專利名稱：：一種利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，屬于生化分析領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：碳酸酐酶(Carbonicanhyd:rase，CA;carbonatehydrolyase，EC4.2.1.1)是催化二氧化碳的可逆水合反應(yīng)的一種含鋅金屬酶，廣泛地分布在植物和動(dòng)物中，甚至有些微生物中也存在.它的主要生理作用涉及到離子交換、酸堿平衡、羧化/脫羧反應(yīng)及無(wú)機(jī)碳的利用。它催化的(]02+1120^11++03—反應(yīng)，在無(wú)碳酸酐酶催化的條件下，平衡需要l分鐘，在有碳酸酐酶作用下，平衡只需10—6秒。目前，對(duì)碳酸酐酶活力測(cè)定主要有以下幾種方法。1.放射免疫分析法；2.pH計(jì)法；3.同位素(A質(zhì)譜分析法；4.比色法；5.熒光光度法；6.mRNA測(cè)定法；7.凝膠電泳法等等。每種方法都有優(yōu)缺點(diǎn)。放射免疫分析法有較高的靈敏度，重現(xiàn)性好，但操作復(fù)雜；同位素C02質(zhì)譜分析法有較高的靈敏度，操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，但設(shè)備昂貴；比色法和熒光光度法的精確度較高，但測(cè)試成本較高。mRNA測(cè)定法和凝膠電泳法靈敏度高，但操作煩瑣；pH計(jì)法操作簡(jiǎn)單，便利快速，設(shè)備便宜，用得較廣泛，但由于靈敏度較低，在一些活力范圍內(nèi)線性較好，但超出該范圍，線性較差。目前的很多研究者大都采用pH計(jì)法來(lái)測(cè)定酶活力。傳統(tǒng)的測(cè)定植物體內(nèi)碳酸酐酶的pH計(jì)法將預(yù)冷(02°C)的飽和C02的蒸餾水分別加到有碳酸酐酶和無(wú)碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系中，用玻璃電極分別記錄這兩個(gè)體系下降一個(gè)PH單位的時(shí)間，根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)pH單位的時(shí)間，來(lái)計(jì)算酶活力。常用的pH玻璃電極是一支端部吹成泡狀的對(duì)于pH敏感的玻璃膜的玻璃管。管內(nèi)充填有零電位下pH為7的內(nèi)參比溶液，是中性磷酸鹽和氯化鉀的混合溶液，外參比溶液為氯化鉀溶液或氯化鉀凝膠電解質(zhì)。內(nèi)外參比電極均為Ag/AgCl參比電極，內(nèi)參比電極主要作用是引出電極電位，外參比電極主要作用是提供與保持一個(gè)固定的參比電勢(shì)。這種方法有一些缺點(diǎn)首先，常規(guī)用來(lái)測(cè)量PH變化的商業(yè)化玻璃電極，因?yàn)椴Ａさ拇嗳醵荒鼙晃⑿突虼藢?duì)pH變化的響應(yīng)較遲緩，限制了其測(cè)量碳酸酐酶活力的范圍。當(dāng)被測(cè)樣品的碳酸酐酶活力過(guò)小時(shí)，由于玻璃電極響應(yīng)緩慢而測(cè)量不準(zhǔn)。而當(dāng)被測(cè)樣品的碳酸酐酶活力過(guò)大時(shí)，PH計(jì)顯示數(shù)據(jù)變化過(guò)快，由于人的眼睛的視覺(jué)暫留時(shí)間為0.1-0.4秒，人的動(dòng)作又滯后于人眼，這樣勢(shì)必會(huì)造成較大的誤差，并且不同的實(shí)驗(yàn)操作人員會(huì)有不同的記錄結(jié)果。其次，碳酸酐酶催化的C02+H20H++HC03—反應(yīng)，反應(yīng)速度并不都是勻速的(如圖1)。此外，傳統(tǒng)測(cè)量方法僅能依靠秒表記錄開(kāi)始和結(jié)束時(shí)的兩點(diǎn)數(shù)據(jù)，這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的pH變化過(guò)程是否為勻速無(wú)法得知。碳酸酐酶催化的巴比妥鈉緩沖系統(tǒng)中C02+H20H++HC03—反應(yīng)過(guò)程的pH值隨時(shí)間變化曲線如圖l所示。許多金屬氧化物可以用來(lái)在不同的系統(tǒng)中檢測(cè)pH，如Pt02、Ir02、Ru02、Ti02、Sb203和81203。pH傳感的機(jī)制依靠于接觸被測(cè)介質(zhì)中金屬與金屬氧化物表面平衡的建立M0x+2xH+M+xH20(1)既然平衡體系中包含氫離子，那么在零電流條件下，電極電位將和pH值有一種線性關(guān)系，可以用能斯特方程來(lái)表達(dá)。因此，用開(kāi)路電位法測(cè)量金屬氧化物電極相對(duì)于參比電極的關(guān)系，能夠知道被測(cè)介質(zhì)的pH值。在眾多被用來(lái)研究測(cè)量pH的固態(tài)金屬氧化物中，氧化銻是迄今為止使用最為廣泛的。它比經(jīng)常用來(lái)測(cè)量pH的鉑系家族的金屬氧化物例如銥、鉬、鈀等成本低很多且容易得到。裸金屬銻在接觸空氣或樣本溶液時(shí)能很快形成一層氫氧化物層4Sb+302+6H20—4Sb(OH)3(2)電極的電位響應(yīng)來(lái)自于氫氧化物層和其下的金屬基底的反應(yīng)平衡。因此，能否利用銻微電極測(cè)定較大范圍的植物碳酸酐酶活力，成為本發(fā)明所要解決的關(guān)鍵問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，以克服傳統(tǒng)的pH計(jì)法中存在的測(cè)定范圍小、精確度低以及人為誤差大的不足。本發(fā)明采取以下技術(shù)方案它包括以下過(guò)程第一，制作銻微電極；第二，將預(yù)冷(02°C)的飽和C02的蒸餾水加入到有碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系和無(wú)碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系；第三，將電化學(xué)工作站與銻微電極及參比電極相連，采用開(kāi)路電位法分別對(duì)上述兩個(gè)體系的整個(gè)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，分別記錄下有碳酸酐酶和無(wú)碳酸酐酶的反應(yīng)體系中整個(gè)反應(yīng)過(guò)程的電位值的變化，保存電位變化過(guò)程曲線；第四，依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖選擇起始段勻速部分，分別計(jì)算出兩個(gè)體系中相當(dāng)于一個(gè)PH單位的電位值變化所需時(shí)間，再根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)pH單位的所需時(shí)間計(jì)算酶活力。在第四過(guò)程中，依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖選擇起始段的勻速部分，提取出這部分的電位與時(shí)間數(shù)據(jù)，進(jìn)行直線回歸方程的擬合，方程為Y=kX+b，其中Y為電位值，X為時(shí)間，k為方程的斜率，b為常數(shù)；依據(jù)兩個(gè)體系中方程的斜率以及經(jīng)多次測(cè)定獲得的該銻微電極在巴比妥鈉緩沖液中的pH電位關(guān)系的能斯特斜率，分別計(jì)算出這兩個(gè)體系中相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化的所需時(shí)間，再根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)pH單位的所需時(shí)間，進(jìn)行酶活力的計(jì)算。在第一過(guò)程中，用銅絲進(jìn)行電鍍，在銅絲表面形成一層細(xì)致光滑的銻金屬層，制成銻微電極。制備好的銻微電極在使用前需要在相應(yīng)緩沖液中活化時(shí)間至少為兩小時(shí)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下1)本方法通過(guò)多點(diǎn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)獲得反應(yīng)體系中相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化所需時(shí)間，因此比傳統(tǒng)的pH計(jì)法用兩點(diǎn)數(shù)據(jù)計(jì)算一個(gè)pH單位變化所需時(shí)間，測(cè)出的植物的碳酸酐酶活力可信度高。2)本方法依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖的勻速部分來(lái)計(jì)算植物的碳酸酐酶活力，因此，它比傳統(tǒng)的pH計(jì)法精確度高。3)由于銻微電極的針狀形貌，因此它可以使測(cè)量體系的體積大大縮小，減少植物材料的使用。4)本方法可以對(duì)碳酸酐酶活力過(guò)大或過(guò)小的植物進(jìn)行測(cè)定。圖1為碳酸酐酶催化的巴比妥鈉緩沖系統(tǒng)中C02+H20H++HC03—反應(yīng)過(guò)程的pH值隨時(shí)間變化曲線。圖2為本發(fā)明的開(kāi)路電位法監(jiān)測(cè)的無(wú)碳酸酐酶體系整個(gè)反應(yīng)過(guò)程pH值的變化曲線。圖3為本發(fā)明的開(kāi)路電位法監(jiān)測(cè)的有碳酸酐酶體系整個(gè)反應(yīng)過(guò)程pH值的變化曲線。圖4為用本發(fā)明測(cè)定的純碳酸酐酶的活力與體積之間的關(guān)系圖。圖5為用傳統(tǒng)pH玻璃電極測(cè)定的純碳酸酐酶的活力與體積之間的關(guān)系圖。具體實(shí)施例方式具體實(shí)施例方式它包括以下過(guò)程第一，制作銻微電極；第二，將預(yù)冷(02°C)的飽和C02的蒸餾水加入到有碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系和無(wú)碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系；第三，將電化學(xué)工作站與銻微電極及參比電極相連，采用開(kāi)路電位法分別對(duì)上述兩個(gè)體系的整個(gè)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，分別記錄下有碳酸酐酶和無(wú)碳酸酐酶的反應(yīng)體系中整個(gè)反應(yīng)過(guò)程任意時(shí)間點(diǎn)的電位值的變化，保存電位變化過(guò)程曲線；第四，依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖選擇起始段的勻速部分，提取出這部分的電位與時(shí)間數(shù)據(jù)，進(jìn)行直線回歸方程的擬合；方程為Y=kX+b，其中Y為電位值，X為時(shí)間，k為方程的斜率，b為常數(shù)；依據(jù)兩個(gè)體系中方程的斜率以及經(jīng)多次測(cè)定獲得的該銻微電極在巴比妥鈉緩沖液中的PH電位關(guān)系的能斯特斜率，分別計(jì)算出這兩個(gè)體系中相當(dāng)于一個(gè)PH單位的電位值變化的所需時(shí)間，再根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)pH單位的所需時(shí)間，來(lái)計(jì)算酶活力。采用直徑0.6mm，長(zhǎng)5cm左右的銅絲，用金相砂紙打磨光滑后，使用電化學(xué)工作站進(jìn)行電鍍，在銅絲表面形成一層細(xì)致光滑的銻金屬層，鍍上銻的銅絲在烘箱中12(TC烘干過(guò)夜。制備好的銻微電極在使用前需要在相應(yīng)緩沖液中活化時(shí)間至少為兩小時(shí)。用滴加稀硫酸(20mmol/L)的方式改變巴比妥鈉緩沖液(20mmol/L，pH8.30)的pH值，來(lái)測(cè)試電極在不同pH值溶液中的電位變化。銻微電極的電位隨溶液pH值的升高而降低，經(jīng)多次測(cè)試結(jié)果，銻微電極對(duì)pH表現(xiàn)出良好的電位響應(yīng)，響應(yīng)范圍pH2-9，其能斯特斜率為41.7±0.46mV/pH。取植物葉片0.30.5g，放到預(yù)冷的研缽中，迅速加入液氮，再加入3mL巴比妥緩沖液(10mmol/L，含巰基乙醇50mmol/L，pH8.30)進(jìn)行研磨，取研磨液倒入5mL離心管中，離心管置于冰浴中20min后，在13000r/min下離心5min，取上清液，冷藏待測(cè)。保持反應(yīng)系統(tǒng)在02t:，取待測(cè)樣品溶液101000L，加入到含3mL的巴比妥緩沖液(20mmol/L，pH8.30)的反應(yīng)容器中，然后迅速加入2mL預(yù)冷的(02°C)飽和C02蒸餾水，銻微電極及參比電極與電化學(xué)工作站相連采用開(kāi)路電位法監(jiān)測(cè)該反應(yīng)體系pH值變化，保存下電位變化過(guò)程曲線。保持反應(yīng)系統(tǒng)在02t:，取提取碳酸酐酶的巴比妥緩沖液(10mmol/L，含巰基乙醇50mmol/L，pH8.30)10IOOOL，加入到含3mL的巴比妥緩沖液(20mmol/L，pH8.30)的反應(yīng)容器中，然后迅速加入2mL預(yù)冷的(02°C)飽和C02蒸餾水，銻微電極及參比電極與電化學(xué)工作站相連采用開(kāi)路電位法監(jiān)測(cè)該反應(yīng)體系pH值變化，保存下電位變化過(guò)程曲線。將上述保存好的電位變化過(guò)程曲線以origin軟件將數(shù)據(jù)導(dǎo)出，取反應(yīng)開(kāi)始后電位勻速變化的一段數(shù)據(jù)進(jìn)行線性擬合，獲得電位隨時(shí)間變化的直線方程。依據(jù)上述的直線方程，獲得方程的斜率。有碳酸酐酶的反應(yīng)體系的直線方程的斜率記為、，相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化的所需時(shí)間記為^則為41.7/\。無(wú)碳酸酐酶的反應(yīng)體系的直線方程的斜率記為b，相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化的所需時(shí)間記為t。則為41.7/\，酶的相對(duì)活力=t。/t「l，單位為WAU。實(shí)施例1為了證明本發(fā)明的實(shí)施效果，分別用本發(fā)明和傳統(tǒng)玻璃pH電極測(cè)定了Sigma公司生產(chǎn)的純碳酸酐酶的活力(酶活力標(biāo)定為4860WAU/mg蛋白質(zhì))。表1、圖4和圖5顯示了本發(fā)明和傳統(tǒng)玻璃PH電極對(duì)商品碳酸酐酶活力的測(cè)定效果差異。表1本發(fā)明和傳統(tǒng)玻璃pH電極對(duì)商品碳酸酐酶(Sigma公司產(chǎn)品)活力的測(cè)定效果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從圖4可以看出，用本發(fā)明測(cè)定的純碳酸酐酶的活力與體積之間的關(guān)系的線性較好，方程為y=0.0673x+1.0677(R2=0.9963，n=11)。從圖5可以看出，用傳統(tǒng)pH玻璃電極測(cè)定的純碳酸酐酶的活力與體積之間的關(guān)系的線性方程為y=0.0550x+3.0378(R2=0.9752，n=10)，明顯劣于用本發(fā)明測(cè)定的純碳酸酐酶的活力與體積之間的線性關(guān)系，因此本發(fā)明測(cè)定的結(jié)果更具為精確、可信。實(shí)施例2為了證明本發(fā)明的實(shí)施效果，將桑樹(shù)、椿樹(shù)、甘藍(lán)型油菜分成兩份，分別用本發(fā)明和傳統(tǒng)pH玻璃電極測(cè)定了它們的碳酸酐酶活力。取植物葉片0.30.5g，放到預(yù)冷的研缽中，迅速加入液氮，再加入3mL巴比妥緩沖液(10mmol/L，含巰基乙醇50mmol/L，pH8.30)進(jìn)行研磨，取研磨液倒入5mL離心管中，離心管置于冰浴中20min后，在13000r/min下離心5min，取上清液，冷藏待測(cè)。表2顯示了本發(fā)明和傳統(tǒng)玻璃pH電極對(duì)幾種植物碳酸酐酶活力的測(cè)定效果差異。表2用本發(fā)明和傳統(tǒng)pH玻璃電極對(duì)幾種植物葉片的碳酸酐酶的測(cè)定效果比較。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表2中可以看出，本發(fā)明的測(cè)定范圍更大，結(jié)果更可靠，而傳統(tǒng)pH玻璃電極對(duì)10微升體積的桑樹(shù)葉片的碳酸酐酶提取液則難以測(cè)出活力。對(duì)中等碳酸酐酶活力的測(cè)定效果，本發(fā)明與傳統(tǒng)pH玻璃電極測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著差異。實(shí)施例3為了驗(yàn)證本發(fā)明的實(shí)施效果，分別用本發(fā)明和傳統(tǒng)pH玻璃電極測(cè)定桑樹(shù)和構(gòu)樹(shù)葉片的碳酸酐酶胞外酶的活力。由于乙酰唑胺(Acetazolamide，AZ)能夠抑制碳酸酐酶活力，本身又不能通細(xì)胞膜，因此可以通過(guò)比較不加乙酰唑胺前處理的葉片碳酸酐酶活力與加乙酰唑胺前處理的葉片碳酸酐酶活力來(lái)獲得碳酸酐酶胞外酶活力。本實(shí)驗(yàn)采用的乙酰唑胺的濃度約為30mmol/L。碳酸酐酶胞外酶活力為不加乙酰唑胺前處理的葉片碳酸酐酶活力與加乙酰唑胺前處理的葉片碳酸酐酶活力之差值。本發(fā)明和傳統(tǒng)玻璃pH電極測(cè)定碳酸酐酶胞外酶活力分別需要構(gòu)樹(shù)葉片6份、桑樹(shù)葉片6份。其中3份不加乙酰唑胺處理，另外3份用乙酰唑胺進(jìn)行前處理。從每份中取植物葉片0.30.5g，放到預(yù)冷的研缽中，迅速加入液氮，再加入3mL巴比妥緩沖液(10mmo1/L，含巰基乙醇50mmol/L，pH8.30)進(jìn)行研磨，取研磨液倒入5mL離心管中，離心管置于冰浴中20min后，在13000r/min下離心5min，取上清液，冷藏待測(cè)。表3顯示了本發(fā)明和傳統(tǒng)玻璃PH電極對(duì)構(gòu)樹(shù)和桑樹(shù)的碳酸酐酶胞外酶活力的測(cè)定效果差異。表3用本發(fā)明和傳統(tǒng)pH玻璃電極對(duì)桑樹(shù)和構(gòu)樹(shù)葉片的碳酸酐酶胞外酶活力的測(cè)定效果比較。測(cè)定方法植物材料酶活力(不加乙酰唑胺)(WAU/gFW)酶活力(加乙酰唑胺)(WAU/gFW)胞外酶活力和比例本發(fā)明1478919559(38%)構(gòu)樹(shù)葉片14851163322(22%)17381140598(34%)15011149(26%)桑樹(shù)葉片21213874(35%)15910851(32%)傳統(tǒng)pH玻璃電極1041854187(18%)構(gòu)樹(shù)葉片1196909287(24%)1586983603(38%)18713651(27%)桑樹(shù)葉片143152-9(-6%)13210824(18%)從表3中可以看出，本發(fā)明測(cè)定的構(gòu)樹(shù)和桑樹(shù)的碳酸酐酶胞外酶活力以及比例的變異性明顯小于傳統(tǒng)PH玻璃電極的測(cè)定；用傳統(tǒng)pH玻璃電極的測(cè)定桑樹(shù)葉片的碳酸酐酶胞外酶活力甚至出現(xiàn)負(fù)值。目前很少有胞外酶活力的比例的資料記錄，這可能與用傳統(tǒng)PH玻璃電極測(cè)定精度度不高有關(guān)。因此可以看出，本發(fā)明測(cè)定植物的碳酸酐酶尤其是碳酸酐酶胞外酶活力具有較高的可信度。從表3中還可以看出，本發(fā)明測(cè)活力較大的植物如構(gòu)樹(shù)能夠獲得可信的結(jié)果，因?yàn)椋挥蝎@得誤差較小的不加乙酰唑胺前處理和加乙酰唑胺前處8理的碳酸酐酶數(shù)據(jù)，才能獲得可信的碳酸酐酶胞外酶的數(shù)據(jù)。同理，本發(fā)明測(cè)活力較小的植物如桑樹(shù)也能夠獲得可信的結(jié)果。權(quán)利要求一種利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，其特征在于它包括以下過(guò)程第一，制作銻微電極；第二，將預(yù)冷(0～2℃)的飽和CO2的蒸餾水加入到有碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系和無(wú)碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系；第三，將電化學(xué)工作站與銻微電極及參比電極相連，采用開(kāi)路電位法分別對(duì)上述兩個(gè)體系的整個(gè)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，分別記錄下有碳酸酐酶和無(wú)碳酸酐酶的反應(yīng)體系中整個(gè)反應(yīng)過(guò)程的電位值的變化，保存電位變化過(guò)程曲線；第四，依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖選擇起始段勻速部分，分別計(jì)算出兩個(gè)體系中相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化所需時(shí)間，再根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)pH單位的所需時(shí)間計(jì)算酶活力。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，其特征在于在第四過(guò)程中，依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖選擇起始段的勻速部分，提取出這部分的電位與時(shí)間數(shù)據(jù)，進(jìn)行直線回歸方程的擬合，方程為Y二kX+b，其中Y為電位值，X為時(shí)間，k為方程的斜率，b為常數(shù)；依據(jù)兩個(gè)體系中方程的斜率以及經(jīng)多次測(cè)定獲得的該銻微電極在巴比妥鈉緩沖液中的pH電位關(guān)系的能斯特斜率，分別計(jì)算出這兩個(gè)體系中相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化的所需時(shí)間，再根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)PH單位的所需時(shí)間，進(jìn)行酶活力的計(jì)算。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，其特征在于在第一過(guò)程中，用銅絲進(jìn)行電鍍，在銅絲表面形成一層細(xì)致光滑的銻金屬層，制成銻微電極。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，其特征在于制備好的銻微電極在使用前需要在相應(yīng)緩沖液中活化至少兩小時(shí)。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種利用銻微電極測(cè)定植物碳酸酐酶活力的電化學(xué)方法，其過(guò)程為第一，制作銻微電極；第二，將預(yù)冷(0～2℃)的飽和CO2的蒸餾水加入到有碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系和無(wú)碳酸酐酶的巴比妥緩沖體系；第三，將電化學(xué)工作站與銻微電極及參比電極相連，采用開(kāi)路電位法分別對(duì)上述兩個(gè)體系的整個(gè)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，分別記錄下有碳酸酐酶和無(wú)碳酸酐酶的反應(yīng)體系中整個(gè)反應(yīng)過(guò)程的電位值的變化，保存電位變化過(guò)程曲線；第四，依據(jù)電位變化過(guò)程曲線圖選擇起始段勻速部分，分別計(jì)算出兩個(gè)體系中相當(dāng)于一個(gè)pH單位的電位值變化所需時(shí)間，再根據(jù)這兩種體系下降一個(gè)pH單位的所需時(shí)間計(jì)算酶活力。本發(fā)明比傳統(tǒng)的pH計(jì)法精確度高，碳酸酐酶活力測(cè)定范圍大。文檔編號(hào)G01N27/30GK101793860SQ20091031251公開(kāi)日2010年8月4日申請(qǐng)日期2009年12月29日優(yōu)先權(quán)日2009年12月29日發(fā)明者吳沿友,宋艷嬌,施倩倩,朱詠莉,李萍萍,王坤申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院地球化學(xué)研究所;江蘇大學(xué)