專利名稱：一種瘦肉精含量的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及添加劑的分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種瘦肉精含量的檢測方法。
背景技術(shù)：
鹽酸克倫特羅，俗稱瘦肉精，是一種選擇性β 2腎上腺素受體激動劑，在臨床上主要用于治療支氣管哮喘和痙攣。研究者在使用過程中偶然發(fā)現(xiàn)，較高劑量的鹽酸克倫特羅能夠明顯促進動物的生長，使其瘦肉含量增加，脂肪含量大幅減少，因此被稱為“瘦肉精”。 將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉含量、減少飼料的使用，從而使肉品提早上市、降低成本。因此，近年來瘦肉精被廣泛地用作飼料添加劑，用于牲畜的喂養(yǎng)。瘦肉精作為動物飼料添加劑使用時，它的用量大大超過了其作為藥物使用時的用量，并且作為動物飼料添加劑時的時間較長，一般持續(xù)在三周以上，導(dǎo)致瘦肉精在動物體內(nèi)的代謝周期變長，所以極易在動物體內(nèi)造成瘦肉精的蓄積(張清安，等.食品與發(fā)酵工業(yè)， 2004,30(9) :108 119.)。國內(nèi)外的相關(guān)研究表明，食用含有瘦肉精的肉會出現(xiàn)惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒癥狀，特別是對心臟病、高血壓患者的危害更大；長期食用則有可能導(dǎo)致染色體畸變，誘發(fā)惡性腫瘤。因此，在2002年，我國農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《禁止在飼料和動物飲用水中使用的要物品中目錄》明令禁止在飼料和動物飲用水中添加瘦肉精。在對食品安全越來越重視的今天，發(fā)展簡便、快速和準(zhǔn)確的瘦肉精含量的檢測方法具有非常重要的意義。目前，檢測瘦肉精的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 (GC-MS)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)等(黃傳峰，等.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2002， 12 (5) :634 634.)，這些方法能夠?qū)崿F(xiàn)對瘦肉精含量的檢測，但是對實驗條件的要求較高、實驗過程繁瑣、檢測時間長，而且需要貴重的儀器，這些儀器的操作繁瑣，價格昂貴，不適用于對瘦肉精的快速檢測和上述檢測方法的推廣應(yīng)用。為了提高對瘦肉精含量的檢測的速度，簡化檢測的步驟，現(xiàn)有技術(shù)中公開了可用于瘦肉精含量檢測的試紙或試劑盒，這種試紙或試劑盒以動物或人體的尿液或動物組織為檢測對象，這種方法能夠快速對瘦肉精進行篩選檢測，然而這種方法對瘦肉精的檢測靈敏度低，得到的結(jié)果準(zhǔn)確度不高，容易出現(xiàn)假陰性的檢測結(jié)果，尤其是對喂食過瘦肉精但出欄前停藥的牲畜的檢測不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種瘦肉精含量的檢測方法，本發(fā)明提供的檢測方法對瘦肉精含量檢測的結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高。本發(fā)明提供一種瘦肉精含量的檢測方法，包括以下步驟a)將待測樣品進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物；b)將所述步驟a)得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；c)檢測所述步驟b)得到的反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；d)根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線與所述步驟c)得到的電化學(xué)發(fā)光信號強度，得到瘦肉精含量。優(yōu)選的，所述待測樣品中瘦肉精與所述步驟b)中三聯(lián)吡啶釕的摩爾比為(O. 02
2.5) (5 8)。優(yōu)選的，所述步驟a)中毛細管電泳分離的電壓為IOkV 20kV。優(yōu)選的，所述步驟c)具體為采用三電極系統(tǒng)檢測所述步驟b)得到的反應(yīng)產(chǎn)物；所述三電極系統(tǒng)為鉬盤電極為工作電極、鉬電極為對電極和銀/氯化銀為參比電極。優(yōu)選的，所述步驟c)中檢測的電位為I. IV I. 5V。優(yōu)選的，所述步驟b)具體為在緩沖溶液中，將所述步驟a)得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物。優(yōu)選的，所述緩沖溶液為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液或磷酸鹽緩沖溶液。優(yōu)選的，所述緩沖溶液的pH值為6. 5 8. 5 ;所述緩沖溶液的摩爾濃度為15mmol/ L SOmmoI /I,η優(yōu)選的，所述步驟d)的標(biāo)準(zhǔn)曲線按照以下方法得到配制瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液；將所述標(biāo)準(zhǔn)溶液進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物；將所述分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；檢測所述反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；根據(jù)所述電化學(xué)發(fā)光信號強度及其對應(yīng)的所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。優(yōu)選的，所述瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液按照以下方法制備按照乙醇與水的體積比為5 (I 10)，配制乙醇混合溶液；將瘦肉精溶于所述乙醇混合溶液中，得到瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液。本發(fā)明提供一種瘦肉精的檢測方法，包括以下步驟a)將待測樣品進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物山)將所述步驟a)得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；c)檢測所述步驟b)得到的反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；d)根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線與所述步驟c)中得到的電化學(xué)發(fā)光信號強度，得到瘦肉精的含量。本發(fā)明提供的方法首先將待測樣品進行毛細管電泳分離，提高了對瘦肉精檢測的選擇性；將得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，利用三聯(lián)吡啶釕能與含有胺基的瘦肉精發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)、產(chǎn)生更強的電化學(xué)發(fā)光信號的性質(zhì)，采用電化學(xué)發(fā)光法對得到的反應(yīng)產(chǎn)物進行檢測，提高了對瘦肉精檢測的靈敏度，實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的檢測方法的最低檢測限為 lX10_6mOl/L。因此，本發(fā)明提供的方法對瘦肉精含量的檢測具有較高的選擇性和靈敏度， 得到更加準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。另外，本發(fā)明提供的檢測方法操作簡單、快速，能夠顯著節(jié)約檢測成本；本發(fā)明提供的檢測方法將待測樣品首先進行毛細管電泳分離，無需對樣品進行復(fù)雜的前處理，更加節(jié)省了檢測時間，提高了檢測速度。


圖I為本發(fā)明實施例I得到的三聯(lián)吡啶釕(a)和三聯(lián)吡啶釕與瘦肉精反應(yīng)產(chǎn)物 (b)的電化學(xué)發(fā)光譜圖；圖2為本發(fā)明實施例4得到的毛細管電泳-電化學(xué)發(fā)光譜圖；圖3為本發(fā)明實施例5得到的毛細管電泳-電化學(xué)發(fā)光譜圖；圖4為本發(fā)明實施例6得到的毛細管電泳-電化學(xué)發(fā)光譜圖。
具體實施例方式本發(fā)明提供一種瘦肉精的檢測方法，包括以下步驟a)將待測樣品進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物；b)將所述步驟a)得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；c)檢測所述步驟b)得到的反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；d)根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線與所述步驟c)中得到的電化學(xué)發(fā)光信號強度，得到瘦肉精的含量。瘦肉精，學(xué)名為鹽酸克倫特羅，結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，它是一種平喘藥，研究者在實驗中發(fā)現(xiàn)，鹽酸克倫特羅具有促進動物生長、增加動物的瘦肉量、減少脂肪含量的性質(zhì)， 因此其被稱為“瘦肉精”。瘦肉精雖然能夠促進動物的生長，但是容易在動物體內(nèi)蓄積，長期食用這種含有瘦肉精殘留的肉會使人體出現(xiàn)如惡心、頭暈、四肢無力、手顫的癥狀，危害人體的健康，尤其是對心臟病、高血壓患者等的危害更大。本發(fā)明采用毛細管電泳將待測樣品分離，采用電化學(xué)發(fā)光的方法實現(xiàn)對分離產(chǎn)物進行測定，得到瘦肉精含量。
權(quán)利要求
1.一種瘦肉精含量的檢測方法，包括以下步驟a)將待測樣品進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物；b)將所述步驟a)得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；c)檢測所述步驟b)得到的反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；d)根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線與所述步驟c)得到的電化學(xué)發(fā)光信號強度，得到瘦肉精含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測方法，其特征在于，所述待測樣品中瘦肉精與所述步驟b)中三聯(lián)吡啶釕的摩爾比為(O. 02 2. 5) (5 8)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟a)中毛細管電泳分離的電壓為IOkV 20kVo
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟c)具體為采用三電極系統(tǒng)檢測所述步驟b)得到的反應(yīng)產(chǎn)物；所述三電極系統(tǒng)為鉬盤電極為工作電極、鉬電極為對電極和銀/氯化銀為參比電極。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟c)中檢測的電位為I.IV I.5V。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟b)具體為在緩沖溶液中，將所述步驟a)得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述緩沖溶液為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液或磷酸鹽緩沖溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述緩沖溶液的pH值為6.5 8.5 ; 所述緩沖溶液的摩爾濃度為15mmol/L 50mmol/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟d)的標(biāo)準(zhǔn)曲線按照以下方法得到配制瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液；將所述標(biāo)準(zhǔn)溶液進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物；將所述分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；檢測所述反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；根據(jù)所述電化學(xué)發(fā)光信號強度及其對應(yīng)的所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液按照以下方法制備按照乙醇與水的體積比為5 : (I 10)，配制乙醇混合溶液；將瘦肉精溶于所述乙醇混合溶液中，得到瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種瘦肉精的檢測方法，包括以下步驟將待測樣品進行毛細管電泳分離，得到分離產(chǎn)物；將所述分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；檢測所述反應(yīng)產(chǎn)物，得到所述反應(yīng)產(chǎn)物的電化學(xué)發(fā)光信號強度；根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線與所述電化學(xué)發(fā)光信號強度，得到瘦肉精的含量。本發(fā)明提供的檢測方法首先將待測樣品進行毛細管電泳分離，將得到的分離產(chǎn)物與三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)，利用三聯(lián)吡啶釕能與含有胺基的瘦肉精發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)、產(chǎn)生更強的電化學(xué)發(fā)光信號的性質(zhì)，采用電化學(xué)發(fā)光法對得到的反應(yīng)產(chǎn)物進行檢測，得到的電化學(xué)發(fā)光的信號強度與瘦肉精的濃度成正比，從而得到瘦肉精的含量。本發(fā)明提供的檢測方法選擇性好，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號G01N21/76GK102590191SQ20121002887
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月9日
發(fā)明者包懿, 楊帆, 楊秀榮, 路麗霞 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所