專利名稱：一種快速定量測定尿碘的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于檢測試劑類，具體地屬于測定尿中碘含量的檢測方法。
背景技術(shù)：
碘缺乏與碘過量作為嚴(yán)重危害人類健康的疾病已引起人們的普遍關(guān)注，因而準(zhǔn)確評價人群碘營養(yǎng)狀態(tài)尤為重要。人體攝入的碘除了被甲狀腺攝取的部分(約50 75 μ g/ L)，其余皆被排出體外，其中80% 85%經(jīng)尿液排出，因此普遍認(rèn)為尿碘水平是評價及監(jiān)測人群碘營養(yǎng)狀況的最適指標(biāo)。目前我國尿碘測定的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法是過硫酸銨消化-砷鈰催化分光光度法， 該方法采用在試管中對樣品逐一消化，試劑用量較多，操作過程繁瑣，并且對于反應(yīng)時間要求嚴(yán)格，因此無法實現(xiàn)批量樣品的快速測定。國內(nèi)專利CN 1170147C公開了 “尿碘定量檢測試劑盒及尿碘檢測方法”，碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣經(jīng)消解后，先加入解析劑或中和劑，再加還原劑進(jìn)行還原。但是不夠簡便和靈敏。標(biāo)準(zhǔn)方法因其較高的靈敏度，在尿碘測定中已被廣泛用采用，但在該方法中，樣品的消化和光催化反應(yīng)過程需要在試管中逐一進(jìn)行，不僅導(dǎo)致無法批量測定樣品，而且試劑用量大，特別是亞砷酸的較大用量，造成了一定的環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是根據(jù)上述現(xiàn)狀況，旨在提供一種快速、準(zhǔn)確定量檢測尿中碘含量的方法。本發(fā)明定量檢測尿中碘含量的方法，包括步驟1、采用12道移液排槍吸取同時吸取不同濃度的7份碘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50 μ L加至 96微孔板的第一排微孔中，然后采用排槍同時吸取12份尿樣50 μ L加入微孔板的第二排微孔中，同樣吸取另四批尿樣(每批12份)50 μ L分別置于微孔板的第三、四、五、六排微孔中，然后用排槍于加樣微孔中加入100μ L的過硫酸銨。2、將微孔板密封后置于100°C的恒溫干燥箱中消化60min。3、消化后將密封盒的底部用自來水冷卻至室溫，防止微孔板凹槽上部的水蒸氣凝結(jié)，同時終止消化。4、將冷卻后的密封板打開，加入100μ L的亞砷酸溶液混勻，然后用排槍每排間隔 30s，快速加入50 μ L的硫酸鈰銨溶液。5、反應(yīng)混合物在室溫下(27。C )反應(yīng)10分鐘后，采用酶標(biāo)儀每排間隔30s讀出各孔中溶液在420nm處的吸光度數(shù)值。本發(fā)明的優(yōu)點及效果1、本發(fā)明將96微孔板作為消化容器和催化反應(yīng)容器，同時利用12道移液排槍進(jìn)行試劑的批次移加，酶標(biāo)儀進(jìn)行多個樣品吸光度的同時測定，大幅度減少了測定試劑用量、 縮短了測定時間、簡化了操作程序，對提高尿碘檢測的效率、降低檢測成本。
2、本發(fā)明采用耐熱性和化學(xué)惰性良好的聚丙烯微孔板作為消化容器和催化反應(yīng)容器，利用自制的密封板，防止微孔板中水蒸氣漏出和樣品的交叉污染；同時采用酶標(biāo)儀同時測定多份樣品的吸光度，實現(xiàn)了微量樣本的批量測定。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實施例1標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品測試本發(fā)明定量檢測尿中碘含量的方法，包括步驟1、采用12道移液排槍吸取同時吸取不同濃度的7份碘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50 μ L加至 96微孔板的第一排微孔中，然后采用排槍同時吸取12份尿樣50 μ L加入微孔板的第二排微孔中，同樣吸取另四批尿樣(每批12份)50 μ L分別置于微孔板的第三、四、五、六排微孔中，然后用排槍于加樣微孔中加入100μ L的過硫酸銨。2、將微孔板密封后置于100°C的恒溫干燥箱中消化60min。3、消化后將密封盒的底部用自來水冷卻至室溫，防止微孔板凹槽上部的水蒸氣凝結(jié)，同時終止消化。4、將冷卻后的密封板打開，加入100μ L的亞砷酸溶液混勻，然后用排槍每排間隔 30s，快速加入50 μ L的硫酸鈰銨溶液。5、反應(yīng)混合物在室溫下(27。C )反應(yīng)10分鐘后，采用酶標(biāo)儀每排間隔30s讀出各孔中溶液在420nm處的吸光度數(shù)值。同批次進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和60份樣品測試。結(jié)果表明在0-300 μ g//L碘濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:C = 17. 68-367. 41gA, R = O. 9985。60例尿碘含量測定平均值為132 μ g/L。按標(biāo)準(zhǔn)方法，對60例樣品在試管中逐一消化后，用分光光度計測定，測得尿碘含量平均值1 μ g/L。將微孔板批量測定的結(jié)果(Y)與標(biāo)準(zhǔn)方法的測定結(jié)果(X)進(jìn)行對照， 得回歸方程為γ= 1. 0077X-3. 6998，R = 0. 9902，經(jīng)t檢驗，P > 0. 05，兩者無顯著性差異。實施例2回收率將已測得尿碘濃度為102 μ g/L的尿液標(biāo)本分別加入50 μ g/L、100 μ g/L、150 μ g/ L的碘酸鉀標(biāo)溶液，按本實驗方法進(jìn)行回收實驗，得回收率分別為93.3 %、105. 9%和 96. 6%，平均回收率為98. 6%。實施例3精密度批內(nèi)精密度分別取高碘濃度056 μ g/L)的尿液標(biāo)本、中等碘濃度(152 μ g/L)的尿液標(biāo)本、低碘濃度的尿液樣本(49 μ g/L)，每個尿樣標(biāo)本平行取12份，在微孔板中同一批次進(jìn)行測定。得高、中、低樣品的平均變異系數(shù)(00分別為3.35%、2.32%和5.61(%。批間精密度取濃度(152yg/L)的尿液標(biāo)本連續(xù)測定3天，每天3次，得批間平均變異系數(shù)為 4. 50%。實施例4氣密性實驗分別稱量出微孔板的質(zhì)量、微孔板和密封硅膠膜總質(zhì)量；然后在每微孔板的每個加樣孔中加入150 μ L水，稱量加樣后的微孔板質(zhì)量、加樣微孔板和密封硅膠膜的總質(zhì)量；接著將加樣后的微孔板密封，置于100°C恒干燥箱中加熱60min ；自然冷卻至室溫后，分別稱量加樣微孔板的質(zhì)量、加樣微孔板和密封膜的總質(zhì)量。測得實驗數(shù)據(jù)為表1微孔板、微孔板與硅膠膜在各階段的質(zhì)量(g)
微孔板及密封膜微孔板加樣前加樣后加熱冷卻后加樣前加樣后加熱冷卻后51.7255 65.8782 65.865646.631360.787054.3930通過表中數(shù)據(jù)分別計算加熱前后水分質(zhì)量，根據(jù)如下公式，計算水分殘留率。
水分殘留率.力量X 100O/O
加熱前水分質(zhì)量實施例5交叉污染實驗采用兩個相同型號的微孔板，一個作為對照板，一個作為實驗板，進(jìn)行交叉污染實驗。具體方法如下對照板中，將系列標(biāo)準(zhǔn)液取50μ L每間隔一個加入到微孔中；實驗板中， 標(biāo)準(zhǔn)液加入到與對照板相同的微孔中，間隔的微孔中加入50 μ L由標(biāo)準(zhǔn)溶液和尿液配制的混合溶液。混合溶液由0. IOmL濃度為100 μ g/L的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液和0. 90mL尿液混合而成。按照實施例1方法，測定標(biāo)準(zhǔn)系列微孔中的吸光度數(shù)值，分別繪制對照板和實驗板的標(biāo)準(zhǔn)曲線。得對照板的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為C = 16. 42-371. 31gA，R = O. 9985實驗板的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:C = 19. 15-363. 21gA, R = O. 9985。實驗中發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度數(shù)值為0. 900-0. 170之間，假定吸光度數(shù)值如下表中所示，分別采用對照板和實驗板所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得碘含量數(shù)據(jù)如下，從表中結(jié)果可知，兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線的計算結(jié)果吻合，說明測定過程中不存在交叉污染。表2對照板和標(biāo)準(zhǔn)板標(biāo)準(zhǔn)曲線方程對應(yīng)不同吸光度的尿碘計算結(jié)果
A0.9000.8000.7000.6000.5000.4000.3000.2000.170對照板33527499128164211276302實驗板3654.74100128164209273299 *計算結(jié)果的單位μ g/L。
權(quán)利要求
1. 一種快速定量測定尿碘的方法，其特征在于具體步驟如下(1)采用12道移液排槍吸取同時吸取不同濃度的7份碘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50μ L加至96 微孔板的第一排微孔中，然后采用排槍同時吸取12份尿樣50 μ L加入微孔板的第二排微孔中，同樣吸取另四批尿樣(每批12份)50 μ L分別置于微孔板的第三、四、五、六排微孔中， 然后用排槍于加樣微孔中加入100 μ L的過硫酸銨。(2)將微孔板密封后置于100°C的恒溫干燥箱中消化60min。(3)消化后將密封盒的底部用自來水冷卻至室溫，防止微孔板凹槽上部的水蒸氣凝結(jié)， 同時終止消化。(4)將冷卻后的密封板打開，加入IOOyL的亞砷酸溶液混勻，然后用排槍每排間隔 30s，快速加入50 μ L的硫酸鈰銨溶液。(5)反應(yīng)混合物在室溫下(27°C)反應(yīng)10分鐘后，采用酶標(biāo)儀每排間隔30s讀出各孔中溶液在420nm處的吸光度數(shù)值。
全文摘要
本發(fā)明采用耐熱性和化學(xué)惰性良好的聚丙烯微孔板作為消化容器和催化反應(yīng)容器，利用自制的密封板，防止微孔板中水蒸氣漏出和樣品的交叉污染；同時采用酶標(biāo)儀同時測定多份樣品的吸光度，實現(xiàn)了微量樣本的批量測定。本發(fā)明方法的建立大大的節(jié)省了試劑用量，極大縮短了測定時間，減輕了測定的工作量，非常適用于大批量樣品的測定。本發(fā)明方法儀器結(jié)構(gòu)更簡單、分析成本更低廉，且分析效率略高于自動分析方法。
文檔編號G01N21/75GK102507542SQ20111031567
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月9日
發(fā)明者丁鋼強(qiáng), 劉佳明, 呂建新, 曹建明, 樓曉明, 樓永良, 趙長容, 鄭美琴 申請人:溫州醫(yī)學(xué)院