專利名稱：：使用MR-proADM的糖尿病診斷和風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)的制作方法使用MR-proADM的糖尿病診斷和風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)本發(fā)明涉及糖尿病，特別是糖尿病繼發(fā)病的診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)方法，其中在待研究的患者中進(jìn)行標(biāo)志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(midregionalproadrenomedul1in，MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段的測(cè)定，或包含在標(biāo)志物組合(標(biāo)志物組，標(biāo)志物簇)中進(jìn)行測(cè)定。此外，本發(fā)明涉及用于進(jìn)行所述方法的診斷設(shè)備和試劑盒。糖尿病的診斷以腎上腺髓質(zhì)素而眾所周知(Garcia-UnzuetaMT，MontalbanC，PesqueraC，BerrazuetaJ"R，AmadoJA.Plasmaadrenomedullinlevelsintype1diabetes.Relationshipwithclinicalparameters.DiabetesCare.21:999-1003，1998和TurkHM，BuyukberberS，SevincA，AkG，AtesM，SariR，SavliH，CigliA.Relationshipbetweenplasmaadrenomedul1inlevelsandmetaboliccontrol,riskfactors,anddiabeticmicroangiopathyinpatientswithtype2diabetes.DiabetesCare23:864-7，2000)。然而，它的缺點(diǎn)在于由于腎上腺髓質(zhì)素缺乏穩(wěn)定性，以及其在血漿中短暫的壽命(LewisLK,SmithMW，YandleTG，RichardsAM,NichollsMG.Adrenomedul1in(1-52)measuredinhumanplasmabyradioimmunoassay:plasmaconcentration,adsorption,andstorage.ClinChem.44:571-7，1998),無法進(jìn)行可靠的診斷。但是，需要提供糖尿病可靠的診斷，或進(jìn)行(風(fēng)險(xiǎn))分級(jí)，特別是關(guān)于進(jìn)一步的臨床決策，和特別是關(guān)于糖尿病或糖尿病繼發(fā)病的嚴(yán)重程度。此外，在診斷中進(jìn)行腎上腺髓質(zhì)素原(proADM)檢測(cè)在本領(lǐng)域中被描述(EP0622458B1),特別是關(guān)于膿毒癥的研究(EP1121600B1)。而且，腎上腺髓質(zhì)素原的另一片段，即，被稱為中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2，也是SEQIDNo.1中preproADM的氨基酸45-92(圖1))，在EP1488209B1中被公開用于診斷目的。然而，中5央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)對(duì)糖尿病診斷的適合性沒有被公開。本發(fā)明的任務(wù)是得到用于糖尿病，特別是糖尿病繼發(fā)病的診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)的改進(jìn)方法。該任務(wù)通過用于糖尿病體外診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)的方法的手段完成，其中在待研究的患者中進(jìn)行標(biāo)志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段的測(cè)定，或其包含在標(biāo)志物組合(標(biāo)志物組，標(biāo)志物簇)中進(jìn)行測(cè)定(下文稱為依據(jù)本發(fā)明的方法)。依據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)(riskstratification)"，包含發(fā)現(xiàn)糖尿病患者，特別是預(yù)后較差的具有糖尿病繼發(fā)病的那些患者，用于糖尿病(繼發(fā)病)的深入診斷和療法/處理目的，其目標(biāo)是使糖尿病的病程盡可能地有利。由于這個(gè)原因，特別有利的是，可靠的診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)可以通過依據(jù)本發(fā)明方法的方式進(jìn)行。依據(jù)本發(fā)明的方法允許得到更迅速診斷的臨床決策，特別是對(duì)于糖尿病繼發(fā)病。這樣的臨床決策也包括使用藥物進(jìn)一步治療，用于糖尿病的處理或治療。在依據(jù)本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，進(jìn)行所述診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)，以用于對(duì)糖尿病進(jìn)行預(yù)后、預(yù)防、鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)和發(fā)現(xiàn)、嚴(yán)重程度評(píng)估、和伴隨治療的進(jìn)程評(píng)估。在依據(jù)本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，體液樣品，特別是血液，任選全血、血清或可用血漿，從待研究患者收集，并且診斷在體外/離體(ww>o)進(jìn)行，即在人或動(dòng)物體外。診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)可以在下列測(cè)定基礎(chǔ)上進(jìn)行標(biāo)志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段，及其存在的量，或與參考值相比量的變化，所述測(cè)定在至少一個(gè)患者的樣品中進(jìn)行。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"糖尿病"，特別是II型糖尿病(胰島素抵抗)，被理解為指代慢性代謝疾病，其中胰島素在胰腺胰島P細(xì)胞中的產(chǎn)生被打亂，或胰島素存在但不能在其靶位點(diǎn)一一細(xì)胞膜一一正確地發(fā)揮作用。這種擾亂的胰島素產(chǎn)生和作用的結(jié)果是升高的血糖值(高血糖)。在糖尿病進(jìn)程中，在前驅(qū)糖尿病和實(shí)際明顯的糖尿病之間作出區(qū)分，在前驅(qū)糖尿病中，"葡萄糖耐量擾亂(disturbed)"——其可通過實(shí)驗(yàn)室化學(xué)方法檢測(cè)一一僅發(fā)生在末期。胰島素抵抗發(fā)生在前驅(qū)糖尿病病程的開始。幾乎同時(shí)，內(nèi)皮功能障礙已經(jīng)發(fā)生，伴隨心血管系統(tǒng)的高脂蛋白血癥和高血壓。這種風(fēng)險(xiǎn)集合的結(jié)果是血管壁進(jìn)一步動(dòng)脈粥樣硬化改變(微管血管病變和大血管病變)，以及作為微循環(huán)問題結(jié)果的血管并發(fā)癥。其它繼發(fā)病和伴隨疾病是糖尿病性視網(wǎng)膜病直至失明，以及腎病直至腎機(jī)能不全，神經(jīng)病，糖尿病性足部綜合征，和心血管并發(fā)癥。由于這種原因，本發(fā)明涉及II型糖尿病，及其繼發(fā)病和并發(fā)病，特別是內(nèi)皮功能障礙、高脂蛋白血癥、高血壓性循環(huán)調(diào)節(jié)障礙、糖尿病性視網(wǎng)膜病、腎病、腎機(jī)能不全、神經(jīng)病、糖尿病性足部綜合征和心血管并發(fā)癥的診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)。所有前述適應(yīng)癥都在例如Pschyrembel，DeGruyter，Berlin2004中進(jìn)一步描述。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，"中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)"被理解為人類蛋白或多肽，其具有具有前腎上腺髓質(zhì)素原SEQ訓(xùn)o.1(圖1)(KitamuraK，SakataJ，KangawaK，KojimaM，MatsuoH，EtoT.CloningandcharacterizationofcDNAencodingaprecursorforhumanadrenomedullin.BiochemBiophysResCo咖un1993:194:720-725)的氨基酸序列45-92(45位是Glu,92位是Val)，和/或具有SEQIDNo.2(圖2)的氨基酸序列1-48。腎上腺髓質(zhì)素原的這一片段被稱為"中央?yún)^(qū)腎上腺髄質(zhì)素原(MR-proADM)，，(EP1488209B1)，并且顯示出強(qiáng)的血漿穩(wěn)定性，這是特別有利的。此外，"中央?yún)^(qū)腎上腺髄質(zhì)素原"依據(jù)本發(fā)明可以顯示出修飾，如糖基化、脂化或衍生化。在另一實(shí)施方式中，中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ7IDNo.2)的測(cè)定可以另外連同其它標(biāo)志物一起進(jìn)行，其中中央?yún)^(qū)腎上腺髄質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)被包含在標(biāo)志物組合(標(biāo)志物組，標(biāo)志物簇)中，特別優(yōu)選已經(jīng)表明糖尿病的那些標(biāo)志物。在另一特定的實(shí)施方式中，這也可以是血管標(biāo)志物，其能夠表明伴隨糖尿病的心血管系統(tǒng)內(nèi)皮功能障礙。為此，本發(fā)明涉及依據(jù)本發(fā)明方法的實(shí)施方式，其中在待研究患者中，另外還連同選自炎性標(biāo)志物、血管標(biāo)志物的至少一種其它標(biāo)志物一起進(jìn)行所述測(cè)定。依據(jù)本發(fā)明，炎性標(biāo)志物可以選自下列至少一種標(biāo)志物C-反應(yīng)蛋白(CRP)，細(xì)胞因子例如TNF-a，白細(xì)胞介素，例如IL-6、白細(xì)胞介素-iP，降鈣素原(1-116，3-116)，血管緊張素II，內(nèi)皮素-l，和粘附分子如VCAM或ICAM，并且血管標(biāo)志物可以選自下列至少一種標(biāo)志物肌酸激酶，髓過氧化物酶，肌紅蛋白，利尿鈉蛋白(natriureticprotein)，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或在每一情況下其部分序列，CRP。此外，該術(shù)語也被理解為指代調(diào)節(jié)循環(huán)的激素(原)，特別是例如胃泌素釋放肽原(proGRP)、內(nèi)皮素-l原、瘦蛋白原、神經(jīng)肽-Y原、生長抑素原、神經(jīng)肽-YY原、阿黑皮素原或它們各自的部分序列。在另一種實(shí)施方式中，至少一種糖尿病標(biāo)志物/因子可以被額外地測(cè)定。根據(jù)本發(fā)明，糖尿病標(biāo)志物/因子特別是諸如脂連蛋白，碳水化合物，脂肪，如膽固醇(LDH)和其它，體重指數(shù)(BMI),年齡，血壓，HOMA-IR(穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估-胰島素抵抗指數(shù)，其檢測(cè)參見MatthewsDR，HoskerJP，RudenskiAS，NaylorBA，TreacherDF，TurnerRC，HomeostasisModelAssessment:InsulinResistanceandB-cellFunctionfromFastingPlasmaGlucoseandInsulinConcentrationsinMan.DUbetologia28:412-419.1985)的那些。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，依據(jù)本發(fā)明的方法可以通過標(biāo)志物的平行測(cè)定或同時(shí)測(cè)定(如，有96孔或更多孔的多重滴定板)的方式進(jìn)行，其中所述測(cè)定在至少一個(gè)患者樣品上進(jìn)行。8此外，依據(jù)本發(fā)明的方法及其測(cè)定可以在自動(dòng)分析設(shè)備上，特別是借助于Kryptor(http:〃麗.kryptor.net/)來進(jìn)行。在另一實(shí)施方式中，依據(jù)本發(fā)明的方法及其測(cè)定可以通過快速測(cè)試(如橫向流動(dòng)測(cè)試)來進(jìn)行，不論是使用單參數(shù)或多參數(shù)測(cè)定。此外，本發(fā)明涉及中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段，或其包含在標(biāo)志物組合(標(biāo)志物組，標(biāo)志物簇)中的用途，用于糖尿病特別是II型糖尿病、及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)，并且，特別地，將前述實(shí)施方式納入考慮。如果必要，所述標(biāo)志物組合可以含有另一種合適的標(biāo)志物。另一任務(wù)是得到相應(yīng)的診斷設(shè)備，或應(yīng)用這種設(shè)備進(jìn)行依據(jù)本發(fā)明的方法。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，這樣的診斷設(shè)備特別地被理解為陣列或測(cè)試(如免疫測(cè)試、ELISA等)，在最寬泛的意義中，是用于實(shí)施依據(jù)本發(fā)明方法的設(shè)備。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于糖尿病特別是II型糖尿病、及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)的試劑盒，或這種試劑盒的應(yīng)用，其中，在待研究的患者中進(jìn)行中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段的測(cè)定，或包含在標(biāo)志物組合(標(biāo)志物組，標(biāo)志物簇)中的測(cè)定，特別地將前述實(shí)施方式納入考慮。例如，這樣的檢測(cè)試劑包括抗體等。以下實(shí)施例和附圖用于更詳細(xì)地解釋本發(fā)明，而非將本發(fā)明限制于這些實(shí)施例和附圖。實(shí)施例實(shí)施例1MR-proADM測(cè)試依據(jù)Morgenthaler等人(MorgenthalerNG，StruckJ，AlonsoC，BergmannA.Measurementofmidregionalproadrenomedullininplasmawithani腿unoluminometricassay.ClinChem.2005Oct;51(10):1823-9)所述進(jìn)行。在葡萄糖耐量未擾亂的IOO位健康受試者、葡萄糖耐量已擾亂的60位患者和患有明顯II型糖尿病(簡寫為"DMII")的200位患者中檢測(cè)MR-proADM。這200位患者被分為未患任何繼發(fā)病的100名糖尿病患者，和已經(jīng)患有諸如糖尿病腎病和糖尿病性視網(wǎng)膜病的繼發(fā)病的100名糖尿病患者。圖3顯示。隨著DMII的嚴(yán)重程度增加，MR-proADM值顯著升高。兩組DMII患者尤其與健康對(duì)照和葡萄糖耐量擾亂的患者不同。令人吃驚地，最高M(jìn)R-proADM值在已顯示糖尿病繼發(fā)病的DMII患者中被發(fā)現(xiàn)。表1不僅示出MR-proADM，也示出在每種情況下各組中與糖尿病相關(guān)的參數(shù)，如葡萄糖和HbAlc。表l.(晚期并發(fā)癥(SK)(同義詞繼發(fā)病))<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>已經(jīng)存在的受限微循環(huán)與MR-proADM值之間的關(guān)系也通過患有DMII的50名患者的MR-proADM值和測(cè)定為靜止前臂皮膚微循環(huán)灌流的循環(huán)流之間的顯著相關(guān)性(r-0.43，P=0.002)顯示。(RCMP:AEnriqueCaballero,RolaSaouaf，SubodhArora，SuCLim，F(xiàn)rankWLoGerfo，EdwardSHorton，AristidisVeves.Reactivityofthemicro-andmacro-circulationisimpairedinthoseatriskfortype2diabetes.Diabetes48:1856-1862，1999)。附圖圖2示出MR-proADM的SEQIDNo.2。圖3示出健康受試者，葡萄糖耐量擾亂的患者、沒有晚期并發(fā)癥(SK)(同義詞繼發(fā)病)的II型糖尿病(DMII)患者、和具有晚期并發(fā)癥(同義詞繼發(fā)病)的DMII患者中的MR-proADM。權(quán)利要求1.用于糖尿病體外診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)的方法，其特征在于在待研究的患者中進(jìn)行中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADMSEQIDNo.2)或其部分肽或片段的測(cè)定。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于對(duì)II型糖尿病及其繼發(fā)病和并發(fā)病，特別是內(nèi)皮功能障礙、高脂蛋白血癥、高血壓性循環(huán)調(diào)節(jié)障礙、糖尿病性視網(wǎng)膜病、腎病、腎機(jī)能不全、神經(jīng)病、糖尿病性足部綜合征和心血管并發(fā)癥進(jìn)行體外診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)。3.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于在待研究的患者中，另外還對(duì)選自炎性標(biāo)志物、血管標(biāo)志物和/或糖尿病標(biāo)志物/因子的至少一種其它標(biāo)志物進(jìn)行測(cè)定。4.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于所述炎性標(biāo)志物選自下列至少一種標(biāo)志物C-反應(yīng)蛋白(CRP)，細(xì)胞因子例如TNF-a,白細(xì)胞介素，例如IL-6、白細(xì)胞介素-ip,降鈣素原(1-116，3-116)，血管緊張素II，內(nèi)皮素-l。5.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于所述血管標(biāo)志物選自下列至少一種標(biāo)志物肌酸激酶，髓過氧化物酶，肌紅蛋白，利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP，或調(diào)節(jié)循環(huán)的激素(原)，例如胃泌素釋放肽原(proGRP)、內(nèi)皮素-l原、瘦蛋白原、神經(jīng)肽-Y原、生長抑素原、神經(jīng)肽-YY原、阿黑皮素原或它們各自的部分序列。6.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于進(jìn)行所述標(biāo)志物的平行或同時(shí)測(cè)定。7.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于所述測(cè)定在至少一個(gè)患者樣品上進(jìn)行。8.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于所述測(cè)定在自動(dòng)分析設(shè)備上，特別是借助于Kryptor來進(jìn)行。9.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于所述測(cè)定通過快速測(cè)試，特別是以單參數(shù)或多參數(shù)測(cè)定來進(jìn)行。10.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于所述診斷用于對(duì)患者進(jìn)行分級(jí)以進(jìn)行臨床決策，特別是用藥物進(jìn)行進(jìn)一步處理，以便處理或治療糖尿病，特別是II型糖尿病，及其繼發(fā)病和并發(fā)病。11.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于進(jìn)行所述診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)，以用于對(duì)糖尿病特別是II型糖尿病及其繼發(fā)病和并發(fā)病進(jìn)行預(yù)后、預(yù)防、鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)和發(fā)現(xiàn)、嚴(yán)重程度評(píng)估、和伴隨治療的進(jìn)程評(píng)估。12.中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段，或者包含在標(biāo)志物組合中的中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原或其部分肽或片段的用途，用于糖尿病特別是II型糖尿病及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)，其中所述標(biāo)志物組合包含根據(jù)權(quán)利要求3至5之一所述的其它標(biāo)志物，或者任選地包含另外的合適的標(biāo)志物。13.用于實(shí)施根據(jù)權(quán)利要求1至11之一的方法的診斷設(shè)備。14.用于糖尿病特別是II型糖尿病及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)的試劑盒，其包含檢測(cè)試劑和助劑，所述檢測(cè)試劑用于測(cè)定標(biāo)志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQIDNo.2)或其部分肽或片段，或者包含在標(biāo)志物組合中的標(biāo)志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原或其部分肽或片段，其中所述標(biāo)志物組合包含根據(jù)權(quán)利要求3至5之一所述的其它標(biāo)志物。全文摘要本發(fā)明涉及糖尿病，特別是糖尿病繼發(fā)病的診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)方法，其中在待研究的患者中進(jìn)行標(biāo)志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADMSEQIDNo.2)或其部分肽或片段的測(cè)定，或如果其包含在標(biāo)志物組合(標(biāo)志物組，標(biāo)志物簇)中進(jìn)行測(cè)定。此外，本發(fā)明涉及用于進(jìn)行所述方法的診斷設(shè)備和試劑盒。文檔編號(hào)G01N33/66GK101568833SQ200780041709公開日2009年10月28日申請(qǐng)日期2007年11月8日優(yōu)先權(quán)日2006年11月8日發(fā)明者A·博格曼,J·帕帕索提里奧,J·斯塔克,N·莫根塔勒申請(qǐng)人:布拉姆斯股份公司