取柱，用8mL淋洗液分3次洗滌濃縮瓶并轉入SPE-C18固相萃取柱，收集淋出液，用淋洗液定容至10mL，得樣品；所述淋洗液為0.3% (v/v)磷酸水溶液；(3)對步驟⑵所得樣品進行HPLC測定，條件為高效液相色譜儀為WatersAlliance e 2695/2487 ;色譜柱為 Waters Sun FireC18,5. 0 u m, 4. 6X 250mm ;流動相為體積比=5 95的甲醇/0. I %磷酸水溶液；流速為0. 8mL/min ;柱溫30°C，測定波長205nm，進樣量10 u L0與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明涉及的煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法具有操作簡便、迅速、準確的優(yōu)點。具體表現(xiàn)為本發(fā)明采用酸性甲醇直接提取煙草中殘留的馬來酰肼，提取液經SPE-C18柱層析凈化后進行HPLC測定，不需進行加熱蒸餾、回流等措施；根據(jù)加熱工具電熱套的規(guī)格，現(xiàn)有技術方法一批可處理6-8個煙草樣本，而本發(fā)明采用振蕩器和超聲波提取器振蕩提取的方法，一批可處理12-16個煙草樣品，適合大批量煙草樣品中馬來酰肼殘留量的分析測定。另外，現(xiàn)有的測定技術中，用0. lmol/L醋酸水溶液作為流動相，檢測波長313nm。而本發(fā)明對HPLC檢測條件進行優(yōu)化，以甲醇/磷酸水溶液作為流動相，較醋酸水溶液具有更好的分離效果，馬來酰肼色譜峰與雜質峰的分離效果很好，能最大程度的減少煙草本身化學成分對靶標物馬來酰肼的干擾，更準確地對馬來酰肼殘留量進行定量分析。


圖I為馬來酰肼標準品的儀器測定色譜圖。圖2為未添加馬來酰肼的煙草空白樣本的儀器測定色譜圖。圖3為煙草空白樣本中添加馬來酰肼的儀器測定色譜圖。圖4為煙草樣品中馬來酰肼的儀器測定色譜圖。
具體實施例方式以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術方案做進一步作描述，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內。實施例I煙草樣品中馬來酰肼殘留量的測定I、煙草中馬來酰肼的提取、
80%酸化甲醇溶液的配制80mL甲醇+20mL 0. 2mol/L鹽酸水溶液。稱取煙草樣品4. 0g，置于250mL磨口三角瓶中，加入40mL80%酸化甲醇，于循環(huán)式震蕩器震蕩提取lh，再于超聲波提取器超聲提取lOmin。過濾后量取IOmL提取液，在旋轉蒸發(fā)儀上50°C減壓濃縮蒸除甲醇，待凈化。2、提取液的凈化 淋洗液0. 3%磷酸水溶液。SPE-C18固相萃取柱(lg/6mL)，用5mL甲醇、5mL水預淋洗，提取液濃縮殘渣轉入層析柱，用SmL淋洗液分3次洗滌濃縮瓶并轉入層析柱，收集淋出液，用淋洗液定容至10mL，待測定。3、儀器測定條件高效液相色譜儀(HPLC-UV)，WatersAlliance e 2695/2487 ；色譜柱Waters Sun Fire C18, 5. 0 u m, 4. 6 X 250mm ;流動相甲醇/0. I %磷酸水溶液(5 95，V/V)，流速0. 8mL/min ；柱溫30°C，測定波長205nm，進樣量10iiL。馬來酰肼在上述高效液相色譜儀器的測定條件下，在色譜柱中相對保留時間為17. 5-17. 7min(見圖 I、圖 3、圖 4)。本發(fā)明采用酸化甲醇溶液直接浸泡煙草樣本，配合提取儀器加速了提取速度。循環(huán)式振蕩器和超聲波提取器是做農藥殘留分析常用的提取儀器，經試驗，確定使用循環(huán)式振蕩器提取lh，再用超聲波振蕩器提取lOmin，提取液經濾紙過濾，剔除大顆粒雜質后，再進行SPE柱層析凈化，消除煙草本身化學成分的干擾。以煙草空白樣本，添加3個不同濃度的馬來酰肼標準品溶液，每個濃度重復5次，按上述方法提取、凈化和檢測。試驗結果表明，在煙草空白樣本中添加濃度為I、10、80mg/kg時，平均回收率75. 24% 87. 98%，相對標準偏差2. 32% 6. 99%。表I.馬來酰肼在煙草樣本中添加回收率試驗結果
權利要求
1.一種煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，包括樣品前處理、HPLC法測定步驟，其特征在于所述的樣品前處理包括如下步驟 (1)取煙草或煙草制品置于容器中，加入酸化甲醇溶液，震蕩提取lh，然后超聲提取lOmin，過濾，濾液轉入濃縮瓶后減壓濃縮蒸除甲醇，得濃縮物；所述酸化甲醇溶液是甲醇與0.2mol/L鹽酸水溶液按80 20的體積比配制而成； (2)取SPE-C18固相萃取柱，先后用甲醇、水預淋洗，將步驟(I)所得濃縮物轉入SPE-C18固相萃取柱，用淋洗液分3次洗滌濃縮瓶，并轉入SPE-C18固相萃取柱，收集淋出液，用淋洗液定容后采用HPLC法測定；所述淋洗液為0. 3% (v/v)磷酸水溶液。
2.根據(jù)權利要求I所述煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，其特征在于HPLC的測定條件為高效液相色譜儀為Waters Alliance e 2695/2487 ;色譜柱為WatersSun Fire C18, 5. 0 y m, 4. 6 X 250mm ;流動相為體積比=5 : 95的甲醇/0. I %磷酸水溶液;流速為0. 8mL/min ;柱溫30°C，測定波長205nm，進樣量10 Uし
3.根據(jù)權利要求I所述煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，其特征在于包括如下步驟 (1)稱取煙草或煙草制品4.Og,置于250mL磨ロ三角瓶中，加入40mL酸化甲醇溶液，于循環(huán)式震蕩器震蕩提取lh，再于超聲波提取器超聲提取lOmin，過濾后量取IOmL提取液，在旋轉蒸發(fā)儀上50°C減壓濃縮蒸除甲醇，得濃縮物；所述酸化甲醇溶液是甲醇與0. 2mol/L鹽酸水溶液按80 20的體積比配制而成； (2)取SPE-C18固相萃取柱(lg/6mL)，先后用5mL甲醇、5mL水預淋洗，然后將步驟(I)所得濃縮物轉入SPE-C18固相萃取柱，用8mL淋洗液分3次洗滌濃縮瓶并轉入SPE-C18固相萃取柱，收集淋出液，用淋洗液定容至10mL，得樣品；所述淋洗液為0. 3% (v/v)磷酸水溶液； (3)對步驟(2)所得樣品進行HPLC測定，條件為高效液相色譜儀為WatersAlliancee 2695/2487 ;色譜柱為 Waters Sun Fire C18, 5. 0 u m, 4. 6 X 250mm ;流動相為體積比=5 95的甲醇/0. I %磷酸水溶液；流速為0. 8mL/min ;柱溫30°C，測定波長205nm，進樣量10 uし
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙草或煙草制品中馬來酰肼殘留量的檢測方法，包括樣品前處理、HPLC法測定步驟，所述的樣品前處理包括取煙草或煙草制品置于容器中，加入酸化甲醇溶液，震蕩提取，然后超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮物轉入SPE-C18固相萃取柱進行凈化，最后采用HPLC法測定馬來酰肼殘留量。本發(fā)明的方法不需對樣品采取加熱蒸餾、回流等手段，解決了現(xiàn)有技術中存在的缺點，大大簡化了操作過程。
文檔編號G01N30/06GK102759587SQ20121024434
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月16日 優(yōu)先權日2012年7月16日
發(fā)明者孫惠青, 徐光軍, 徐金麗, 李義強, 王鳳龍, 王秀國, 鄭曉 申請人:孫惠青