專利名稱：臨床檢驗(yàn)?zāi)冈瓡r(shí)間(pt)測定體外診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外診斷試劑盒，特別是一種臨床檢驗(yàn)?zāi)冈瓡r(shí)間(PT)測定體外診斷試劑盒。
背景技術(shù)：
凝血實(shí)驗(yàn)對(duì)于臨床各科的疾病診斷具有很大的意義，除了對(duì)出血性疾病的篩選與診斷外，還用于對(duì)各種血栓性疾病與血栓前狀態(tài)的檢查和預(yù)測；彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)的實(shí)驗(yàn)診斷以及對(duì)各種抗凝治療患者的用藥指導(dǎo)和預(yù)后估計(jì)等。血栓與止血不僅涉及基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，且與多個(gè)臨床學(xué)科(包括血液科、呼吸消化科、心血管科、神經(jīng)科、婦產(chǎn)科、普通外科等)的疾病密切相關(guān)1)所有手術(shù)前檢查外科手術(shù)、骨科手術(shù)、婦科手術(shù)等；檢查病人出凝血機(jī)能，以免術(shù)中發(fā)生危險(xiǎn)。2)監(jiān)測抗凝及溶栓治療如換瓣手術(shù)后、肝素治療、口服抗凝劑、華法令、香豆素等，減少臨床治療出血發(fā)生率。3)彌散性血管內(nèi)凝血診斷。4)先天及后天性凝血因子缺乏。5)纖維蛋白原缺乏所致的出血傾向。6)動(dòng)脈粥樣硬化。7)中醫(yī)活血化瘀的診療研究?？傊?，在血液病、糖尿病、高脂血癥、心腦血管病、外科手術(shù)治療等領(lǐng)域的研究、診斷與治療方面，血栓與止血檢驗(yàn)均有重要意義。
傳統(tǒng)的出血時(shí)間測定采用Duke氏法、IVY氏法和出血時(shí)間測定器法。Duke氏法雖操作簡單，但穿刺深度、寬度難以標(biāo)準(zhǔn)化，且受穿刺部位毛細(xì)血管分布及血管收縮程度的影響致使實(shí)驗(yàn)的敏感性很差，不能達(dá)到診斷要求。文獻(xiàn)記載，血小板低于3×109/L的患者陽性率僅為42％，vWD患者陽性率為32％。IVY氏法雖較Duke氏法敏感，但操作繁瑣，又是損傷性的，且切口難以標(biāo)準(zhǔn)化，也不易推廣。出血時(shí)間測定器法的靈敏度比前兩者高，可操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，也不適合常規(guī)使用。凝血時(shí)間測定常規(guī)采用的玻片法、毛細(xì)血管法，操作也較簡單，但都過于粗糙，重復(fù)性及敏感性較差，血友病漏檢率高達(dá)90％，對(duì)臨床難以提供可信的結(jié)果；而通常使用的試管法，也只是檢查內(nèi)在凝血系統(tǒng)某些因子的過篩試驗(yàn)，敏感性、準(zhǔn)確性均比較差，僅能作為凝血障礙性疾病初篩時(shí)參考。此法對(duì)抗凝物質(zhì)的監(jiān)測效果較好，但對(duì)凝血物質(zhì)缺乏的測定比較差。以前用于測定個(gè)別因子缺乏的一些糾正試驗(yàn)以及所謂的凝血活酶生成試驗(yàn)，因操作繁瑣，敏感性也不高而趨于淘汰。而凝血酶原時(shí)間(PT)測定方法自創(chuàng)建以來，迄今為止仍然是檢查外源性凝血因子及相關(guān)抑制物的重要篩選試驗(yàn)，是用來證實(shí)先天性或獲得性纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或抑制物存在的重要項(xiàng)目，同時(shí)用于監(jiān)測口服抗凝劑的用量和療效的主要手段。
凝血酶原時(shí)間(PT)主要由肝臟合成的凝血因子I、II、V、VII、X的水平?jīng)Q定，在肝病中的作用尤為重要。急性肝炎PT異常率10％～15％，慢性肝炎為15％～51％，肝硬化為71％，重癥肝炎為90％，是反映肝臟合成功能、儲(chǔ)備功能、病變嚴(yán)重程度及預(yù)后的一個(gè)非常重要的指標(biāo)。PT與血小板計(jì)數(shù)常用于評(píng)價(jià)進(jìn)行肝活檢與外科手術(shù)患者的出血傾向，如血小板＜50×109/L，PT延長超過正常4s是肝活檢、外科手術(shù)包括肝移植的禁忌癥。
由于實(shí)驗(yàn)室使用PT試劑質(zhì)量上的不同，使得同一個(gè)患者在不同醫(yī)院測定的結(jié)果相差懸殊，造成檢測結(jié)果的不一致，影響對(duì)疾病的正確、及時(shí)診斷。因此，PT試劑的質(zhì)量成了獲得準(zhǔn)確結(jié)果及診斷的關(guān)鍵。同時(shí)，由于試劑復(fù)溶后的穩(wěn)定性差，增加浪費(fèi)，導(dǎo)致醫(yī)療單位成本增加，患者負(fù)擔(dān)加重。所以研制一種安全、可靠、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的PT試劑，無疑將對(duì)臨床診斷疾病有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種檢測凝血因子缺乏癥和監(jiān)控口服抗凝劑治療，且安全、可靠、重復(fù)性好、穩(wěn)定性佳的體外診斷試劑。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的一種臨床檢驗(yàn)?zāi)冈瓡r(shí)間(PT)測定體外診斷試劑盒，其特征在于它是由凝血活酶、緩沖液體系組成。
緩沖液體系由下述原料制成甘氨酸2～8％ 聚乙二醇-80000.4～1.0％氯化鈣8～20mM 氯化鈉 85～110mMTAPSO 20～45mMNaN3 1‰該緩沖液體系中甘氨酸的最適含量應(yīng)選為5％。
該緩沖液體系中聚乙二醇-8000的最適含量應(yīng)選為0.6％。
該緩沖液體系中氯化鈣的最適濃度應(yīng)選為13.7mM。
該緩沖液體系中氯化鈉的最適濃度應(yīng)選為100mM。
該緩沖液體系中TAPSO的最適濃度應(yīng)選為30mM。
該凝血活酶的來源是兔腦粉。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明通過兔腦粉提取凝血活酶，并用獨(dú)特的緩沖液體系調(diào)節(jié)和穩(wěn)定凝血活酶活性，與市售產(chǎn)品相比，在重復(fù)性和穩(wěn)定性方面較好。經(jīng)多家醫(yī)院臨床試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，本產(chǎn)品確實(shí)對(duì)臨床疾病診斷起到了相當(dāng)重要的作用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的設(shè)計(jì)是由凝血活酶、緩沖液體系、使用說明書組成。
該緩沖液體系是由下述含量的原料制成甘氨酸2～8％ 聚乙二醇-80000.4～1.0％氯化鈣8～20mM 氯化鈉 85～110mMTAPSO 20～45mMNaN3 1‰其中，該緩沖液體系中甘氨酸的最適含量應(yīng)選為5％，聚乙二醇-8000的最適含量應(yīng)選為0.6％，氯化鈣的最適濃度應(yīng)選為13.7mM，氯化鈉的最適濃度應(yīng)選為100mM，TAPSO的最適濃度應(yīng)選為30mM。本發(fā)明還將結(jié)合實(shí)例作進(jìn)一步詳述實(shí)施例一與市售PT試劑重復(fù)性比較將1g用丙酮脫水的兔腦粉加入20ml提取液中(含硫酸鋇0.6g、0.63％氯化鈉、0.25％曲拉通X-100)，45℃水浴振蕩15min，提取混合液再以2500rpm，離心10分鐘，以提取凝血活酶，提取液經(jīng)過分裝，冷凍干燥。緩沖液體系由下述含量的原料制成2～8％甘氨酸、0.4～1.0％聚乙二醇-8000、8～20mM CaCl2、85～110mM NaCl、20～45mM TAPSO、1‰ NaN3。
使用時(shí)，凝血活酶凍干品用一定體積的緩沖液復(fù)溶，同一正常質(zhì)控血漿(PT值10～14秒)凝血酶原時(shí)間(PT)在太平洋TS400C血凝儀上測得。(表1)表1表明，本發(fā)明所講的PT試劑與市售試劑相比，變異系數(shù)(CV)較小，重復(fù)性較好。
表1

實(shí)施例二與市售PT試劑穩(wěn)定性比較如例一所述凝血活酶凍干品用一定體積的緩沖液復(fù)溶，然后將復(fù)溶后試劑置于2～8℃保存。每天吸取一定體積的試劑，在太平洋TS400C血凝儀上測定同一正常質(zhì)控血漿(PT值10～14秒)，市售試劑同步進(jìn)行測定。(結(jié)果見表2)表2表明，本發(fā)明的PT試劑在復(fù)溶后的七天內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定，到第八天時(shí)才變化，而市售試劑在第二天時(shí)就開始變化，這一結(jié)果對(duì)臨床檢驗(yàn)科來說，尤其是中小醫(yī)院來說非常重要，因?yàn)樗梢詼p少浪費(fèi)，從而降低成本。
表2

綜上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用來限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。即凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍的內(nèi)容所作的等效變化與修飾，都應(yīng)為本發(fā)明的技術(shù)范疇。
權(quán)利要求
1.一種臨床檢驗(yàn)?zāi)冈瓡r(shí)間(PT)測定體外診斷試劑盒，其特征在于它是由凝血活酶、緩沖液體系組成。
2.按權(quán)利要求1所說的試劑盒，其特征在于緩沖液體系由下述原料制成甘氨酸2～8％ 聚乙二醇-8000 0.4～1.0％氯化鈣8～20mM氯化鈉85～110mMTAPSO 20～45 mM NaN31‰
3.按權(quán)利要求2所說的試劑盒，其特征在于緩沖液體系中甘氨酸的但最適含量應(yīng)選為5％。
4.按權(quán)利要求2所說的試劑盒，其特征在于緩沖液體系中聚乙二醇-8000的最適含量應(yīng)選為0.6％。
5.按權(quán)利要求2所說的試劑盒，其特征在于緩沖液體系中氯化鈣的最適濃度應(yīng)選為13.7mM。
6.按權(quán)利要求2所說的試劑盒，其特征在于緩沖液體系中氯化鈉的最適濃度應(yīng)選為100mM。
7.按權(quán)利要求2所說的試劑盒，其特征在于緩沖液體系中TAPSO的最適濃度應(yīng)選為30mM。
8.按權(quán)利要求1所說的試劑盒，其特征在于凝血活酶的來源是兔腦粉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種臨床檢驗(yàn)?zāi)冈瓡r(shí)間(PT)測定體外診斷試劑盒。它是由凝血活酶、緩沖液體系組成，用于凝血因子缺乏的篩選試驗(yàn)和口服抗凝劑治療的監(jiān)控。其優(yōu)點(diǎn)是安全簡便、重復(fù)性好、穩(wěn)定性佳，為臨床診斷治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，降低成本和減輕患者負(fù)擔(dān)，提高血栓與止血基礎(chǔ)研究的效率和水平。
文檔編號(hào)G01N33/50GK1952169SQ20051003062
公開日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月18日
發(fā)明者謝永華, 朱美萍 申請(qǐng)人:上海太陽生物技術(shù)有限公司