專利名稱：表面脂肪酸結(jié)合蛋白e－fabp的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP用作檢測(cè)肝癌的蛋白質(zhì)分子標(biāo)記的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝癌是一種嚴(yán)重危害人類的疾病。西方發(fā)達(dá)國家肝癌的發(fā)病率較低，國際上對(duì)肝癌的基礎(chǔ)研究仍較為薄弱，而我國是肝癌高發(fā)國家，發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡構(gòu)成年輕化，每年用于肝癌治療的醫(yī)療支出大為增加，肝癌成了嚴(yán)重危害我國人民生命財(cái)產(chǎn)安全的頭號(hào)敵人，并且是影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的一個(gè)重要因素，加大力度進(jìn)行我國肝癌的基礎(chǔ)研究具有戰(zhàn)略意義，而分離和鑒定新的肝癌相關(guān)基因是目前肝癌基礎(chǔ)研究中的前沿課題。
到目前為止，已有不下20種的基因異常表達(dá)被確定與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但已確定的肝癌相關(guān)基因在肝癌中的異常表達(dá)率并不高，肝癌的發(fā)病機(jī)制至今仍未闡明，肝癌的早期診斷率仍有待提高。此外，傳統(tǒng)的肝癌手術(shù)加化療以及近年來配合使用的多種基因治療方法仍沒有明顯提高肝癌患者的生存率，因而尋找新的肝癌相關(guān)基因尤其是肝癌高表達(dá)基因?qū)τ谔接懜伟┑陌l(fā)病機(jī)制具有重要意義。
因此，為治療和診斷目的研究和開發(fā)在肝癌中高表達(dá)的基因和/或蛋白具有重要意義。本領(lǐng)域迫切需要新的在肝癌中高表達(dá)的基因和/或蛋白。
表面脂肪酸結(jié)合蛋白(Fatty acid-binding protein，epidermal；E-FABP；Psoriasis-associated fatty acid-binding protein homolog；PA-FABP；Fatty acid binding protein5；Psoriasis associated fatty acid binding protein homolog；Fatty acid binding protein 5，psoriasisassociated；Fatty acid binding protein，psoriasis associated)的Genebank登錄號(hào)為gi|4557581，NCBI的登錄號(hào)為NP_001435，Swissprot登錄號(hào)為Q01469，IPI號(hào)為IPI00007797.1。表面脂肪酸結(jié)合蛋白屬于脂肪酸結(jié)合蛋白家族，脂肪酸結(jié)合蛋白(FABPs)是一種與長(zhǎng)鏈脂肪酸有高度親和特異性的蛋白，并且在細(xì)胞內(nèi)對(duì)長(zhǎng)鏈脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)起著關(guān)鍵性的作用。到目前為止，至少發(fā)現(xiàn)了三種不同的脂肪酸結(jié)合蛋白B-FABP；E-FABP；H-FABP。我們這里所提到的表面脂肪酸結(jié)合蛋白就是其中的一種，除了以上所說的功能外，該蛋白被認(rèn)為在角質(zhì)細(xì)胞的分化過程中發(fā)揮著作用(J.Neural.Transm.Suppl.2003；(67)225-34)。
表面脂肪酸結(jié)合蛋白(Fatty acid-binding protein，epidermal；E-FABP)最初被發(fā)現(xiàn)在表皮中阻止水分的通透性起著重要的作用，對(duì)表型為E-FABP缺陷的小鼠進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，E-FABP缺陷型小鼠的組織學(xué)水平和生長(zhǎng)都是正常的，而肝臟中H-FABP的表達(dá)量大大升高(Mo1.Cell Biochem.2002 Oct；239(1-2)83-6)。這表明H-FABP可能對(duì)E-FABP有補(bǔ)充的作用。對(duì)E-FABP缺陷型的純合子小鼠進(jìn)一步研究表明E-FABP在皮膚對(duì)水分通透性的調(diào)節(jié)中確實(shí)起著關(guān)鍵性的作用。
最近有工作對(duì)癌癥(主要是腦癌患者)患者的血清進(jìn)行自身抗體抗原反應(yīng)研究發(fā)現(xiàn)，20％以上的癌癥患者的血清中檢測(cè)到了E-FABP的高表達(dá)，而在對(duì)正常人的血清中，只有2％的人檢測(cè)到了E-FABP，該數(shù)據(jù)表明E-FABP可能在癌癥患者的血清中高表達(dá)(Biochem.Biophys.Res.Commun.2004 Oct 8；323(1)156-62)。
但是到目前為止，現(xiàn)有技術(shù)中未見有關(guān)于表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP與肝細(xì)胞癌的相關(guān)性的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
通過篩選在肝細(xì)胞癌癌組織以及肝細(xì)胞癌癌旁組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，本申請(qǐng)的發(fā)明人找到了一種在肝細(xì)胞癌的癌組織和癌旁組織中存在差異表達(dá)的蛋白質(zhì)(在癌組織中上調(diào)表達(dá))，經(jīng)質(zhì)譜鑒定為表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP。進(jìn)一步的免疫印跡實(shí)驗(yàn)證實(shí)，表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的確在肝細(xì)胞癌的癌組織與癌旁組織中存在差異表達(dá)(在癌組織中上調(diào)表達(dá))。
基于表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP與肝細(xì)胞癌的這種相關(guān)性，以該蛋白作為一個(gè)蛋白質(zhì)分子標(biāo)記對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)可以用于檢測(cè)肝癌。
因此，本發(fā)明的首要目的即在于提供一種表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP用作檢測(cè)肝癌的蛋白質(zhì)分子標(biāo)記的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體，包括單克隆抗體和多克隆抗體，用于制備檢測(cè)肝癌的制劑的應(yīng)用。
本發(fā)明的再一個(gè)目的還在于提供一種抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體，包括單克隆抗體和多克隆抗體，用于制備檢測(cè)肝癌的試劑盒的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種體外檢測(cè)肝細(xì)胞組織中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的表達(dá)是否異常的方法，該方法包括以下步驟A、用特異性抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體檢測(cè)待測(cè)肝細(xì)胞中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的數(shù)量；
B、將步驟A測(cè)得的表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的數(shù)量與正常肝組織中的表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的數(shù)量進(jìn)行比較，如測(cè)得的蛋白數(shù)量高于正常值，則表示被檢測(cè)肝組織中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的表達(dá)異常。
雖然在現(xiàn)有技術(shù)中有關(guān)于表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP與癌癥相關(guān)的報(bào)道，但是到目前為止，還沒有表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP與肝細(xì)胞癌的相關(guān)性的報(bào)道，因此，本發(fā)明的這一發(fā)現(xiàn)將為肝細(xì)胞癌的診斷和/或治療提供一條全新的途徑。


圖1顯示了對(duì)表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的免疫印跡分析結(jié)果，Beta-actin為對(duì)照。
圖2顯示了對(duì)隨機(jī)抽取的36例肝癌患者血清樣品、24例乙肝而非肝癌患者的血清樣品以及36例正常人血清樣品中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的免疫印跡分析結(jié)果，transferrin為對(duì)照；其中N代表正常人血清，I代表乙肝而非肝癌患者血清，C代表肝癌患者血清。
圖3為采用R數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)圖2的免疫印跡圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)分析得出的蛋白質(zhì)表達(dá)量相對(duì)分布圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
發(fā)明人用非酶解樣品制備法(nonenzymatic sample preparation，NESP)制備的肝細(xì)胞癌的癌組織與癌旁組織蛋白質(zhì)樣品，以同位素親和標(biāo)簽與凝膠增強(qiáng)的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(gel-enhanced liquid chromatography-mass spectrometry coupled with isotope-coded affinitytag，GeLC-MS-ICAT)對(duì)其中的蛋白進(jìn)行鑒定并比較其表達(dá)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP在肝細(xì)胞癌癌組織中高表達(dá)。免疫印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的確在肝細(xì)胞癌的癌組織與癌旁組織中存在差異表達(dá)。
因此，以表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP作為一個(gè)蛋白質(zhì)分子標(biāo)記對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)可以用于檢測(cè)肝癌，也即表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP可以用作檢測(cè)肝癌的蛋白質(zhì)分子標(biāo)記。
實(shí)施例1、肝細(xì)胞癌癌組織及癌旁組織蛋白質(zhì)樣品的制備本實(shí)施例中所使用的尿素、3-[(3-膽酰胺丙基)-二乙銨]-1-丙磺酸(CHAPS)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、二硫蘇糖醇(DTT)均購自Sigma公司。
本實(shí)施例以非酶解樣品制備法(nonenzymatic sample preparation，NESP)制備肝細(xì)胞癌的癌組織及癌旁組織蛋白質(zhì)樣品，具體如下手術(shù)切除的新鮮組織塊迅速置于冰上，快速切成幾個(gè)肉眼可見、無壞死區(qū)域的小塊。用預(yù)冷的不含谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基(5％胎牛血清，0.2mM PMSF，1mM EDTA，苯甲異噁唑青霉素25mg/mL，慶大霉素50mg/mL，青霉素100U/mL，鏈霉素100mg/mL，兩性霉素B 0.25mg/mL，制霉菌素50U/mL)洗滌組織小塊數(shù)次后，在液氮中快速研磨成細(xì)胞沉淀，細(xì)胞沉淀分別溶于適量裂解液(8mol/L尿素、4％CHAPS、40mmol/L Tris和65mmmol/L DTT)中，超聲細(xì)胞破碎儀(Soniprep 150，英國，MSE)冰浴間歇超聲2min，15000r/min、4℃離心1h。取上清，以改良的Bradford法(見Bio-Rad公司產(chǎn)品說明書)進(jìn)行總蛋白質(zhì)定量，制備好的肝細(xì)胞癌癌組織及相應(yīng)癌旁組織的蛋白質(zhì)樣品分裝，-80℃保存?zhèn)溆谩?br> 以上述方法制備11對(duì)肝細(xì)胞癌癌組織及癌旁組織蛋白質(zhì)樣品。11例肝細(xì)胞癌標(biāo)本均來自東方肝膽外科醫(yī)院，由2個(gè)病理科醫(yī)生明確為肝細(xì)胞癌。均為男性，平均年齡48.5歲(31～65歲)，血清檢測(cè)hepatitis B病毒感染陽性，11例(100％)屬臨床分級(jí)(TNM分級(jí))III級(jí)。其中，甲胎蛋白(AFP)高于25μg/L的10例(90.9％)；9例腫瘤大于5cm。11例肝細(xì)胞癌標(biāo)本的病理資料詳見表1。
表1、11例肝細(xì)胞癌標(biāo)本的病理資料

本實(shí)施例所用癌組織及癌旁組織樣品均為取自同一肝細(xì)胞癌患者的成對(duì)樣品，所有11例肝細(xì)胞癌病例有極相似的病例診斷指標(biāo)均為男性，平均年齡48.5歲(31～65歲)，血清檢測(cè)hepatitis B病毒感染陽性，11例(100％)屬TNM分級(jí)III級(jí)。其中，AFP高于25μg/L的10例(93.75％)；9例腫瘤大于5cm。這種取樣方法有利于降低個(gè)體間差別對(duì)實(shí)驗(yàn)分析工作的影響。
實(shí)施例2、差異表達(dá)蛋白的篩選本實(shí)施例中使用的尿素、3-[(3-膽酰胺丙基)-二乙銨]-1-丙磺酸(CHAPS)、十二烷基磺酸鈉(SDS)、二硫蘇糖醇(DTT)購自Sigma公司；碘乙酰胺(IAA)、丙烯酰胺、N，N-甲叉雙丙烯酰胺等購自Fluka公司；cleavable ICAT試劑購自Applied BiosystemsFramingham，MA公司。
過硫酸胺(AP)、TEMED、Tri-n-butylphosphat(TBP)、PDQuest軟件等為Bio-Rad產(chǎn)品。
Avidin親和柱購自Applied Biosystems，F(xiàn)ramingham，MA公司。
LCQTMDeca XP system和ProteomeXTMWorkstation購自Thermo Finnigan公司。
所使用的上樣緩沖液的組成為1mol/L Tris-HCl(pH6.8)0.6ml，50％甘油5ml，10％SDS 2ml，巰基乙醇0.5ml，蒸餾水1.9ml，少量六溴酚藍(lán)。
首先采用同位素親和標(biāo)簽與凝膠增強(qiáng)的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(gel-enhanced liquidchromatography-mass spectrometry coupled with isotope-coded affinity tag，GeLC-MS-ICAT)對(duì)實(shí)施例1得到的11對(duì)蛋白質(zhì)樣品中的其中一對(duì)(病例編號(hào)為4 29)肝細(xì)胞癌的癌組織及癌旁組織中的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行篩選鑒定，方法參照2003年Steven P.Gygi發(fā)表在MCP上的文獻(xiàn)(Jiaxu Li et al.Mol Cell Proteomics.2003 Nov；2(11)1198-204.Epub.2003 Sep.23)，具體過程如下NESP法制備的一對(duì)肝細(xì)胞癌癌組織與相應(yīng)癌旁組織蛋白質(zhì)樣品(病例編號(hào)為429)，分別取100μg，先用TBP還原蛋白質(zhì)，而后分別用cleavable ICAT試劑(C12和C13)標(biāo)記(其中C12與C13分別對(duì)應(yīng)癌組織與相應(yīng)癌旁組織，標(biāo)記方法參照產(chǎn)品說明書)?；旌虾蠹尤脒m量上樣緩沖液，跑5％濃縮膠(上層膠)和7.5％～17.5％分離膠(下層膠)，電泳條件為15mA/膠30min，然后30mA/膠，保持至溴酚藍(lán)前沿入濃縮膠8cm左右。
考染染出條帶后，將整個(gè)上樣條帶平均切為8份，每份再分別切成1mm3的小塊，在100mM NH4HCO3，30％ACN中脫色，真空冷凍干燥，100μl 50mmol/L NH4HCO3(pH8.3，蛋白質(zhì)胰蛋白酶＝1∶5，w/w)中4℃放置2hr，加入50μl 50mmol/LNH4HCO3(pH8.3)，37℃酶解過夜。
抽提蛋白(60％ACN、0.1％TFA)，真空冷凍干燥。酶解后的每份肽段混合物經(jīng)Avidin親和柱純化出已標(biāo)記肽段后，再用LCQTMProteomeXTMWorkstation進(jìn)行液相串聯(lián)(LC-MS/MS)質(zhì)譜鑒定，Bioworks(Thermo finnigan公司)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)庫搜索并用relex軟件(Scripps Research Institute，USA)進(jìn)行數(shù)值計(jì)算。
運(yùn)用NESP法和GeLC-MS-ICAT技術(shù)，我們共鑒定到426種有定量關(guān)系的蛋白質(zhì)。其中兩倍以上量變的蛋白質(zhì)共201種，肝細(xì)胞癌癌組織高表達(dá)的有155種蛋白質(zhì)；肝細(xì)胞癌癌旁組織高表達(dá)的有46種蛋白質(zhì)。
用LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定、數(shù)據(jù)庫搜索及比值計(jì)算得2個(gè)含Cys的肽段被總共鑒定到3次，與表面脂肪酸結(jié)合蛋白(Fatty acid-binding protein，epidermal；E-FABP；Psoriasis-associated fatty acid-binding protein homolog；PA-FABP；Fatty acid binding protein5；Psoriasis associated fatty acid binding protein homolog；Fatty acid binding protein 5，psoriasisassociated；Fatty acid binding protein，psoriasis associated)相符，氨基酸覆蓋率為15.56％。relex軟件計(jì)算結(jié)果顯示表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP在肝細(xì)胞癌癌組織中高表達(dá)，癌組織/癌旁組織的比值為2.682(SD＝0)，詳細(xì)的鑒定情況及肽段打分結(jié)果見表格2(表格中C*代表C13標(biāo)記的Cys)。
表2、GeLC-MS-ICAT中2個(gè)含Cys的肽段的詳細(xì)鑒定結(jié)果

實(shí)施例3、表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP差異表達(dá)的免疫印跡驗(yàn)證為確認(rèn)表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的差異表達(dá)，取10位肝細(xì)胞癌患者的癌組織及相應(yīng)癌旁組織蛋白質(zhì)樣品(NESP法制備，表1中除429例以外的其它10例)，用購買的抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP抗體進(jìn)行免疫印跡分析，具體過程簡(jiǎn)述如下每個(gè)樣品取60μg蛋白質(zhì)樣品用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(即SDS-PAGE，膠濃度12％)分離，轉(zhuǎn)移至PVDF膜(購自Amersham Biosciences公司)上，一抗使用兔抗人表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP單抗(購自HyCult biotechnology b.v.公司，1∶100稀釋)，室溫孵育2小時(shí)，用TBST(每升含Tris 2.42g，氯化鈉8g，Tween 20ml，用HCl調(diào)節(jié)pH到7.6)洗滌三次，每次5分鐘，二抗為抗兔抗體(購自Santa Cruz公司，1∶5000稀釋)室溫孵育1小時(shí)，再用TBST洗滌三次，每次10分鐘，最后用ECL plus試劑(AmershamBiosciences)反應(yīng)5分鐘后，以X-光片曝光檢測(cè)；同時(shí)以beta-actin作為等量上樣的對(duì)照(beta-actin單抗購自abcam公司，1∶1000稀釋，二抗為小鼠)，結(jié)果如圖1所示。
圖1的免疫印跡結(jié)果顯示，10對(duì)癌組織與癌旁組織基本上是等量上樣，并且10對(duì)癌組織與癌旁組織中都呈現(xiàn)這樣的現(xiàn)象癌組織中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的雜交條帶的濃度都明顯高于相應(yīng)的癌旁組織；可見表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP在肝細(xì)胞癌的癌組織中存在高表達(dá)，該結(jié)果與質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果一致。
為了能夠體現(xiàn)更好的應(yīng)用價(jià)值，我們隨機(jī)挑取了36例肝癌患者的血清(樣品資料見表3)，24例乙肝而非肝癌患者的血清(樣品資料見表4)，36例正常人血清(樣品資料見表5)，隨機(jī)進(jìn)行分組(每一組包含一例正常人血清、一例乙肝而非肝癌患者血清，一例肝癌患者血清)，每例樣品取10ug蛋白質(zhì)樣品，同樣運(yùn)用上述的免疫印跡方法進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)采用transferrin作為等量上樣的對(duì)照(transferrin單抗購自abcam公司，1∶1000稀釋，二抗為小鼠)，結(jié)果如圖2所示。
同時(shí)，我們采用R數(shù)據(jù)分析軟件(免費(fèi)從http://www.r-project.org/下載)對(duì)圖2的免疫印跡圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得出蛋白質(zhì)表達(dá)量的相對(duì)分布圖，結(jié)果如圖3所示。
從圖2和圖3可以看出，所有樣品的上樣量基本相同(從圖3的transferrin中可以得出此結(jié)論)，但是E-FABP蛋白質(zhì)在肝癌患者血清中的表達(dá)量明顯的高于正常人血清中的量，可見表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP在肝細(xì)胞癌患者的血清中高表達(dá)，該結(jié)果與質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果一致。
綜上所述，表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP在肝細(xì)胞癌的癌組織及癌旁組織中存在差異表達(dá)，顯然與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的相關(guān)性，因此，以表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP作為一個(gè)蛋白質(zhì)分子標(biāo)記對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)可以用于檢測(cè)肝細(xì)胞癌。相應(yīng)的，特異性抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體，包括各種抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的單克隆抗體和多克隆抗體，由于其能夠用于檢測(cè)表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的表達(dá)量，因而可以用于檢測(cè)肝癌，或者用于制備檢測(cè)肝癌的制劑或試劑盒等，這對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的。
雖然有關(guān)表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP動(dòng)態(tài)的生物學(xué)功能及腫瘤相關(guān)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究，但是將其作為檢測(cè)肝癌的標(biāo)記物卻是肯定的。表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP可作為肝細(xì)胞癌的潛在標(biāo)志，而其在胞內(nèi)的生物學(xué)功能提示表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP可能作為肝癌的預(yù)后分子標(biāo)記和臨床治療的靶分子。
表3、肝癌血清樣品資料

表4、乙肝血清樣品資料

表5、正常血清樣品資料

權(quán)利要求
1.一種表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的應(yīng)用，其特征在于，用作檢測(cè)肝癌的蛋白質(zhì)分子標(biāo)記。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述用作檢測(cè)肝癌的蛋白質(zhì)分子標(biāo)記是檢測(cè)該蛋白在肝細(xì)胞組織中的表達(dá)量。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)該蛋白在肝細(xì)胞組織中的表達(dá)量是檢測(cè)該蛋白在肝細(xì)胞組織中是否存在上調(diào)表達(dá)。
4.一種抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體的應(yīng)用，其特征在于，用于制備檢測(cè)肝癌的制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體包括單克隆抗體和多克隆抗體。
6.一種抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體的應(yīng)用，其特征在于，用于制備檢測(cè)肝癌的試劑盒。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體包括單克隆抗體和多克隆抗體。
8.一種體外檢測(cè)肝細(xì)胞組織中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的表達(dá)是否異常的方法，其特征在于包括以下步驟A、用特異性抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體檢測(cè)待測(cè)肝細(xì)胞中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的數(shù)量；B、將步驟A測(cè)得的表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的數(shù)量與正常肝組織中的表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的數(shù)量進(jìn)行比較，如測(cè)得的蛋白數(shù)量高于正常值，則表示被檢測(cè)肝組織中表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的表達(dá)異常。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述所述抗表面脂肪酸結(jié)合蛋白E-FABP的抗體包括單克隆抗體和多克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明通過篩選在肝細(xì)胞癌的癌組織和癌旁組織中存在差異表達(dá)的蛋白，找到了一種在肝細(xì)胞癌的癌組織中高表達(dá)的蛋白，免疫印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了表面脂肪酸結(jié)合蛋白E－FABP的確在肝細(xì)胞癌的癌組織與癌旁組織中存在差異表達(dá)。鑒于表面脂肪酸結(jié)合蛋白E－FABP與肝細(xì)胞癌的這種相關(guān)性，該蛋白可以用作檢測(cè)肝細(xì)胞癌的蛋白質(zhì)分子標(biāo)記。
文檔編號(hào)G01N33/577GK1952664SQ200610115888
公開日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2006年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月26日
發(fā)明者曾嶸, 周曉, 李辰, 袁新雨 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院