專利名稱：一種dna損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，用于評(píng)估基因損傷修復(fù)能力的強(qiáng)弱，針對(duì)性的提示受檢者面對(duì)于各種可能導(dǎo)致基因損傷的外界因素時(shí)應(yīng)采取的恰當(dāng)應(yīng)對(duì)措施，屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
在基因組核酸復(fù)制的過程中，細(xì)胞內(nèi)具有復(fù)雜的機(jī)制保證遺傳信息被正確的復(fù)制，因?yàn)镈NA的遺傳保守性是維持物種相對(duì)穩(wěn)定的主要因素。但是，在生物體內(nèi)外環(huán)境多種因素影響下，也會(huì)出現(xiàn)DNA損傷，也稱DNA突變。絕大多數(shù)損傷被機(jī)體內(nèi)一整套十分有效的修復(fù)系統(tǒng)所修復(fù)，有些損傷則可造成機(jī)體的不可逆損害，出現(xiàn)細(xì)胞衰老、死亡或形成腫瘤等。
多種因素可引起DNA損傷，如紫外線、電離輻射、烷化劑等。修復(fù)的形式也是多樣的。某些DNA損傷可以直接修復(fù)；切除修復(fù)是常見的修復(fù)方式；重組修復(fù)是DNA損傷較多時(shí)的修復(fù)方式；SOS修復(fù)是DNA損傷嚴(yán)重時(shí)的應(yīng)急修復(fù)方式；細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制是真核生物誘導(dǎo)修復(fù)的主要機(jī)制。由于遺傳因素的不同，每個(gè)個(gè)體對(duì)于基因損傷的修復(fù)能力也有所差異，而這種差異會(huì)影響到機(jī)體對(duì)諸多疾病，尤其是癌癥的易感性。
DNA損傷是基因突變的前奏，是癌變、畸變的分子基礎(chǔ)。外界環(huán)境和生物體內(nèi)部的許多因素都會(huì)經(jīng)常導(dǎo)致DNA分子的損傷或改變，但由于存在強(qiáng)大的DNA修復(fù)系統(tǒng)，DNA分子的損傷或突變可以通過多種機(jī)制修復(fù)(如堿基切除修復(fù)，核苷酸切除修復(fù)，重組修復(fù)及錯(cuò)配修復(fù)等)。
DNA損傷的修復(fù)機(jī)制可保護(hù)細(xì)胞的基因免遭致癌因素的侵害，從而維持細(xì)胞中基因組的完整性。近年來的分子生物學(xué)研究進(jìn)展已證實(shí)，DNA修復(fù)機(jī)制是由一類DNA修復(fù)基因所控制，DNA修復(fù)基因存在多態(tài)性，其多態(tài)性可影響到DNA修復(fù)能力的高低。如果DNA修復(fù)能力有缺陷，受損的基因不能修復(fù)，便會(huì)大大地增加基因的突變的概率，使個(gè)體處于非常高的腫瘤罹患危險(xiǎn)之中，增加了腫瘤的易感性。而腫瘤已成為二十一世紀(jì)的人類第一殺手。在2005年全世界5800萬死亡總數(shù)中，癌癥占所有死亡的760萬(或13％)。并且2005年所有癌癥死亡的70％以上發(fā)生在低收入和中等收入國家。預(yù)計(jì)全世界癌癥死亡將繼續(xù)增加。據(jù)估計(jì)，2015年將有900萬人死于癌癥，并且2030年將有1140萬人死亡。在我國，癌癥發(fā)病及死亡率一直呈上升趨勢(shì)，在城鎮(zhèn)居民中，癌癥已占死因的首位。為此，我國制定了《中國癌癥預(yù)防與控制規(guī)劃綱要(2004-2010)》，確定肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、宮頸癌及鼻咽癌為我國癌癥防治重點(diǎn)，強(qiáng)調(diào)癌癥的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及早期治療。
目前臨床上關(guān)于基因損傷修復(fù)能力遺傳的檢測(cè)至今尚無完善的檢測(cè)方法和統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。曾有Todd等用氯霉素?；D(zhuǎn)移酶(CAT)反映細(xì)胞內(nèi)源性P53活性來檢測(cè)DNA損傷，結(jié)果靈敏穩(wěn)定。但CAT的檢測(cè)要用放射性同位素，不夠安全，而且費(fèi)用較高，限制了其推廣應(yīng)用。
目前的基礎(chǔ)研究已能從理論上證明基因分型檢測(cè)可以用于判斷基因損傷修復(fù)能力的強(qiáng)弱，而且檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本在可接受程度中、檢測(cè)結(jié)果可信。因此，基因分型檢測(cè)用于評(píng)估DNA損傷修復(fù)能力的可行性是明確的。
不同的人在相同的環(huán)境下基因損傷修復(fù)能力存在個(gè)體差異。面對(duì)不同的基因損傷修復(fù)能力風(fēng)險(xiǎn)，需要采取不同的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)防手段。因此，綜合利用現(xiàn)代科學(xué)研究成果，開發(fā)一項(xiàng)基于分子遺傳基礎(chǔ)的基因損傷修復(fù)能力評(píng)估及個(gè)性化干預(yù)提示產(chǎn)品會(huì)對(duì)由于基因損傷修復(fù)能力缺陷而引起疾病的發(fā)生起到預(yù)警、個(gè)性化防治的作用，具有很強(qiáng)的社會(huì)意義和市場(chǎng)前景。目前對(duì)涉及基因損傷修復(fù)通路的一些基因已經(jīng)進(jìn)行了大量研究。其作用機(jī)制、生化功能、通路情況、調(diào)控、轉(zhuǎn)錄等等方面都有明確可靠的研究結(jié)果；已經(jīng)有可靠的檢測(cè)方法、儀器設(shè)備和檢測(cè)試劑等。因此利用現(xiàn)有科學(xué)、技術(shù)研究成果來開發(fā)這樣一個(gè)產(chǎn)品，時(shí)機(jī)是成熟的。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，可以讓受檢者了解自身基因損傷修復(fù)能力的強(qiáng)弱，加強(qiáng)對(duì)可能發(fā)生基因損傷的環(huán)境的辨別能力，采取適當(dāng)措施防止或降低基因損傷的程度，從而有效減少由于基因損傷帶來的癌癥風(fēng)險(xiǎn)。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種利用基因檢測(cè)和軟件分析進(jìn)行DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的具體實(shí)施方法。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，其特征在于，其方法為 步驟1.檢測(cè)的樣品類型與采樣方法 用采樣拭在20-30被測(cè)者口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本； 步驟2.基因組DNA的抽提方法 采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)-2.5小時(shí)，共抽提20-30個(gè)被測(cè)者樣本，經(jīng)電泳檢測(cè)后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測(cè)； 步驟3熒光定量PCR反應(yīng) 將每一個(gè)被測(cè)者樣本分別放入5個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測(cè)5個(gè)位點(diǎn)，即多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQID NO2Arg194Trp、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp；20-30個(gè)被測(cè)者樣本就有100-150個(gè)反應(yīng)孔，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對(duì)照孔； 每一個(gè)反應(yīng)孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan

-MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測(cè)試劑合成； 在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μl，即濃度為20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液ABI Taqman

MGB、0.1μl 25mM d NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μl 25mM MgCl2溶液、0.02μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、去離子水4.98μl、5個(gè)位點(diǎn)分別采用不同的正向引物(20μM，0.225μl)、反向引物(20μM，0.225μl)、VIC熒光探針(10μM，0.25μl)和FAM熒光探針(10μM，0.25μl)工具進(jìn)行檢測(cè)(詳見下表)；

將101-151個(gè)反應(yīng)孔在ABI9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，先進(jìn)行預(yù)熱50℃、2分鐘，95℃、10分鐘，然后再進(jìn)行60個(gè)循環(huán)的95℃、30秒，60℃、1分鐘、反應(yīng)結(jié)束后取出后再放入ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，并自動(dòng)將20-30個(gè)被測(cè)者樣本檢測(cè)5個(gè)點(diǎn)位的數(shù)據(jù)對(duì)號(hào)入座到5個(gè)圖中，同時(shí)生成5張圖，即多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala圖、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp圖、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln圖、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln圖、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp圖； 步驟4SNP基因型分析 將ABI7900型熒光定量PCR儀上顯示的最終樣本熒光信號(hào)的5個(gè)表和一個(gè)NTC空白對(duì)照進(jìn)行比較，每個(gè)位點(diǎn)理論上存在三種不同的信號(hào)，純VIC熒光信號(hào)、VIC和FAM雜合熒光信號(hào)以及純FAM熒光信號(hào)，分別代表該位點(diǎn)三種不同的基因型； (1)、多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala 在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.4-0.5、Y坐標(biāo)軸0.2-0.4區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.2-0.4、Y坐標(biāo)軸1.0-1.3區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.7-0.9、Y坐標(biāo)軸0.7-1.0區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.8-0.9、Y坐標(biāo)軸0.3-0.4區(qū)域?yàn)镃C基因型，其中，CC為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)酶的活性降低，導(dǎo)致多種癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (2)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp 在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.2-0.3區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.9-1.1區(qū)域?yàn)镃C基因型、X坐標(biāo)軸0.3-0.5、Y坐標(biāo)軸0.75-0.95區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.5-0.6、Y坐標(biāo)軸0.5-0.6區(qū)域?yàn)門T基因型，其中，TT為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)XRCC1活性降低，導(dǎo)致個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (3)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln 在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.3-0.4區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸2.1-2.2區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.4-0.6、Y坐標(biāo)軸1.1-1.7區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.8-1.0、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)镃C基因型，其中，TT為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (4)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln 在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.0-0.1、Y坐標(biāo)軸0.2-0.3區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.05-0.15Y坐標(biāo)軸1.5-2.0區(qū)域?yàn)锳A基因型、X坐標(biāo)軸0.7-0.9、Y坐標(biāo)軸1.4-1.6區(qū)域?yàn)锳G基因型、X坐標(biāo)軸0.7-1.2、Y坐標(biāo)軸0.3-0.5區(qū)域?yàn)镚G基因型，其中，AA和AG為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)基本轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物不能正確識(shí)別DNA損傷位點(diǎn)，DNA上致癌損傷積累，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (5)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp 在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.0-0.1、Y坐標(biāo)軸2.3-2.8區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.8-0.1、Y坐標(biāo)軸2.2-2.5區(qū)域?yàn)镚T基因型、X坐標(biāo)軸0.8-1.0、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)镚G基因型(該基因型在中國人群中頻率很低，附圖30個(gè)樣本中未檢出該基因型)，其中，GT和GG為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)ERCC2參與構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物性能弱化，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； 每一個(gè)被測(cè)者的5個(gè)點(diǎn)落在5個(gè)表上哪個(gè)區(qū)域，即可知道被測(cè)者DNA損傷修復(fù)能力的遺傳風(fēng)險(xiǎn)； 步驟5，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果給予個(gè)性化指導(dǎo)建議，主要有以下幾點(diǎn) 一、避免過多、過強(qiáng)的紫外線照射陽光中適量的紫外線照射對(duì)人體有益，但過多、過強(qiáng)的紫外線，尤其是紫外線燈等的照射，會(huì)引起胸腺嘧啶二聚體的形成，還可以引起DNA之間的交聯(lián)，DNA與蛋白質(zhì)的交聯(lián)，甚至DNA鏈的斷裂。紫外線對(duì)人的傷害主要限于皮膚； 二、避免電離輻射引起的基因損傷電離輻射可導(dǎo)致DNA分子的多種變化，如堿基變化、脫氧核糖變化、DNA鍵斷裂、DNA鏈交聯(lián)等。這些輻射可能會(huì)引起癌癥的發(fā)生。電離輻射廣泛存在于人們的生活環(huán)境中，包括天然輻射和人造輻射。在日常生活中，應(yīng)注意盡量避免接觸含有放射性物質(zhì)的東西，如夜光手表等； 三、注意防止烷化劑引起的DNA損傷烷化劑種類很多，如芥子氣、硫酸二乙酯等。很多烷化劑都是致癌物?，F(xiàn)在工業(yè)中大量使用烷化劑，應(yīng)盡量避免接觸。烷化劑引起的損傷有堿基烷基化、堿基脫落、DNA斷鏈、DNA鏈交聯(lián)等； 四、戒煙酒并注意營養(yǎng)補(bǔ)充吸煙和飲酒會(huì)抑制DNA的修復(fù)，缺乏葉酸會(huì)增加DNA雙鏈打開的可能性，而這不容易修復(fù)，往往造成DNA永久的損傷。在日常生活中，應(yīng)注意多補(bǔ)充富含各種營養(yǎng)元素的新鮮水果蔬菜及菜花、酵母等富含葉酸的食物。
本發(fā)明通過同時(shí)檢測(cè)多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶家族成員1(Poly ADP-ribosepolymerase family，member 1，PARP1)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)、X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(X-ray repair complementing defective repair inChinese hamster cells 1，XRCC1)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與切除修復(fù)復(fù)合物2(Excision Repair Cross-complementing Rodent Repair Deficiency，Complementation Group 2，ERCC2)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)來評(píng)估個(gè)體對(duì)DNA損傷修復(fù)能力的遺傳風(fēng)險(xiǎn)，并根據(jù)遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果進(jìn)行個(gè)性化健康指導(dǎo)，針對(duì)性的提示受檢者面對(duì)于各種可能導(dǎo)致基因損傷的外界因素時(shí)應(yīng)采取的恰當(dāng)應(yīng)對(duì)措施。
目前，經(jīng)證實(shí)并且機(jī)理研究清楚的與基因損傷修復(fù)能力密切相關(guān)的基因有多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)等。在不同人群中與基因損傷修復(fù)有顯著相關(guān)性的基因位點(diǎn)包括PARP1 Val762Ala、XRCC1 Arg194Trp、XRCC1 Arg399Gln、ERCC2Lys751Gln和ERCC2 Asn312Asp。以上位點(diǎn)有國內(nèi)外大量的關(guān)聯(lián)分析數(shù)據(jù)支持。
一、多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1) PARP1全稱poly(ADP-ribose)polymerase family，member 1，多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶，又簡(jiǎn)寫為ADPRT，位于第一號(hào)染色體1q41-q42位置?；蛉L(zhǎng)47.3kb，mRNA全長(zhǎng)3861bp，共有23個(gè)外顯子，該突變位點(diǎn)位于第17個(gè)外顯子。PARP1編碼多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶。這種酶通過聚ADP核糖基化反應(yīng)修正多種核蛋白。這種修正以DNA為基礎(chǔ)，參與多種重要的細(xì)胞活動(dòng)例如分化，增殖，腫瘤轉(zhuǎn)移等。同時(shí)也參與分子水平的活動(dòng)，例如修復(fù)DNA受損的細(xì)胞等等。PARP1是一種高豐度核蛋白，人類的PARP1有三個(gè)蛋白結(jié)構(gòu)域，其中包括一個(gè)DNA結(jié)合區(qū)域。當(dāng)DNA受損時(shí)，PARP1立刻結(jié)合到DNA鏈斷裂，通過共價(jià)作用修改各種參與DNA修復(fù)作用的蛋白的屬性，同時(shí)通過對(duì)自己的核糖基化作用，脫離DNA鏈，讓其他DNA修復(fù)蛋白與DNA鏈斷裂點(diǎn)結(jié)合，進(jìn)行修復(fù)。當(dāng)DNA受損過于嚴(yán)重時(shí)，PARP1能起到消耗細(xì)胞中NAD(nicotinamide adenine dinucleotide)和ATP的作用，同時(shí)停留在DNA鏈斷裂處，阻止其他DNA修復(fù)蛋白進(jìn)行修復(fù)，啟動(dòng)細(xì)胞死亡路徑。這也就是說，在某個(gè)細(xì)胞DNA受損過于嚴(yán)重的情況下，PARP1還能起到導(dǎo)致細(xì)胞死亡的作用，從而避免受損的DNA繼續(xù)被復(fù)制。另有其他的研究證實(shí)，PARP1能與DNA轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)因子SPA1結(jié)合，通過這個(gè)途徑，其可以抑制轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行，進(jìn)而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄，并且可以在DNA未修復(fù)情況下引發(fā)調(diào)亡。rs1136410是位于第一號(hào)染色體上PARP1基因上的一個(gè)C/T多態(tài)，引起PARP1基因編碼的蛋白第762個(gè)氨基酸由Val變?yōu)锳la，目前研究表明該氨基酸替換能直接導(dǎo)致ADPRT酶的活性的降低，進(jìn)而影響到機(jī)體的基因損傷修復(fù)能力。
在關(guān)聯(lián)分析研究方面2004年，Kristin L等人對(duì)PARP1 Val762Ala多態(tài)與前列腺癌的研究中(488 cases，524 controls，高加索人)發(fā)現(xiàn)PARP1 Ala/Ala基因型在前列腺病人中比例明顯高出非患病人群。PARP1 Ala/Ala基因型的前列腺癌危險(xiǎn)度為(OR＝2.65；95％CI，1.08-6.49)；PARP1 Val/Ala基因型為(OR＝1.18；95％CI，0.85-1.64)。同時(shí)利用PARP1 Val/Val基因型為參照，PARP1多態(tài)與前列腺腫瘤的關(guān)聯(lián)性在年輕男性中更加顯著[(＜65歲)男性(OR，4.77；95％CI，1.01-22.44)，(＞65歲)男性(OR，1.78；95％CI，0.55-5.82)]。在利用PARP1 Ala/Ala基因型的淋巴細(xì)胞進(jìn)行氧化破壞的實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，PARP1酶有針對(duì)氧化破壞的功能。2004年，Bingtao Hao等人使用ESCC(etiology ofesophageal squamous cell carcinoma)對(duì)數(shù)個(gè)BER基因進(jìn)行研究。在對(duì)419個(gè)食道癌患者的研究中發(fā)現(xiàn)，PARP1 62Ala的腸癌危險(xiǎn)度為1.25[95％(CI)1.02-1.53]，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了PARP1 Val762Ala與XRCC1 Arg399Gln的易感性在中國人口ESCC中的基因-基因交互作用。
2005年，Zhang X等人的研究發(fā)現(xiàn)PARP1 Val762Ala與XRCC1 Arg399Gln多態(tài)性與蛋白質(zhì)能以及BER活動(dòng)性有關(guān)。在針對(duì)這兩個(gè)多態(tài)性以及吸煙的因素與肺癌的關(guān)聯(lián)性研究中得出(樣本量1000，1000對(duì)照)PARP1 Ala/Ala基因型相對(duì)于Val/Val基因型 的肺癌危險(xiǎn)度OR＝1.68[95％confidence interval(95％CI)，1.27-2.23]；在Ala/Ala基因型中，不抽煙人群和抽煙人群(＜＝16，16到28，＞28條/年)的肺癌危險(xiǎn)度分別為1.13(0.79-1.62)，1.35(0.68-2.70)，2.46(1.35-4.51)和17.09(8.15-35.83)，(P＜0.001)。當(dāng)PARP1 762Ala/Ala和XRCC1 399Gln/Gln基因型同時(shí)出現(xiàn)時(shí)，肺癌危險(xiǎn)度為5.91(95％CI，2.09-16.72)。研究結(jié)果顯示，PARP1 762Ala/Ala在吸煙引發(fā)的肺癌發(fā)生中起到重要作用。2001年-2003年張志等人以聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)分析方法，檢測(cè)236例胃癌患者和708例無腫瘤正常對(duì)照的基因型。以logostic多因素回歸模型計(jì)算各基因型的胃癌風(fēng)險(xiǎn)以及基因-基因交互作用對(duì)胃癌風(fēng)險(xiǎn)的影響。結(jié)果PARP1 Ala/Ala基因型患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)比PARP1 Val/Val基因型高2倍(OR＝2.07；95％CI＝1.33-3.21；P＝0.001)。
二、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1) XRCC1基因全稱X-ray repair cross--complementing gene 1，人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1，位于第19號(hào)染色體1q13.2-13.3位置。基因全長(zhǎng)32.3kb，mRNA全長(zhǎng)2087bp，共有17個(gè)外顯子，編碼634個(gè)氨基酸的蛋白。XRCC1編碼的蛋白對(duì)因電離輻射和烷基化物引起的DNA單鏈斷裂能起到有效的修復(fù)作用。XRCC1編碼的蛋白與DNA連接酶III、聚合酶β、多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶交互作用，參與DNA的堿基切除修復(fù)(Base Excision Repair，BER)通路。眾多研究顯示，XRCC1基因上部分位點(diǎn)的多態(tài)性，與癌癥發(fā)生有密切的關(guān)系。
XRCC1有三個(gè)主要的功能區(qū)域，XRCC1通常利用與其它酶的結(jié)合，改變其它酶的活性，參與DNA修復(fù)。XRCC1在機(jī)體內(nèi)各個(gè)組織中的表達(dá)量均不高，在大腸中的表達(dá)相對(duì)較大。XRCC1參與的DNA修復(fù)通路的遺傳性或獲得性缺陷將破壞基因的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)變，從而影響個(gè)體對(duì)腫瘤疾病的易感性。
rs1799782是位于第19號(hào)染色體XRCC1基因上的一個(gè)C/T多態(tài)，引起XRCC1基因編碼的蛋白第194個(gè)氨基酸由Arg變?yōu)門rp，可能引起XRCC1活性降低，導(dǎo)致個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降。rs25487是位于第19號(hào)染色體XRCC1基因上的一個(gè)G/A多態(tài)，引起XRCC1基因編碼的蛋白第399個(gè)氨基酸由Arg變?yōu)镚ln。Arg399Gln位于第10號(hào)外顯子，XRCC1蛋白BCRT I區(qū)域。突變型的Gln氨基酸可能可以加強(qiáng)XRCC1蛋白與DNA-致癌物加合物的結(jié)合能力，從而影響個(gè)體的腫瘤易感性。
關(guān)聯(lián)分析研究方面，目前國內(nèi)外學(xué)者已作了大量研究，主要成果有1、rs1799782 Chen等對(duì)中國人群109例肺癌患者和109例正常對(duì)照的研究發(fā)現(xiàn)，194Trp/Trp基因型個(gè)體發(fā)生肺癌的相對(duì)危險(xiǎn)性增加(OR＝3.06，95％CI0.94~9.92)。2001年，宋春英和譚文等人對(duì)中國北京、四川、廣東和江蘇地區(qū)總共222例食管癌病例和433例健康對(duì)照的研究中發(fā)現(xiàn)XRCC1 26304TT變異基因型在病例組和對(duì)照組中的頻率分別為12.6％和6.7％，攜帶該基因型的個(gè)體發(fā)生食管癌的風(fēng)險(xiǎn)比攜帶其他基因型者高1.8倍。
2002年，Xing D和Qi J等人對(duì)中國人群中433例食管癌病例和524例健康對(duì)照的研究中發(fā)現(xiàn)XRCC1 Arg194Trp位點(diǎn)Trp/Trp基因型在病例組和對(duì)照組中的頻率分布存在顯著差異，食管癌風(fēng)險(xiǎn)度為2.07(95％ CI 1.34-3.20)。結(jié)果顯示，XRCC1基因多態(tài)性可能是中國人群中食管癌遺傳易感因素之一。張薇采用PCR-RELP分析技術(shù)檢測(cè)242例膀胱癌患者及225例人群對(duì)照XRCC1基因194位點(diǎn)的多態(tài)性。應(yīng)用非條件Logistic回歸模型，調(diào)整混雜因素后，分析各基因型與膀胱癌發(fā)生的關(guān)系以及是否與吸煙因素存在著交互作用。其結(jié)果膀胱癌病例組的194Trp/Trp突變基因型頻率(11.2％)顯著高于對(duì)照組(4.0％)。調(diào)整年齡、性別、吸煙、高危職業(yè)史、膀胱感染和體質(zhì)指數(shù)等因素后，攜帶194Trp/Trp基因型個(gè)體患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)是194Arg/Arg基因型個(gè)體的3.64倍(95％CI 1.60-9.30)。此基因型與吸煙對(duì)增加膀胱癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無明顯交互作用。去除了吸煙的混雜效應(yīng)后，194Trp/Trp基因型個(gè)體患膀胱癌的危險(xiǎn)性是其它基因型個(gè)體的3.16倍(95％CI 1.45-6.88)。結(jié)論XRCC1基因194Trp/Trp突變基因型增加膀胱癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，與吸煙無交互作用。
2、rs25487 2001年，Divine KK和Gilliland FD等對(duì)西班牙人和非西班牙白人進(jìn)行研究，通過調(diào)整年齡、種族和吸煙后，具有399Gln/Gln基因型者患肺腺癌的危險(xiǎn)性增加，OR值為2.45(95％CI1.1～5.8，P＝0.03)。以上研究表明，個(gè)體XRCC1多態(tài)位點(diǎn)是否有突變以及攜帶各突變等位基因的數(shù)目不同都可能影響肺癌的易感性。Park JY等人在一項(xiàng)對(duì)于韓國人群的肺癌病例對(duì)照研究中，針對(duì)192個(gè)肺癌病人和135個(gè)健康人做出了分析，發(fā)現(xiàn)XRCC1上399位氨基酸處Gln單倍型的存在會(huì)增加鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR＝1.77，95％CI＝1.06-2.93)，帶有Gln/Gln基因型的攜帶者來說，肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)更高(OR＝3.26，95％CI＝1.17-9.15)。當(dāng)將病例組按照吸煙量分為≥40包/年和≤40包/年兩組時(shí)，Gln單倍型僅僅在≤40包/年組中增加肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(Arg/Gln校正OR＝1.48，95％CI＝0.78-2.8；Gln/Gln校正OR＝5.75，95％CI＝1.46-22.69)。該研究提示在吸煙量較少的鱗癌發(fā)病中，XRCC1的399氨基酸編碼位點(diǎn)可能是一個(gè)重要的遺傳影響因素。在國內(nèi)，張文娟等人對(duì)鄭州大學(xué)第一、二附屬醫(yī)院和河南胸科醫(yī)院的149例河南漢族肺癌病例和157例正常人對(duì)照進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者中，XRCC1 194Trp變異基因型頻率為12.8％，高于對(duì)照組6.4％(P＜0.05)；此種基因型個(gè)體發(fā)生肺癌的風(fēng)險(xiǎn)是其他基因型的2.0倍(調(diào)整OR＝1.6，95％CI＝0.57～4.47)。399Gln基因型頻率在病例組中為10.7％，高于對(duì)照組8.3％(P＜0.05)；經(jīng)性別、年齡和吸煙狀況調(diào)整，此基因個(gè)體發(fā)生肺癌的風(fēng)險(xiǎn)是其他基因型的2.1倍(95％CI＝0.73～6.15)。
XRCC1基因這兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)之間沒有明顯的聯(lián)合作用，但基因型均與吸煙之間有聯(lián)合作用而增高肺癌風(fēng)險(xiǎn)。李鳴川等人對(duì)中國醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院和遼寧省腫瘤醫(yī)院的126例漢族女性肺癌手術(shù)病例和157例正常人對(duì)照進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，與攜帶399Arg/Arg基因型者比較，攜帶399Gln/Gln基因型者患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)是其8.695倍(95％CI為3.343～22.614)。攜帶等位基因399Gln又有油煙暴露的個(gè)體患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯增高，校正的比值比為5.21(95％CI為1.85～14.70，P＜0.001)。結(jié)論XRCC1基因Arg399Gln多態(tài)性可能是非吸煙女性肺腺癌的遺傳易感因素。
三、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2) 切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)，位于13號(hào)染色體19q13.3位置，共有23個(gè)外顯子?；蛉L(zhǎng)19.0kb，mRNA全長(zhǎng)2355bp，編碼含761個(gè)氨基酸的蛋白。核苷酸切除修復(fù)通路是幾條DNA損傷修復(fù)通路之一。由ERCC2編碼的蛋白參與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)的核苷酸切除修復(fù)，并且是基本轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物BTF2/TFIIH的一個(gè)組成成分。該蛋白具有ATP依賴性的DNA解旋活性，并且屬于RAD3/XPD解旋酶亞家族。ERCC2基因的突變或者失活可能導(dǎo)致的疾病包括癌癥、著色性干皮病、毛發(fā)營養(yǎng)不良、柯凱因氏綜合癥等。ERCC2在體內(nèi)最主要參與的通路是NER(NucleotideExcision Repair)通路。
rs13181是位于第19號(hào)染色體ERCC2基因第23號(hào)外顯子段Lys751Gln的G/T多態(tài)。世界人群中的頻率約為G∶T＝0.202∶0.798，雜合度0.322。目前的多項(xiàng)研究表明，Lys751Gln的氨基酸替代位于ERCC2蛋白C-末端部，這個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與肺癌、膀胱癌、乳腺癌、皮膚癌等疾病有關(guān)。rs1799793是位于第19號(hào)染色體ERCC2基因第10號(hào)外顯子段Asp312Asn的G/A多態(tài)。世界人群中的頻率約為G∶A＝0.778∶0.222。目前的多項(xiàng)研究表明，該位點(diǎn)的多態(tài)會(huì)導(dǎo)致ERCC2參與構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物的性能發(fā)生弱化，從而使得對(duì)DNA損傷修復(fù)的能力下降，轉(zhuǎn)錄因子的能力也同時(shí)發(fā)生下降，導(dǎo)致一系列諸如肺癌，前列腺癌等疾病的發(fā)生。
在關(guān)聯(lián)性分析研究方面，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)于上述兩個(gè)位點(diǎn)的研究成果主要有 1、rs13181 2002年，Hou SM和Falt S等人對(duì)瑞典人群中185例肺癌病例和162例健康最招的研究中發(fā)現(xiàn)70歲以下的在非吸煙人群，攜帶ERCC2Lys/Gln和Gln/Gln基因型的肺癌風(fēng)險(xiǎn)度為OR＝3.2，95％CI＝1.3-8.0。2004年，Harms C和SalamaSA等人對(duì)110例原發(fā)性肺癌病例和119吸煙者對(duì)照的研究中未發(fā)現(xiàn)ERCC2Lys751Gln位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌存在顯著關(guān)聯(lián)性，但是攜帶ERCC2 Lys/Gln和Gln/Gln基因型的個(gè)體有顯著的染色體異常(P＜0.05)。Popanda等進(jìn)行的463名肺癌病例460名醫(yī)院非腫瘤對(duì)照的病例2對(duì)照研究結(jié)顯示，751Gln基因型的個(gè)體患肺癌的險(xiǎn)性升高(OR＝1.39，95％CI＝0.90-2.14)。
2003年，邢德印等人對(duì)383人正常對(duì)照，肺癌患者351例，食管癌患者325例的研究發(fā)現(xiàn)吸煙劑量＞＝29包每年的ERCC2 751Gln攜帶者患肺鱗癌的危險(xiǎn)度(OR)為10.74(95％CI 4.51-25.57)。2003年，Liang G和Xing D等人對(duì)中國人群中1006例原發(fā)性肺癌病例和1020例健康對(duì)照的研究中發(fā)現(xiàn)與攜帶ERCC2 Lys/Lys基因型的個(gè)體相比，攜帶ERCC2 Gln/Gln基因型的個(gè)體肺癌發(fā)生危險(xiǎn)度為OR＝2.71，95％CI＝1.01-7.24。Yu等對(duì)135名食管鱗癌患者和15名對(duì)照的研究結(jié)果顯示，XPD 751Gln/Gln基因型個(gè)體患食管鱗癌的危險(xiǎn)性升高(OR＝6.71，95％CI＝1.90-23.73)；在吸煙者中，XPD 751Gln/Gln基因型比751Lys/Lys基因型者患食管鱗癌的危險(xiǎn)性增加8倍(OR＝8.42，95％CI＝1.02-69.58)。
2、rs1799793 Zhou W等人在高加索人群中做的1000多對(duì)肺癌和正常人的Case-control研究顯示，Asp312Asn多態(tài)位點(diǎn)的Asn/Asn基因型攜帶者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)對(duì)Asp/Asp攜帶者患肺癌風(fēng)險(xiǎn)的OR為1.47(95％CI，1.1-2.0)。此外基因和環(huán)境互作的分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)Asp312Asn位點(diǎn)與環(huán)境有比較強(qiáng)的相互作用效應(yīng)。Hou SM等人的對(duì)瑞典人群的肺癌Case-control研究中發(fā)現(xiàn)，Asp312Asn位點(diǎn)上的突變型主要影響了非抽煙人群的肺癌發(fā)生率。在小于70歲的非吸煙人群中為OR＝2.6，(95％(CI)＝1.1-6.5)。2003年，Liang G和Xing D等人對(duì)中國人群中1006例原發(fā)性肺癌病例和1020例健康對(duì)照的研究中發(fā)現(xiàn)ERCC2 Asp312Asn位點(diǎn)Ash/Asn基因型攜帶者與Asp/Asp基因型攜帶者相比的肺癌發(fā)生危險(xiǎn)度為(adjusted OR＝10.33，95％ CI＝1.29-82.50)。
2003年，Xing DY和Qi J等人對(duì)中國人群中351例肺癌病例和383例健康對(duì)照的研究中發(fā)現(xiàn)ERCC2 Asp312Asn位點(diǎn)Asp/Asn和Asn/Asn基因型攜帶者與Asp/Asp基因型攜帶者相比，患肺鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)度為(OR 1.80；95％CI1.10-2.93)；但是在肺腺癌病例中未發(fā)現(xiàn)攜帶Asp/Asn和Asn/Asn基因型的風(fēng)險(xiǎn)度。結(jié)果顯示，ERCC2 Asp312Asn位點(diǎn)多態(tài)性是中國人群中肺鱗癌遺傳易感因素之一。Hu Z等人的對(duì)這一位點(diǎn)進(jìn)行了Meta分析，驗(yàn)證了Asn是肺癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因子。
本發(fā)明所需檢測(cè)的DNA可以利用口腔粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)行抽提獲得，采用口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣方法和器材進(jìn)行樣本采集，樣本的DNA抽提利用硅膠吸附法進(jìn)行口腔上皮細(xì)胞的DNA抽提并進(jìn)行DNA濃度和純度的測(cè)定。
本發(fā)明5個(gè)位點(diǎn)的基因分型可以采用TaqMa

-MGB技術(shù)對(duì)這些位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，基因分型的準(zhǔn)確率達(dá)到了99％以上，重復(fù)性達(dá)到了100％。除此之外，基因測(cè)序等技術(shù)也可以作為備選的基因分型手段。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是 1.可在基因損傷發(fā)生前就采取干預(yù)措施，從而避免基因損傷，從而降低與基因損傷相關(guān)的如腫瘤疾病的發(fā)病率和死亡率； 2.從分子機(jī)理上進(jìn)行腫瘤發(fā)病機(jī)理的分析，可用于腫瘤分子流行病學(xué)調(diào)查和腫瘤防治措施的制定。



圖1為即多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala示意圖； 圖2為人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp示意圖； 圖3為人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln示意圖； 圖4為切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln示意圖； 圖5為切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp示意圖。

具體實(shí)施例方式 以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1 一種DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法為 步驟1.檢測(cè)的樣品類型與采樣方法 用采樣拭在26被測(cè)者口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮45次，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本； 步驟2.基因組DNA的抽提方法 采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)，共抽提26個(gè)被測(cè)者樣本，并用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測(cè)； 步驟3熒光定量PCR反應(yīng) 將每一個(gè)被測(cè)者樣本分別放入5個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測(cè)5個(gè)位點(diǎn)，即多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp；26個(gè)被測(cè)者樣本就有130個(gè)反應(yīng)孔，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對(duì)照孔； 每一個(gè)反應(yīng)孔Ash312Asp SNP位點(diǎn)的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan

-MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測(cè)試劑合成； 在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μl，即濃度為20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液ABI Taqman

MGB、0.1μl 25mM d NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μl 25mM MgCl2溶液、0.02μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、20μM的有義引物1和2各0.225μl、20μM的反義引物1和2各0.225μl、10μM的熒光探針1和2各0.25μl，去離子水4.98μl；采用5個(gè)位點(diǎn)的正向引物、反向引物、VIC熒光探針和FAM熒光探針工具進(jìn)行檢測(cè)； 本發(fā)明5個(gè)位點(diǎn)的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan

-MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測(cè)試劑合成。

將131個(gè)反應(yīng)孔在ABI9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，先進(jìn)行預(yù)熱50℃、2分鐘，95℃、10分鐘，然后再進(jìn)行60個(gè)循環(huán)的95℃、30秒，60℃、1分鐘檢測(cè)，經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，基因分型的準(zhǔn)確率達(dá)到了99％以上，重復(fù)性達(dá)到了100％。反應(yīng)結(jié)束后取出后再放入ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，并自動(dòng)將26個(gè)被測(cè)者樣本檢測(cè)5個(gè)點(diǎn)位的數(shù)據(jù)對(duì)號(hào)入座到5個(gè)圖中，同時(shí)生成5張圖，即圖1為多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala圖、圖2為人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp圖、圖3為人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln圖、圖4為切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln圖、圖5為切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp圖； 采用儀器為ABI Prism

7900型熒光定量PCR儀，檢出率可達(dá)99％以上，可重復(fù)性達(dá)到100％。每小時(shí)可進(jìn)行10000個(gè)SNP多態(tài)性終點(diǎn)檢測(cè)分析，可滿足從中通量到高通量的SNP多態(tài)性實(shí)驗(yàn)的需求。
步驟4SNP基因型分析 將ABI7900型熒光定量PCR儀上顯示的最終樣本熒光信號(hào)的5個(gè)表和NTC空白對(duì)照進(jìn)行比較，每個(gè)位點(diǎn)理論上存在三種不同的信號(hào)，純VIC熒光信號(hào)、VIC和FAM雜合熒光信號(hào)以及純FAM熒光信號(hào)，分別代表該位點(diǎn)三種不同的基因型；(1)、多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala 在檢測(cè)結(jié)果圖1中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.4-0.5、Y坐標(biāo)軸0.2-0.4區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.2-0.4、Y坐標(biāo)軸1.0-1.3區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.7-0.9、Y坐標(biāo)軸0.7-1.0區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.8-0.9、Y坐標(biāo)軸0.3-0.4區(qū)域?yàn)镃C基因型，其中，CC為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)酶的活性降低，導(dǎo)致多種癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (2)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp 在檢測(cè)結(jié)果圖2中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.2-0.3區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.9-1.1區(qū)域?yàn)镃C基因型、X坐標(biāo)軸0.3-0.5、Y坐標(biāo)軸0.75-0.95區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.5-0.6、Y坐標(biāo)軸0.5-0.6區(qū)域?yàn)門T基因型，其中，TT為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)XRCC1活性降低，導(dǎo)致個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (3)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln 在檢測(cè)結(jié)果圖3中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.3-0.4區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸2.1-2.2區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.4-0.6、Y坐標(biāo)軸1.1-1.7區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.8-1.0、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)镃C基因型，其中，TT為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (4)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln 在檢測(cè)結(jié)果圖4中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.0-0.1、Y坐標(biāo)軸0.2-0.3區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.05-0.15Y坐標(biāo)軸1.5-2.0區(qū)域?yàn)锳A基因型、(該基因型在中國人群中頻率很低，附圖30個(gè)樣本中未檢出該基因型)、X坐標(biāo)軸0.7-0.9、Y坐標(biāo)軸1.4-1.6區(qū)域?yàn)锳G基因型、X坐標(biāo)軸0.7-1.2、Y坐標(biāo)軸0.3-0.5區(qū)域?yàn)镚G基因型，其中，AA和AG為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)基本轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物不能正確識(shí)別DNA損傷位點(diǎn)，DNA上致癌損傷積累，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； (5)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp 在檢測(cè)結(jié)果圖5中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸O.1-0.2、Y坐標(biāo)軸O.4-0.5區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.0-0.1、Y坐標(biāo)軸2.3-2.8區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.8-0.1、Y坐標(biāo)軸2.2-2.5區(qū)域?yàn)镚T基因型、X坐標(biāo)軸0.8-1.0、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)镚G基因型(該基因型在中國人群中頻率很低，附圖30個(gè)樣本中未檢出該基因型)，其中，GT和GG為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)ERCC2參與構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物性能弱化，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加； 每一個(gè)被測(cè)者的5個(gè)點(diǎn)落在5個(gè)表上哪個(gè)區(qū)域，即可知道被測(cè)者DNA損傷修復(fù)能力的遺傳風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果； 步驟5，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果給予個(gè)性化指導(dǎo)建議，主要有以下幾點(diǎn) 一、避免過多、過強(qiáng)的紫外線照射陽光中適量的紫外線照射對(duì)人體有益，但過多、過強(qiáng)的紫外線，尤其是紫外線燈等的照射，會(huì)引起胸腺嘧啶二聚體的形成，還可以引起DNA之間的交聯(lián)，DNA與蛋白質(zhì)的交聯(lián)，甚至DNA鏈的斷裂。紫外線對(duì)人的傷害主要限于皮膚； 二、避免電離輻射引起的基因損傷電離輻射可導(dǎo)致DNA分子的多種變化，如堿基變化、脫氧核糖變化、DNA鍵斷裂、DNA鏈交聯(lián)等。這些輻射可能會(huì)引起癌癥的發(fā)生。電離輻射廣泛存在于人們的生活環(huán)境中，包括天然輻射和人造輻射。在日常生活中，應(yīng)注意盡量避免接觸含有放射性物質(zhì)的東西，如夜光手表等； 三、注意防止烷化劑引起的DNA損傷烷化劑種類很多，如芥子氣、硫酸二乙酯等。很多烷化劑都是致癌物。現(xiàn)在工業(yè)中大量使用烷化劑，應(yīng)盡量避免接觸。烷化劑引起的損傷有堿基烷基化、堿基脫落、DNA斷鏈、DNA鏈交聯(lián)等； 四、戒煙酒并注意營養(yǎng)補(bǔ)充吸煙和飲酒會(huì)抑制DNA的修復(fù)，缺乏葉酸會(huì)增加DNA雙鏈打開的可能性，而這不容易修復(fù)，往往造成DNA永久的損傷。在日常生活中，應(yīng)注意多補(bǔ)充富含各種營養(yǎng)元素的新鮮水果蔬菜及菜花、酵母等富含葉酸的食物。
位點(diǎn)序列的確定
根據(jù)文獻(xiàn)提供的位點(diǎn)序列信息和rs號(hào)，在NCBI SNP數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索比對(duì)，獲得以上5個(gè)位點(diǎn)的參考序列如下
1.PARP1 Val762Ala SEQ ID NO1rs1136410
CCTTGTTAAC ATTCCAGAAA GTCCTTATGA GCTCTCAATA TGTGCAGCAG 50
GTAACAGGCT GGCCCTGACC AGCAGGAGGG TTTGCCATTC ACTGTGTTGG 100
ACCTTCTCTG CATGTAGGTT TTCTCTGCCA CCTGGGTGAG TCTGTCTCAT 150
TCACCATGAT ACCTAAGTCG GGGGCTTTCT TTTGCTCCTC CAGGCCAAGG 200
C/T SNP
GGAAATGCTT GACAACCTGC TGGACATCGA GGTGGCCTAC AGTCTGCTCA 250
GGGGAGGGTC TGATGATAGC AGCAAGGATC CCATCGATGT CAACTATGAG 300
AAGCTCAAAA CTGACATTAA GGTAACAGGG TCAGGCCTTC CTCAAGCATC 350
TTAACCTCTC ATCCTGAGAG CAGCGGTCCC AAACTTCCAT GTGTGTTAGG 400
ATCTCCTGGA AAGCTTGTTA AAACACAGGT GGCTGGCGCC CAATAATTCA 450
CTTTTCTAAC AAGTTCCCGG ACATTGCTGC TGGTGGTCCT TTGAGAACCT 500
TTGGGCGTTT CACGTGTAGA TAATGCACCT TGTTT 535
2.XRCC1 Arg194Trp SEQ ID NO2rs1799782
CCCTTTGGCT TGAGTTTTGT ACGGTTTCAT AGCCCCCCAG ACAAAGATGA 50
GGCAGAGGCC CCGTCCCAGG TAAGCTGTAC CTGTCACTCC CCATGGCCTT 100
CTCCCTGCCT CTCCACCCCC ACCTGCCAGC AGCCCACCTA TAATACTGAC 150
CTTGCGGGAC CTTAGAAGGT GACAGTGACC AAGCTTGGCC AGTTCCGTGT 200
17
GAAGGAGGAG GATGAGAGCG CCAACTCTCT GAGGCCGGGG 240
GCTCTCTTCT TCAGC255
C/T SNP
GGATCAACAA GACATCCCCA GGTGAGCTCG GACAACGTGG GTCCTGAGTG 305
AGTAGGGTTG AGACCTAGAC TCGTGGGTCT GAGGGTAGAG GGGGCTGGGG 355
CTCAGATTCC TGGGTCTGAG GGAGGAGGGT AGTGGAGTCC TGGACTCCTG 405
GGTCTCAGGG TGGAGGAAGG TGGGCCTGGC CTCTTGTGTC CTGAGGGTTG 455
AGAGGTCTGG AGGCTGGGAC TCCTGGATCA CTGGTGGGTT TTGGCAACAA 505
TATTC
3.XRCC1 Arg399Gln SEQ ID NO3rs25487
ACCTCTTTTT GTTTCTCCCA CCTCAATCTC ATGATCTGTC TGTCTGTCTG 50
TCTCTCTCTC TCTCTGTCTG TCTCCCCTGT CTCATTCCCC TTTGCCCCTC 100
AGATCACACC TAACTGGCAT CTTCACTTCT GCCCCCCACC AGCTGTGCCT 150
TTGCCAACAC CCCCAAGTAC AGCCAGGTCC TAGGCCTGGG AGGCCGCATC 200
GTGCGTAAGG AGTGGGTGCT GGACTGTCAC CGCATGCGTC GGCGGCTGCC 250
CTCCC 255
G/A SNP
GAGGTAAGGC CTCACACGCC AACCCTGCTC CTTATCCTGT GCTGGGCAAT 305
GCCAGGAATC TGGAGGGGAG TCAGACTGGG GCCTGCCAGC GGAGAACACA 355
GGTGGTCCCA GCCCAGAGCC AGCAGACTAC TGAGAGGAGC GGGGCAGGGG 405
CTGGGGTACT CCAGATGAGG GAAGGAGGAC CTGCCTGGGA GGTCACAGAG 455
GGCTCTGTGA AGCCTGCTTA TCAGAAAAGG CTGGAGGAGC AGTTTGTGCA 505
AAAAC 510
4.ERCC2 Lys751Gln SEQ ID NO4rs13181
GGATGGGCTG GTGGGGTGAG AGGGGGTCTA TCATCTCCTG GCCCCCCCTT 50
GCCTCTGGGT ACCTGGTGGA TAGCTGCCTT CTCCTGCGAT TAAAGGCTGT 100
GGACGTGACA GTGAGAAATG TCACCTGACT TCATAAGACC TTCTAGCACC 150
ACCGCCGCTG GGAACCAGGG CCAGGCAAGA CTCAGGAGTC ACCAGGAACC 200
GTTTATGGCC CCACCCGCCC CACTCAGAGC TGCTGAGCAA 240
TCTGCTCTAT CCTCT255
G/T SNP
CAGCGTCTCC TCTGATTCTA GCTGCTCCAG GCTGAGCAGG GACAGGCCCA 305
GCTGATCCTC CTGCAGAGAA CAGAGGAAAG GGAGAGGGGG GCACTGTTGG 355
GCAGGGGCCC AGGCAGCTGC TGCACTTCCC CAACCACCCC CCCGAATGGC 405
CAGTAGGGAC AGGATGTTTG AATGAATTTG GAGATGTCCG TATAATCCAG 455
AGCGGGCCAT CCCTGTCAAC ATAAGATGGG GCTGAGGGAG GAGCCAGCTA 505
GGGAG 510
5.ERCC2 Asp312Asn SEQ ID NO5rs1799793
ACCTCACCCG CCGGACCCTT GACCGGTGCC AGGGCAACCT GGAGACCCTG 50
CAGAAGACGG TGCTCAGGTG GGGCCGGGGA CGTCTGGCGG TGGTGCCCGC 100
CCTGCCCCTG GGACCCTGGC CCCTGTCTGA CTTGTCCCCA GGGTTGCCAG 150
CCCCCTCCCA GCCCCAGCTC ATCTCTCCGC AGGATCAAAG AGACAGACGA 200
GCAGCGCCTG CGGGACGAGT ACCGGCGTCT GGTGGAGGGG CTGCGGGAGG 250
CCAGCGCCGC CCGGGAGACG GACGCCCACC TGGCCAACCC CGTGCTGCCC 300
A/G SNP
ACGAAGTGCT GCAGGGTGAG CCCCGACCCC CCGCTGCCCC CCAGTCCCTT 350
TCCCGCCTCC CCGTCGCCGC TGATAGCGTC TCCTCGCAGA GGCAGTGCCT 400
GGCTCCATCC GCACGGCCGA GCATTTCCTG GGCTTCCTGA GGCGGCTGCT 450
GGAGTACGTG AAGTGGCGGC TGCGTGTGCA GCATGTGGTG CAGGAGAGCC 500
CGCCCGCCTT CCTGAGCGGC CTGGCCCAGC GCGTGTGCAT CCAGCGCAAG 550
CCCCTCAGGT GCGGCCCCAG ACAGCGCGCG GGGTGGGGGC CCGGCAGGTC 600
權(quán)利要求
1.一種DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，其特征在于，其方法為
步驟1.檢測(cè)的樣品類型與采樣方法
用采樣拭在20-30被測(cè)者口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本；
步驟2.基因組DNA的抽提方法
采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)-2.5小時(shí)，共抽提20-30個(gè)被測(cè)者樣本，經(jīng)電泳檢測(cè)后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測(cè)；
步驟3熒光定量PCR反應(yīng)
將每一個(gè)被測(cè)者樣本分別放入5個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測(cè)5個(gè)位點(diǎn)，即多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys751Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp；20-30個(gè)被測(cè)者樣本就有100-150個(gè)反應(yīng)孔，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對(duì)照孔；
每一個(gè)反應(yīng)孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan
-MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測(cè)試劑合成；
在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μl，即濃度為20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液ABI Taqman
MGB、0.1μl 25mM d NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μl 25mM MgCl2溶液、0.02μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、去離子水4.98μl、5個(gè)位點(diǎn)分別采用不同的正向引物(20μM，0.225μl)、反向引物(20μM，0.225μl)、VIC熒光探針(10μM，0.25μl)和FAM熒光探針(10μM，0.25μl)工具進(jìn)行檢測(cè)(詳見下表)；
將101-151個(gè)反應(yīng)孔在ABI9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，先進(jìn)行預(yù)熱50℃、2分鐘，95℃、10分鐘，然后再進(jìn)行60個(gè)循環(huán)的95℃、30秒，60℃、1分鐘、反應(yīng)結(jié)束后取出后再放入ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，并自動(dòng)將20-30個(gè)被測(cè)者樣本檢測(cè)5個(gè)點(diǎn)位的數(shù)據(jù)對(duì)號(hào)入座到5個(gè)圖中，同時(shí)生成5張圖，即多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQID NO1圖；Val762Ala、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQID NO2圖；Arg194Trp、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3圖；Arg399Gln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4圖；Lys7516ln、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5步驟4SNP基因型分析
將ABI7900型熒光定量PCR儀上顯示的最終樣本熒光信號(hào)的5個(gè)表和一個(gè)NTC空白對(duì)照進(jìn)行比較，每個(gè)位點(diǎn)理論上存在三種不同的信號(hào)，純VIC熒光信號(hào)、VIC和FAM雜合熒光信號(hào)以及純FAM熒光信號(hào)，分別代表該位點(diǎn)三種不同的基因型；
(1)、多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶(PARP1)SEQ ID NO1Val762Ala
在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.4-0.5、Y坐標(biāo)軸0.2-0.4區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.2-0.4、Y坐標(biāo)軸1.0-1.3區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.7-0.9、Y坐標(biāo)軸0.7-1.0區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.8-0.9、Y坐標(biāo)軸0.3-0.4區(qū)域?yàn)镃C基因型，其中，CC為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)酶的活性降低，導(dǎo)致多種癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加；
(2)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO2Arg194Trp
在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.2-0.3區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.9-1.1區(qū)域?yàn)镃C基因型、X坐標(biāo)軸0.3-0.5、Y坐標(biāo)軸0.75-0.95區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.5-0.6、Y坐標(biāo)軸0.5-0.6區(qū)域?yàn)門T基因型，其中，TT為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)XRCC1活性降低，導(dǎo)致個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加；
(3)、人類X射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1(XRCC1)SEQ ID NO3Arg399Gln
在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.3-0.4區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸2.1-2.2區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.4-0.6、Y坐標(biāo)軸1.1-1.7區(qū)域?yàn)門C基因型、X坐標(biāo)軸0.8-1.0、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)镃C基因型，其中，TT為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)個(gè)體的DNA修復(fù)能力下降，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加；
(4)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO4Lys7516ln
在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.0-0.1、Y坐標(biāo)軸0.2-0.3區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.05-0.15Y坐標(biāo)軸1.5-2.0區(qū)域?yàn)锳A基因型、X坐標(biāo)軸0.7-0.9、Y坐標(biāo)軸1.4-1.6區(qū)域?yàn)锳G基因型、X坐標(biāo)軸0.7-1.2、Y坐標(biāo)軸0.3-0.5區(qū)域?yàn)镚G基因型，其中，AA和AG為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)基本轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物不能正確識(shí)別DNA損傷位點(diǎn)，DNA上致癌損傷積累，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加；
(5)、切除修復(fù)復(fù)合物2(ERCC2)SEQ ID NO5Asn312Asp
在檢測(cè)結(jié)果圖中，共有21-31個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)被測(cè)者樣本的檢測(cè)結(jié)果，X坐標(biāo)軸0.1-0.2、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照、X坐標(biāo)軸0.0-0.1、Y坐標(biāo)軸2.3-2.8區(qū)域?yàn)門T基因型、X坐標(biāo)軸0.8-0.1、Y坐標(biāo)軸2.2-2.5區(qū)域?yàn)镚T基因型、X坐標(biāo)軸0.8-1.0、Y坐標(biāo)軸0.4-0.5區(qū)域?yàn)镚G基因型，其中，GT和GG為風(fēng)險(xiǎn)基因型，攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)ERCC2參與構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物性能弱化，癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加；
每一個(gè)被測(cè)者的5個(gè)點(diǎn)落在5個(gè)表上哪個(gè)區(qū)域，即可知道被測(cè)者DNA損傷修復(fù)能力的遺傳風(fēng)險(xiǎn)；
步驟5，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果給予個(gè)性化指導(dǎo)建議，主要有以下幾點(diǎn)
一、避免過多、過強(qiáng)的紫外線照射陽光中適量的紫外線照射對(duì)人體有益，但過多、過強(qiáng)的紫外線，尤其是紫外線燈等的照射，會(huì)引起胸腺嘧啶二聚體的形成，還可以引起DNA之間的交聯(lián)，DNA與蛋白質(zhì)的交聯(lián)，甚至DNA鏈的斷裂。紫外線對(duì)人的傷害主要限于皮膚；
二、避免電離輻射引起的基因損傷電離輻射可導(dǎo)致DNA分子的多種變化，如堿基變化、脫氧核糖變化、DNA鍵斷裂、DNA鏈交聯(lián)等。這些輻射可能會(huì)引起癌癥的發(fā)生。電離輻射廣泛存在于人們的生活環(huán)境中，包括天然輻射和人造輻射。在日常生活中，應(yīng)注意盡量避免接觸含有放射性物質(zhì)的東西，如夜光手表等；
三、注意防止烷化劑引起的DNA損傷烷化劑種類很多，如芥子氣、硫酸二乙酯等。很多烷化劑都是致癌物。現(xiàn)在工業(yè)中大量使用烷化劑，應(yīng)盡量避免接觸。烷化劑引起的損傷有堿基烷基化、堿基脫落、DNA斷鏈、DNA鏈交聯(lián)等；
四、戒煙酒并注意營養(yǎng)補(bǔ)充吸煙和飲酒會(huì)抑制DNA的修復(fù)，缺乏葉酸會(huì)增加DNA雙鏈打開的可能性，而這不容易修復(fù)，往往造成DNA永久的損傷。在日常生活中，應(yīng)注意多補(bǔ)充富含各種營養(yǎng)元素的新鮮水果蔬菜及菜花、酵母等富含葉酸的食物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種DNA損傷修復(fù)能力遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，其特征在于，通過同時(shí)檢測(cè)分析個(gè)體的PARP1基因、XRCC1基因、ERCC2基因SNPs位點(diǎn)基因攜帶型為所有的受檢者提供DNA損傷修復(fù)能力的遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、相關(guān)疾病風(fēng)險(xiǎn)規(guī)避的個(gè)性化健康指導(dǎo)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是可在基因損傷發(fā)生前就采取干預(yù)措施，從而避免基因損傷，從而降低與基因損傷相關(guān)的如腫瘤疾病的發(fā)病率和死亡率；從分子機(jī)理上進(jìn)行腫瘤發(fā)病機(jī)理的分析，可用于腫瘤分子流行病學(xué)調(diào)查和腫瘤防治措施的制定。
文檔編號(hào)G01N21/64GK101302562SQ20081004031
公開日2008年11月12日 申請(qǐng)日期2008年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日
發(fā)明者傅詠南, 校 王, 毛丹丹 申請(qǐng)人:上海中優(yōu)醫(yī)藥高科技有限公司