專利名稱：測定糖化血清蛋白的試劑盒的制作方法
測定糖化血清蛋白的試劑盒本發(fā)明涉及ー種醫(yī)藥試劑，具體涉及ー種測定糖化血清蛋白的試劑盒。糖化血清蛋白(GSP)是臨床上血糖監(jiān)測的指標(biāo)之一，對于評價(jià)糖尿病患者近期血糖控制情況及反映短期內(nèi)血糖水平的變化具有較高的臨床價(jià)值。人體中葡萄糖與蛋白質(zhì)發(fā)生非酶糖化反應(yīng)即形成糖化蛋白。糖化血紅蛋白(HbAlc)是血液中葡萄糖與紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在其生命的120天內(nèi)非酶促反應(yīng)形成的ー種糖蛋白，故可反映測定前2 3個(gè)月內(nèi)患者的總體血糖水平，是國際上評價(jià)長期血糖控制的金標(biāo)準(zhǔn)，因血紅蛋白半衰期長，其測定值難以反映患者近期血糖水平；糖化血清蛋白(GSP)是血清蛋白(主要是白蛋白)與葡萄糖發(fā)生非酶促反應(yīng)的產(chǎn)物，由于白蛋白的半衰期為17 19天，故其值能反映測定前2 3周血糖的平均水平，是目前臨床上用來判斷短期血糖控制的指標(biāo)。早在上世紀(jì)80年代，日本學(xué)者就研發(fā)了高壓液相離子交換法(HPLC法)進(jìn)行糖化血清蛋白的測定。HPLC法測定糖化血清蛋白可準(zhǔn)確檢測患者短期內(nèi)血糖控制的總體水平，但當(dāng)時(shí)由于其代價(jià)高昂，處理樣本量小，不適宜臨床常規(guī)開展而未得到廣泛應(yīng)用。本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確定量的檢測試劑，其檢測具有良好的稀釋直線性、準(zhǔn)確度、精密度，并與HPLC檢測法有良好的一致性。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明設(shè)計(jì)了ー種測定糖化血清蛋白的試劑盒，包括試劑Rl和試劑R2，其中試劑R1，包括緩沖液20mmol/L;表面活性剤，占試劑Rl的0. 5 % ;抗干擾物0. 05-0. lmmol/L ;穩(wěn)定劑 0. 5-lg/L ;防腐剤 0. 05g/L ；試劑R2，包括果糖氨基酸氧化酶20mmol/L ;辣根過氧化酶20KU/L ;色原0. Immol/L ;防腐剤 0. 05g/L ;穩(wěn)定劑 0. 5-lg/L。所述的試劑Rl中，緩沖液為MES緩沖液或磷酸鉀緩沖液，PH值為5. 5-8. 5。所述的試劑Rl中，表面活性劑為TritonX-100、Tween-20或Bri j35中的ー種。所述的試劑Rl中，抗干擾物為高碘酸鈉或亞鐵氰化鉀。所述的試劑Rl中，穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金屬離子中的ー種。所述的試劑Rl中，防腐劑為疊氮化鈉、慶大霉素或氯霉素中的ー種。所述的試劑R2中，色原為DA-64。所述的試劑R2中，防腐劑為疊氮化鈉、慶大霉素或氯霉素中的ー種。 所述的試劑R2中，穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金屬離子中的ー種。
本發(fā)明同現(xiàn)技術(shù)相比，采用本發(fā)明的糖化血清蛋白測定試劑盒，酶法測定糖化血清蛋白，完全可以替代HPLC應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行大批量樣本的測定，其操作簡便，線性范圍寬，成本低，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。圖I為本發(fā)明試劑盒和HPLC測定糖化血清蛋白的相關(guān)性分析曲線。圖2為本發(fā)明試劑盒測定糖化血清蛋白的線性范圍。下面結(jié)合附圖
對本發(fā)明作進(jìn)ー步描述。實(shí)施例I :
試劑Rl包括以下組分MES 緩沖液20mmol/L ；TritonX-100 (表面活性劑)占試劑Rl的0. 5% ;高碘酸鈉(抗干擾物)0. 05mmol/L ；蛋白酶K20KU/L ；海藻糖(穩(wěn)定劑)lg/L ；疊氮化鈉(防腐劑)0. 05g/L ；試劑R2包括以下組分磷酸鉀緩沖液20mmol/L ；果糖氨基酸氧化酶(FAOD)10KU/L ；辣根過氧化物酶(HRP)20KU/L ；色原(DA-64)0. lmmol/L ；慶大霉素(防腐劑)0. 05g/L ；海藻糖(穩(wěn)定劑)lg/L ；用上述試劑盒測定新鮮的病人樣本中糖化血清蛋白(GSP)的含量，在日立7170生化分析儀上進(jìn)行檢測，測定參數(shù)如下分析方法兩點(diǎn)終點(diǎn)法；測定溫度37°C ;比色杯光徑I. Ocm ;波長700nm (主)/800nm (副)；樣品量20ul;試劑 Rl 200ul ;試劑 R2 50ul ；反應(yīng)方向上升；反應(yīng)時(shí)間IOmin測定操作步驟如下表
權(quán)利要求
1.一種測定糖化血清蛋白的試劑盒，包括試劑Rl和試劑R2，其中 試劑R1，包括緩沖液20mmol/L ;表面活性劑，占試劑Rl的0. 5 % ;抗干擾物0.05-0. lmmol/L ;穩(wěn)定劑 0. 5-lg/L ;防腐剤 0. 05g/L ； 試劑R2，包括果糖氨基酸氧化酶20mmol/L ;辣根過氧化酶20KU/L ;色原0. lmmol/L ;防腐劑 0. 05g/L ;穩(wěn)定劑 0. 5-lg/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑Rl中，緩沖液為MES緩沖液或磷酸鉀緩沖液，PH值為5. 5-8. 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑Rl中，表面活性劑為TritonX-100、Tween-20或Bri j35中的ー種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑Rl中，抗干擾物為高碘酸鈉或亞鐵氰化鉀。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在干，所述的試劑Rl中，穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金屬離子中的ー種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑Rl中，防腐劑為疊氮化鈉、慶大霉素或氯霉素中的ー種。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑R2中，色原為DA-64。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑R2中，防腐劑為疊氮化鈉、慶大霉素或氯霉素中的ー種。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測定糖化血清蛋白的試劑盒，其特征在于，所述的試劑R2中，穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金屬離子中的ー種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥試劑，具體涉及一種測定糖化血清蛋白的試劑盒，包括試劑R1和試劑R2，其中試劑R1，包括緩沖液20mmol/L；表面活性劑，占試劑R1的0.5％；抗干擾物0.05-0.1mmol/L；穩(wěn)定劑0.5-1g/L；防腐劑0.05g/L。試劑R2，包括果糖氨基酸氧化酶20mmol/L；辣根過氧化酶20KU/L；色原0.1mmol/L；防腐劑0.05g/L；穩(wěn)定劑0.5-1g/L。本發(fā)明同現(xiàn)技術(shù)相比，采用本發(fā)明的糖化血清蛋白測定試劑盒，酶法測定糖化血清蛋白，完全可以替代HPLC應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行大批量樣本的測定，其操作簡便，線性范圍寬，成本低，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號G01N21/31GK102650591SQ20121009953
公開日2012年8月29日 申請日期2012年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月6日
發(fā)明者孫明禮, 李子樵 申請人:上海藍(lán)怡科技有限公司