專利名稱：整體透明方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種整體透明方法，屬于植物顯微技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
整體透明技術(shù)是利用透明劑浸透植物材料，或是利用某些染料或化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)及透明劑 對植物材料進(jìn)行處理，使材料的光學(xué)特性發(fā)生改變，透光性增強(qiáng)，從而能不經(jīng)解剖即可觀察 到材料的內(nèi)部結(jié)構(gòu)特征?，F(xiàn)有的整體透明技術(shù)，多采用先對植物材料進(jìn)行染色，然后通過對 植物材料的脫水、浸透等處理來改變材料的光學(xué)和透光特性。目前整體透明技術(shù)中最常用的 透明劑是冬青油，由于冬青油對植物材料的滲透、透明，需要在無水環(huán)境中進(jìn)行，所以透明 前，先要對植物材料脫水，但材料脫水會引起其收縮。同時，由于油類透明劑對材料的浸透 、透明需要較長的時間，這使得制片處理程序較多，總的制片時間較長。另外對于野外用乙 醇溶液保存的材料，其顏色常常變深，使得整體染色與透明技術(shù)無法直接使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種整體透明方法，以簡化操作步驟并獲得更好的觀察效果。 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種整體透明方法，該方法包括以下順序 步驟
待觀察部分植物材料的分離；
將植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料變得透明； 植物材料的制片，觀察。
所述的步驟B中的84消毒液可以替換為過氧化氫(H202)或次氯酸鈉(NaOCl)溶液；透 明劑84消毒液為市售產(chǎn)品，其主要成分是次氯酸鈉，有效氯含量為4. 5 5. 5 (質(zhì)量體積比值 )，它是一種強(qiáng)氧化劑，具有一定的腐蝕作用，可用做離析劑，對棉紡物等具有漂白、脫色 作用；但隨著存放時間的增加，其有效氯含量會降低，使用時應(yīng)盡可能使用近期生產(chǎn)的產(chǎn)品
所述的步驟B中浸泡使用的是密閉容器。
所述的步驟C中的制片觀察，可以選用直接觀察的方法，即將植物材料取出放在凹玻片的凹槽內(nèi)，在植物材料表面滴加84消毒液，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。
所述的步驟C中的制片觀察，還可以選用染色后觀察的方法，在制片前對植物材料進(jìn)行 染色，具體的操作方法為將植物材料從84消毒液中取出后，放入清水中浸泡漂洗，除去植物 材料上的殘留物；然后將植物材料放入梔子色素溶液中浸泡染色，當(dāng)植物材料被染上較深顏 色時，將其取出放在凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加清水，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察。其中所述的梔子 色素溶液的制備方法為取10-30粒梔子果實(shí)(購自藥店)，用適量開水浸泡，得到的黃色溶 液即為梔子色素溶液。
所述的步驟C中的制片觀察，還可以選用以下方法將植物材料取出放在凹玻片的凹槽 內(nèi)，在植物材料表面滴加無水乙醇和香柏油(又稱油鏡油)的混合液(無水乙醇與香柏油之 比50-100: 1)，使其完全覆蓋植物材料，用吸水紙吸去擴(kuò)散到周圍的白色液體；待混合液 揮發(fā)將盡，植物材料完全暴露在空氣中時，再次滴加無水乙醇和香柏油的混合液，重復(fù)2-4 次；然后在植物材料上滴加無水乙醇和香柏油的混合液，或者滴加香柏油，最后蓋上蓋玻片 進(jìn)行觀察。其中僅滴加香柏油的方法所得玻片可以長時間保存。
所述的植物材料取出可采用以下方法進(jìn)行，取足以吸附植物材料的濾紙片，伸入84消毒 液中吸附植物材料，然后將吸附有植物材料的濾紙片轉(zhuǎn)移到洗滌液中清洗，或移到四玻片的 凹槽內(nèi)，滴加84消毒液、清水或生理鹽水，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾紙，使植物材 料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)。
所述的制片觀察，在制片前需要對植物材料進(jìn)行顯微解剖的，可采用如下方法依據(jù)植 物材料選取合適大小的擦鏡紙，放入凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加84消毒液、清水或生理鹽水使擦 鏡紙吸附在凹槽玻璃的表面，然后將植物材料轉(zhuǎn)移到擦鏡紙上，用濾紙或吸水紙接觸擦鏡紙 邊緣，將其上多余的液體吸去，使植物材料貼附在擦鏡紙的表面，在解剖鏡下，對貼附在擦 鏡紙小片上的植物材料進(jìn)行解剖，分離出所需要的結(jié)構(gòu)。
所述的滴加84消毒液、清水或生理鹽水，優(yōu)選的方式是對于直接使用84消毒液封片的， 此步可滴加84消毒液；對于需對植物材料進(jìn)行漂洗、染色或使用無水乙醇和香柏油的混合液 處理的，此步可滴加清水或生理鹽水。
本發(fā)明還涉及84消毒液作為透明劑在整體透明方法中的應(yīng)用，其具體的使用方法為
A、 待觀察部分植物材料的分離；
B、 將植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料變得透明；
C、 植物材料的制片，觀察。
采用本發(fā)明的方法優(yōu)勢在于①本發(fā)明所使用的透明劑和染色液都是市售產(chǎn)品，購買方便，并且價格便宜；②本發(fā)明所使用的透明劑作透明處理時，處理前不需要對材料進(jìn)行脫水 等處理，不僅避免了材料因脫水引起的收縮等問題，而且很大程度上縮短了透明所需的時間 ，簡化了制片處理程序；③對于野外用乙醇溶液保存的材料，直接使用本方法即可得到較好 的觀察效果；④使用濾紙取出植物材料的方法簡單易行且材料易得；⑤使用擦鏡紙固定植物 材料以便于在解剖鏡下解剖植物材料的方法操作簡單且材料易得。


圖l為千金藤果實(shí)中分離出的幼嫩種子的圖片；
圖2為高梁子房中分離出的胚珠的圖片；
圖3為千金藤幼嫩種子的透明處理后的圖片；
圖4為千金藤幼嫩種子經(jīng)84消毒液透明、制片后，觀察到的圖片； 圖5為圖4的植物材料經(jīng)顯微解剖分離出的千金藤球形胚的圖片；
圖6為千金藤幼嫩種子經(jīng)透明、染色、制片后，在胚囊中觀察到的球形胚的圖片； 圖7為高梁胚珠的透明處理后的圖片；
圖8為高梁胚珠的透明、染色、制片后的觀察結(jié)果l可觀察到胚珠表面突出的珠孔和隱
約可見的胚珠內(nèi)的胚囊的圖片，2為1經(jīng)調(diào)焦后觀察到的胚囊圖片，3為上圖胚囊的熒光顯微
鏡觀察的圖片。
具體實(shí)施例方式
以下材料分離實(shí)施例、實(shí)施例和效果實(shí)施例可以更詳細(xì)的說明本發(fā)明，但不以任何形式 限制本發(fā)明。 材料分離實(shí)施例l 千金藤幼嫩種子的分離
先將膠塊放在解剖鏡視野中(參見洪亞平等發(fā)表在《安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)》上的論文在解剖 鏡下利用膠塊觀察植物花形態(tài)的方法)，在解剖鏡下用鑷子將千金藤幼嫩果實(shí)從幼果序上摘 下，放在膠塊上。用尖頭鑷子將幼果的兩側(cè)夾住，用解剖針沿著幼果的背縫線和腹縫線，將 外果皮和中果皮劃開。用鑷子和解剖針沿著劃開的背縫線，將幼果掰開，用解剖針輕輕地將 幼嫩的種子從子房室內(nèi)分離出來，分離出的幼嫩種子如圖l。
材料分離實(shí)施例2
高梁胚珠的分離
將高梁的小花從小穗上摘下，粘在膠塊上，用解剖針和鑷子將其子房分離出來，粘放在膠塊上，再用解剖針將胚珠分離出來，分離出的胚珠見圖2。 實(shí)施例l
一種整體透明方法包括以下步驟
A、 待觀察部分植物材料的分離；
B、 將分離出的植物材料浸泡在84消毒液(購自洛陽市潔康消毒劑廠)中，直到植物材 料變得透明；
C、 取O. 5X0. 7mm的濾紙片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后將吸附有植 物材料的濾紙片轉(zhuǎn)移到凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加84消毒液，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾 紙，使植物材料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察。
實(shí)施例2
一種整體透明方法包括以下步驟
A、 待觀察部分植物材料的分離；
B、 將分離出的植物材料浸泡在84消毒液(購自洛陽市潔康消毒劑廠)中，直到植物材 料變得透明；
C、 取9X15mm的擦鏡紙，放入凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加84消毒液使擦鏡紙吸附在凹槽玻璃 的表面，然后取0.5X0.7mm的濾紙片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后將吸附 有植物材料的濾紙片轉(zhuǎn)移到凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加84消毒液，使植物材料脫離濾紙表面，移 除濾紙，使植物材料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)的擦鏡紙上，用濾紙或吸水紙接觸擦鏡紙邊緣，將 其上多余的液體吸去，使植物材料貼附在擦鏡紙的表面，在解剖鏡下，對貼附在擦鏡紙小片 上的植物材料進(jìn)行解剖，分離出所需要的結(jié)構(gòu)，封片后進(jìn)行觀察。
實(shí)施例3
一種整體透明方法包括以下步驟 待觀察部分植物材料的分離；
將分離出的植物材料浸泡在84消毒液(購自洛陽市潔康消毒劑廠)中，直到植物材料變 得透明；
取O. 6X0. 7mm的濾紙片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后將吸附有植物材 料的濾紙片轉(zhuǎn)移到清水中浸泡漂洗，除去植物材料上的殘留物；然后將植物材料用濾紙片轉(zhuǎn) 移到梔子色素溶液中浸泡染色，當(dāng)植物材料被染上較深顏色時，用濾紙片將其取出轉(zhuǎn)移到凹 玻片的凹槽內(nèi)，滴加清水，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾紙，使植物材料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察；其中所使用的梔子色素溶液的制備方法為取30粒梔子果實(shí) (購自藥店)，用適量開水浸泡，得到的黃色溶液即為梔子色素溶液。 實(shí)施例4
一種整體透明方法包括以下步驟
A、 待觀察部分植物材料的分離；
B、 將分離出的植物材料浸泡在雙氧水中，直到植物材料變得透明；
C、 取O. 7X0. 7mm的濾紙片，伸入雙氧水中吸附透明好的植物材料，然后將吸附有植物 材料的濾紙片轉(zhuǎn)移到清水中浸泡漂洗，除去植物材料上的殘留物；然后將植物材料用濾紙片 轉(zhuǎn)移到梔子色素溶液中浸泡染色，當(dāng)植物材料被染上較深顏色時，用濾紙片將其取出轉(zhuǎn)移到 凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加生理鹽水，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾紙，使植物材料進(jìn)入凹 玻片的凹槽內(nèi)的，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察；其中所使用的梔子色素溶液的制備方法為取10粒 梔子果實(shí)(購自藥店)，用適量開水浸泡，得到的黃色溶液即為梔子色素溶液。
實(shí)施例5
一種整體透明方法包括以下步驟 待觀察部分植物材料的分離；
將分離出的植物材料浸泡在84消毒液(購自洛陽市潔康消毒劑廠)中，直到植物材料變 得透明；
取O. 7X0. 5mm的濾紙片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后將吸附有植物材 料的濾紙片轉(zhuǎn)移到凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加清水，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾紙，使植 物材料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)，在植物材料表面滴加無水乙醇和香柏油的混合液，無水乙醇與 香柏油之比為50: 1，使其完全覆蓋植物材料，用吸水紙吸去擴(kuò)散到周圍的白色液體；待混 合液揮發(fā)將盡，植物材料完全暴露在空氣中時，再次滴加無水乙醇和香柏油的混合液，重復(fù) 2次；然后在植物材料上滴加無水乙醇和香柏油的混合液，或者滴加香柏油，然后蓋上蓋玻
片，進(jìn)行觀察。其中僅滴加香柏油的方法所得玻片可以長期保存。
實(shí)施例6
一種整體透明方法包括以下步驟
A、 待觀察部分植物材料的分離；
B、 將分離出的植物材料浸泡在次氯酸鈉溶液中，直到植物材料變得透明；C、取0.7X0.6mm的濾紙片，伸入次氯酸鈉溶液中吸附透明好的植物材料，然后將吸附 有植物材料的濾紙片轉(zhuǎn)移到四玻片的四槽內(nèi)，滴加清水，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾 紙，使植物材料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)，在植物材料表面滴加無水乙醇和香柏油的混合液，無 水乙醇與香柏油之比為100: 1，使其完全覆蓋植物材料，用吸水紙吸去擴(kuò)散到周圍的白色液 體；待混合液揮發(fā)將盡，植物材料完全暴露在空氣中時，再次滴加無水乙醇和香柏油的混合 液，重復(fù)4次；然后在植物材料上滴加無水乙醇和香柏油的混合液，或者滴加香柏油，然后 蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察。其中僅滴加香柏油的方法所得玻片可以長期保存。
效果實(shí)施例l
千金藤幼嫩種子的制片觀察
使用材料分離實(shí)施例l的方法獲得待觀察植物材料，運(yùn)用實(shí)施例l的方法對植物材料進(jìn)行 透明(如圖3)、制片觀察結(jié)果如圖4。 效果實(shí)施例2
顯微解剖透明后千金藤幼嫩種子獲得的球形胚的制片觀察
使用材料分離實(shí)施例l的方法獲得待觀察植物材料，運(yùn)用實(shí)施例2的方法對植物材料進(jìn)行 透明、顯微解剖并制片，觀察結(jié)果如圖5。 效果實(shí)施例3
千金藤幼嫩種子的制片觀察
使用材料分離實(shí)施例l的方法獲得待觀察植物材料，運(yùn)用實(shí)施例3的方法對植物材料進(jìn)行 透明、染色、制片，觀察結(jié)果如圖6。 效果實(shí)施例4 高梁胚珠的制片觀察
使用材料分離實(shí)施例2的方法獲得待觀察植物材料，運(yùn)用實(shí)施例3的方法對植物材料進(jìn)行 透明(如圖7)、染色、制片，觀察結(jié)果如圖8。
權(quán)利要求
1.一種整體透明方法，其特征在于所述方法包括以下順序步驟A、待觀察部分植物材料的分離；B、將植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料變得透明；C、將植物材料取出后制片觀察。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種整體透明方法，其特征在于步驟B中所述的84消毒液可以替換為過氧化氫或次氯酸鈉溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種整體透明方法，其特征在于步驟B中 所述的浸泡使用的是密閉容器。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種整體透明方法，其特征在于步驟C中 所述的制片觀察，具體操作方法為將植物材料取出放在凹玻片的凹槽內(nèi)，在植物材料表面滴加84消毒液，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種整體透明方法，其特征在于步驟C中所述的制片觀察，其中制片前還可以對植物材料進(jìn)行染色，具體的操作方法為將植物材料取出后，放入清水中浸泡漂洗，除去植物材料上的殘留物；然后將植物材料放入梔子色素溶液 中浸泡染色，當(dāng)植物材料被染上顏色時，將其取出放在凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加清水，蓋上蓋 玻片，進(jìn)行觀察。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種整體透明方法，其特征在于所述的梔 子色素溶液的制備方法為取10-30粒梔子果實(shí)，用適量開水浸泡，得到的黃色溶液即為梔子 色素溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種整體透明方法，其特征在于步驟C中所述的制片觀察，具體操作方法為將植物材料取出放在凹玻片的凹槽內(nèi)，在植物材料表面滴加無水乙醇和香柏油的混合液，無水乙醇與香柏油之比為50-100: 1，使其完全覆蓋植物材 料，用吸水紙吸去擴(kuò)散到周圍的白色液體；待混合液揮發(fā)將盡，植物材料完全暴露在空氣中 時，再次滴加無水乙醇和香柏油的混合液，重復(fù)2-4次；然后在植物材料上滴加無水乙醇和 香柏油的混合液，或者直接滴加香柏油，然后蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的一種整體透明方法，其特征 在于所述的植物材料取出可采用以下方法進(jìn)行，取足以吸附植物材料的濾紙片，伸入84消 毒液中吸附植物材料，然后將吸附有植物材料的濾紙片轉(zhuǎn)移到洗滌液中清洗，或移到四玻片 的凹槽內(nèi)，滴加84消毒液、清水或生理鹽水，使植物材料脫離濾紙表面，移除濾紙，使植物 材料進(jìn)入凹玻片的凹槽內(nèi)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的一種整體透明方法，其特征 在于所述的制片觀察，在制片前需要對植物材料進(jìn)行顯微解剖的，可采用如下方法依據(jù)植物材料選取合適大小的擦鏡紙，放入凹玻片的凹槽內(nèi)，滴加84消毒液、清水或生理鹽水使擦鏡紙吸附在凹槽玻璃的表面，然后將植物材料轉(zhuǎn)移到擦鏡紙上，用濾紙或吸水紙接觸擦鏡 紙邊緣，將其上多余的液體吸去，使植物材料貼附在擦鏡紙的表面，在解剖鏡下，對貼附在 擦鏡紙小片上的植物材料進(jìn)行解剖，分離出所需要的結(jié)構(gòu)。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的一種整體透明方法，其特征在于所述 的滴加84消毒液、清水或生理鹽水，優(yōu)選的方式是對于直接使用84消毒液封片的，此步可滴 加84消毒液；對于需對植物材料進(jìn)行漂洗、染色或使用無水乙醇和香柏油的混合液處理的， 此步可滴加清水或生理鹽水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種整體透明方法，所述方法包括以下順序步驟A.待觀察部分植物材料的分離；B.將植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料變得透明；C.將植物材料取出后制片觀察。采用本發(fā)明的方法優(yōu)勢在于①本發(fā)明所使用的透明劑和染色液都是市售產(chǎn)品，購買方便，并且價格便宜；②本發(fā)明的透明劑作透明處理時，處理前不需要對材料進(jìn)行脫水等處理，不僅避免了材料因脫水引起的收縮等問題，而且很大程度上縮短了透明所需的時間，簡化了制片處理程序；③對于野外用乙醇溶液保存的材料，直接使用本方法即可得到較好的觀察效果；④使用濾紙取出植物材料的方法簡單易行且材料易得；⑤使用擦鏡紙固定植物材料以便于在解剖鏡下解剖植物材料的方法操作簡單且材料易得。
文檔編號G01N1/30GK101672737SQ20091030839
公開日2010年3月17日 申請日期2009年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月17日
發(fā)明者仝克勤, 張有福, 李友軍, 洪亞平, 韓贊平 申請人:河南科技大學(xué)