專(zhuān)利名稱：一種氯霉素檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種氯霉素檢測(cè)試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
氯霉素(CAP)是一種廣譜抗生素，因其售價(jià)低、效價(jià)高，曾經(jīng)在我國(guó)畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中得到廣泛應(yīng)用，并成為畜禽及水產(chǎn)品疾病防治的重要藥物。隨著氯霉素的廣泛應(yīng)用和研究，人們發(fā)現(xiàn)其會(huì)引起毒副作用，尤其對(duì)人體造血系統(tǒng)的毒性極大。1950年發(fā)現(xiàn)其可造成嚴(yán)重致死性再生不良性貧血。2002年農(nóng)業(yè)部發(fā)布第193號(hào)公告將氯霉素及其鹽、酯列入食品動(dòng)物禁用藥名單，并且規(guī)定氯霉素作為出口肉制品的必檢指標(biāo)。目前檢測(cè)氯霉素的方法主要有微生物法是氯霉素檢測(cè)最常用的方法，該方法又可分為棉簽法(STOP)、杯碟法 (CPM)、紙片法、瓊脂擴(kuò)散法等。微生物法優(yōu)點(diǎn)在于簡(jiǎn)單、快速，在大規(guī)模的定性篩選工作中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。但其也存在靈敏度低、易受干擾、易漏檢、結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性、檢出限較高等缺點(diǎn)。氣相色譜法(GC):可以對(duì)于分配系數(shù)相差很近的組分進(jìn)行分離，從而分離出極為復(fù)雜的混合物。有許多高靈敏、通用性或?qū)Ｒ恍詮?qiáng)的檢測(cè)器供選用，如氫焰離子化檢測(cè)器 (FID)、電子捕獲檢測(cè)器(ECD)、氮磷檢測(cè)器(NPD)等，檢出限一般為ppb級(jí)。氣相色譜法具有分離效能高、選擇性強(qiáng)、靈敏度高、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，但是由于受到氯霉素?fù)]發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，樣品前處理過(guò)程復(fù)雜、分析速度慢、儀器化程度高且價(jià)格昂貴，氣相色譜法在基層推廣使用還是比較困難的。氯霉素殘留檢測(cè)色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)主要為液質(zhì)聯(lián)用儀(LC-MQ和氣質(zhì)聯(lián)用儀 (GC-MS)。LC-MS現(xiàn)在已進(jìn)入實(shí)用階段，其靈敏度較熒光檢測(cè)器高1個(gè)數(shù)量級(jí)，能方便地對(duì) ng/kg級(jí)的藥物殘留組分進(jìn)行分析檢測(cè)與結(jié)構(gòu)確認(rèn)，LC-MS法目前也是美國(guó)FDA推薦使用的氯霉素確證方法。但是儀器分析方法因?yàn)樾枰F重儀器，操作復(fù)雜，檢測(cè)成本高的原因一般在科研和檢測(cè)機(jī)構(gòu)使用。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)氯霉素的ELISA法檢測(cè)現(xiàn)已開(kāi)發(fā)出商業(yè)試劑盒，但是目前大多數(shù)試劑盒檢測(cè)過(guò)程需2 池。ELISA法檢測(cè)原理是將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)物加入微孔，溫浴時(shí)，游離的和酶標(biāo)記的氯霉素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合氯霉素抗體的結(jié)合位點(diǎn)。所有的未反應(yīng)的酶標(biāo)物，在清洗步驟中被清除，結(jié)合了的酶可以由顯色劑顯色出來(lái)(酶可以使無(wú)色的顯色劑轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色)，反應(yīng)終止液的加入可以使藍(lán)色變成黃色。吸收值在450nm處進(jìn)行測(cè)定。顏色變化的程度反映樣品中氯霉素的含量。酶聯(lián)免疫法的缺點(diǎn)在于影響因素較多，其中包被抗原CAP-0VA、抗CAP單克隆抗體的選擇和使用對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量影響重大，并且抗原抗體的配對(duì)使用極其重要，其制備和篩選與試劑盒性能密切相關(guān)，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，抗體批次不同，測(cè)定結(jié)果也會(huì)出現(xiàn)差異等，但該法作為一種快速篩選手段，在現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大規(guī)模篩選檢測(cè)中有廣闊的應(yīng)用前景。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種成本低廉、操作簡(jiǎn)便、靈敏性高的氯霉素檢測(cè)試劑盒。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案一種氯霉素檢測(cè)試劑盒，包括盒體，盒體內(nèi)主要有包被有氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、放置試劑瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶；所述試劑瓶包括裝有工作濃度為0. 02 0. 2μ g/ml的氯霉素單克隆抗體溶液的試劑瓶、和裝有工作濃度為 0. 5 1 μ g/ml的辣根過(guò)氧化酶蛋白保護(hù)劑標(biāo)記的羊抗鼠IgG的試劑瓶。 所述試劑盒還包括有2瓶裝有顯色液的試劑瓶、1瓶裝有終止液的試劑瓶、1瓶裝有洗滌緩沖液的試劑瓶、以及6瓶裝有氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液的試劑瓶。更進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括密封酶標(biāo)板的自封袋。本試劑盒的原理是采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)肉類(lèi)(牛肉、豬肉、雞肉)、水產(chǎn)(魚(yú)肉、蝦肉)、奶類(lèi)(固態(tài)、液態(tài))、蜂蜜、家禽蛋等樣本中的氯霉素。試劑盒酶標(biāo)板微孔內(nèi)包被有氯霉素-卵清蛋白的偶聯(lián)抗原，加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)液后，樣本或標(biāo)準(zhǔn)液中的氯霉素和微孔內(nèi)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體溶液，加入酶標(biāo)記物溶液后，用TMB底物顯色，樣本和標(biāo)準(zhǔn)液中的氯霉素含量與吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出氯霉素含量。本試劑盒通過(guò)抗原抗體的特異性反應(yīng)和酶對(duì)底物的高效催化作用實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中殘留的獸藥氯霉素(CAP)的快速定性、定量檢測(cè)；可檢測(cè)的樣本包括魚(yú)肉和蜂蜜，可滿足食品生產(chǎn)企業(yè)從原料到成品的質(zhì)控要求，也可作為食品安全監(jiān)督和檢測(cè)機(jī)構(gòu)的常規(guī)篩查手段，還能用于動(dòng)物和微生物實(shí)驗(yàn)中的藥理與毒理學(xué)研究。

圖1是本實(shí)用新型實(shí)施例1盒體與下凹瓶位的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是圖1的俯視圖；圖3是本實(shí)用新型實(shí)施例1酶標(biāo)板的結(jié)構(gòu)示意圖；附圖標(biāo)記1、盒體；2、下凹瓶位；3、酶標(biāo)板；4、微孔。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1 一種氯霉素檢測(cè)試劑盒請(qǐng)參閱圖1-3，清楚展現(xiàn)本實(shí)施例所述氯霉素檢測(cè)試劑盒的結(jié)構(gòu)，盒體1內(nèi)具有固定泡沫模具形成的下凹瓶位2 (共有12個(gè)下凹瓶位)，下凹瓶位2用于放置裝有溶液的試劑瓶；酶標(biāo)板3的微孔4內(nèi)包被有氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原。具體組成成分如下(1)包被氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板1塊配合不同的酶標(biāo)儀選擇，如48孔、96孔(12條微孔條X8孔)等，每孔內(nèi)氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的濃度為2 μ g/ml(2)氯霉素單克隆抗體溶液1瓶7ml/瓶，工作濃度為0. 1 μ g/ml[0026](3)酶標(biāo)記物溶液1瓶15ml/瓶辣根過(guò)氧化酶蛋白保護(hù)劑標(biāo)記的羊抗鼠IgG，工作濃度為0. 8 μ g/ml(4)顯色液 Al 瓶7ml/ 瓶用0. lmol/L、ρΗ5· 0的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液配制，顯色液A含0. 045%的H2O20 磷酸鹽-檸檬酸緩沖液的配制稱取檸檬酸(C6H8O7 · H2O) 21. Olg,用去離子水溶解，定容至 1000ml，量取 243ml 與 0. 2mol/L 的 Na2HPO4 溶液 257ml 混合。在 100ml、pH5. 0 的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液中加入45 μ 1的H2O2，混勻，即得。(5)顯色液 Bl 瓶7ml/ 瓶顯色液B含0. 04%的TMB含0. (Mwt %的四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的0. lmol/L、pH5. 0 的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液；稱取40mg的TMB溶于100ml、pH5. 0的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液中，即得。(6)終止液1瓶7ml/瓶為2mol/L的硫酸，量取濃硫酸加入32ml去離子水中，混勻即得。(7) 20 X洗滌緩沖液1瓶20ml/瓶，使用時(shí)稀釋20倍為0. 05 %、pH7. 4 的 PBST 緩沖液，在 1 X PBS 中加入 0. 05 % 的 Tween-20 得到 PBST 緩沖液。其中 10XPBS(磷酸鹽緩沖液，0. 01mol/L、ρΗ7· 4)稱取 NaC180g、KCl 2g、 Na2HPO4H. 4g、K2HP042.4g溶于800ml去離子水中，調(diào)節(jié)pH至7. 4后，定容至IL0使用時(shí)用去離子水稀釋10倍即得1XPBS。(8)標(biāo)準(zhǔn)液6瓶1ml/瓶氯霉素濃度分別為0ng/ml、0. 05ng/ml、0. 15ng/ml、0. 45ng/ml、l. 35ng/ml, 4. 05ng/mlo(9)自封袋1個(gè)本實(shí)施例所述的氯霉素檢測(cè)試劑盒的制備方法如下(1)制備包被氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板將氯霉素和卵清蛋白采用活化酯法進(jìn)行偶聯(lián)得到氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原，所述氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的濃度為6 8mg/ml ；用0. 05mol/L、pH9. 6的碳酸鹽緩沖液將所述氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原稀釋?zhuān)?00 μ 1/孔包被酶標(biāo)板，包被過(guò)夜，包被溫度為 4°C，1 X洗滌緩沖液洗板5次，加封閉液(在酶標(biāo)板保護(hù)劑中加入1 % BSA和0. 2%明膠) 于37°C封閉，封閉液的量為200 300 μ 1/孔。封閉池后甩出封閉液，在吸水紙上拍干。 每孔內(nèi)氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的濃度為2 μ g/ml。將已包被了 CAP-OVA偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板晾干，封袋保存于4°C備用。(2)制備氯霉素單克隆抗體溶液取8-10周大小Balb/c小鼠作為免疫動(dòng)物，以氯霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物為免疫原，將氯霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(將氯霉素和牛血清白蛋白(BSA)采用活化酯法進(jìn)行偶聯(lián)得到免疫原)與等體積的弗氏完全佐劑乳化，100 μ g/只的劑量對(duì)小鼠皮下注射，以后每隔兩周加強(qiáng)免疫一次，改用弗氏不完全佐劑，腹腔注射；融合前三天強(qiáng)化免疫一次，不用佐劑，但是劑量改為200 μ g/只；細(xì)胞融合按照常規(guī)方法操作，當(dāng)融合后的細(xì)胞生長(zhǎng)到培養(yǎng)孔面積的四分之一時(shí)，取細(xì)胞培養(yǎng)上清間接ELISA法進(jìn)行陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞篩選，選擇陽(yáng)性強(qiáng)，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，用有限稀釋法進(jìn)行克隆，然后擴(kuò)大培養(yǎng)、凍存并進(jìn)行鑒定；單克隆抗體的制備與純化采用體內(nèi)誘生法，將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油0. 5ml/只，7-14 天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5-106個(gè)/只，7-10天后采集腹水，經(jīng)辛酸-飽和硫酸銨法進(jìn)行腹水純化，-20°C保存即得氯霉素單克隆抗體。在1 X磷酸鹽緩沖液中加入0. 05 %的Tween-20得到PBST緩沖液，用0. 2 % BSA-PBST將所述氯霉素單克隆抗體稀釋即得工作濃度為0. 1 μ g/ml ；(3)制備酶標(biāo)記物溶液制備辣根過(guò)氧化酶蛋白保護(hù)劑標(biāo)記的羊抗鼠IgG，用脫脂奶粉-PBST將所述辣根過(guò)氧化酶蛋白保護(hù)劑標(biāo)記的羊抗鼠IgG稀釋?zhuān)坏玫焦ぷ鳚舛葹?. 8 μ g/ml的酶標(biāo)記物溶液。實(shí)施例1的試劑盒的性能指標(biāo)如下(1)靈敏度0. Ippb(2)檢測(cè)下限肉類(lèi)(牛肉、豬肉、雞肉)0.02ng/g ；水產(chǎn)(魚(yú)肉、蝦肉)0. 025ng/g ；奶類(lèi)(固態(tài)、 液態(tài))0. 25ng/g ；蜂蜜0. 05ng/g ；家禽蛋0. 05ng/g ；(3)交叉反應(yīng)率氯霉素(Chloramphenicol):100 % ；氯霉素琥珀酸鈉(Chloramphenicol succinate sodium) :152.63 % ；氟苯尼考(Florfenicol) < 0. 01 % ；四環(huán)素 (Tetracycline) < 0. 01 %；新霉素(Neomycin) < 0. 01 %；金霉素(Chloroteracycline)
<0. 01 % ；磺胺二甲嘧啶(Sulphadimidine) < 0. 01 % ；諾氟沙星(Norfloxacin)
<0. 01%;鹽酸克倫特羅(Clenbuterol Hydrochloride) < 0. 01 %；潮霉素 B(Hygromycin B) < 0. 01%。(4)回收率肉類(lèi)(牛肉、豬肉、雞肉)100% 士5%;水產(chǎn)(魚(yú)肉、蝦肉)80%;奶類(lèi)(固態(tài)、液態(tài))90% 士 10% ；蜂蜜、家禽蛋80% 士5%。實(shí)施例2 —種氯霉素檢測(cè)試劑盒本實(shí)施例所述的氯霉素檢測(cè)試劑盒每個(gè)微孔內(nèi)氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的濃度為ι μ g/ml ；所述氯霉素單克隆抗體的工作濃度為0. 02 μ g/ml ；所述酶標(biāo)記物溶液的工作濃度為0. 5 μ g/ml。其他組分均與實(shí)施例1相同，制備方法也與實(shí)施例1相同。實(shí)施例3 —種氯霉素檢測(cè)試劑盒本實(shí)施例所述的氯霉素檢測(cè)試劑盒每個(gè)微孔內(nèi)氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的濃度為3 μ g/ml ；所述氯霉素單克隆抗體的工作濃度為0. 18 μ g/ml ；所述酶標(biāo)記物溶液的工作濃度為1 μ g/ml。其他組分均與實(shí)施例1相同，制備方法也與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4采用實(shí)施例1的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)魚(yú)肉中的氯霉素含量使用前將試劑盒置于室溫(20 25°C )平衡30min以上，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板微孔條插入微孔架中，將樣本和標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)。 標(biāo)準(zhǔn)液做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，記錄下標(biāo)準(zhǔn)液和樣品的位置。將不用的微孔條放入鋁箔袋密封，保存于2 8°C。(1)樣品液的制備a取3g絞碎的魚(yú)肉組織樣本，加入6ml乙酸乙酯，振蕩lOmin，3000g離心15min ；[0063]取4ml上清液，加入4ml氯仿，再加4ml水，振蕩lOmin，3000g離心15min，吸取下
層細(xì)1用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氮?dú)獯蹈蓛x吹干(50度 60度)；c加入0.5ml PBS和0. 5ml正己烷復(fù)溶，振蕩IOmin后3000g離心15min，去除上層正己烷，取下層50ul即可以用于分析，稀釋倍數(shù)為0. 5 ；(2)加入100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)液或處理好的樣品液到各自的微孔中，每個(gè)孔加入樣品液或標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)注意更換移液器的吸頭。(3)加入50μ 1氯霉素單克隆抗體溶液到每一個(gè)微孔中，輕輕敲打酶標(biāo)板以充分混合，注意不要顛出，于37°C溫育40min。(4)倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。 每孔中加入170 μ 1 IX洗滌緩沖液，再次倒掉微孔中液體，在吸水紙上拍干，重復(fù)上述操作3次。(5)加入100 μ 1酶標(biāo)記物溶液到每一個(gè)微孔，輕輕敲打酶標(biāo)板以充分混合，注意不要顛出，于37°C溫育40min。取出酶標(biāo)板，洗滌3次。(6)每孔加入50 μ 1顯色液A和50 μ 1顯色液B，充分混合并在37 °C暗處孵育 15 30min。亦可將顯色液A、B等比例充分混合后，加入100 μ 1至每孔，催化反應(yīng)不得超過(guò) 30min。(7)每孔加入50μ1終止液，輕輕振蕩混勻，立刻于450nm(建議用雙波長(zhǎng) 450/630nm檢測(cè))處用酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度值(OD值)。取0D450或0D450-0D630 (推薦)用于結(jié)果分析。(8)結(jié)果判定所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)液或樣本吸光度值的平均值B (雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(O 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值Btl再乘以100%，即百分吸光度值。百分吸光度值(％) = B/B0X100%B-標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的平均吸光度值Btl-OngAil標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸光度值以標(biāo)準(zhǔn)液的百分吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素的實(shí)際濃度。如果利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。(9)試驗(yàn)結(jié)果用實(shí)施例1的氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)32份經(jīng)GC-MS法確證為陰性的魚(yú)肉，32份樣品的測(cè)定值均小于0. lyg/kg，為陰性，與儀器法檢測(cè)結(jié)果相符。用實(shí)施例1的氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)20份經(jīng)GC-MS法確證為陽(yáng)性的魚(yú)肉，20份樣品的測(cè)定值均大于0. 2 μ g/kg，為陽(yáng)性，與儀器法檢測(cè)結(jié)果相符。實(shí)施例5采用實(shí)施例1的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)蜂蜜中的氯霉素含量使用前將試劑盒置于室溫(20 25°C )平衡30min以上，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板微孔條插入微孔架中，將樣本和標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)。 標(biāo)準(zhǔn)液做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，記錄下標(biāo)準(zhǔn)液和樣品的位置。將不用的微孔條放入鋁箔袋密封，保存于2 8°C。[0081]樣品液的制備方法為a取4g蜂蜜，加入水，乙酸乙酯，振蕩IOmin后3000g離心15min ；b取上層乙酸乙酯anl，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氮?dú)獯蹈蓛x吹干(50度 60度)；c用ImlPBS復(fù)溶，吸取50ul用于分析。稀釋倍數(shù)為0. 5。其他步驟均與實(shí)施例4步驟相同。試驗(yàn)結(jié)果如下用實(shí)施例1的氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)40份經(jīng)GC-MS法確證為陰性的蜂蜜，40份樣品的測(cè)定值均小于0. 1 μ g/kg，為陰性，與儀器法檢測(cè)結(jié)果相符。用實(shí)施例1的氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)22份經(jīng)GC-MS法確證為陽(yáng)性的蜂蜜，22份樣品的測(cè)定值均大于0. 2 μ g/kg，為陽(yáng)性，與儀器法檢測(cè)結(jié)果相符。實(shí)施例6采用實(shí)施例1的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)牛奶中的氯霉素含量使用前對(duì)試劑盒的處理同實(shí)施例4和5。樣品液的制備方法為3取細(xì)1液態(tài)奶(若為固態(tài)奶粉，則取Ig奶粉加6ml水，混勻后取Iml用于處理)， 加入5. 5ml乙腈，振蕩混勻5min ；b 4000g離心15min，棄除上層液，下層有機(jī)相轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干或氮?dú)獯蹈蓛x吹干(50 60°C )；(用細(xì)1PBS復(fù)溶，加細(xì)1乙酸乙酯，振蕩混勻5min，離心后，轉(zhuǎn)移上層有機(jī)層到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干或氮?dú)獯蹈蓛x吹干(50 60°C )；d用Iml PBS復(fù)溶，吸取50ul用于分析。如清亮無(wú)雜質(zhì)，可進(jìn)一步進(jìn)行濃縮。樣本稀釋倍數(shù)為0.5。其他步驟均與實(shí)施例4步驟相同。試驗(yàn)結(jié)果與儀器法檢測(cè)結(jié)果相符。實(shí)施例7采用實(shí)施例1的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)家禽蛋中的氯霉素含量使用前對(duì)試劑盒的處理同實(shí)施例4和5。樣品液的制備方法為a將整個(gè)蛋樣的蛋清和淡黃，混勻。取4g或細(xì)1混合樣，加入8ml乙腈，振蕩混勻 5min ；b 4000g離心15min，吸取上層液，轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干或氮?dú)獯蹈蓛x吹干 (50 60°C )；(用細(xì)1PBS復(fù)溶，加入細(xì)1乙酸乙酯，振蕩混勻5min，離心后，轉(zhuǎn)移上層有機(jī)層到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干或氮?dú)獯蹈蓛x吹干(50 60°C )；d加入Iml PBS和Iml正己烷復(fù)溶，振蕩IOmin后3000g離心15min，去除上層正己烷。取下層50ul即可以用于分析。樣本稀釋倍數(shù)為0.5。其他步驟均與實(shí)施例4步驟相同。試驗(yàn)結(jié)果與儀器法檢測(cè)結(jié)果相符。以上是針對(duì)本實(shí)用新型的可行實(shí)施例的具體說(shuō)明，但該實(shí)用新型并非用以限制本實(shí)用新型的專(zhuān)利范圍，凡未脫離本實(shí)用新型的等效實(shí)施或變更，均應(yīng)包含于本實(shí)用新型的專(zhuān)利范圍中。
權(quán)利要求1.一種氯霉素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括盒體，盒體內(nèi)主要有包被有氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、放置試劑瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶；所述試劑瓶包括裝有工作濃度為0. 02 0. 2 μ g/ml的氯霉素單克隆抗體溶液的試劑瓶、和裝有工作濃度為0. 5 1 μ g/ml的辣根過(guò)氧化酶蛋白保護(hù)劑標(biāo)記的羊抗鼠IgG的試劑瓶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯霉素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括有2瓶裝有顯色液的試劑瓶、1瓶裝有終止液的試劑瓶、1瓶裝有洗滌緩沖液的試劑瓶、以及6瓶裝有氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液的試劑瓶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的氯霉素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括密封酶標(biāo)板的自封袋。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種氯霉素檢測(cè)試劑盒，試劑盒包括盒體，盒體內(nèi)主要有包被有氯霉素-卵清蛋白偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、放置試劑瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶；所述試劑瓶包括裝有工作濃度為0.02～0.2μg/ml的氯霉素單克隆抗體溶液的試劑瓶、和裝有工作濃度為0.5～1μg/ml的辣根過(guò)氧化酶蛋白保護(hù)劑標(biāo)記的羊抗鼠IgG的試劑瓶。本試劑盒通過(guò)抗原抗體的特異性反應(yīng)和酶對(duì)底物的高效催化作用實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中殘留的獸藥氯霉素的快速定性、定量檢測(cè)；可檢測(cè)的樣本包括魚(yú)肉和蜂蜜，可滿足食品生產(chǎn)企業(yè)從原料到成品的質(zhì)控要求，也可作為食品安全監(jiān)督和檢測(cè)機(jī)構(gòu)的常規(guī)篩查手段，還能用于動(dòng)物和微生物實(shí)驗(yàn)中的藥理與毒理學(xué)研究。
文檔編號(hào)G01N21/31GK202110176SQ20112014455
公開(kāi)日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2011年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月9日
發(fā)明者唐海波, 王繼華 申請(qǐng)人:廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)有限公司