專利名稱：葡萄糖胺聚糖減少免疫測定中非特異性結(jié)合的應(yīng)用的制作方法
葡萄糖胺聚糖減少免疫測定中非特異性結(jié)合的應(yīng)用 相關(guān)申請的交叉引用非特異性結(jié)合指在應(yīng)用固相的異相測定中結(jié)合伙伴的非特 異性相互作用。非特異性結(jié)合通常減小所述異相測定的靈敏度，因此 希望減少這種非特異性結(jié)合。臨床研究已經(jīng)表明心肌肌鈣蛋白I ( cTnl)在急性心肌梗塞 (AMI)后的4-6小時的血流中是可測定的且此后的數(shù)天內(nèi)是保持提 高的(Mair等，Clin Chem 41(9): 1266-1272, 1995; Larue等，Clin Chem 39(6):972畫979， 1993 )。因此，cTnl的提高掩蓋了肌酸激酶-MB( CK-MB ) 和乳酸脫氬酶的診斷的窗口 (Bodor, J Clin Immunoassay 17(l):40-44， 1994)。進(jìn)一步的研究已經(jīng)表明cTnl對于心肌損傷比CK-MB具有更 好的臨床專屬性(Adams等，Circulation 88(1):101畫106, 1993; Apple等， Clin Chim Acta 237:59-66, 1995 )。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述樣品是血清或EDTA血漿， 所述分析物是肌鈣蛋白，所述分析物結(jié)合劑是抗肌鈣蛋白I單克隆抗 體，以及所述葡萄糖胺聚糖是硫酸軟骨素。本實(shí)驗(yàn)的目的是測定向Tropl BJ和/或CJ試劑加入肝素是否 減弱Tropl假陽性結(jié)果。得到血清樣品中肌鈣蛋白I的重復(fù)的不真實(shí) 提高的多個報告。也得到了在EDTA血漿中不真實(shí)提高的Tropl結(jié)果 的若干報告。在一些情況中，從同樣的患者得到的相配的肝素血漿試 樣沒有顯示不真實(shí)提高的Tropl結(jié)果。實(shí)驗(yàn)包括向BJ和CJ試劑摻加肝素，隨后使用這些試劑的測 定用先前已經(jīng)表現(xiàn)陽性Trop結(jié)果的Tropl樣品進(jìn)行。先前已經(jīng)表現(xiàn)假陽性Tropl結(jié)果的去雜血清試樣嵌板的應(yīng) 用，用每mL包含IO個單位的CJ溶液進(jìn)行測定。這些去雜試樣表現(xiàn) 了 cTnl (心肌肌鈣蛋白I)濃度的顯著的降低。未處理的試樣的回收 率為8-35%，其被發(fā)現(xiàn)具有0.7-7.0%的表觀濃度。然而，這些試樣中 沒有完全校正到低于血清參考上限(URL)。所述測定和捕獲試劑(BJ)包含下列組分
組分 量g/L 水
K2HP04 13
KH2P04 17
異p塞唑啉酮 20
30%牛血清白蛋白 100
EDTA (等摩爾的二鈉和三鈉) 15mM
碌u酸4欠骨素C 1 生物素?；膯慰寺】贵w24-40aa特異克隆5.5mg/L
生物素酰化的單克隆抗體19C7克隆 3mg/L
pH 6.6反應(yīng)的順丁 烯二酰亞胺基團(tuán)活化；2)所述HRP用與NHS-SATA[s-乙?；虼?酸N-羥基琥珀酰亞胺]反應(yīng)的硫醇基活化；3)純化兩個活化試劑而后 相互作用一起產(chǎn)生16A11-HRP,其隨后^皮純化。雖然已陳述本發(fā)明的實(shí)施方案，但是可以理解的是，因?yàn)楸?領(lǐng)域技術(shù)人員可做修改，尤其是借助上述敘述，因此本發(fā)明不限于所 述實(shí)施方案。在不偏離本發(fā)明主旨的情況下，在本發(fā)明上述公開的范 圍內(nèi)可做合理的變化和修改。
權(quán)利要求
1. 一種免疫測定試劑，包含:稀釋劑中的分析物結(jié)合劑；以及葡萄糖胺聚糖，其量足以減少對分析物進(jìn)行的樣品測定中的非特異性結(jié)合。
2. 如權(quán)利要求1所述的免疫測定試劑，其中所述葡萄糖胺聚糖是 碌^酸軟骨素。
3. 如權(quán)利要求2所述的免疫測定試劑，其中所述硫酸軟骨素存在 的量為乂人約0.25 mg/mL到約4 mg/mL。
4. 如權(quán)利要求2所述的免疫測定試劑，其中所述硫酸軟骨素存在 的量為約1 mg/mL。
5. 如權(quán)利要求1所述的免疫測定試劑，其中所述分析物結(jié)合劑是 抗體。
6. 如權(quán)利要求1所述的免疫測定試劑，其中所述分析物是肌鈣蛋白I。
7. —種樣品組合物，包含樣品，其待測定其中分析物的存在； 分析物結(jié)合劑；以及肝素以外的葡萄糖胺聚糖，其量足以減少對分析物進(jìn)行的樣品觀'J 定中的非特異性結(jié)合。
8. 如權(quán)利要求7所述的樣品組合物，其中所述樣品是血清樣品。
9. 如權(quán)利要求7所述的樣品組合物，其中所述樣品是包含乙二胺 四乙酸的血漿樣品。
10. 如權(quán)利要求7所述的樣品組合物，其中所述葡萄糖胺聚糖是 硫酸軟骨素。
11. 如權(quán)利要求7所述的樣品組合物，其中所述分析物結(jié)合劑是 抗體。
12. 如權(quán)利要求7所述的樣品組合物，其中所述分析物是肌4丐蛋白I。
13. —種測定樣品中分析物的方法，所述方法包含將待測定其中分析物的存在的樣品與葡萄糖胺聚糖和分析物結(jié) 合劑結(jié)合，以便形成在所述樣品中存在的任何分析物和所述分析物結(jié) 合劑的絡(luò)合物，其中所述葡萄糖胺聚糖減少所述方法中的非特異性結(jié)合；以及測定所形成的絡(luò)合物以便測定所述分析物。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述樣品與所述葡萄糖胺聚 糖結(jié)合以及所形成的樣品隨后與所述分析物結(jié)合劑結(jié)合。
15. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述樣品與所述分析物結(jié)合 劑結(jié)合以及所形成的樣品隨后與所述葡萄糖胺聚糖結(jié)合。
16. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述分析物結(jié)合劑被作為包 含稀釋劑中的分析物結(jié)合劑和所述葡萄糖胺聚糖的免疫測定試劑提 供，以及其中所述免疫測定試劑與所述樣品結(jié)合。
17. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述分析物是肌鈣蛋白I。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述葡萄糖胺聚糖是硫酸軟 骨素。
全文摘要
本發(fā)明涉及葡萄糖胺聚糖減少免疫測定中非特異性結(jié)合的應(yīng)用。提供一種免疫測定試劑，其包含稀釋劑中的分析物結(jié)合劑，以及其量足以減少對分析物進(jìn)行的樣品測定中的非特異性結(jié)合的葡萄糖胺聚糖。在所提供的這種免疫測定試劑中，所述分析物是肌鈣蛋白I，所述分析物結(jié)合劑是生物素?；目辜♀}蛋白I抗體，以及所述葡萄糖胺聚糖是硫酸軟骨素。還提供一種樣品組合物，其包含待測定其中分析物的存在的樣品、分析物結(jié)合劑和肝素以外的葡萄糖胺聚糖。進(jìn)一步提供測定樣品中分析物的方法，其中使用葡萄糖胺聚糖減少非特異性結(jié)合。
文檔編號G01N33/53GK101377488SQ20081021369
公開日2009年3月4日 申請日期2008年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月28日
發(fā)明者B·?？ㄌm, D·C·海恩斯, G·伊爾伍德, P·C·霍西默, S·S·薩利文 申請人:奧索臨床診斷有限公司