專利名稱：傳染性法氏囊病病毒vp2蛋白及傳染性法氏囊病亞單位疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白及其制備方法，特別是指一種利用該傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白制備獲得傳染性法氏囊病亞單位疫苗及其方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳染性法氏囊病(IBD)是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的三大主要傳染病之一。我國是世界上禽蛋禽肉生產(chǎn)的大國，生產(chǎn)規(guī)模位居世界第一。該病在我國流行情況復(fù)雜，被農(nóng)業(yè)部列為重點防御的二類烈性傳染病。傳染性法氏囊病病毒(IBDV)主要侵襲3 10周齡的雛雞，尤其是4周齡內(nèi)的小 雞。病雞群的死亡率達5% 30%。本病毒損害的器官主要是法氏囊，引起法氏囊充血、出血和壞死，并引起腿部肌肉出血及腎臟尿酸鹽沉積等病變。雞感染法氏囊病毒后，常繼發(fā)其他傳染病而死亡。防治該病的經(jīng)典疫苗是弱毒苗和滅活苗，弱毒疫苗有其潛在的傳染性和致病性，而滅活苗的免疫效果不確實。國內(nèi)外科研工作者利用多種表達系統(tǒng)表達了 IBDV VP2蛋白以制備IBDV VP2蛋白亞單位疫苗，如榮俊等利用大腸桿菌表達系統(tǒng)、Macreadie等利用酵母表達系統(tǒng)表達、Bayliss等利用重組禽痘病毒表達系統(tǒng)、Darteil等利用重組火雞皰疹病毒表達系統(tǒng)、Sh印pard等利用重組禽腺病毒表達系統(tǒng)進行了 IBDV VP2蛋白的表達，但是這些方法大部分都需要大量培養(yǎng)細胞，成本昂貴，不利于養(yǎng)殖場接受。Dybbing等雖然成功利用重組苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒AcNPV在昆蟲細胞中表達IBDV VP2蛋白，但是，昆蟲細胞培養(yǎng)基仍然價格昂貴。盧覓佳等雖然利用重組家蠶桿狀病毒/家蠶幼蟲表達系統(tǒng)進行了 IBDV VP2蛋白的表達，但構(gòu)建重組家蠶桿狀病毒程序復(fù)雜、病毒重組復(fù)雜且成功率低，而且需要在難養(yǎng)的家蠶細胞中培養(yǎng)繁殖重組病毒，也限制重組病毒在生產(chǎn)IBDV VP2蛋白及IBD亞單位疫苗方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
傳統(tǒng)上認為苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒AcNPV不能感染家蠶幼蟲或蠶蛹，但本發(fā)明者在研究過程中發(fā)現(xiàn)重組IBDV VP2基因的AcNPV通過皮下注射方式能夠感染品種為‘大造’的家蠶幼蟲及其蠶蛹，這就為利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)IBDV VP2蛋白提供了一種簡單高效的方式。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)以家蠶幼蟲或蛹表達重組IBDV VP2蛋白與天然IBDV VP2蛋白的天然結(jié)構(gòu)非常接近，保持了 VP2蛋白的天然活性和抗原性，同時避免了大腸桿菌表達的重組蛋白內(nèi)毒素殘留的缺點。家蠶幼蟲或蠶蛹感染重組病毒后，也能夠刺激機體產(chǎn)生一些能夠刺激機體免疫系統(tǒng)的物質(zhì)，增強重組VP2蛋白制備成IBD亞單位疫苗的免疫效力。因此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白在家蠶幼蟲或蠶蛹中大量生產(chǎn)的方法，以實現(xiàn)較為廉價地、大規(guī)模生產(chǎn)傳染性法氏囊病亞單位疫苗。
技術(shù)方案本發(fā)明首先提供了一種傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白，為使用重組苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒，經(jīng)皮下注射家蠶幼蟲或蛹，首次成功在家蠶幼蟲或蛹體內(nèi)表達的IBDVVP2蛋白。而在現(xiàn)有技術(shù)中，一直以來人們未能成功地將含有IBDV VP2蛋白編碼基因的重組苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒，在家蠶幼蟲或蛹體內(nèi)中表達。優(yōu)選地，生產(chǎn)本發(fā)明IBDV VP2蛋白的家蠶幼蟲或蛹的品種為大造；本發(fā)明的IBDV毒株為洛陽地區(qū)送檢的臨床診斷為雞傳染性法氏囊(IBD)病的法氏囊病料中提取篩選獲得的毒株，該毒株獲得的IBDVVP2蛋白免疫原性更好，對國內(nèi)變異的IBDV病毒具有更高的免疫原性，而該IBDV VP2蛋白的編碼基因為SEQ ID N0.1。因此，本發(fā)明優(yōu)選IBDV VP2蛋白的編碼基因序列為SEQ ID N0.1 ;而其他的IBDVVP2蛋白也可以使用本發(fā)明的方法制備獲得。優(yōu)選地，本發(fā)明所述IBDV VP2蛋白為可溶性蛋白，具有抗原活性。即發(fā)明人發(fā)現(xiàn)以家蠶幼蟲或蛹表達重組IBDV VP2蛋白可以形成與天然結(jié)構(gòu)類似的活性結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為非融合蛋白并適合表達，并保持了天然VP2蛋白的活性和抗原性。因此，本發(fā)明的IBDV VP2蛋白特別適合于制備傳染性法氏囊病亞單位疫苗；并且也特別適合于制備傳染性法氏囊病的診斷試劑或試劑盒等，可以方便、快速地提供關(guān)于傳染性法氏囊病病毒的感染情況。本發(fā)明的另一目的在于提供了一種利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的方法，包括以下步驟:I)克隆IBDV VP2蛋白的編碼基因序列，至昆蟲核型多角體病毒(AcNPV)的表達轉(zhuǎn)移載體PFastBacI上，獲得重組表達轉(zhuǎn)移載體；2)將重組表達轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)化入含有桿狀病毒載體的大腸桿菌感受態(tài)細胞DHlOBac中，獲得含有IBDV VP2基因的重組桿狀病毒基因組穿梭載體；

3)將上述重組桿狀病毒基因組穿梭載體轉(zhuǎn)染入昆蟲細胞中，獲得帶該IBDV VP2基因的重組昆蟲核型多角體病毒；4)將上述重組昆蟲核型多角體病毒經(jīng)皮下注射家蠶幼蟲或蛹，在體內(nèi)表達VP2蛋白。優(yōu)選地，本發(fā)明上述方法中所述克隆IBDV VP2蛋白的編碼基因序列為SEQ IDN0.1。優(yōu)選地，本發(fā)明上述方法中所述家蠶幼蟲或蛹的品種為大造。優(yōu)選地,本發(fā)明上述方法中所述昆蟲細胞為sf9、sf21、High Five等昆蟲細胞。本發(fā)明還提供了一種利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)傳染性法氏囊病亞單位疫苗的方法，即在獲得了 IBDV VP2蛋白之后，還包括將獲得的IBDV VP2蛋白，加入疫苗佐劑，制備為傳染性法氏囊病亞單位疫苗的步驟。本發(fā)明還獲得了一種使用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)的IBDV VP2蛋白而制備的傳染性法氏囊病亞單位疫苗。因此，如本發(fā)明后續(xù)實施例所證明，本發(fā)明的IBDV VP2蛋白可以在制備治療或預(yù)防傳染性法氏囊病疫苗中的應(yīng)用。因此，本發(fā)明的IBDV VP2蛋白也可以提供在制備傳染性法氏囊病診斷試劑中的應(yīng)用。
由上可以看出，與現(xiàn)有的IBDV VP2蛋白的生產(chǎn)相比，本發(fā)明至少有以下優(yōu)點:(1)中國在家蠶養(yǎng)殖方面還有幾千年的歷史，家蠶人工飼養(yǎng)技術(shù)成熟，無菌條件下常年進行大規(guī)模家蠶的人工飼養(yǎng)已經(jīng)可以實現(xiàn)；(2)家蠶幼蟲和蠶蛹的表達成本遠遠低于昆蟲細胞表達系統(tǒng)，每條蠶的蛋白表達量相當(dāng)于lOOml-lOOOml昆蟲細胞培養(yǎng)基中蛋白的表達量；(3)生產(chǎn)設(shè)備簡單，易于操作；(4)昆蟲核型多角體病毒對人和畜禽無感染性，是非常安全的表達系統(tǒng)。(5)本發(fā)明中提供的重組AcNPV病毒構(gòu)建更簡便、篩選更直觀方便，注射家蠶或蛹可以直接表達可溶性的重組IBDV VP2蛋白，簡化了構(gòu)建重組家蠶桿狀病毒的繁瑣的步驟和多輪噬斑篩選純化重組病毒和提純分離VP2蛋白的復(fù)雜工藝和技術(shù)。(6)本發(fā)明的IBDV VP2蛋白的編碼基因，來自洛陽地區(qū)送檢的臨床診斷為雞傳染性法氏囊(IBD)病的法氏囊病料進行勻漿后分離篩選獲得的IBDV LYZS株病毒，該病毒編碼的IBDV VP2蛋白免疫力更好，更適合國內(nèi)大面積出現(xiàn)的IBDV感染的預(yù)防與治療或診斷。


圖1為本發(fā)明提供的傳染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2基因PCR擴增結(jié)果圖；圖2為家蠶血淋巴中IBDV VP2蛋白瓊擴抗原含量測定結(jié)果圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法及未說明配方的試劑均為按照常規(guī)條件或者生產(chǎn)商建議的方法及條件進行或配置。實施例1本實施例描述了本發(fā)明提供的傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因的獲得方法，克隆方法為巢式RT-PCR，包括以下步驟:(一 )傳染性法氏囊病病毒(IBDV) LYZS株基因組RNA的提取:IBDV LYZS株病毒為從洛陽地區(qū)送檢的臨床診斷為雞傳染性法氏囊(IBD)病的法氏囊病料進行勻漿后，按照天根生化科技(北京)有限公司的TIANamp病毒RNA提取試劑盒說明書進行IBDV基因組RNA的提取。( 二 ) IBDV LYZS 株 VP2 基因的克隆:1.根據(jù)GenBank登記的IBDV毒株的序列選擇保守區(qū)設(shè)計一對位于VP2基因序列的外圍區(qū)的引物，用于擴增包含VP2基因的大片段，目的是通過測序確定VP2基因的完全準(zhǔn)確的序列信息。然后根據(jù)測序結(jié)果設(shè)計合適的引物擴增出VP2基因。外圍引物對的上游引物命名為WVP2F，其序列信息為5' -GGTTAGTAGAGATCAGACAAAC-3'，下游引物命名為WVP2R，其序列信息為5' -GCATGGGCTAGGGGAGCGGCAGG-3'。步驟(一)中提取的RNA用于反轉(zhuǎn)錄，利用寶生物工程(大連)有限公司的Reverse Transcriptase XL(AMV)(貨號:D2620)進行第一鏈的合成，在0.2ml的PCR管中加入含I微克上述RNA，加入I微升(IOpm/微升)下游引物WVP2R作為反轉(zhuǎn)錄引物,加入4微升5 X Reverse Transcriptase XL Buffer和I微升Reverse Transcriptase XL(5U/ μ I)，然后補加雙蒸水至20微升，42°C水浴作用60分鐘，即獲得IBDV VP2基因的cDNA鏈。2.以WVP2F和WVP2R為上下游引物，以上述cDNA為模板，利用寶生物工程(大連)有限公司的TaKaRa Ex Taq (貨號:DRR001A)進行PCR擴增VP2基因及其外圍序列，反應(yīng)程序如下:95°C預(yù)變性3min，94°C變性30s，60°C退火30s，72°C延伸1.5min，進行35個循環(huán)，72°C保溫延伸lOmin。PCR產(chǎn)物進行測序測定VP2基因的序列信息。3.根據(jù)上述VP2基因測序結(jié)果設(shè)計一對引物用于擴增VP2基因的表達序列，上游引物命名為 VP2F，其序列信息為 5'-CGCGGATCCATGGCATTCCTCATCTGCTTGATAA-3',下游引物命名為VP2R，其序列信息為5' -CCCAAGCTTTCAAAATTCTGCGAAGTAATCTG-3'，并在引物中引物了合適的酶切位點識別序列(下劃線)，上游引物的5'端引入BamHI限制性內(nèi)切酶識別位點序列“G丨GATCC”，下游引物的5'端引入HindIII限制性內(nèi)切酶識別位點序列“A丨AGCTT”，以步驟2中的PCR產(chǎn)物為模板，通過引物VP2F和VP2R進行PCR，反應(yīng)程序如下:95°C預(yù)變性2min，94°C變性30s，62。。退火30s，72。。延伸1.5min，共進行30個循環(huán)，72°C保溫延伸IOmin。4.利用核酸限制性內(nèi)切酶BamHI和HindIII雙酶切步驟3中所述的PCR產(chǎn)物，并克隆入供體質(zhì)粒PFastBacI的BamHI和HindIII的位點中，獲得重組載體pFastBac_VP2,并對重組載體中的VP2基因進行序列分析。序列表中SEQ ID N0.1為本發(fā)明提供的傳染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2基因序列，序列表中SEQ ID N0.2為本發(fā)明提供的傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白序列，參照圖1為本發(fā)明提供的傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因PCR擴增結(jié)果。實施例2本實施例描述了生產(chǎn)傳染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2蛋白的方法，它以家蠶或蛹表達上述基因蛋白，并包 括如下步驟:(一)將以上所述獲得的重組載體pFastBac-VP2轉(zhuǎn)化入含有桿狀病毒全長基因組穿梭載體的大腸桿菌感受態(tài)細胞DHlOBac (Invitrogen, Catalog:10361012)中，在大腸桿菌細胞內(nèi)重組，通過藍白斑進行篩選重組穿梭載體，重組穿梭載體命名為Bacmid-VP2。 (二)將步驟(一)所述的重組穿梭載體Bacmid_VP2轉(zhuǎn)染昆蟲sf9細胞(Invtrogen公司，Catalog: 11496015)，在細胞內(nèi)產(chǎn)生重組桿狀病毒，命名為vBac_VP2:準(zhǔn)備5 X 105cells/ml的sf9細胞懸液，在6孔細胞培養(yǎng)板中接入sf9細胞2ml/孔，27°C靜置Ih以上使細胞貼壁。取一個無菌的1.5ml的離心管，加入I μ g重組穿梭質(zhì)粒Bacmid-VP2，用100 μ L的SF900II SFM培養(yǎng)基進行稀釋混勻，室溫靜置30min，取另一個無菌的1.5ml離心管加入 8 μ L 轉(zhuǎn)染試劑 Cellfectin ⑧ II Reagent (Invitrogen,貨號:10362100)，用 100 μ L的SF900II SFM培養(yǎng)基進行稀釋混勻，室溫靜置30min，混合上述兩個離心管中的轉(zhuǎn)染試劑稀釋液和重組穿梭質(zhì)粒稀釋液，用移液器輕輕混勻，室溫靜置lOmin。棄去準(zhǔn)備好的6孔板中的sf9細胞的培養(yǎng)上清，加入上述混合轉(zhuǎn)染液，并補加SF900II SFM至1ml，27°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)6h，然后棄去轉(zhuǎn)染液，加入新鮮的SF900II SFM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)5天后收集細胞培養(yǎng)上清，然后再通過感染昆蟲sf9細胞來擴增重組病毒。重組病毒通過病毒空斑實驗測定重組病毒滴度。(三)用步驟(二)所述的重組昆蟲核型多角體病毒感染家蠶幼蟲(或蛹)，大規(guī)模生產(chǎn)雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白。參照圖2，準(zhǔn)備病毒滴度為5X107pfu/ml的重組昆蟲核型多角體病毒，用25 μ L微量注射器于家蠶(購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所，品種:大造)5日齡幼蟲皮下節(jié)間膜接種上述重組病毒，每條蠶接種5 μ L，于接種后第3、4、5、6、7、8天收集蠶體血淋巴，再利用高壓均質(zhì)機進行處理，4°C，SOObar壓力處理2遍。通過瓊脂擴散試驗測定VP2蛋白在家蠶幼蟲中的表達，結(jié)果表明，在接種后第6天蠶體血淋巴表達VP2蛋白的AGP (瓊脂擴散試驗)抗原量達到最大值1: 3200(標(biāo)準(zhǔn)血清購自中國獸用藥品監(jiān)察所，濃度為1: 8，每瓶2毫升裝)。實施例3本實施例描述了本發(fā)明提供的IBDV基因工程亞單位疫苗。它為注射疫苗:包括以上所述感染重組病毒的家蠶幼蟲的血淋巴的稀釋液、免疫佐劑、防腐劑和穩(wěn)定劑等，上述家蠶血淋巴淋巴利用PBS (0.01M, pH = 7.4)進行稀釋至VP2蛋白的瓊擴抗原濃度達到1: 16，得到的稀釋液與免疫佐劑以1:1 1: 3(V: V)混勻，免疫佐劑包括礦物油、司本-80、吐溫-80、硬脂酸鋁及ISCOM等。血淋巴稀釋液和免疫佐劑的比例可為1: 2。其生產(chǎn)方法為，收集上述家蠶血淋巴，高壓均質(zhì)機處理，4°C,800bar壓力處理2遍，12000rpm離心30min,收集上清，利用PBS (0.01M, pH = 7.4)進行200倍稀釋上述上清液。油相制備:取注射用礦物油94份，硬脂酸鋁1.5份，置于油相制備罐中加熱至80°C，再加入司本-806份，至溫度達到121°C維持30分鐘，冷卻后備用；水相制備:取吐溫-804份，121°C滅菌30分鐘，冷卻，再加入上述血淋巴稀釋 液，充分攪拌，直至吐溫-80完全溶解；使用實驗室小型乳化設(shè)備進行乳化，按水相:油相=1: 2，以17500r/min攪拌5分鐘，在終止攪拌前加入I %硫柳汞溶液，使其最終濃度為0.01 %。制備的疫苗外觀為白色均勻乳劑，疫苗中抗原部分AGP抗原濃度為 1: 16。用上述IBDV基因工程亞單位疫苗皮下注射接種4周齡非免疫雛雞，每只0.25ml,免疫組10只，同時設(shè)立10只作為對照組，其中5只作為攻毒對照(1-5號)，另5只不攻毒作為正常對照(6-10號)，對照組不免疫接種，同條件飼養(yǎng)觀察。另，為了研究與同類疫苗的免疫效果比較，選用某公司商品化的IBD亞單位疫苗A做為平行試驗組，該疫苗含有大腸桿菌表達的IBDV VP2抗原，其AGP抗原濃度彡I: 16。疫苗接種后第14、21天分別采血，分離血清，用瓊脂擴散試驗(AGP)檢測IBD抗體滴度。疫苗接種后21日，免疫組、平行試驗組及攻毒對照組雞，經(jīng)點眼途徑分別攻擊IBDV BC6/85強毒株病毒液，攻毒劑量為100BID/只。攻毒后，逐日觀察雞只臨床表現(xiàn)，記錄發(fā)病和死亡情況，剖檢觀察死亡雞法氏囊病變，至96小時撲殺全部試驗雞，逐只剖檢，觀察記錄試驗雞注射部位、皮下、胸肌、內(nèi)臟各器官及法氏囊病變，計算保護率，同時剖檢前對各組試驗雞進行稱重，比較各組試驗雞體重差異。免疫攻毒結(jié)果判定:胸肌或腿肌條狀出血；法氏囊出血、水腫、發(fā)黃；法氏囊內(nèi)有膠凍樣或干酪樣分泌物等一種以上病變判為感染陽性。當(dāng)血清中抗體效價大于等于3Log2，判定為合格。當(dāng)剖檢結(jié)果為陰性，同時免疫后21天8/10以上免疫雞血清中抗體效價大于等于3Log2，則判定疫苗免疫保護合格。結(jié)果見表1，2。表1.免疫后試驗雞血清抗體(AGP)效價結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白，其特征在于，所述IBDVVP2蛋白為使用重組苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒，經(jīng)皮下注射家蠶幼蟲或蛹，在體內(nèi)表達的VP2蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IBDVVP2蛋白，其特征在于，所述家蠶幼蟲或蛹的品種為大造。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IBDVVP2蛋白，其特征在于，所述IBDV VP2蛋白的編碼基因序列為 SEQ ID N0.1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IBDVVP2蛋白，其特征在于，所述IBDV VP2蛋白為可溶性蛋白，具有抗原活性。
5.一種利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)克隆IBDVVP2蛋白 的編碼基因序列，至昆蟲核型多角體病毒(AcNPV)的表達轉(zhuǎn)移載體PFastBacI上，獲得重組表達轉(zhuǎn)移載體； 2)將重組表達轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)化入含有桿狀病毒載體的大腸桿菌感受態(tài)細胞DHlOBac中，獲得含有IBDV VP2基因的重組桿狀病毒基因組穿梭載體； 3)將上述重組桿狀病毒基因組穿梭載體轉(zhuǎn)染入昆蟲細胞中，獲得帶該IBDVVP2基因的重組昆蟲核型多角體病毒； 4)將上述重組昆蟲核型多角體病毒經(jīng)皮下注射家蠶幼蟲或蛹,在體內(nèi)表達VP2蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述克隆IBDVVP2蛋白的編碼基因序列為 SEQ ID N0.1。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述家蠶幼蟲或蛹的品種為大造。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述昆蟲細胞為sf9、sf21、HighFive等昆蟲細胞。
9.一種利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)傳染性法氏囊病亞單位疫苗的方法，其特征在于，還包括將權(quán)利要求1-4任意一項所述的IBDV VP2蛋白，加入疫苗佐劑，制備為傳染性法氏囊病亞單位疫苗的步驟。
10.一種由權(quán)利要求1-4任意一項所述的IBDV VP2蛋白制備的傳染性法氏囊病亞單位疫苗。
11.一種權(quán)利要求1-4任意一項所述的IBDV VP2蛋白在治療或預(yù)防傳染性法氏囊病疫苗中的應(yīng)用。
12.—種權(quán)利要求1-4任意一項所述的IBDV VP2蛋白在制備傳染性法氏囊病診斷試劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明獲得了一種傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白，為使用重組苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒，經(jīng)皮下注射家蠶幼蟲或蛹，首次成功在家蠶幼蟲或蛹體內(nèi)大量生產(chǎn)表達的IBDV VP2蛋白。而在現(xiàn)有技術(shù)中，一直以來人們未能成功地將含有IBDV VP2蛋白編碼基因的重組苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒，在家蠶幼蟲或蛹體內(nèi)中表達。本發(fā)明還提供了一種利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白及傳染性法氏囊病亞單位疫苗的方法，本發(fā)明的IBDV VP2蛋白可以在制備治療或預(yù)防傳染性法氏囊病疫苗中的應(yīng)用，也可以提供在制備傳染性法氏囊病診斷試劑中的應(yīng)用。
文檔編號G01N33/68GK103172709SQ20111044278
公開日2013年6月26日 申請日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者張許科, 孫進忠, 白朝勇 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司