專利名稱：可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品添加劑檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法。
背景技術(shù)：
苯甲酸，又名安息酸，是一種常見的有機化學(xué)反應(yīng)原料和中間體，在酸性條件下對微生物的生長和繁殖有很強的抑制作用，故在食品中常用作防腐劑。但由于其對人體有一定毒性，特別是過量使用時會對人體造成危害，我國《食品安全國家標準——食品添加劑使用標準》(GB2760-2011)限定了苯甲酸及其鈉鹽的使用范圍和使用量。近年來，食品安全事件接連發(fā)生，食品安全問題引起了人們的高度關(guān)注。食品添加劑在食品中的殘留檢測具 有十分重要的意義。目前食品中苯甲酸的測定方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法(GB/T 5009. 59- 2003)等，這些方法測定準確度高，但操作相對復(fù)雜，需要專門高價儀器設(shè)備；近年來，對食品中苯甲酸含量的簡便檢測方法也有一些報道，如公開號CN101806767A的發(fā)明公開了一種用于檢測食品中苯甲酸含量的一次性生物傳感器電極及其制備方法，所述生物傳感器電極包括基底層與在基底層上形成的反應(yīng)層，所述的基底層為碳油墨絲網(wǎng)印刷電極，所述的反應(yīng)層為氯離子插層鎂鋁水滑石納米粒子的懸濁液與酪氨酸酶混合液，用戊二醛蒸汽交聯(lián)固定，用磷酸鹽緩沖溶液清洗，即得類水滑石-酪氨酸酶修飾的絲網(wǎng)印刷電極。該一次性生物傳感器電極的制備較復(fù)雜，生產(chǎn)成本較高，而且只能一次性使用，較浪費資源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有苯甲酸測定方法存在的操作復(fù)雜、需要專門高價儀器設(shè)備、檢測不便的缺陷，提供一種可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，它操作方便、檢測簡便、適應(yīng)性好、檢測成本低、檢測的準確度較高，測定回收率高、重現(xiàn)性好。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是
一種可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，所述的方法包括如下步驟
(1)標準苯甲酸儲備液的制備將苯甲酸標準品以乙腈溶解并全部轉(zhuǎn)移到容量瓶中，再用乙腈定容，得到I. Omg/mL苯甲酸標準儲備液；
(2)樣品溶液的制備取食品樣品粉碎或打成漿狀，稱取粉碎或漿狀的樣品5 10.Og,置于IOOmL容量瓶中，加入乙腈60mL±10mL，超聲萃取18 25min，用乙腈定容，微孔濾膜過濾，濾液即為樣品溶液，備用；
將食品樣品粉碎或打成漿狀是為了能更好地提取食品中的苯甲酸，固體食品樣品普通粉碎就行，半固體食品樣品就打成漿。超聲萃取能使樣品中的苯甲酸更有效地溶出來，從而更有效地提取樣品中的苯甲酸；微孔濾膜的孔徑在0. 22-2. OMm,具體可選擇0. 22Mm,0. 45Mm,0. 65Mm,0. 8Mm, I. 2Mm,2. OWn0
(3)標準工作曲線繪制分別移取(Tioooml苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中，向每個容量瓶中分別加入2. OmL FeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以乙腈定容，得到6個濃度級別的標準工作溶液和I個空白參比液，所述空白參比液中苯甲酸標準儲備液的加入量為OmL，室溫下放置l(Tl5min，在550飛50的測定波長下以空白參比液為參比，用比色皿依次測定吸光度值，以苯甲酸的含量為橫坐標，相應(yīng)吸光度值為縱坐標，繪制標準工作曲線，并擬合出標準曲線方程；
FeBPM是反應(yīng)物之一，H2O2是催化劑，反應(yīng)原理FeBPM和苯甲酸在催化劑H2O2的作用下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成一種藍色化合物，該藍色化合物生成量與苯甲酸的量成比例，因此可以通過顏色的深淺來確定反應(yīng)中苯甲酸的量。(4)樣品測定移取10. OmL樣品溶液于25mL容量瓶中，向容量瓶中分別加入2. OmLFeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以乙腈定容，室溫下放置10_15min，在550-650的測定波 長下以空白參比液為參比，用比色皿測定樣品的吸光度值，把樣品的吸光度值代入步驟(3)得到的標準曲線方程中計算出苯甲酸的mg數(shù)，從而換算出每克樣品中苯甲酸的含量。 作為優(yōu)選，所述FeBPM溶液為(N，N-二甲基-N，N-二(2_甲基吡啶)_1，2_二胺)-二乙腈鐵高氯酸鹽溶液，F(xiàn)eBPM溶液濃度范圍為0. ri. 0禮。FeBPM是(N，N- 二甲基-N，N- 二(2_甲基吡啶)_1，2_ 二胺)-二乙腈鐵高氯酸鹽這個化合物英文名稱的簡稱，mM就是0. 001mol/L, mM即毫摩爾每升的意思。FeBPM溶液濃度范圍為0. ri. 0 mM，加入量為2. OmL，這樣能達到最佳的反應(yīng)條件，F(xiàn)eBPM溶液濃度過高或過低對化學(xué)反應(yīng)有影響，只有在較合適的濃度范圍內(nèi)，生成的化合物量最多，也就是顏色最深，這樣更有利于檢測，能檢測到更低濃度的苯甲酸。FeBPM溶液濃度為0. 2mM最佳。作為優(yōu)選，所述H2O2溶液的濃度為FeBPM溶液濃度的2飛倍。H2O2溶液的濃度為FeBPM溶液濃度的2飛倍，H2O2溶液加入量為2. OmL,這樣能達到最佳的反應(yīng)條件，H2O2溶液的濃度過高或過低對化學(xué)反應(yīng)有影響，只有在較合適的濃度范圍內(nèi)，生成的化合物量最多，也就是顏色最深，這樣更有利于檢測，能檢測到更低濃度的苯甲酸。H2O2溶液的濃度為FeBPM溶液濃度的3倍為最佳。作為優(yōu)選，所述FeBPM溶液配制方法是準確稱取112. 3^1123mg FeBPM,以乙腈溶解并定容到IOOOmL,得到濃度為0. ri. 0 mM的FeBPM溶液。作為優(yōu)選，步驟(3)標準工作曲線的繪制與步驟(4)樣品測定同時進行。這樣能節(jié)約整個測定的時間，提高效率。作為優(yōu)選，步驟(3)和步驟(4)中所述的測定波長為590nm。590nm波長下，測定最準確。作為優(yōu)選，步驟(3)中分別移取(Tioooml苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中具體為分別移取0ML、100ML、200ML、400ML、600ML、800ML和1000ML苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中。本發(fā)明的有益效果是
(I)對樣品的前處理要求簡單，僅需要用乙腈超聲萃取，然后微孔濾膜過濾即可。(2)操作過程簡單、不需要大型儀器設(shè)備。(3)本發(fā)明在檢測范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系，檢出限可達20. 0l^g/25mL，平均回收率為98. 1%，平均相對標準偏差(n=10)為2. 7%，本發(fā)明測定回收率高、重現(xiàn)性好。


圖I為標準工作溶液測定時的波長掃描光譜 圖2為苯甲酸測定的標準工作曲線圖。
具體實施例方式下面通過具體實施例，并結(jié)合附圖，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的具體說明。測定波長的確定
準確稱取500mg苯甲酸標準品于燒杯中，以乙腈溶解并全部轉(zhuǎn)移到500mL容量瓶中，用乙腈定容到刻度，得到I. Omg/mL苯甲酸標準儲備液；分別移取O、1000ML苯甲酸標準儲備液于兩個25mL容量瓶中，每個容量瓶中分別加入2. OmL FeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以 乙腈定容。室溫下放置lOmin，以乙腈為參比，用Icm石英比色皿，在紫外可見分光光度計中30(T900nm范圍內(nèi)進行波長掃描，得到光譜曲線，如圖I所示。從圖I可知，不含苯甲酸的反應(yīng)液在370nm附近有最大吸收峰；含有苯甲酸的反應(yīng)液在370nm和590nm有最大吸收峰。本發(fā)明采用可見分光光度法測定，因此,確定590nm為本發(fā)明的最佳測定波長。下面以蜜餞樣品中苯甲酸的含量測定為例，來具體說明本發(fā)明的方法。實施例I :測定蜜餞樣品中苯甲酸的含量。(I)檢測試劑的配制準確稱取224. 6mg FeBPM ((N，N- 二甲基-N，N- 二(2_甲基吡啶)_1，2- 二胺)-二乙腈鐵高氯酸鹽)入一干凈燒杯中，以乙腈溶解并定容到IOOOmL,即為0. 2mM FeBPM溶液。移取610ML 30% H2O2溶液到IOOmL容量瓶中，以蒸餾水定容到刻度，即濃度約為0. 6mM的H2O2溶液。(2)標準苯甲酸儲備液的制備準確稱取500mg苯甲酸標準品于燒杯中，以乙腈溶解并全部轉(zhuǎn)移到500mL容量瓶中，用乙腈定容到刻度，得到I. Omg/mL苯甲酸標準儲備液。(3)樣品溶液的制備取蜜餞100g，在組織搗碎機中打成漿狀，稱取成漿后的蜜餞樣品10. Og到一干燥燒杯中，加入少量乙腈濕潤，并全部移到IOOmL容量瓶中，并用少量乙腈清洗燒杯，清洗液倒入容量瓶中，容量瓶中樣品進行超聲萃取20min，用乙腈定容到刻度，用I. 2Mm濾膜過濾，濾液即為樣品溶液，備用。(4)標準工作曲線繪制分別移取0、100、200、400、600、800和1000ML苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中，每個容量瓶中分別加入2. OmL FeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以乙腈定容，得到6個濃度級別的標準工作溶液和I個空白參比液，空白參比液中苯甲酸標準儲備液的加入量為OmL，室溫下放置lOmin，在590nm的測定波長下以空白參比液為參比，用Icm比色皿依次測定吸光度值。以苯甲酸的含量為橫坐標，相應(yīng)吸光度值為縱坐標，繪制標準工作曲線，如圖2所示。(5)樣品測定在制作標準曲線的同時進行樣品測定，步驟如下移取10. OmL樣品溶液于25mL容量瓶中，向容量瓶中分別加入2. OmL FeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以乙腈定容，室溫下放置lOmin，在590nm的測定波長下以空白參比液為參比，用Icm比色皿測定樣品的吸光度值，記錄吸光度值為0. 135。(6)檢測限和定量限的確定對標準工作曲線中的最低濃度工作標準溶液(即移取IOOML標準儲備液到25mL容量瓶)，做六次重復(fù)測定試驗，計算標準偏差，以3倍標準偏差為檢出限、10倍標準偏差為定量檢測限，得到結(jié)果如表I所示。表I、可見分光光度法測定蜜餞中苯甲酸的標準曲線和檢測限
名稱線性回歸方程相關(guān)系檢測限定量檢測限
數(shù) R2 (^g/25mL) (fig/25 mL)
苯甲 Y=0.3384X+0.0032 0.998420.070.0
酸
(7)結(jié)果計算把樣品測定的吸光度值0. 135代入線性回歸方程，得到IOmL樣品溶液 中苯甲酸的含量為0. 389mg，換算成蜜餞中苯甲酸含量為0. 389g/Kg。對本發(fā)明方法的重現(xiàn)性和加標回收率進行檢測
按照實施例I中樣品測定方法，對該樣品進行平行測定10次，得到本發(fā)明測定蜜餞中苯甲酸含量的重現(xiàn)性結(jié)果如表2所示。另外，分別在樣品中加入3個梯度的標準儲備苯甲酸溶液，得到3種不同濃度的加標樣，測定結(jié)果如表3所示。表2、可見分光光度法測定蜜餞中苯甲酸的重現(xiàn)性結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其特征在于所述的方法包括如下步驟 (1)標準苯甲酸儲備液的制備將苯甲酸標準品以乙腈溶解并全部轉(zhuǎn)移到容量瓶中，再用乙腈定容，得到I. Omg/mL苯甲酸標準儲備液； (2)樣品溶液的制備取食品樣品粉碎或打成漿狀，稱取粉碎或漿狀的樣品5 10.Og,置于IOOmL容量瓶中，加入乙腈60mL±10mL，超聲萃取18 25min，用乙腈定容，微孔濾膜過濾，濾液即為樣品溶液，備用； (3)標準工作曲線繪制分別移取(Tioooml苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中，向每個容量瓶中分別加入2. OmL FeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以乙腈定容，得到6個濃度級別的標準工作溶液和I個空白參比液，所述空白參比液中苯甲酸標準儲備液的加入量為OmL，室溫下放置l(Tl5min，在55(T650nm的測定波長下以空白參比液為參比，用比色皿依次測定吸光度值，以苯甲酸的含量為橫坐標，相應(yīng)吸光度值為縱坐標，繪制標準工作曲線，并擬合出標準曲線方程； (4)樣品測定移取10.OmL樣品溶液于25mL容量瓶中，向容量瓶中分別加入2. OmLFeBPM溶液和2. OmL H2O2溶液，再以乙腈定容，室溫下放置l(Tl5min，在55(T650nm的測定波長下以空白參比液為參比，用比色皿測定樣品的吸光度值，把樣品的吸光度值代入步驟(3)得到的標準曲線方程中計算出苯甲酸的mg數(shù)，從而換算出每克樣品中苯甲酸的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其特征在于所述FeBPM溶液為(N，N- 二甲基-N，N- 二(2-甲基吡啶)_1，2- 二胺)-二乙腈鐵高氯酸鹽溶液，F(xiàn)eBPM溶液濃度范圍為0. ri. 0禮。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其特征在于所述H2O2溶液的濃度為FeBPM溶液濃度的2飛倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其特征在于所述FeBPM溶液配制方法是準確稱取112. 3 1123mg FeBPM，以乙腈溶解并定容到IOOOmL,得到濃度為0. I I. 0 mM的FeBPM溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3或4所述的可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法 其特征在于步驟(3)標準工作曲線的繪制與步驟(4)樣品測定同時進行。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3或4所述的可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其特征在于步驟(3)和步驟(4)中所述的測定波長為590nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3或4所述的可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其特征在于步驟(3)中分別移取(Tioooml苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中具體為分別移取0ML、100ML、200ML、400ML、600ML、800ML和1000ML苯甲酸標準儲備液于七個25mL容量瓶中。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種可見分光光度法測定食品中苯甲酸含量的方法，其目的在于解決現(xiàn)有苯甲酸測定方法存在的操作復(fù)雜、需要專門高價儀器設(shè)備、檢測不便的缺陷。本發(fā)明的主要步驟包括(1)標準苯甲酸儲備液的制備，(2)樣品溶液的制備，(3)標準工作曲線繪制，(4)樣品測定。本發(fā)明它操作方便、檢測簡便、適應(yīng)性好、檢測成本低、檢測的準確度較高，測定回收率高、重現(xiàn)性好。
文檔編號G01N21/31GK102749293SQ20121012424
公開日2012年10月24日 申請日期2012年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月26日
發(fā)明者趙澎濤, 黃光榮 申請人:杭州天邁生物科技有限公司