專利名稱：一種戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種抗體檢測試劑盒及其制備方法，具體涉及一種戊型肝炎病毒IgG 抗體膠體金法檢測試劑盒及其制備方法。
背景技術：
戊型肝炎病毒(h印atitis E virus，戊型肝炎)是非甲非乙型急性肝炎的病原體， 主要經(jīng)糞口途徑傳播，也有報道可以通過血液傳播。人對戊型肝炎普遍易感，病人發(fā)病癥狀嚴重，病死率高，青壯年戊肝病死率可達1 % 2 %，遠較其它各型肝炎高，孕婦戊肝病的死亡率可高達20%左右，給人類健康造成嚴重威脅。ELISA檢測法是目前用于檢測血清戊型肝炎抗體最常用的一種方法，其中以間接 ELISA用途最廣，現(xiàn)在已有商品化的試劑盒。用于檢測戊型肝炎的抗原有3種即組織培養(yǎng)全病毒抗原，合成肽抗原和表達抗原，目前最受關注的是表達抗原。常用的表達抗原有 0RF22的表達抗原，0RF23的表達抗原以及同時含有0RF22和0RF23編碼產(chǎn)物的重組表達抗原。Uchida等應用結(jié)構(gòu)基因0RF22區(qū)中部的一段重組表達蛋白作為抗原的抗戊型肝炎 ELISA法檢測52例戊肝病人血清，戊型肝炎陽性率為67. 31%。Tsarve等構(gòu)建了含有巴基斯坦戊型肝炎SAR255株完整戊型肝炎0RF22基因組的重組桿狀病毒63222IV22，ELISA法監(jiān)測接種戊型肝炎的8種靈長類動物的血清學轉(zhuǎn)變，證實應用此法檢測戊型肝炎具有高度靈敏性和特異性。國內(nèi)何志強等利用大腸桿菌表達的部分0RF22蛋白，建立的雙抗原夾心 ELISA方法，該方法與利用同一抗原的間接ELISA比較，結(jié)果符合良好，且s/co (OD/cutoff) 比值較間接法更高。但ELISA法操作復雜、檢測時間長，需要對待測樣品進行稀釋、溫育、分離、洗滌和顯色等操作，大概需要用兩個小時以上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對上述現(xiàn)有技術中的缺陷，提供了一種可以快速定性檢測血清樣本中的戊型肝炎病毒IgG抗體的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術方案為一種戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒，包括硝酸纖維素膜檢測線包被的重組抗原HEV-Ag、質(zhì)控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標墊上包被的由膠體金標記的鼠抗人IgG單抗，所述重組戊型肝炎病毒抗原濃度大于ang/ml，用SDS-PAGE測定；所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于％ig/ml ；所述鼠抗人IgG單抗?jié)舛却笥?mg/ml，用SDS-PAGE測定，上樣量在10 μ 1條件下為兩條帶。本發(fā)明的另一個目的是提供一種根據(jù)所述的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟(1)反應膜的制備用磷酸鹽緩沖液將重組HEV-Ag稀釋到包被濃度為1. Omg/ml,將羊抗鼠IgG抗體稀釋成包被濃度為2. Omg/ml，將兩種包被液分別劃到硝酸纖維素膜上， 將已包被的硝酸纖維素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊的制備將標記濃度為10-23μ g/ml的鼠抗人IgG 單抗與膠體金進行偶聯(lián)制得膠體金標記鼠抗人IgG單抗溶液，以轉(zhuǎn)速為12000r/min離心 40min，棄上清，加入膠體金結(jié)合物稀釋液至原體積的1/2，然后用混合液浸泡金標墊，制備成HEV-IgG金結(jié)合物墊，將HEV-IgG金結(jié)合物墊干燥保存；(3)切割裝配在反應膜所在膠板的上部揭去1. 5cm寬的不干膠紙，粘貼上粗纖維濾紙，使紙的下部壓住反應膜，揭去反應膜下部的0. 9cm的不干膠紙，貼上HEV-IgG金結(jié)合物墊，并且金結(jié)合物墊的上部壓住反應膜1mm，再揭去金結(jié)合物墊下部的的不干膠紙，貼上樣品墊，樣品墊的上部壓住金結(jié)合物墊的下部1mm，制成反應板，再用切條機切成4mm試紙條，進行裝卡后，裝入鋁箔袋內(nèi)制成產(chǎn)品。所述步驟⑴和O)的干燥條件為37°C干燥3小時。所述步驟O)的鼠抗人IgG單抗的標記濃度為10 μ g/ml。本發(fā)明的有益效果為戊型肝炎病毒IgG抗體檢測試劑盒具有快速、簡便、準確和靈敏度高的特點，整個操作時間僅需20分鐘就可以判讀結(jié)果。膠體金快速檢測試紙條，以多表位的重組抗原為原料，具有操作更加簡便，成本低廉，特異性好，靈敏度高的特點，可單份檢測，易于普及，對于戊型肝炎病毒IgG的檢測和控制效果明顯。
具體實施例方式一、生產(chǎn)工藝條件的確定1、反應膜包被條件的優(yōu)化1. 1檢測線包被濃度和膠體金標記鼠抗人IgG稀釋比例的選擇按照上述確定好的標記條件進行標記，將其體積濃縮至原體積(原體積以膠體金體積計算)的1/10，再以不同的稀釋比例稀釋濃縮液，用稀釋液浸泡金標墊，1.5ml/條，干燥后與以不同檢測線包被濃度，0. 1 μ 1/mm的包被量包被好的戊型肝炎反應膜進行配對，檢測內(nèi)控血清。實驗方案如表1，實驗結(jié)果如表2、3:表1實驗方案設計
權(quán)利要求
1.一種戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒，包括硝酸纖維素膜檢測線包被的重組抗原HEV-Ag、質(zhì)控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標墊上包被的由膠體金標記的鼠抗人IgG單抗，其特征在于所述重組戊型肝炎病毒抗原濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定；所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于％ig/ml ；所述鼠抗人IgG單抗?jié)舛却笥?mg/ml，用SDS-PAGE測定，上樣量在10 μ 1條件下為兩條帶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)反應膜的制備用磷酸鹽緩沖液將重組HEV-Ag稀釋到包被濃度為1.Omg/ml，將羊抗鼠IgG抗體稀釋成包被濃度為2. Omg/ml，將兩種包被液分別劃到硝酸纖維素膜上，將已包被的硝酸纖維素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgG單抗金結(jié)合物墊的制備將標記濃度為10-23μ g/ml的鼠抗人IgG 單抗與膠體金進行偶聯(lián)制得膠體金標記鼠抗人IgG單抗溶液，以轉(zhuǎn)速為12000r/min離心 40min，棄上清，加入膠體金結(jié)合物稀釋液至原體積的1/2，然后用混合液浸泡金標墊，制備成HEV-IgG金結(jié)合物墊，將HEV-IgG金結(jié)合物墊干燥保存；(3)切割裝配在反應膜所在膠板的上部揭去1.5cm寬的不干膠紙，粘貼上粗纖維濾紙，使紙的下部壓住反應膜，揭去反應膜下部的0. 9cm的不干膠紙，貼上HEV-IgG金結(jié)合物墊，并且金結(jié)合物墊的上部壓住反應膜1mm，再揭去金結(jié)合物墊下部的的不干膠紙，貼上樣品墊，樣品墊的上部壓住金結(jié)合物墊的下部1mm，制成反應板，再用切條機切成4mm試紙條， 進行裝卡后，裝入鋁箔袋內(nèi)制成產(chǎn)品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述步驟(1)和(2)的干燥條件為37°C干燥3小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述步驟(2)的鼠抗人IgG單抗的標記濃度為10 μ g/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種戊型肝炎病毒IgG抗體膠體金法檢測試劑盒，包括硝酸纖維素膜檢測線包被的重組抗原HEV-Ag、質(zhì)控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標墊上包被的由膠體金標記的鼠抗人IgG單抗，所述重組戊型肝炎病毒抗原濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定；所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于4mg/ml；所述鼠抗人IgG單抗?jié)舛却笥?mg/ml，用SDS-PAGE測定，上樣量在10μl條件下為兩條帶。本發(fā)明的有益效果為戊型肝炎病毒IgG抗體檢測試劑盒具有快速、簡便、準確和靈敏度高的特點，整個操作時間僅需20分鐘就可以判讀結(jié)果。膠體金快速檢測試紙條，以多表位的重組抗原為原料，具有操作更加簡便，成本低廉，特異性好，靈敏度高的特點，可單份檢測，易于普及，對于戊型肝炎病毒IgG的檢測和控制效果明顯。
文檔編號G01N33/576GK102288759SQ20111021728
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月29日
發(fā)明者李習榮 申請人:北京中檢安泰診斷科技有限公司