專利名稱：一種用于牛奶中抗生素在線檢測的無縫鏈接的裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型屬于化學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種無預(yù)處理情況下的在快速在線機械化分析牛奶中抗生素的裝置。
背景技術(shù)：
本實用新型公開了一種無預(yù)處理情況下的在快速在線機械化分析牛奶中抗生素 的裝置，涉及化學(xué)檢測領(lǐng)域，為了解決現(xiàn)有技術(shù)中在線高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用檢測抗生 素的問題。乳制品作為一種日常生活中的一種必須膳食重要組成成分，其重要性與安全性得 到了越來越多的國家有關(guān)部門的重視。多年來國內(nèi)外大量研究結(jié)果證明，牛奶蛋白質(zhì)的氨 基酸組成與人體接近，非常有利于處于生長發(fā)育期的兒童吸收，消化率可達到98%—100%。 在眾多牛奶殘留物中，抗生素的檢測問題日益受到國際社會的重視。國際上一般規(guī)定，青霉 素類藥物殘留的限量為0.4-1. Oppm，青霉素G在牛乳中的允許殘留量為0.01IU/ml。近年 來，隨著牛奶中抗生素含量問題的日益關(guān)注，眾多檢測方法應(yīng)運而生。但是由于牛奶樣品預(yù) 處理過程中復(fù)雜的步驟，如何更加快速而又便捷地檢測牛奶中抗生素的方法始終沒有能夠 很好的解決。在分析檢測方面，現(xiàn)有的高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)擁有快速、準確、進樣 量小等優(yōu)點，在眾多檢測牛奶中抗生素含量手段中最具有發(fā)展前景。高效液相色譜具有快 速分離與精確定量的特點，有利于從牛奶的復(fù)雜成分中有效地將抗生素與其他小分子分離 并且通過峰面積地計算得到精確地定量信息。同時質(zhì)譜地應(yīng)用能夠在極短的時間內(nèi)對目標 化合物進行定性的結(jié)構(gòu)分析，并且隨著技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜技術(shù)(如現(xiàn)有的線性離子阱質(zhì)譜) 已經(jīng)使得更高靈敏度與更快速的分析的目標得以實現(xiàn)。將高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用無疑將 發(fā)揮各自的優(yōu)勢，能夠在極短的時間內(nèi)得到全面的目標化合物的定性與定量的信息。但由 于現(xiàn)有的牛奶預(yù)處理過程相當(dāng)復(fù)雜所以不適用與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的直接進 樣分析，直接導(dǎo)致牛奶中抗生素分析所需時間長，重復(fù)性差。因此本實用新型裝置對如何實 現(xiàn)高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)能夠直接應(yīng)用與牛奶中抗生素檢測的研究具有十分重 要的意義。例如，可以免除牛奶的預(yù)處理步驟，使得牛奶的預(yù)處理與分析系統(tǒng)無縫銜接，達 至IJ快速便捷的檢測目的。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型提供一種能夠免去牛奶樣品的預(yù)處理過程，方便檢測抗生素含量的牛 奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜接裝置。本實用新型提供的牛奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜接裝置包 括1、預(yù)分離裝置，由普通石英毛細管構(gòu)成，石英毛細管內(nèi)制作有高分子聚合物柱塞， 并有體積排阻填料。具體制作步驟為將高分子聚合物、引發(fā)劑、溶劑混合后灌入毛細管內(nèi)， 形成一小段液體。在100攝氏度條件下反應(yīng)，通過毛細管內(nèi)壁的硅羥基與高分子聚合物的共價鍵相互作用一次成型制作高分子聚合物柱塞。溶膠凝膠法制備毛細管整體柱具有快 速、一次成型、操作簡便等特點。制備后成型的柱塞具有分布均勻、孔徑適中、耐高壓的特 點，并且與常用的液相色譜流動相或待分析物質(zhì)沒有明顯的相互作用。將體積排阻填料灌 入帶有柱塞的石英毛細管中。體積排阻填料通過填料本身孔徑的大小來對不同分子量的化 合物進行區(qū)分。在流動相浸潤并流動的條件下，小分子化合物會首先進入體積排阻填料的 孔徑內(nèi)，而大分子化合物由于其體積大于填料孔徑，因此直接經(jīng)過填料表面而流出色譜柱。 隨著流動相不斷沖洗后，小分子化合物延后從填料孔徑中流出，最終流出色譜柱。由于小 分子化合物與大分子化合物在色譜柱內(nèi)流經(jīng)的路程不同，因此在相同的流動相流速的條件 下，可以將不同分子量的化合物通過體積排阻的方式得以區(qū)分，將牛奶樣品中蛋白質(zhì)等大 分子與抗生素等小分子進行分離。2、富集裝置，待分析的抗生素小分子被流動相送入色譜分離富集小柱。富集裝置 中色譜富集小柱內(nèi)主要包括C18反相色譜填料。其制備方法與預(yù)分離小柱的制備方法相 同，即制備一次成型的色譜柱柱塞，將C18反相色譜填料灌入帶有柱塞的色譜柱中。C18反 相填料表面含有18烷基鏈，通過非極性相互作用將待分離物質(zhì)進行分離。在極性流動相的 條件下，待分離物質(zhì)流經(jīng)C18反相富集柱后，通過非極性的相互作用吸附在C18填料上。使 用極性較弱的流動相可以將吸附與C18填料表面的待測物質(zhì)洗脫并進行檢測。 3、進樣裝置，通過三通閥的結(jié)構(gòu)使得泵、富集裝置(富集柱)、色譜分析柱保持在同 一管路內(nèi)，通過更改泵輸出的流動相組成將富集小柱上的抗生素小分子洗脫送入高效液相 色譜柱分離分析。所述各裝置分別通過不銹鋼管與三通閥相連接。預(yù)分離裝置通過不銹鋼管與三通 閥分別與富集裝置(富集柱)、廢液口相接連。預(yù)分離裝置通過閥切換首先與廢液口相鏈接， 牛奶打入預(yù)分離裝置的小柱后通過體積排阻填料將牛奶中蛋白質(zhì)等大分子與待測小分子 分離。蛋白質(zhì)流出餾分進入廢液收集瓶。隨后將三通閥切換，使得流出小分子的餾分進入 富集裝置系統(tǒng)進行富集。富集完成后通過泵輸出洗脫液，將富集裝置(富集柱)待測小分子 洗脫并通不銹鋼管進入色譜分離柱。本實用新型適用于牛奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián) 用儀器的無縫銜接。

圖1用新型適用于牛奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜接部件的 示意圖。圖2表示標準抗生素樣品與不含有抗生素的牛奶樣品混合物進入裝置處理后的 液相色譜圖。峰歸屬頭孢羥氨芐(⑶X) (1號)，CD (2號)，土霉素(OTC) (3號)，TC (4號)， 金霉素(CTC) (5號)，多西環(huán)素(DC) (6號)。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖對本實用新型適用于牛奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的 無縫銜接裝置進行詳細描述。應(yīng)當(dāng)明確，所描述的實施例僅僅是本實用新型一部分實施例，而不是全部的實施 例?；诒緦嵱眯滦椭械膶嵤├?，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本實用新型保護的范圍。如圖1所示，本實用新型適用于牛奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜的裝置，包括預(yù)分離裝置1，由普通石英毛細管構(gòu)成，經(jīng)過特殊溶膠凝膠法處理后交聯(lián)體積排阻 填料，制備毛細管整體柱。將牛奶樣品中蛋白質(zhì)等大分子與抗生素等小分子進行分離。富集裝置2，待分析的抗生素小分子被流動相送入色譜分離富集小柱；經(jīng)過富集 裝置的樣品量適用于直接高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器。進樣裝置3，用于富集小柱上的抗生素小分子由洗脫液洗脫送入高效液相色譜柱 分離分析，并且將高效液相色譜柱流出餾分進入質(zhì)譜分析。高效液相色譜泵4，采用常規(guī)的二元梯度泵。廢液系統(tǒng)5，廢液收集瓶與閥的廢液通路相鏈接。三通轉(zhuǎn)換閥6，同有6個流通口，通過兩兩線路相連得到閥切換的目的。本實用新型適用于牛奶樣品與高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜的裝置，使 用特殊溶膠凝膠法制作預(yù)分離裝置，牛奶樣品直接在預(yù)分離裝置處分離得到抗生素小分 子，被分析小分子經(jīng)過富集裝置得到富集，通過洗脫得到適用于高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用 的進樣量，進入進樣裝置后由高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器分析待測分子。實施例1 使用標準抗生素樣品與無抗生素牛奶實際樣品的混合測定裝置的加樣 回收率。本實用新型實驗條件如下流動相=A相，0. P/oTFA (水溶液);B相，乙腈流量lml/min毛細石英管預(yù)分離管長30cm，石英管內(nèi)徑250mm，體積排阻填料長20cm高效液相色譜儀LC 色譜柱類型C18反相柱，色譜柱長250mm，色譜柱內(nèi)徑 4. 6讓，柱溫250C，檢測器為紫外分光光度檢測器本實用新型實驗步驟及結(jié)果如下使用新型的溶膠凝膠法制備預(yù)分離裝置，其中體積排阻填料長度為20cm。準確吸取牛奶標樣5uL與抗生素標準品混合物5uL，灌入預(yù)分離柱。由流動相A相 沖洗分離柱。前IOuL洗脫液去除，收集后500uL洗脫液。切換閥至富集裝置，將洗脫液流 經(jīng)富集柱進行富集。切換閥至進樣裝置，使用2uL流動相B相洗脫并且將洗脫液送入高效 液相色譜分離柱。圖2色譜圖對應(yīng)的峰面積用于計算各種標準抗生素回收率。實驗表明本實用新型測定裝置操作簡單，使用方便，牛奶樣品用量小，并且實現(xiàn)了 牛奶樣品預(yù)處理于高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜接，實驗回收率好，操作時間短 而且重現(xiàn)性良好?？捎糜谂Ｄ虡悠分锌股氐目焖僭u價。以上所述，僅為本實用新型的具體實施方式
，但本實用新型的保護范圍并不局限 于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本實用新型揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變 化或替換，都應(yīng)涵蓋在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。因此，本實用新型的保護范圍應(yīng)所述以 權(quán)利要求的保護范圍為準。[0035]表1抗生素標準品的加標回收率
權(quán)利要求1. 一種用于牛奶中抗生素在線檢測的無縫鏈接的裝置，其特在于包括(1)預(yù)分離裝置，由普通石英毛細管構(gòu)成，石英毛細管內(nèi)制作有高分子聚合物柱塞，并 有體積排阻填料；(2)富集裝置，富集裝置中有色譜富集小柱，主要包括C18反相色譜填料；(3)進樣裝置，通過三通閥的結(jié)構(gòu)使得泵、富集柱、色譜分析柱保持在同一管路內(nèi)，通 過更改泵輸出的流動相組成將富集柱上的抗生素小分子洗脫送入高效液相色譜柱分離分 析；所述各裝置分別通過不銹鋼管與三通閥相連接；預(yù)分離裝置通過不銹鋼管與三通閥分 別與富集裝置、廢液口相接連；預(yù)分離裝置通過閥切換首先與廢液口相鏈接，牛奶打入預(yù)分 離裝置的小柱后通過體積排阻填料將牛奶中蛋白質(zhì)等大分子與待測小分子分離，蛋白質(zhì)流 出餾分進入廢液收集瓶；隨后將三通閥切換，使得流出小分子的餾分進入富集裝置系統(tǒng)進 行富集；富集完成后通過泵輸出洗脫液，將富集裝置待測小分子洗脫并通不銹鋼管進入色 譜分離柱。
專利摘要本實用新型屬于化學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種用于牛奶中抗生素在線檢測的無縫鏈接的裝置。該裝置包括預(yù)分離裝置，由普通石英毛細管構(gòu)成，內(nèi)制作有高分子聚合物柱塞，并有體積排阻填料；富集裝置，內(nèi)有色譜富集小柱，主要包括C18反相色譜填料；進樣裝置。各裝置分別通過不銹鋼管與三通閥相連接。本實用新型操作簡單，使用方便，牛奶樣品用量小，并且實現(xiàn)牛奶樣品預(yù)處理于高效液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用儀器的無縫銜接，實驗回收率好，操作時間短而且重現(xiàn)性良好?？捎糜谂Ｄ虡悠分锌股氐目焖僭u價。
文檔編號G01N30/08GK201876442SQ201020602248
公開日2011年6月22日 申請日期2010年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月11日
發(fā)明者劉俊彥, 劉揚, 張祥民 申請人:復(fù)旦大學(xué)