專利名稱：：乙肝核心抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種乙肝核心抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法。本發(fā)明的試劑盒結(jié)合了免疫磁微粒技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)。
背景技術(shù)：
：乙型肝炎是一種嚴(yán)重的常見的肝臟疾病，在全球影響到數(shù)百萬人。目前全球人口中，超過20億人已經(jīng)在其生命中的某個(gè)時(shí)期感染過HBV，其中，大約3.5億仍然為慢性感染者，成為病毒的攜帶者。全世界四分之三的人口生活在感染的高發(fā)區(qū)。每年HBV急性臨床病例超過4百萬。攜帶者中大約25%,也就是每年IOO萬人死于慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化或原發(fā)性肝癌。目前已經(jīng)建立了三個(gè)臨床上有價(jià)值的抗原-抗體系統(tǒng)應(yīng)用于乙型肝炎乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和針對(duì)HBsAg的抗體(表面抗體，anti-HBs);針對(duì)乙肝核心抗原(HBcAg)的抗體(Anti-HBcIgM和Anti-HBcIgG);乙肝e抗原(HBeAg)和針對(duì)HBeAg的抗體(Anti-HBe)。上述指標(biāo)的聯(lián)合應(yīng)用可以判斷患者是否感染HBV,是否具有免疫力，傳染性如何，應(yīng)用于孕婦，可以有效的保證新生兒免受HBV感染。乙型肝炎核心抗體(Anti-HBc)是針對(duì)乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的抗體，不具有保護(hù)性，但卻是乙型肝炎感染的可靠指標(biāo)，分為Anti-HBcIgG和Anti-HBcIgM,前者低滴度時(shí)作為既往感染的指標(biāo)，用于乙型肝炎流行病學(xué)的調(diào)查，高滴度時(shí)作為乙型肝炎感染的指標(biāo)；后者出現(xiàn)于新感染早期，是乙型肝炎早期診斷的指標(biāo),同時(shí)也是乙型肝炎急性感染和復(fù)制活躍的指針。定量測(cè)定乙型肝炎核心抗體含量，對(duì)于乙型肝炎的臨床診斷、治療效果評(píng)價(jià)、嚴(yán)格篩選供血血源、阻斷乙型肝炎的傳播等有一定的參考價(jià)值。目前用于檢測(cè)乙肝核心抗體的免疫方法主要有酶免疫測(cè)定(enzymeimmunoassay,EIA)、it射免疫測(cè)定(radioimmunoassay,RIA)、免疫焚光測(cè)定(fluoroimmunoassay,FIA)以及化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)。這些超微量檢測(cè)技術(shù)的基本理論大體相同，但是所用示蹤劑及所發(fā)出的信號(hào)各不相同。根據(jù)大量的試驗(yàn)結(jié)果及臨床應(yīng)用資料，從實(shí)用性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性及發(fā)展前景來看，依次為化學(xué)發(fā)光免疫分析、熒光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析技術(shù)因其使用放射性元素作為標(biāo)記物，因此對(duì)環(huán)境有一定污染性，并存在操作復(fù)雜，測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定，試劑保存時(shí)間短等缺點(diǎn)。酶免疫分析法靈敏度低，影響因素較多，易造成假陰性和假陽性。化學(xué)發(fā)光免疫分析法是一種較先進(jìn)而有效的方法，可使檢測(cè)靈敏度達(dá)到1(T18摩爾水平，而且檢測(cè)范圍可達(dá)6個(gè)數(shù)量級(jí)，又因?yàn)槊笜?biāo)記物穩(wěn)定，可長期使用，因而得到了越來越多的關(guān)注。在實(shí)際的免疫檢測(cè)中，由于待測(cè)樣品中所含的雜質(zhì)成分較多，一定程度上影響了檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性，所以從復(fù)雜的背景中快速分離、純化出目的待測(cè)物，是臨床檢驗(yàn)工作者面臨的難題之一。免疫磁微粒技術(shù)是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學(xué)偶聯(lián)等方法包被上具有特異性親合力的各種免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)，使其致敏為免疫磁微粒，具有分離速度快、效率高、可重復(fù)性好；操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備；不影響被分離細(xì)胞或其它生物材料的生物學(xué)性狀和功能等特點(diǎn)，在外加磁場(chǎng)作用下定向運(yùn)動(dòng)，使得某些特殊成分得以分離、濃集或純化。采用微小的磁微粒作為固相可增加包被表面積，從而增加抗原或抗體的吸附量，既加快了反應(yīng)速度，也使清洗和分離更簡(jiǎn)便。作為用于化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)技術(shù)的一種通用固相分離方法，磁微?？纱蟠筇岣哂行О涣繌亩?jié)省原料，同時(shí)可拓寬檢測(cè)的線性范圍，從而有效避免彎鉤效應(yīng)的發(fā)生。將免疫磁微粒技術(shù)與化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)結(jié)合檢測(cè)待測(cè)物，可大大提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性，它以微米級(jí)磁微粒為栽體，利用表面有機(jī)物提供的羧基活性基團(tuán)與蛋白質(zhì)氨基共價(jià)結(jié)合，采用抗體進(jìn)行"搭橋"成免疫磁微粒，可進(jìn)行抗原、抗體反應(yīng)。該技術(shù)的新穎之處有(l)利用順磁鐵微粒為固相載體，外包被抗原，增加抗原、抗體的接觸面積及底物發(fā)光面積，提高反應(yīng)的靈敏度，并釆用旋轉(zhuǎn)磁場(chǎng)使磁微粒起攪拌作用及分離結(jié)合抗原-抗體與游離抗體的作用；(2)在液相反應(yīng)中，使用發(fā)光增強(qiáng)劑，將水分子從發(fā)光底物的發(fā)光位點(diǎn)排開，同時(shí)還可縮短發(fā)光的達(dá)峰時(shí)間?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析結(jié)合免疫磁微粒固相分離體系是一種檢測(cè)乙肝核心抗體的先進(jìn)而有效的方法，有助于促進(jìn)化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在臨床檢驗(yàn)、檢測(cè)中的應(yīng)用與發(fā)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明對(duì)上述問題進(jìn)行了分析研究，利用免疫磁微粒技術(shù)與化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)相結(jié)合的方法來檢測(cè)乙肝核心抗體，提供了一種能夠簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定地檢測(cè)乙肝核心抗體的測(cè)定試劑盒，該試劑盒適于在產(chǎn)業(yè)上有效地推廣應(yīng)用。本發(fā)明的目的是提供一種免疫磁微粒技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定乙肝核心抗體的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包括乙肝核心抗體校準(zhǔn)品；乙肝核心抗原包被》茲微粒；辣根過氧化物酶標(biāo)記的乙肝核心抗體單克隆抗體；化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述化學(xué)發(fā)光底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-碘苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過氧化脲、0.1%Tween20。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述濃縮洗滌液為含吐溫20的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明的再一目的是提供一種制備上述試劑盒的方法。根據(jù)本發(fā)明制備上述試劑盒的方法包括以下步驟1)以乙肝核心抗體陽性人血清配制校準(zhǔn)品；2)用乙肝核心抗原包被磁樣i粒；3)用辣根過氧化物酶標(biāo)記乙肝核心抗體單克隆抗體；4)配制辣根過氧化物酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；5)配制濃縮洗滌液；6)分裝上述校準(zhǔn)品、磁微粒、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗涂液；以及7)組裝為成品。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述磁微粒為23pm粒徑、四氧化三鐵內(nèi)核、表面包裹帶有活性基團(tuán)如氨基(NH2-)、羧基(-COOH)的聚合物，其使用濃度為48mg/mL;所述抗原包被磁微粒是通過戊二醛兩步法將乙肝核心抗原包被于磁微粒上；以封閉液封閉包被的磁微粒，所述封閉液為含有0.2%~1.0%牛血清白蛋白、pH值為7.2的0.02mol/L磷酸緩沖液；根據(jù)本發(fā)明的方法，在所述以辣根過氧化物酶標(biāo)記乙肝核心抗體單克隆抗體的步驟3)中，采用過^f典酸鈉法。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述化學(xué)發(fā)光底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-雍基耳關(guān)苯、0.05mM4-*典苯硼酸；B液是0.2MpH7,2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過氧化脲、0.1%Tween20。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述濃縮洗滌液為含吐溫20的磷酸鹽緩沖液。具體的上述試劑盒可以包括校準(zhǔn)品、抗原包被的磁微粒、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物與濃縮洗滌液。其中，所述校準(zhǔn)品的原料為乙肝核心抗體陽性人血清；磁微粒上包被的為乙肝核心抗原；標(biāo)記乙肝核心抗體單克隆抗體的酶為辣根過氧化物酶；化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾體系；濃縮洗滌液為20倍PBST洗液。本發(fā)明"乙肝核心抗體磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒"可以非常有效地檢測(cè)出患者體內(nèi)的乙肝核心抗體的含量，可以根據(jù)乙肝核心抗體含量的多少判斷治療效果及其病情的變化。本發(fā)明的試劑盒(化學(xué)發(fā)光法與免疫磁微粒結(jié)合)具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，且各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到同類試劑盒的分析法水平。并且，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)系統(tǒng)為開放式操作，簡(jiǎn)便快速，不需要昂貴的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量儀，特別適合廣大的中小醫(yī)院推廣使用，為臨床診斷和科研工作提供一種非常有價(jià)值的檢測(cè)手段。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，待測(cè)樣品中的乙肝核心抗體與辣根過氧化物酶標(biāo)記的乙肝核心抗體單抗竟?fàn)幣c乙肝核心抗原包被的磁微粒結(jié)合，形成"抗原抗體"復(fù)合結(jié)構(gòu)，之后與化學(xué)發(fā)光底物作用產(chǎn)生光信號(hào)，在管式發(fā)光儀中對(duì)乙肝核心抗體進(jìn)行高靈敏、高特異檢測(cè)。本發(fā)明采用"竟?fàn)幰徊椒?反應(yīng)模式，有效地利用了化學(xué)發(fā)光技術(shù)結(jié)合磁微粒技術(shù)原理，定量檢測(cè)人體血清、血漿樣品中乙肝核心抗體含量，確保了檢測(cè)的靈敏度。使用的磁微粒具有超順磁、高分散、表面積大的特點(diǎn)。對(duì)樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡(jiǎn)單可靠，可快速、高通量檢測(cè)大批樣品，便于操作和生產(chǎn)。本發(fā)明的試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，價(jià)格便宜，攜帶便利，與市場(chǎng)上的酶聯(lián)免疫試劑盒、線性范圍寬，.適用于大批量檢測(cè)樣品。圖1為實(shí)施例1所制備的試劑盒中的校準(zhǔn)品線性圖(雙對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線)。具體實(shí)施方式實(shí)施例1制備本發(fā)明的乙肝核心抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒一、乙肝核心抗體校準(zhǔn)品的制備用小牛血清將乙肝核心抗體高值陽性血清稀釋成校準(zhǔn)品，濃度分別為0NCN/mL、0.4NCN/mL、0.8NCN/mL、2NCN/mL、4NCN/mL、12NCN/mL,共6瓶。二、乙肝核心抗原包被磁微粒的制備將粒徑為2~3nm的磁微粒用戊二醛進(jìn)行活化，室溫?cái)嚢?，混?小時(shí)后，加磁場(chǎng)，靜置2025min,倒出上清，用pH值為7.4的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液清洗三次，并用該溶液進(jìn)行懸浮，濃度為40~80mg/mL;每毫升懸浮液中加入乙肝核心原40100嗎，在4。C下攪拌過夜后，加磁場(chǎng)，靜置1015min,倒出上清，用含有0.2%~1.0%牛血清白蛋白、0.02mol/L的磷酸緩沖液(pH為7.2)于室溫封閉3~4小時(shí)；最后用pH值為7.4、含吐溫-20和Proclin-300的磷酸鹽洗滌緩沖液清洗3~5次，并用該溶液配制成48mg/mL的工作液。^茲樣支粒在4。C保存。三、辣根過氧化物酶標(biāo)記的乙肝核心抗體單克隆抗體的制備乙肝核心抗體單克隆抗體用過缺酸鈉法與辣根過氧化物酶偶聯(lián)，經(jīng)PBS緩沖液充分透析后，加等體積甘油，-20'C以下保存?zhèn)溆谩Ｃ赶♂屢河?2.12g的Tris和5%。的牛血清白蛋白組成，含l%。proclin-300;經(jīng)方陣法確定辣根過氧化物酶標(biāo)記乙肝核心抗體單克隆抗體的工作濃度為1:1000-5000。四、化學(xué)發(fā)光底物本發(fā)明所使用的辣根過氧化物酶(HRP)的化學(xué)發(fā)光底物液的配制方法A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-硤苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過氧化脲、0.1%Tween20。使用方法使用前A液與B液根據(jù)使用量等體積混合。五、濃縮洗滌液濃縮洗滌液是含有58gNa2HP0412H20，2gNaH2P042H20，0.1%吐溫-20，0.1%Proclin-300防腐劑的磷酸鹽緩沖液(PBST),pH值為7.4，使用時(shí)用蒸餾水稀釋20倍。六、半成品及成品組成上述步驟所得產(chǎn)品分裝即為半成品。抽出三份經(jīng)過準(zhǔn)確性、靈敏度、精密性及穩(wěn)定性檢定合格才能組裝成乙肝核心抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒，組裝成試劑盒后還需抽檢合格后才能出廠。實(shí)施例2本發(fā)明的試劑盒的使用方法一、樣品前處理取人的空腹晨血清樣品，3000rpm離心5min,取上層液50jiL進(jìn)行分析。二、檢測(cè)方法使用本試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，需先取出抗原包被的磁微粒、校準(zhǔn)品/待測(cè)樣品、酶標(biāo)記的乙肝核心抗體單克隆抗體，在室溫放置15-30分鐘；之后，將恒溫溫箱或者水浴鍋調(diào)至37°C;再后，準(zhǔn)備好合適的微量加樣器及對(duì)應(yīng)吸頭并且檢查化學(xué)發(fā)光儀是否正常工作以及配制工作洗滌液。使用本試劑盒按照實(shí)施例2的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下將圓底聚苯乙烯試管編號(hào)后，向試管中加入50pL血清樣品或系列校準(zhǔn)品溶液，校準(zhǔn)品每管加0NCU/mL、0.4NCU/mL、0.8NCU/mL、2NCU/mL、4NCU/mL、12NCU/mL各50pL，再加入抗原包被的磁樣i粒與酶標(biāo)記的乙肝核心抗體單克隆抗體各50pL,37。C振蕩反應(yīng)60min。之后，將試管架置于磁分離器上分離5min,然后倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液，將倒轉(zhuǎn)的試管放在濾紙上吸干，拍擊分離器以除去掛壁液體。每管加入洗滌液500pL,充分混勻，置于磁分離器上分離5min,倒出上清液，將倒轉(zhuǎn)的試管放在濾紙上吸干，拍擊分離器以除去掛壁液體，重復(fù)3次。各管加入化學(xué)發(fā)光底物200~400|xL，充分混勻，置于磁分離器內(nèi)，待磁微粒富集于底部后，暗處放置10min，而后在管式化學(xué)發(fā)光測(cè)量儀上依序測(cè)量各管的發(fā)光強(qiáng)度(RLU)。以校準(zhǔn)品濃度的Log值為橫坐標(biāo)，RLU的Log值為縱坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(雙對(duì)數(shù)曲線)，以各待測(cè)血清RLU值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出該血清的乙肝核心抗體的濃度，見附圖1,其中，Y為發(fā)光強(qiáng)度，X為乙肝核心抗體濃度(單位為NCU/mL)，相關(guān)系數(shù)r;0,9999，Logit(Y)=-3.8730Log(X)-0.6144。實(shí)施例3本發(fā)明的試劑盒的方法學(xué)檢定按照本領(lǐng)域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對(duì)實(shí)施例1中制備的試劑盒進(jìn)行檢定，結(jié)果如下1、試劑盒準(zhǔn)確度測(cè)定按照實(shí)施例1的試劑盒檢測(cè)國家標(biāo)準(zhǔn)參考品血清，考察陰性及陽性參考品的符合率，根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，要求15份陰性參考品陰性率不小于15/15，15份陽性參考品陽性率不低于14/15。結(jié)果如表l所示，表明實(shí)施例1的試劑盒陰陽性參考品的符合率達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。表l實(shí)施例1的試劑盒檢測(cè)國家參考品血清結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2、試劑盒靈敏度測(cè)定使用國家參考品中的3份系列稀釋的靈敏度參考品血清，考察試劑盒的靈敏度。根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，要求3份系列稀釋血清陽性率應(yīng)均大于2份。結(jié)果如表2所示，表明實(shí)施例1的試劑盒的靈敏度達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。表2實(shí)施例1的試劑盒的靈敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3、試劑盒精密性測(cè)定用國家參考品中的精密度血清，考察試劑盒的精密性。按照實(shí)施例2的方法重復(fù)至少10孔進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)三次，分別計(jì)算變異系數(shù)。結(jié)果如表3所示，表明所制備的乙肝核心抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒的分析內(nèi)變異系數(shù)小于腦。表3實(shí)施例1的試劑盒的精密性<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>4、試劑盒穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例1的試劑盒于37。C放置3天、6天、10天后，檢測(cè)國家參考品血清，結(jié)果表明各項(xiàng)指標(biāo)均可以達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。以上說明"乙肝核心抗體》茲微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒"的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確性、特異性和穩(wěn)定性是完全符合臨床要求的。實(shí)施例4本發(fā)明的試劑盒與酶聯(lián)免疫試劑盒臨床血樣測(cè)值比對(duì)用本發(fā)明的試劑盒和市售乙肝核心抗體酶聯(lián)免疫試劑盒對(duì)1080例臨床血清樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果總符合率為99.3%。檢測(cè)結(jié)果如下表4本發(fā)明試劑盒與酶聯(lián)免疫試劑盒臨床血樣測(cè)值'比對(duì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>另將檢測(cè)結(jié)果不符的7例血樣，用新創(chuàng)公司的乙肝核心抗體ELISA試劑盒和Abbott乙肝核心抗體酶聯(lián)試劑進(jìn)行了復(fù)核，結(jié)果本發(fā)明試劑盒這7份血樣的檢測(cè)結(jié)果與新創(chuàng)、Abbott完全相符，為陰性。綜上，利用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，無放射性污染，試劑盒成本低，臨床適用性強(qiáng)，更適用于我國臨床檢測(cè)及篩查實(shí)驗(yàn)室，可有效地診斷乙型肝炎核心抗體含量，對(duì)于乙型肝炎的臨床診斷、治療效果評(píng)價(jià)、嚴(yán)格篩選供血血源、阻斷乙型肝炎的傳播等有一定的參考價(jià)值。權(quán)利要求1、乙肝核心抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒是由乙肝核心抗體校準(zhǔn)品、乙肝核心抗原包被的磁微粒、辣根過氧化物酶標(biāo)記的乙肝核心抗體單克隆抗體、辣根過氧化物酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物、濃縮洗滌液所組成。2、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-硤苯硼酸；B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過氧化脲、0.1%Tween20。3、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述濃縮洗滌液為含吐溫20的磷酸鹽緩沖液。4、一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟1)以乙肝核心抗體陽性人血清配制校準(zhǔn)品；2)用乙肝核心抗原包被磁微粒；3)用辣根過氧化物酶標(biāo)記乙肝核心抗體單克隆抗體；4)配制辣根過氧化物酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；5)配制濃縮洗滌液；6)分裝上述校準(zhǔn)品、磁微粒、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液；以及7)組裝為成品。5、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在所述用乙肝核心抗原包被磁微粒的步驟2)中所述磁微粒為23nm粒徑、四氧化三鐵內(nèi)核、表面包裹帶有活性基團(tuán)的聚合物，其使用濃度為4~8mg/mL;所述抗原包被磁微粒是通過戊二醛兩步法將乙肝核心抗原包被于磁微粒上；以封閉液封閉包被的石茲」微粒，所述封閉液為含有0.2%1.0%牛血清白蛋白、pH值為7.2的0.02mol/L磷酸緩沖液。6、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在所述用辣根過氧化物酶標(biāo)記乙肝核心抗體單克隆抗體的步驟3)中，采用的是過碘酸鈉法。7、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物包含A液和B液，其中，A液是0.2MpH8.7硼酸-硼砂緩沖液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4"典苯硼酸;B液是0.2MpH7.2磷酸鹽緩沖液，包括3.5mM過氧化脲、0.1%Tween20。8、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述濃縮洗滌液為含吐溫20的磷酸鹽緩沖液。全文摘要本發(fā)明提供了一種乙肝核心抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法。根據(jù)本發(fā)明試劑盒的組分包括乙肝核心抗體校準(zhǔn)品、乙肝核心抗原包被的磁微粒、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物和濃縮洗滌液。本發(fā)明有效的利用了磁微粒固相分離體系和化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)來檢測(cè)乙肝核心抗體，該試劑盒具有檢測(cè)簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定等特點(diǎn)，可以很好的滿足臨床診斷的需要，適于在產(chǎn)業(yè)上有效推廣應(yīng)用。文檔編號(hào)G01N33/576GK101545906SQ20081010267公開日2009年9月30日申請(qǐng)日期2008年3月25日優(yōu)先權(quán)日2008年3月25日發(fā)明者唐寶軍,宋勝利,應(yīng)希堂,黎張,胡國茂,鄭金來申請(qǐng)人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司