專利名稱：檢測(cè)乙烯雌酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化工技術(shù)領(lǐng)域的檢測(cè)方法，具體是一種檢測(cè)乙烯雌酚(DES) 的方法。
背景技術(shù)：
乙烯雌酚(Diethylstilbestrol， DES)誕生于20世紀(jì)40年代，是一種具 有酚羥基結(jié)構(gòu)的人工合成雌激素，有順式和反式兩種異構(gòu)體，其中反式的生理活 性較強(qiáng)。由于DES具有促進(jìn)動(dòng)物增重，增加蛋白質(zhì)沉積和減少脂肪沉積的作用， 曾被廣泛用于促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、增加痩肉率、提高飼料轉(zhuǎn)化率。20世紀(jì)70年代后 期，由于發(fā)現(xiàn)DES具有生殖和遺傳毒性(包括致癌和致畸作用)。因此，美國(guó)從 1979年開(kāi)始禁止使用DES作為食品動(dòng)物的促生長(zhǎng)劑，歐盟從1986年禁止使用DES 用于食品動(dòng)物并限制進(jìn)口其他國(guó)家使用過(guò)該藥的動(dòng)物生產(chǎn)的食品，2002年我國(guó) 農(nóng)業(yè)部第176號(hào)公告和第193號(hào)公告中規(guī)定禁止使用DES。 2004年4月4日，中 華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布《2003年度動(dòng)物性產(chǎn)品中獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃》(農(nóng)牧發(fā) [2003]6號(hào))，對(duì)乙烯雌酚在動(dòng)物性食品中要求零檢出。但在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中非法 添加DES情況不時(shí)出現(xiàn)，對(duì)食品中乙烯雌酚的殘留檢測(cè)引起國(guó)內(nèi)外的高度重視， 因而建立快速，靈敏并能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)乙烯雌酚的方法非常必要。
目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道用于DES殘留檢測(cè)的方法很多，主要有免疫學(xué)方法 放射免疫法(RIA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)等；色譜學(xué)方法如高效液相色譜法 (HPLC)、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法(HPLC-MS)、氣相色譜法(GC)、氣相色 譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、薄層色譜法(TLC)等；其他方法如循環(huán)伏安法、分光 光度法、熒光分光光度分析法、毛細(xì)管電泳法、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法以及生 物分析法等。在這些方法中，高效液相色譜分析法是GB/T14931. 2-1994畜禽肉 中乙烯雌酚的測(cè)定方法，該方法具有靈敏、準(zhǔn)確、精密、雜質(zhì)干擾少，具有較高 可重復(fù)性、權(quán)威性等優(yōu)點(diǎn)。但是該方法也有實(shí)驗(yàn)儀器昂貴、保養(yǎng)程序復(fù)雜、設(shè)備說(shuō)明書(shū)第2/4頁(yè)
對(duì)環(huán)境要求較高、技術(shù)含量較高、試劑毒性較大、單個(gè)樣品檢測(cè)成本較高、樣品 前處理復(fù)雜等缺點(diǎn)；氣相色譜-質(zhì)譜法，放射免疫法以及帶電子捕獲檢測(cè)器的氣 相色譜法是目前已有的最能有效，靈敏地測(cè)定DESppb水平含量的檢測(cè)方法，但 由于乙烯雌酚具有極性，且沸點(diǎn)較高，需要繁瑣的衍生化步驟，從而限制了氣相 色譜分析的應(yīng)用。以上這些分析方法均需要大型分析儀器，操作過(guò)程繁瑣，不能 實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測(cè)乙烯雌酚的方法。 本發(fā)明具有方法和設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快以及檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)，可用于食品中 DES的快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，
將待測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)處理，制備樣品溶液，然后進(jìn)行如下處理 步驟一，在紙層析條的一端點(diǎn)加樣品溶液；
步驟二，將紙層析條置于正己烷-乙醇展開(kāi)劑內(nèi)，當(dāng)展開(kāi)劑前沿接近紙層析 條前沿時(shí)，取出紙層析條，風(fēng)干；
所述正己烷-乙醇展開(kāi)劑為按體積計(jì)算，正己烷1 20份，乙醇O. 1 5 份，混合而得；
步驟三，將鐵氰化鉀-三氯化鐵-&02噴在層析條上，顯色； 所述鐵氰化鉀-三氯化鐵-&02為按體積比為1: 1將0. 01 5Mole/L的鐵 氰化鉀的水溶液與0.01 5 Mole/L的三氯化鐵的水溶液混合均勻，再加入質(zhì)量 分?jǐn)?shù)為0. 001% 5%的H202，其中加入HA的體積占溶液總體積的0 10%。 所述樣品溶液為禽類或畜類樣品溶液。
步驟一中，所述點(diǎn)加具體為，在紙層析條一端的1 2cm處，用進(jìn)樣毛細(xì)管 點(diǎn)加樣品溶液，使樣品溶液在紙層析條上成為直徑為3 7mm的圓點(diǎn)。 步驟二中，所述接近具體為，當(dāng)展開(kāi)劑前沿距紙層析條前沿1 2cm。 步驟三中，所述顯色具體為，顯色之前在層析條上再噴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的冰 乙酸。
本發(fā)明利用乙烯雌酚酚羥基的還原性，使鐵氰化鉀-三氯化鐵試液生成普魯 士藍(lán)沉淀，該沉淀在強(qiáng)酸性溶液中溶解。本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明具有方法和設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快以及 檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)，可用于食品中DES的快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
具體實(shí)施例方式
本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和 過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。下列實(shí)施例中未注明具體條件 的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1
稱取5g絞碎的新鮮雞肉，放入具塞離心管中，加入10ml乙醇，超聲水浴加 熱30min，于3000rpm離心10min，移去上清液，殘?jiān)性偌尤?0ml乙醇，混均 勻后振蕩20min，于3000rpm離心10min，合并兩次上清液，此時(shí)出現(xiàn)混濁，需 要再次離心10min，取上清液過(guò)微濾膜，用去離子水定容10ml，搖勻，分別編號(hào)， 置于4'C冰箱中備用。在紙層析條的一端約1.5cm處，用進(jìn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣品溶液， 每點(diǎn)一次，再加點(diǎn)兩次，使其成為直徑約5mm的圓點(diǎn)，點(diǎn)樣完畢，使溶劑自由揮 發(fā)。取正己垸-乙醇溶液10ml于層析缸中，正己烷-乙醇展開(kāi)劑為按體積計(jì)算， 正己垸10份，乙醇1份，混合而得；將點(diǎn)好樣品的紙層析條立在層析缸中，蓋 好層析缸，上行展層，當(dāng)溶劑前沿距紙層析條前沿上端1 2cm時(shí)，取出紙層析 條，風(fēng)干。用玻璃噴瓶將混合顯色劑鐵氰化鉀-三氯化鐵-HA噴在風(fēng)干的層析條 上，鐵氰化鉀-三氯化鐵-HA為按體積比為l: l將1.0Mole/L的鐵氰化鉀的 水溶液與1.0 Mole/L的三氯化鐵的水溶液混合均勻，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的 H202，其中加入&02的體積占溶液總體積的9%。
結(jié)果并未顯示有色斑點(diǎn)，向樣品溶液中加入10—6M的乙烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，再 用同樣方法進(jìn)行檢測(cè)，紙層析條上顯示有色斑點(diǎn)。
實(shí)施例2
稱取5g絞碎的新鮮豬肉，放入具塞離心管中，加入10ml乙醇，超聲水浴加 熱30min，于3000rpm離心10min，移去上清液，殘?jiān)性偌尤?0ml乙醇，混均 勻后振蕩20min，于3000rpm離心10min，合并兩次上清液，此時(shí)出現(xiàn)混濁，需 要再次離心10min，取上清液過(guò)微濾膜，用去離子水定容10ml，搖勻，分別編號(hào)， 置于4'C冰箱中備用。在紙層析條的一端約1.5cm處，用進(jìn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣品溶液， 每點(diǎn)一次，再加點(diǎn)兩次，使其成為直徑約5mm的圓點(diǎn)，點(diǎn)樣完畢，使溶劑自由揮發(fā)。取正己垸-乙醇溶液10ml于層析缸中，正己垸-乙醇展開(kāi)劑為按體積計(jì)算，
正己烷8份，乙醇0.5份，混合而得；將點(diǎn)好樣品的紙層析條立在層析缸中，蓋
好層析缸，上行展層，當(dāng)溶劑前沿距紙層析條前沿上端1 2cm時(shí)，取出紙層析 條，風(fēng)干。用玻璃噴瓶將混合顯色劑鐵氰化鉀-三氯化鐵-HA噴在風(fēng)干的層析條 上，鐵氰化鉀-三氯化鐵-HA為按體積比為l: l將0.5Mole/L的鐵氰化鉀的 水溶液與0. 5 Mole/L的三氯化鐵的水溶液混合均勻，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 3%的 H202，其中加入&02的體積占溶液總體積的2%。
結(jié)果顯示，樣品中含有至少0.5yg/g的乙烯雌酚。
實(shí)施例3
稱取5g絞碎的新鮮牛肉，放入具塞離心管中，加入10ml乙醇，超聲水浴加 熱30min，于3000rpm離心10min,移去上清液，殘?jiān)性偌尤?0ml乙醇，混均 勻后振蕩20min，于3000rpm離心10min，合并兩次上清液，此時(shí)出現(xiàn)混濁，需 要再次離心10miri，取上清液過(guò)微濾膜，用去離子水定容10ml，搖勻，分別編號(hào)， 置于4'C冰箱中備用。在紙層析條的一端約1. 5cm處，用進(jìn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣品溶液， 每點(diǎn)一次，再加點(diǎn)兩次，使其成為直徑約5mm的圓點(diǎn)，點(diǎn)樣完畢，使溶劑自由揮 發(fā)。取正己烷-乙醇溶液10ml于層析缸中，按體積計(jì)算，正己垸5份，乙醇O. 1 份，混合而得；將點(diǎn)好樣品的紙層析條立在層析缸中，蓋好層析缸，上行展層， 當(dāng)溶劑前沿距紙層析條前沿上端1 2cm時(shí)，取出紙層析條，風(fēng)干。用玻璃噴瓶 將混合顯色劑鐵氰化鉀-三氯化鐵-HA噴在風(fēng)干的層析條上，鐵氰化鉀-三氯化 鐵-HA為按體積比為1: 1將1. 0 Mole/L的鐵氰化鉀的水溶液與1. 0 Mole/L 的三氯化鐵的水溶液混合均勻，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 01%的仏02，其中加入&02的 體積占溶液總體積的0. 1%。
結(jié)果顯示，樣品中含有至少0.5ug/g的乙烯雌酚。
權(quán)利要求
1、一種檢測(cè)乙烯雌酚的方法，將待測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)處理，制備樣品溶液，進(jìn)行如下處理，其特征在于，包括如下步驟步驟一，在紙層析條的一端點(diǎn)加樣品溶液；步驟二，將紙層析條置于正己烷-乙醇展開(kāi)劑內(nèi)，當(dāng)展開(kāi)劑前沿接近紙層析條前沿時(shí)，取出紙層析條，風(fēng)干；所述正己烷-乙醇展開(kāi)劑為按體積計(jì)算，正己烷1～20份，乙醇0.1～5份，混合而得；步驟三，將鐵氰化鉀-三氯化鐵-H2O2噴在層析條上，顯色；所述鐵氰化鉀-三氯化鐵-H2O2為按體積比為1∶1將0.01～5Mole/L的鐵氰化鉀的水溶液與0.01～5Mole/L的三氯化鐵的水溶液混合均勻，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.001％～5％的H2O2，其中H2O2的體積占溶液總體積的0～10％。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測(cè)乙烯雌酚的方法，其特征是，所述樣品溶液 為禽類或畜類樣品溶液。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)乙烯雌酚的方法，其特征是，步驟一中，所 述點(diǎn)加具體為，在紙層析條一端的1 2cm處，用進(jìn)樣毛細(xì)管點(diǎn)加樣品溶液，使 樣品溶液在紙層析條上成為直徑為3 7mm的圓點(diǎn)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)乙烯雌酚的方法，其特征是，步驟二中，所 述接近具體為，當(dāng)展開(kāi)劑前沿距紙層析條前沿1 2cm。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)乙烯雌酚的方法，其特征是，步驟三中，所 述顯色具體為，顯色之前在層析條上再噴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的冰乙酸。
全文摘要
一種分析化學(xué)領(lǐng)域的檢測(cè)乙烯雌酚的方法，將待測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)處理，制備樣品溶液，進(jìn)行如下處理在紙層析條的一端點(diǎn)加樣品溶液；將紙層析條置于正己烷-乙醇展開(kāi)劑內(nèi)，當(dāng)展開(kāi)劑前沿接近紙層析條前沿時(shí)，取出紙層析條，風(fēng)干；所述正己烷-乙醇展開(kāi)劑為按體積計(jì)算，正己烷1～20份，乙醇0.1～5份；將鐵氰化鉀-三氯化鐵-H₂O₂噴在層析條上，顯色；所述鐵氰化鉀-三氯化鐵-H₂O₂為按體積比為1∶1將0.01～5Mole/L的鐵氰化鉀的水溶液與0.01～5Mole/L的三氯化鐵的水溶液混合均勻，再加入0.001％～5％的H₂O₂，其中H₂O₂的體積在溶液總體積的0～10％。本發(fā)明具有方法和設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快以及檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)，可用于食品中DES的快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N30/00GK101598713SQ200910052889
公開(kāi)日2009年12月9日 申請(qǐng)日期2009年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月11日
發(fā)明者宋啟軍, 王正武, 波 趙 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)