專利名稱：血液檢查方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從血液中取出規(guī)定細(xì)胞內(nèi)的成分，通過生物化學(xué)檢查，可早期準(zhǔn)確把握病態(tài)的血液檢查方法。
背景技術(shù)：
以往，取出作為血液液體部分的血漿中的成分，進(jìn)行生物化學(xué)分析的血液檢查，作為有效把握患者病態(tài)的體檢檢查方法之一，在多數(shù)醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行。
通過這種血液檢查想要把握的病態(tài)有許多種，但是，例如以糖尿病的情況為例，測(cè)定患者空腹時(shí)和飯后血液中(血漿中)的葡萄糖濃度。這樣，所測(cè)葡萄糖的濃度，即血糖值高達(dá)規(guī)定值以上時(shí)，可判定糖尿病乃至糖尿病發(fā)生的可能性很高。另外，例如是慢性呼吸器官疾病或心衰、腎衰的場(chǎng)合，可測(cè)定血液中(血漿中)的乳酸濃度，所測(cè)乳酸濃度高達(dá)規(guī)定值以上時(shí)，可以判定慢性呼吸器官疾病或心衰、腎衰發(fā)生的可能性很高。
眾所周知，人的細(xì)胞是將葡萄糖作為主要的能源，在夜間，腦，神經(jīng)、血細(xì)胞、肌肉等全身的細(xì)胞都利用糖。另一方面，肝臟由脂肪或氨基酸合成糖并放出。通常肝臟的糖放出率與全身細(xì)胞的糖利用率一致，因此血糖值為一定值(109mg/dl)以下。
這樣，由全身細(xì)胞攝入并有效利用葡萄糖的是稱作胰島素的激素。當(dāng)攝取食物時(shí)，糖質(zhì)形成葡萄糖，由小腸迅速吸收，進(jìn)入血液中，從而流遍全身。由此，當(dāng)血糖值上升時(shí)，瞬間從胰臟分泌出足量的胰島素。這樣，肝臟停止糖的釋放。另一方面，成為全身細(xì)胞攝取糖，上述飯后上升的血糖值會(huì)迅速恢復(fù)到飯前的數(shù)值。重復(fù)這種過程是健康人的血糖值的變化。
然而，盡管飯后血糖值上升，但對(duì)于所謂“胰島素分泌緩慢，或分泌量很少”的體質(zhì)的人，再加上運(yùn)動(dòng)不足或過量飲食等，胰島素的功能不斷降低時(shí)，上述葡萄糖難以攝入到細(xì)胞內(nèi)，血液中會(huì)積存過量的葡萄糖。這樣，飯后即使經(jīng)過相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，血糖值也不會(huì)降低。
這種狀況是“高血糖”狀態(tài)，通過上述以前一般的生化血液檢查方法，要想把握該高血糖狀態(tài)時(shí)，如上所述，將血液中的血漿成分作為檢測(cè)體，進(jìn)行空腹時(shí)的血糖值(FBS)和飯后的血糖值的測(cè)定。結(jié)果，例如，空腹時(shí)血漿中的血糖值在140mg/dl以上，飯后該血糖值在200mg/dl以上時(shí)，一般診斷為糖尿病(2型糖尿病)。當(dāng)這種高血糖狀態(tài)長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)視網(wǎng)膜癥、腎病等糖尿病所特有的血管障礙。另外，如果血糖值越高，其持續(xù)時(shí)間也就越長(zhǎng)，視網(wǎng)膜癥和腎病也就越惡化。
然而，近年來，使用上述以前一般的生化血液檢查，即，血漿成分中的血糖值檢查，對(duì)于診斷為糖尿病血糖值并不高的患者，心肌梗塞發(fā)病的情況增多。即，可以確認(rèn)對(duì)于所謂的糖尿病予備大軍的早期、輕癥的糖尿病患者，也動(dòng)脈硬化癥也發(fā)作、進(jìn)展。
例如，飯前的血糖值在正常范圍內(nèi)，屬于健康正常。然而，發(fā)現(xiàn)每次飯后血糖值異常增高的情況(所謂輕癥2型糖尿病)。象這樣，即使飯前血糖值在正常范圍內(nèi)，飯后血糖值異常增高時(shí)，胰島素慢于該血糖值的升高，但是，受高血糖刺激，過量分泌。當(dāng)然，對(duì)于具有運(yùn)動(dòng)習(xí)慣的患者來說，上述由胰臟分泌的胰島素將葡萄糖攝入肌肉中，但對(duì)于缺乏運(yùn)動(dòng)的患者來說，被脂肪細(xì)胞攝入。攝入脂肪細(xì)胞內(nèi)的糖變成脂防，加速了肥胖，引起高血脂癥。這樣，高胰島素血癥的持續(xù)導(dǎo)致高血壓癥。
結(jié)果，具有上述所謂胰島素分泌圖形遲緩型體質(zhì)的人，由于符合所說的「輕型糖尿病(輕癥2型)」、「稍有肥胖」、「輕度高血脂癥」、「輕度高血壓」的惡化條件，所以動(dòng)脈硬化癥容易進(jìn)展，這通過頸動(dòng)脈壁的回波檢查等，已經(jīng)被證實(shí)。事實(shí)上，據(jù)報(bào)導(dǎo)，根據(jù)最近日本的研究，觀察10年內(nèi)已診斷為糖尿病的民眾時(shí)，每10人中，就有1人并發(fā)心肌梗塞，還有1人并發(fā)腦梗塞。因此，如果直系親屬中有患糖尿病的人，在診斷為糖尿病之前，應(yīng)當(dāng)注意過量飲食和缺乏運(yùn)動(dòng)，說到此處，對(duì)于糖尿病，要求事前重視、早期掌握病態(tài)的必要性。
然而，上述將血液的血漿成分作為檢測(cè)體的以前的生化檢查方法，只不過是相同成分從作為血液細(xì)胞的紅細(xì)胞中向外部滲出，在血漿中表象，然后開始進(jìn)行分析判斷，因此無論怎樣，判定緩慢，存在未必能有效應(yīng)對(duì)上述早期掌握病態(tài)的要求的問題。
到目前為止，臨床進(jìn)行的紅細(xì)胞檢查，只有紅細(xì)胞數(shù)、血細(xì)胞比容值、血紅蛋白量的測(cè)定、網(wǎng)狀紅細(xì)胞、異常血紅蛋白的檢查等，實(shí)際上，取出紅細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)液成分，簡(jiǎn)便地進(jìn)行生化檢查的血液檢查方法還未提出。
發(fā)明公開本發(fā)明人對(duì)能夠進(jìn)行早期準(zhǔn)確把握病態(tài)的血液檢查方法進(jìn)行了悉心研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分析先期支配血漿中葡萄糖濃度的血液細(xì)胞紅細(xì)胞內(nèi)的成分狀態(tài)變化(葡萄糖濃度的升高，代謝狀態(tài)等)本身，對(duì)于掌握早期病態(tài)是十分重要的。即，為了能夠掌握本來早期的病態(tài)，作為血液細(xì)胞成分，具有將血漿中攝入的葡萄糖解糖分解的代謝功能，知道在上流側(cè)先期支配血漿中血糖值的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖濃度(血糖值狀態(tài))是非常重要的。另一方面發(fā)現(xiàn)，如果測(cè)定具有上述糖尿病及其他病態(tài)的患者的血液中氧化還原電位(ORP)，病態(tài)時(shí)，氧化還原電位處于氧化狀態(tài)，健康時(shí)，處于還原狀態(tài)。這些均成為能夠把握上述早期病態(tài)的有益判定參量，此時(shí)，上述紅細(xì)胞中乳酸濃度對(duì)確定該氧化還原電位具有很大的影響，和上述情況一樣，與該紅細(xì)胞內(nèi)的氧化還原電位一起，知道作為糖質(zhì)代謝物的丙酮酸濃度和乳酸濃度是非常重要的。本發(fā)明著眼于這樣的事實(shí)，其目的是提供一種血液檢查方法，其特別是通過測(cè)定血液的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)葡萄糖濃度、乳酸濃度和丙酮酸濃度，以及氧化還原電位等，分別利用這些參量或?qū)⑦@些參量綜合，適當(dāng)把握病態(tài)，從而對(duì)于一般血液生化檢查有效的各種病態(tài)，能從早期輕癥階段準(zhǔn)確且確實(shí)地把握病態(tài)。
本發(fā)明為達(dá)到上述目的，提供一種具有如下(a)～(h)步驟的血液檢查方法。
(a)將哺乳動(dòng)物血樣離心，分離成血漿成分和血細(xì)胞成分的步驟，(b)從該血細(xì)胞成分除去棕黃層，得到紅細(xì)胞的步驟，(c)用緩沖生理食鹽水洗滌該紅細(xì)胞的步驟，(d)向該洗凈過的紅細(xì)胞中加入緩沖生理食鹽水，得到紅細(xì)胞懸浮液的步驟，(e)將該紅細(xì)胞懸浮液離心，除去上清液成分，得到紅細(xì)胞層的步驟，(f)向該紅細(xì)胞層中加入高滲壓液，為得到含有利用浸透壓滲出的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分的懸浮液，將得到的混合物在25～40℃下保持充分時(shí)間的步驟，(g)將該懸浮液離心，收集含有上述紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分的上清液的步驟，(h)測(cè)定該上清液，確定選自葡萄糖濃度、丙酮酸濃度、乳酸濃度和氧化還原電位中至少1個(gè)因素的步驟。
根據(jù)這樣的構(gòu)成，與以前使用作為血細(xì)胞外液體成分的血漿成分進(jìn)行血液檢查的方法不同，由先期支配血漿中成分狀態(tài)的血液細(xì)胞即紅細(xì)胞內(nèi)的成分，測(cè)定血糖值，或丙酮酸值、乳酸值、氧化還原電位，在時(shí)間上，先期知道尚未在血漿側(cè)表現(xiàn)的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的血糖值上升和丙酮酸值、乳酸值、氧化還原電位的變化，這與在血漿側(cè)表現(xiàn)出相比要早。
為此，對(duì)糖尿病、慢性呼吸器官疾病、心衰、腎衰等各種病癥狀況，可作出早期診斷，并進(jìn)行準(zhǔn)確的相應(yīng)治療。
結(jié)果，如果利用本發(fā)明的血液檢查方法，則可以正確判斷利用以往由血液細(xì)胞外成分即血漿測(cè)定血糖值、丙酮酸值、乳酸值等，判定糖尿病等病態(tài)的血液檢查方法不能準(zhǔn)確判定病態(tài)的正常血糖值狀態(tài)、正常丙酮酸值或低丙酮酸值狀態(tài)、正常乳酸值或低乳酸值狀態(tài)患者的真實(shí)病態(tài)，從而能作出更準(zhǔn)確的早期診斷和早期治療。
關(guān)于本發(fā)明的血液檢查方法的詳細(xì)內(nèi)容，以下更詳細(xì)地進(jìn)行說明。


圖1是表示利用本發(fā)明的血液檢查方法，求出紅細(xì)胞內(nèi)氧化還原電位時(shí)制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的血液檢查方法，由以下(a)～(h)步驟構(gòu)成。
(a)步驟中，將靜脈血樣離心，分離成血漿成分和血細(xì)胞成分。例如，使用裝入規(guī)定量肝素或EDTA作為防止紅細(xì)胞凝固的血液凝固防止劑的采血管，從被檢者采集靜脈血。將得到的靜脈血樣(例如2ml)，優(yōu)選以130～200×g離心5～10分鐘，特別優(yōu)選以150×g離心5分鐘，從而分離成血漿成分和血細(xì)胞成分。血細(xì)胞成分是血液中的細(xì)胞成分，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等。
(b)步驟中，從該血細(xì)胞成分除去棕黃層，得到紅細(xì)胞。這時(shí)，作為易于使紅細(xì)胞和其以外的血細(xì)胞成分，即白細(xì)胞、血小板等棕黃層分離的分離促進(jìn)劑，例如，優(yōu)選向該血細(xì)胞成分中加入0.2ml濃度約25％的甲泛葡胺，將得到的混合物，優(yōu)選以800～1200×g離心7～12分鐘，特別優(yōu)選以1000×g離心10分鐘，分離成白細(xì)胞、血小板等的棕黃層和紅細(xì)胞。這樣，如果從血細(xì)胞成分中確實(shí)除去白細(xì)胞、血小板等棕黃層，則可有效地分離出紅細(xì)胞，在以后的步驟中，容易以高精度取出紅細(xì)胞中的成分，可準(zhǔn)確地測(cè)定出紅細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖、乳酸濃度。
(c)步驟中，用緩沖生理食鹽水洗滌該紅細(xì)胞。優(yōu)選向除去棕黃層的紅細(xì)胞中加入磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)，優(yōu)選以130～200×g離心5～10分鐘，特別優(yōu)選以1 50×g離心5分鐘，進(jìn)行洗滌。這樣，進(jìn)一步確實(shí)除去附著在紅細(xì)胞表面上的血漿成分和白細(xì)胞、血小板等雜質(zhì)。
(d)步驟中，向該洗凈的紅細(xì)胞中加入緩沖生理食鹽水，得到紅細(xì)胞懸浮液。優(yōu)選再次向該洗凈的紅細(xì)胞中加入磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)，使用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器，利用公知的方法，制作規(guī)定量，如2ml的血細(xì)胞比容值優(yōu)選為40～50％，特別優(yōu)選為50％的紅細(xì)胞懸浮液?；蛘?，也可以用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器，制作紅細(xì)胞數(shù)為400萬/μl～500萬/μl，例如400萬/μl的紅細(xì)胞懸浮液。使得到的紅細(xì)胞懸浮液形成難以破壞紅細(xì)胞，而且易于取出細(xì)胞內(nèi)成分的穩(wěn)定狀態(tài)。
(e)步驟中，將該紅細(xì)胞懸浮液離心，除去上清液，得到紅細(xì)胞層。將該紅細(xì)胞懸浮液優(yōu)選以130～200×g離心5～10分鐘，特別優(yōu)選以150×g離心5分鐘，除去其磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)的上清液，得到紅細(xì)胞層。
(f)步驟中，向該紅細(xì)胞層中加入高滲壓液，為得到含有由于滲透壓而滲出的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分的懸浮液，將得到的混合物在25～40℃下保持充分時(shí)間。為了易于取出紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的成分，作為高滲壓液，優(yōu)選向該紅細(xì)胞層中加入濃度為5～10重量％，優(yōu)選濃度為5重量％的食鹽水(NaCl)，使總量為2ml，將該混合物優(yōu)選在35～38℃下，特別優(yōu)選在37℃下，優(yōu)選保持7～15分鐘，特別優(yōu)選保持10分鐘。結(jié)果，通過紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)和食鹽水之間作用的滲透壓，使含有葡萄糖和乳酸成分的內(nèi)液成分與水分一起，從紅細(xì)胞中完全滲出到該食鹽水中。溫度低于25℃時(shí)，所要求的成分會(huì)從紅細(xì)胞中取出不完全，溫度超過40℃時(shí)，存在細(xì)胞內(nèi)成分變性等危險(xiǎn)。
(g)步驟中，將(f)步驟中得到的懸浮液離心，收集含有上述紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分的上清液。優(yōu)選將該紅細(xì)胞懸浮液以1500～2000×g離心7～12分鐘，特別優(yōu)選以1750×g離心10分鐘，收集上述紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分滲出的上清液成分。
(h)步驟中，測(cè)定該上清液，確定選自葡萄糖濃度、丙酮酸濃度、乳酸濃度(L-乳酸濃度(mg/dl))和氧化還原電位中的至少一個(gè)參量。
可利用生化自動(dòng)分析裝置，以公知的適宜方法，測(cè)定該上清液中葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度)、丙酮酸濃度、乳酸濃度(L-乳酸濃度)。在(d)步驟中，制作2ml血細(xì)胞比容值為50％的紅細(xì)胞懸浮液時(shí)，上述靜脈血樣的紅細(xì)胞中葡萄糖濃度、丙酮酸濃度、乳酸濃度(mg/dl)是各測(cè)定值乘以2的值。另一方面，在(d)步驟中，利用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器，制作紅細(xì)胞數(shù)為規(guī)定值的規(guī)定量紅細(xì)胞懸浮液時(shí)，上述靜脈血樣的紅細(xì)胞中葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度(mg/dl))、丙酮酸濃度(mg/dl)、乳酸濃度(L-乳酸濃度(mg/dl)能夠容易地由各測(cè)定值、用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器同時(shí)計(jì)測(cè)的平均紅細(xì)胞容積、紅細(xì)胞數(shù)以及紅細(xì)胞懸浮液量計(jì)算出。
另外，利用氧化還原電位計(jì)(ORP計(jì))以適宜的公知方法，可以測(cè)定該上清液的氧化還原電位(Rc-ORP)。在上述實(shí)驗(yàn)過程中，使用5％食鹽水制作血細(xì)胞比容值為50％的紅細(xì)胞懸浮液時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下制成。即，認(rèn)為在細(xì)胞外液即血清的氧化還原電位的正或負(fù)方向的延長(zhǎng)線上，存在細(xì)胞內(nèi)液的氧化還原電位，因而如表1所示，使用從同一個(gè)被檢者采集的血清，制作圖1所示的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)使用上述氧化還原電位計(jì)實(shí)測(cè)的氧化還原電位(ORP)，求出最終紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的氧化還原電位(Rc-ORP)。
表1

首先，使用裝入規(guī)定量血液凝固促進(jìn)劑和血清分離劑的采血管，將規(guī)定量從被檢者采集的靜脈血，例如4ml，以例如3000rpm離心約10分鐘，可以得到血清。接著分別求出血清的氧化還原電位和用5％食鹽水稀釋為2倍的該血清的氧化還原電位，將由此確定的點(diǎn)作為圖示中A點(diǎn)。接著，由將原血清用磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)稀釋為2倍的血清的氧化還原電位，和將該用磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)稀釋為2倍的血清再用5％食鹽水稀釋為2倍的血清的氧化還原電位得到的點(diǎn)作為圖示B點(diǎn)。同樣，C點(diǎn)為由將原血清用磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)稀釋為4倍的血清的氧化還原電位，和將用磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)稀釋為4倍的血清再用5％食鹽水稀釋為2倍的血清的氧化還原電位求出的點(diǎn)。將A、B、C各點(diǎn)連接，向正或負(fù)方向引出延長(zhǎng)線，將其作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，在先前的標(biāo)準(zhǔn)曲線的Y軸(將血清用5％食鹽水稀釋求出的氧化還原電位的坐標(biāo)軸)上套用細(xì)胞內(nèi)液和上述5％食鹽水的混合液的氧化還原電位的實(shí)測(cè)值，讀取由X軸的坐標(biāo)推測(cè)的細(xì)胞內(nèi)液的氧化還原電位。
另外，在上述(h)步驟中，使用上述氧化還原電位計(jì)(ORP計(jì))求出氧化還原電位(ORP)時(shí)，對(duì)測(cè)定值加上比較電極的電位。該比較電極的電位，根據(jù)此時(shí)上清液成分的溫度進(jìn)行確定，例如，該溫度在0-60℃之間，如表2所示。
表2 通過以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)施例1通過以下(a)～(i)步驟，對(duì)胰島素非依賴性糖尿病患者(MIDDM患者)37名和健康正常人52名，測(cè)定任意時(shí)刻的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度)。
步驟(a)將2ml靜脈血樣以150×g離心5分鐘，分離成血漿成分和血細(xì)胞成分。
步驟(b)向該血細(xì)胞成分中加入0.2ml濃度為25％的甲泛葡胺后，以1000×g離心10分鐘，分離成白細(xì)胞、血小板等棕黃層和紅細(xì)胞。
步驟(c)向該紅細(xì)胞中加入磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)后，以150×g離心5分鐘，進(jìn)行洗滌。
步驟(d)向該洗凈的紅細(xì)胞中加入磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)，用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器，制作2ml血細(xì)胞比容值為50％的紅細(xì)胞懸浮液。
步驟(e)將該紅細(xì)胞懸浮液以150×g離心5分鐘，除去該磷酸緩沖生理食鹽水(PBS)的上清液，得到紅細(xì)胞層。
步驟(f)向該紅細(xì)胞層中加入5重量％的食鹽水(NaCl)，使總量為2ml，將該混合物在37℃下保持10分鐘，得到懸浮液。
步驟(g)將懸浮液以1750×g離心10分鐘，得到紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的成分滲出的上清液成分。
步驟(h)測(cè)定該上清液，確定葡萄糖濃度。
另外，采用和以前一樣的方法，分別測(cè)定血液的血漿中的血糖值。
結(jié)果，胰島素非依賴性糖尿病患者的場(chǎng)合，血漿中的血糖值很高時(shí)，紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度)也很高，血糖值為350mg/dl，紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度)也達(dá)到50mg/dl，即，確認(rèn)兩者間存在正的相關(guān)性。
另一方面，正常健康成人的場(chǎng)合，血糖值達(dá)到150mg/dl時(shí)，紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度)最大為10mg/dl，確認(rèn)依然存在正的相關(guān)性。
從這些胰島素非依賴性患者和正常健康成人的全部數(shù)據(jù)可以看出，在血漿中的血糖值和紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)葡萄糖濃度(D-葡萄糖濃度)之間存在著明顯的正的相關(guān)性。
實(shí)施例2以和實(shí)施例1相同的方法，對(duì)進(jìn)行性血管營(yíng)養(yǎng)障礙患者(4歲，男性)進(jìn)行血液檢查。結(jié)果示于表3。測(cè)定1和2分別是進(jìn)行負(fù)離子照射治療前和后的測(cè)定結(jié)果。
表3

在該病例中，測(cè)定1時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ORP極高(248mV)，認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)的氧化顯著。為此，由于細(xì)胞膜的氧化，Na+/H+通道的驅(qū)動(dòng)力降低，細(xì)胞內(nèi)的pH也降低(7.13)。通常，盡管細(xì)胞內(nèi)乳酸比血中乳酸稍高，但細(xì)胞內(nèi)乳酸為10.6，比血中乳酸的16.8頗低。紅細(xì)胞中沒有TCA回路，僅有解糖體系，因此，糖分解變成丙酮酸后，變化成乳酸結(jié)束。細(xì)胞內(nèi)乳酸比血中乳酸低這一事實(shí)，意味著細(xì)胞內(nèi)的代謝降低了。即，細(xì)胞內(nèi)pH降低，ORP升高，所以細(xì)胞內(nèi)的酸性、氧化亢進(jìn)，代謝降低。這時(shí)，表示肌肉炎癥的CPK、肌紅蛋白、LDH、醛縮酶達(dá)到了顯著高的值，患者的病態(tài)極差。另一方面，測(cè)定2時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ORP低到221，細(xì)胞內(nèi)pH也接近于正常(7.24)，細(xì)胞內(nèi)沒有顯著的酸性、氧化，認(rèn)為新陳代謝良好。實(shí)際上，細(xì)胞內(nèi)乳酸和丙酮酸分別為18.4和1.2，呈現(xiàn)出比血中的這些值稍高的趨勢(shì)。不管怎么說，這些實(shí)測(cè)值比正常值高，細(xì)胞呈現(xiàn)酸性，所以需要改善。因此，研究細(xì)胞內(nèi)外的有機(jī)酸濃度，或者測(cè)定pH和ORP，可及早把握疾病的發(fā)生或病況。結(jié)果，對(duì)于測(cè)定2，CPK、肌紅蛋白、LDH、醛縮酶的值都比測(cè)定1有了顯著改善。實(shí)際上，該患者由于肌肉萎縮造成站立和行走障礙，但在測(cè)定2的階段，癥狀得到大幅度改善。
實(shí)施例3
以和實(shí)施例2相同的方法，對(duì)糖尿病患者(70歲，男性)進(jìn)行血液檢查。結(jié)果示于表4。測(cè)定1和2分別是進(jìn)行負(fù)離子照射治療前和后的測(cè)定結(jié)果。
表4

在測(cè)定1中，細(xì)胞內(nèi)乳酸為17.5，比血中的15.9稍高，由于其實(shí)測(cè)值稍微超過正常值，乍一看細(xì)胞的新陳代謝并不那么差。而且，細(xì)胞內(nèi)ORP也為229，認(rèn)為沒有氧化亢進(jìn)。然而，細(xì)胞內(nèi)pH為7.11，顯著降低，所以認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)的糖代謝處于停止?fàn)顟B(tài)。另一方面，在測(cè)定2中，由于細(xì)胞內(nèi)乳酸很高(23.8)，ORP也高達(dá)250，所以預(yù)測(cè)因細(xì)胞氧化，新陳代謝惡化。然而，由于細(xì)胞內(nèi)pH最適宜，所以認(rèn)為在該階段進(jìn)行糖代謝。實(shí)際上，血糖為309，與測(cè)定1的380相比，得到了很好的改善。
根據(jù)細(xì)胞內(nèi)外的有機(jī)酸、pH、和ORP，可以予測(cè)發(fā)病的可能性和病況的好壞。根據(jù)目前收集的數(shù)據(jù)結(jié)果，認(rèn)為發(fā)病或病況惡化時(shí)的經(jīng)過順序?yàn)棰倥c細(xì)胞內(nèi)外有機(jī)酸的實(shí)測(cè)值的平衡惡化②與細(xì)胞內(nèi)外ORP的實(shí)測(cè)值的平衡惡化③與細(xì)胞內(nèi)外pH實(shí)測(cè)值的平衡惡化參考值如下。
細(xì)胞內(nèi)ORP 235mV以下細(xì)胞內(nèi)乳酸8～16mg/dl細(xì)胞內(nèi)丙酮酸 0.5～1.2mg/dl
細(xì)胞內(nèi)pH 7.24～7.30血液ORP 130mV以下血中乳酸 6～14mg/dl血中丙酮酸0.3～0.9mg/dl血液pH7.36～7.4權(quán)利要求
1.一種血液檢查方法，其特征是包括以下步驟，即，(a)將哺乳動(dòng)物血樣離心，分離成血漿成分和血細(xì)胞成分的步驟，(b)從該血細(xì)胞成分除去棕黃層，得到紅細(xì)胞的步驟，(c)用緩沖生理食鹽水洗滌該紅細(xì)胞的步驟，(d)向該洗凈過的紅細(xì)胞中加入緩沖生理食鹽水，得到紅細(xì)胞懸浮液的步驟，(e)將該紅細(xì)胞懸浮液離心，除去上清液成分，得到紅細(xì)胞層的步驟，(f)向該紅細(xì)胞層中加入高滲壓液，為得到含有利用浸透壓滲出的紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分的懸浮液，將得到的混合物在25～40℃下保持充分時(shí)間的步驟，(g)將該懸浮液離心，收集含有上述紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分的上清液的步驟，(h)測(cè)定該上清液，確定選自葡萄糖濃度、丙酮酸濃度、乳酸濃度和氧化還原電位中至少1個(gè)因素的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1記載的血液檢查方法，其特征是，在(a)步驟中，以130～200×g的離心力，將該血樣離心5～10分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2記載的血液檢查方法，其特征是，在(b)步驟中，向該血細(xì)胞成分中加入沉淀劑，將得到的混合物以800～1200×g離心7～12分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，在(c)步驟中，向該紅細(xì)胞中加入磷酸緩沖生理食鹽水，將得到的混合物以130～200×g離心5～10分鐘，進(jìn)行洗滌。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，在(d)步驟中，向該洗凈的紅細(xì)胞中加入磷酸緩沖生理食鹽水，將得到的混合物用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器，制作成規(guī)定量的血細(xì)胞比容值為40～50％的紅細(xì)胞懸浮液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，在(e)步驟中，將該紅細(xì)胞懸浮液以130～200×g離心5～10分鐘，除去上清液成分，得到紅細(xì)胞層。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，在(f)步驟中，向該紅細(xì)胞層中加入5～10重量％的食鹽水，使總量為規(guī)定量，將該混合物在35～38℃下保持7～15分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，在(g)步驟中，將該紅細(xì)胞懸浮液以1500～2000×g離心7～12分鐘，收集上述紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分滲出的上清液成分。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，利用生化自動(dòng)分析裝置，測(cè)定該上清液中的葡萄糖濃度、丙酮酸濃度、乳酸濃度。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)記載的血液檢查方法，其特征是，利用氧化還原電位計(jì)測(cè)定該上清液中的氧化還原電位。
全文摘要
本發(fā)明涉及能早期把握病態(tài)，操作簡(jiǎn)便的血液檢查方法，可簡(jiǎn)便地測(cè)定血液紅細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖濃度、乳酸濃度、丙酮酸濃度，以及氧化還原電位等，分別利用這些參量或?qū)⑦@些參量綜合，適當(dāng)?shù)匕盐詹B(tài)，從而對(duì)一般血液生化檢查有效的各種病態(tài)，能從早期輕癥階段準(zhǔn)確而確實(shí)地把握病態(tài)。
文檔編號(hào)G01N1/28GK1605869SQ20031011839
公開日2005年4月13日 申請(qǐng)日期2003年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月9日
發(fā)明者堀口升, 堀口裕 申請(qǐng)人:堀口升