專利名稱：：一種樣本處理液及其配制方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫檢測用的樣本處理液，尤其是用于流感病毒檢測中的樣本預(yù)處理。
背景技術(shù)：
：流行性感冒病毒簡稱流感病毒，是引起流感的病原體，流感是一種上呼吸道急性傳染病，它傳染性強(qiáng)、傳播快、潛伏期短、發(fā)病率高。已引起數(shù)次世界性大流行，對人類的生命健康危害極大。隨著流感實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，流感快速診斷技術(shù)也不斷進(jìn)步，不僅實(shí)驗(yàn)方法更加敏感，實(shí)驗(yàn)時(shí)間也不斷縮短最傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)法數(shù)天可報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)當(dāng)天可報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這些檢測需要依賴于醫(yī)院或精密的儀器，操作比較復(fù)雜。目前市面上，有一種更為簡單的檢測工具，流感病毒膠體金法快速診斷試劑盒可以在更短時(shí)間內(nèi)完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)。然而由于流感病毒的樣本，通常選用鼻涕，痰液或者咽喉擦拭液，當(dāng)這些樣本通過免疫的方法進(jìn)行檢測時(shí)，樣本中存在的高粘性物質(zhì)會(huì)堵塞多孔膜的孔。另外，這些高粘性物質(zhì)還可能通過與人體脫落的上皮粘膜細(xì)胞結(jié)合在一起，進(jìn)一步堵寨多孔膜，造成免疫檢測的不精確甚至無法進(jìn)行。
發(fā)明內(nèi)容為了克服以上現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，進(jìn)行了本發(fā)明。本發(fā)明較現(xiàn)有技術(shù)相比，能夠使樣本在檢測前被充分預(yù)處理，排除影響檢測反應(yīng)的不利因素，降低流感檢測的假陽性，提高檢測的精確性。本薦明提供了一種樣本處理液，包括牛血清白蛋白和鹽離子物質(zhì)，優(yōu)選的，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質(zhì)的濃度為5—200mg/ml。優(yōu)選的，所述的鹽離子物質(zhì)包括氯化鈉或氯化鉀。更為優(yōu)選的，所述的氯化鈉的濃度為20-50mg/ml;所述的牛血清白蛋白濃度為5-20mg/ml。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述的樣本處理液包括表面活性劑。優(yōu)選的，所述的樣本處理液包括兩性表面活性劑。同樣優(yōu)選的，所述的表面活性劑選自于聚氧乙烯月桂醇醚、乙烯基二元胺共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、異丙胺烷基苯磺酸鹽中的一種或幾種。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述的樣本處理液還包括生物緩沖物和防腐劑。優(yōu)選的，所述的生物緩沖物選自于三羥甲基氨基甲垸、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸、二(2-羥乙基)亞氣基三(羥甲基)甲烷-丙垸中的一種或幾種；所述的防腐劑選自于疊氮鈉、慶大霉素、卡那霉素、硫柳汞鈉、氨芐青霉素中的一種或述的疊氮化鈉的濃度為0.1-lmg/ml。本發(fā)明還提供一種配制樣本處理液的方法，在溶劑中加入一定量的牛血清蛋白和鹽離子物質(zhì)。優(yōu)選的，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質(zhì)的濃度為5_200mg/ml。本發(fā)明還提供一種檢測試劑盒，包括可以快速檢測樣本中是否含有被分析物質(zhì)的橫向流動(dòng)檢測裝置和樣本處理液，所述的樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質(zhì)。優(yōu)選的，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質(zhì)的濃度為5_200mg/ml。本發(fā)明取得的有益效果是能夠使樣本在檢測前被充分預(yù)處理，排除影響檢測反應(yīng)的不利因素，降低流感檢測的假陽性，提高檢測的精確性。具體實(shí)施例方式下面對本發(fā)明中所使用的技術(shù)術(shù)語做進(jìn)一步的說明。檢測檢測表示化驗(yàn)或測試一種物質(zhì)或材料是否存在，比如，，但并不限于此，化學(xué)物質(zhì)、有機(jī)化合物、無機(jī)化合物、新陳代謝產(chǎn)物、藥物或者藥物代謝物、有機(jī)組織或有機(jī)組織的代謝物、核酸、蛋白質(zhì)或聚合物。另外，檢測表示測試物質(zhì)或材料的數(shù)量。進(jìn)一步說，化驗(yàn)還包括免疫檢測，化學(xué)檢測、酶檢測等。樣本本發(fā)明所指的樣本指那些可以用來檢測、化驗(yàn)或診斷是否存在感興趣的被分析物質(zhì)的物質(zhì)。樣本可以是，例如，液體樣本，液體樣本可以包括血液、血漿、血清、尿液、唾液和各種分泌液，還可以包括固體樣本和半固體樣本經(jīng)過預(yù)先處理后形成的液體溶液。收集來的樣本可以用于免疫檢測、化學(xué)檢測、酶檢測等方法來檢測是否存在被分析物質(zhì)。樣本優(yōu)選如鼻涕，痰液，咽喉擦拭液等。對于采集這些樣本沒有特別的限制，一般可以采用常規(guī)方法，比如可以用棉簽采集，也可以用專用的收集器。流感病毒本發(fā)明的檢測對象是樣本中的物質(zhì)，特別是流感病毒。流感病毒可以使通常定義下的，沒有特別的限制。流感病毒屬于正粘病毒科。流感病毒顆粒呈球形，由外膜和包圍于其中的核衣殼組成。外膜的主要成份是脂質(zhì)，其內(nèi)表面為一層作為基質(zhì)的蛋白質(zhì)，外表面有血凝素和神經(jīng)氨酸酶兩種糖蛋白突起，這些糖蛋白突起是流感病毒抗原結(jié)構(gòu)的主要成分，同時(shí)也是流感疫苗的重要組成部分。核衣殼由RNA(f亥糖核酸)、核蛋白以及多聚酶組成，依據(jù)核蛋白的抗原性，流感病毒分為甲、乙、丙三型。以甲型的流行規(guī)模最大，乙型次之，丙型極少引起流行，因而檢測甲型和乙型流感顯得尤為重要。樣本處理液樣本可以在檢測前被預(yù)處理。預(yù)處理的溶液，可以包括牛血清白蛋白(BSA)和鹽離子物質(zhì)。牛血清白蛋白(簡稱BSA)，是血液的主要成分(38g/100ml)，分子量68kD。等電點(diǎn)4.8。含氮量16%，含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。牛血清白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成，其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。在樣本處理液中加入BSA，BSA的濃度可以是1-50mg/ml之間，優(yōu)選的，BSA的濃度在5-20mg/ml之間。更為優(yōu)選的，BSA的^j^度為5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml或20mg/ml。BSA上有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。尤其可以和樣本中的非特異性物質(zhì)結(jié)合在一起，即封閉非特異性位點(diǎn)，可以避免樣本和非特異性物質(zhì)的結(jié)合，起到生理和機(jī)械保護(hù)作用,抵消由非特異性物質(zhì)引起的假陽性現(xiàn)象。鹽離子物質(zhì)，可以是還有無機(jī)鹽離子的物質(zhì)，比如氯化鈉、氯化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、EDTA鈉鹽、疊氮化鈉中一種或者幾種物質(zhì)的組合。鹽離子物質(zhì)的濃度可以是5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml。優(yōu)選的，鹽離子的濃度為20-50mg/ml，如20mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40.mg/ml、45mg/ml或50mg/ml。更為優(yōu)選的，鹽離子物質(zhì)為氯化鈉，濃度為20-50mg/ml。鹽離子可以除去樣本中，尤其是鼻涕，唾液或者咽喉擦拭液中的粘性物質(zhì)，使粘性物質(zhì)沉降，不影響樣本在試劑條上的流動(dòng)和滲透。樣本處理液還可以包括各類表面活性劑。表面活性劑能顯著改變液體表面張力或兩相之間的界面張力。本發(fā)明中的表面活性劑，可以采用非離子型的表面活性劑，如聚氧乙烯月桂醇醚(商品名ChemalLA-9)、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物(Pluronic)、異丙胺垸基苯磺酸鹽(Ninate)、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)月旨肪醇聚氧乙烯醚、$基酚聚氧乙烯醚和聚乙二醇等，也可以采用離子型的表面活性劑，如十烷基三甲基氯化銨(DTMAC)、十二烷基三甲基氯化銨(DTAC)、十四烷基三甲基氯化銨(TTAC)、十六烷基三甲基氯化銨(CTAC)、十八烷基三甲基氯化銨(OTAC)及十二烷基硫酸鈉(SDS)等。優(yōu)選的，樣本處理液中還可以加入兩性表面活性劑，比如乙烯基二元胺共聚物(商品名Tetronic)。以上表面活性劑均可使樣本與預(yù)處理液混合均勻的作用。以上表面活性劑的濃度可以在0.1-15mg/ml之間。本發(fā)明的樣本處理液還可以包括生物緩沖物品，濃度在3-30mg/ml之間，如三羥甲基氨基甲垸(TrizmaBase)、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris鹽酸)、3-(N-嗎啉基)_2-羥基丙磺酸(MOPSO)、二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷-丙垸(BPT)等。本發(fā)明的樣本處理液還可以包括防腐劑，有效延長樣本處理液的保質(zhì)時(shí)間。防腐劑可是選自于山梨酸、山梨酸鉀、苯甲酸、二氧化碳、硝酸鹽、亞硝酸鹽、亞硫酸等。優(yōu)選的，防腐劑選自于疊氮鈉，慶太霉素，卡那霉素，硫柳汞，氨芐青霉素等之一或其組合。優(yōu)選的，疊氮鈉濃度可以是O.1-lmg/ml,慶大霉素濃度可以是0.01-0.lmg/ml，卡那霉素濃度可以是0.01-0.lmg/ml，硫柳汞鈉濃度可以是0.1-lmg/ml，氨芐青霉素濃度可以是O.Ol-O.lmg/ml。更優(yōu)選的，疊氮鈉濃度可以是0.2mg/ml，慶大霉素濃度可以是0.02mg/ml，卡那霉素濃度可以是0.05mg/ml，硫柳汞鈉濃度可以是0.2mg/ml，氨芐青霉素濃度可以是0.05mg/ml。樣本處理液中可以含有以上濃度的其中之一種防腐劑，也可以兩兩組合或者兩種以上組合作為防腐劑存在。本發(fā)明還提供一種配制以上所述樣本處理液的方法，在水中加入一定量的牛血清蛋白和鹽離子物質(zhì)。優(yōu)選的，牛血清白蛋白的濃度為.l-50mg/ml，鹽離子物質(zhì)的濃度為5—200mg/ml。本潭明還提供一種檢測試劑盒，包括可以快速檢測樣本中是否含有被分析物質(zhì)的橫向流動(dòng)檢測裝置和如上所述的樣本處理液，樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質(zhì)。優(yōu)選的，牛血清白蛋白的濃度為1-50mg/ml，鹽離子物質(zhì)的濃度為5—200mg/ml。優(yōu)選的，這種檢測試劑盒可以用于流感A型或者B型的檢測。更為優(yōu)選的；這種檢測試劑盒可以同時(shí)用于檢測感A型和流感B型。更為優(yōu)選的，橫向流動(dòng).檢測裝置為流感病毒膠體金法快速診斷試劑裝置。下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明來進(jìn)行詳細(xì)的說明。這些具體的實(shí)施例子僅僅是在不違背本發(fā)明精神下的有限列舉，并不排除本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員把現(xiàn)有技術(shù)和本發(fā)明結(jié)合而產(chǎn)生的其他具體的實(shí)施方案。實(shí)施例一本實(shí)施例以檢測流感病毒為對象，樣本處理液的配方為不'同濃度的BSA和NaCl，濃度單位為mg/ml。1.樣本處理液的配比。其中，BSA的濃度分別為5mg/ml、15mg/ml、25mg/ml、35mg/ml;NaCl的濃度分別為10mg/ml、25mg/ml、35mg/mi、45mg/ml和50mg/ml。根據(jù)不同濃度配比成不同的樣本處理液。2.選用流感檢測中兩種不同類型的流感的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，如FluA弱陽性標(biāo)準(zhǔn)品、FluB弱陽性標(biāo)準(zhǔn)品、FluA強(qiáng)'陽性標(biāo)準(zhǔn)品、FluB彈陽性標(biāo)準(zhǔn)品和Flu陰性標(biāo)準(zhǔn)品。3.快速診斷檢測。使用流感病毒膠體金法快速診斷試劑盒，包括流感病毒膠體金法快速診斷試劑條(FluA+B)(IMI公司生產(chǎn))。將各種樣本使用不同的樣本處理液進(jìn)行預(yù)處理后，取一定量滴于快速診斷試劑條上，進(jìn)行15分鐘的免疫反應(yīng)。結(jié)果如表一所示，+-表示疑似，+表示陽性，-表示陰性，++表示強(qiáng)陽性。在完全不含有BSA和NaCl的情況下，反應(yīng)結(jié)果比較模糊，處于陽性和陰性交界，很容易給檢測者或者醫(yī)生造成誤讀。采用不同濃度的BSA和NaCl，都可以讀得準(zhǔn)確良好的結(jié)果，很容易對流感A和流感B進(jìn)行鑒定。表一BSA+NaClFluA弱陽性標(biāo)準(zhǔn)品FluB弱陽性標(biāo)準(zhǔn)品FluA強(qiáng)陽性標(biāo)準(zhǔn)品FluB強(qiáng)陽性標(biāo)準(zhǔn)品陰性標(biāo)準(zhǔn)口叩0+Q+-+-+++-5+10++++++—15+25++++++-15+35++++++—25+25++++++-25+45++++++-11<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例二與實(shí)施例一不同的是，本實(shí)施例中采用三種物質(zhì)配比得到樣本處理液，分別是BSA，NaCl和聚氧乙烯月桂醇醚(ChemalLA-9)，，三者配比濃度如表二，濃度為mg/ml。在含有BSA，NaCl和ChemalLA-9的情況下，均可以讀得準(zhǔn)確良好的結(jié)果，很容易對流感A和流感B進(jìn)行鑒定。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例三與實(shí)施例一不同的是，本實(shí)施例中采用三種物質(zhì)配比得到樣本處理液，分別是BSA，NaCl和乙烯基二元胺共聚物(Tetronic),三者配比濃度如表二，濃度為mg/ml。在含有BSA，NaCl和Tetronic的情況下，均可以讀得準(zhǔn)確良好的結(jié)果，很容易對流感A和流感B進(jìn)行鑒定。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例四與實(shí)施例一不同的是，本實(shí)施例中采用五種物質(zhì)配比得到樣本處理液，分別是BSA，NaCl、ChemalLA-9、三羥甲基氨基甲烷(TrizmaBase)和疊氮鈉(SodiumAzide)，三者配比濃度如表二，濃度為mg/ml。在含有BSA，NaCl、ChemalLA國9、TrizmaBase禾BSodiumAzide的情況下，均可以讀得準(zhǔn)確良好的結(jié)果，很容易對流感A和流感B法行鑒定。表四<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權(quán)利要求1.一種樣本處理液，其特征在于，該樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質(zhì)。2.如權(quán)利要求i所述的樣本處理液，其特征在于，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質(zhì)的濃度為5，200mg/ml。3.如權(quán)利要求1所述的樣本處理液，其特征在于，所述的鹽，離子物質(zhì)包括氯化鈉或氯化鉀。4..如權(quán)利要求3所述的樣本處理液，其特征在于，所述的氯化鈉的濃度為20-50mg/ml。5.如權(quán)利要求1或2所述的樣本處理液，其特征在于.，所述的牛血清白蛋白濃度為5-20mg/ml。6.如權(quán)利要求1所述的樣本處理液，其特征在于，所述的樣本處理液包括表面活性劑。7.如權(quán)利要求6所述的樣本處理液，其特征在于，所述的樣本處理液包括兩性表面活性劑。8.如權(quán)利要求6所述的樣本處理液，其特征在于，所述的表面活性劑選自于聚氧乙烯月桂醇醚、乙烯基二元胺共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物、異丙胺烷基苯磺酸鹽中的一種或幾種。9.如權(quán)利要求1所述的樣本處理液，其特征在于，所述的樣本處理液還包括生物緩沖物和防腐劑。10.如權(quán)利要求9所述的樣本處理液，其特征在于，所述的生物緩沖物選自于三羥甲基氨基甲烷、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸、二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲'基)甲烷-丙烷中的一種或幾種；所述的防腐劑選自于疊氮鈉、慶大霉素、卡那霉素、硫柳汞鈉、氨芐青霉素的一種或幾種。11.如權(quán)利要求10所述的樣本處理液，其特征在于，所述的三羥甲基氨基甲烷的濃度為3-30mg/ml;所述的疊氮化鈉的濃度為0.l-lmg/ml。12.—種配制如權(quán)利要求1所述的樣本處理液的方法，其特征在于，在溶劑中加入一定量的牛血清蛋白和鹽離子物質(zhì)。13.如權(quán)利要求12所述的配制樣本處理液的方法，其特征在于，所述的牛血清白蛋白的濃度為l-50mg/ml，所述的鹽離子物質(zhì)的濃度為5—200mg/ml。14.一種檢測試劑盒，包括可以快速檢測樣本中是否含有被分析物質(zhì)的橫向流動(dòng)檢測裝置和樣本處理液，其特征在于，所迷的樣本處理液包括牛血清白蛋白和鹽離子物質(zhì)。15.如權(quán)利要求14所述的樣本處理液，其特征在于，所述的牛血清白蛋白.的濃度為1-50mg/ml，所述的鹽離子物質(zhì)的濃度為5—200mg/ml。全文摘要本發(fā)明提供了一種樣本處理液，包括牛血清白蛋白和鹽離子物質(zhì)，牛血清白蛋白的濃度為1-50mg/ml，鹽離子物質(zhì)的濃度為5-200mg/ml。本發(fā)明的樣本處理液中還可以包括表面活性劑。本發(fā)明能夠使樣本在檢測前被充分預(yù)處理，排除影響檢測反應(yīng)的不利因素，降低流感檢測的假陽性，提高檢測的精確性。文檔編號G01N33/48GK101556222SQ20081006169公開日2009年10月14日申請日期2008年5月29日優(yōu)先權(quán)日2008年5月29日發(fā)明者紅于,吳淑江,吳銀飛,陸維克,陳金樹,飛高申請人:艾博生物醫(yī)藥(杭州)有限公司