專(zhuān)利名稱(chēng)：：共聚物測(cè)定的制作方法共聚物測(cè)定領(lǐng)域在此披露的主題總體涉及對(duì)絡(luò)合的肽或多肽混合物進(jìn)行表征的方法。更具體地說(shuō)，在此披露的主題涉及基于細(xì)胞的方法，用于評(píng)價(jià)一種氨基酸聚合物的一種或多種特性。背景聚合物1是一種多肽的絡(luò)合的混合物，這些多肽從以下氨基酸的聚合中得以制備谷氨酸、賴(lài)氨酸、甘氨酸以及酪氨酸。共聚物1也被稱(chēng)為醋酸格拉默，并且具有以下結(jié)構(gòu)式(Glu，Ala，Lys，Tyr)xXCH3C00H(C5H9N04C3H7N02C6H14N202C9HuN03)xXC2H402醋酸格拉默(GA)是COPAXONE(TevaPharmaceuticalIndustriesLtd.，Israel)的活性組分，它包括合成的多肽的醋酸鹽，這些多肽包含四種自然發(fā)生的氨基酸L-谷氨酸、L-甘氨酸、L-酪氨酸、以及L-賴(lài)氨酸，其中報(bào)告的平均摩爾分?jǐn)?shù)分別是0.141、0.427、0.095、以及0.338。醋酸格拉默用于治療復(fù)發(fā)_緩解形式的多發(fā)性硬化癥(RRMS)概述本發(fā)明提供了用于評(píng)價(jià)一種候選藥劑(例如，一種氨基酸共聚物，例如共聚物-1;例如，醋酸格拉默)中的一種或多種特性的方法和組合物。在一方面，對(duì)于生理、藥效學(xué)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、或藥學(xué)特性，包括但不限于效能(potency)、特異性、穩(wěn)定性、生物活性(例如，對(duì)于作為(例如)用于治療自身免疫性和/或炎性疾病、病癥或機(jī)能障礙的藥物配制品的穩(wěn)定性)，本發(fā)明提供了用于評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物制備品的多個(gè)實(shí)施方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，在此說(shuō)明的一種方法或測(cè)定包括(a)將(i)產(chǎn)生或分泌由一種促炎分子所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)的至少一個(gè)細(xì)胞、與(ii)一定量的氨基酸共聚物、以及(iii)該促炎分子，在足以誘導(dǎo)這個(gè)或這些細(xì)胞產(chǎn)生或分泌所調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的一個(gè)濃度下以及一段時(shí)間中進(jìn)行接觸?？蓹z測(cè)一種或多種受調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(或者對(duì)于該一種或多種受調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的報(bào)告基因)的產(chǎn)生、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平，并將其與這種氨基酸共聚物的一種特性相聯(lián)系。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于評(píng)價(jià)一個(gè)氨基酸共聚物的方法包括(a)提供至少一個(gè)細(xì)胞，該細(xì)胞能夠表達(dá)由一種細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的蛋白；(b)將該至少一個(gè)細(xì)胞與一定量的這種氨基酸共聚物以及這種細(xì)胞因子在一個(gè)濃度以及一個(gè)時(shí)間段內(nèi)相接觸，該濃度以及該時(shí)間段足以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)；(c)測(cè)量所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的表達(dá)、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平；并且(d)將所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的經(jīng)測(cè)量的表達(dá)、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平與對(duì)于一種上市的醋酸格拉默的藥物制劑的一個(gè)參考值、一種細(xì)胞誘導(dǎo)特性分布或一種藥物規(guī)格進(jìn)行比較以評(píng)價(jià)這種氨基酸共聚物的一種特性。能夠表達(dá)由細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的細(xì)胞是以下細(xì)胞，與在這種細(xì)胞因子的缺失下這個(gè)細(xì)胞將要表達(dá)的相比，在暴露于足夠水平的細(xì)胞因子時(shí)這個(gè)細(xì)胞將會(huì)表達(dá)更多的這種蛋白質(zhì)。當(dāng)然，在這種細(xì)胞因子的缺失下這個(gè)細(xì)胞可以表達(dá)這種蛋白質(zhì)。這個(gè)細(xì)胞能夠表達(dá)多于一種的由該細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)。產(chǎn)生或分泌這種蛋白質(zhì)的細(xì)胞是表達(dá)這種蛋白質(zhì)的細(xì)胞。還說(shuō)明了用于評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物的一種特性的方法，包括(a)提供至少一個(gè)細(xì)胞，該細(xì)胞能夠表達(dá)由一種細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)；(b)將該至少一個(gè)細(xì)胞與一定數(shù)量的這種氨基酸共聚物以及這種細(xì)胞因子在一個(gè)濃度以及一個(gè)時(shí)間段內(nèi)相接觸，該濃度以及該時(shí)間段足以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)由這種細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的一種或多種蛋白質(zhì)；并且(c)對(duì)所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)以評(píng)價(jià)這種氨基酸共聚物的一種特性。還說(shuō)明了評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物的一種特性的方法，該方法包括(a)提供了至少一個(gè)細(xì)胞，該細(xì)胞能夠分泌或產(chǎn)生由一個(gè)細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白；(b)將該至少一個(gè)細(xì)胞與一定量的這種氨基酸共聚物以及所述細(xì)胞因子在一個(gè)濃度以及一個(gè)時(shí)間段內(nèi)相接觸，該濃度以及該時(shí)間段足以誘導(dǎo)該細(xì)胞分泌或產(chǎn)生由這種細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)；并且(c)對(duì)所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)以評(píng)價(jià)這種氨基酸共聚物的一種特性。這種氨基酸共聚物制備品的(例如，一種測(cè)試氨基酸共聚物制備品的)一種或多種特性(如效能、特異性、穩(wěn)定性、和/或生物活性)可以通過(guò)以下方法進(jìn)行評(píng)價(jià)將來(lái)自于這種測(cè)定的結(jié)果(例如，對(duì)應(yīng)于一種受調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)、產(chǎn)生、分泌、存在或水平的定性或定量的測(cè)定值)與一個(gè)參考值進(jìn)行比較，例如，預(yù)先確定的與共聚物的效能、特異性、穩(wěn)定性、和/或生物活性的特定水平相關(guān)聯(lián)的一個(gè)值，例如，預(yù)先確定的與適宜于用于治療在此說(shuō)明的疾病、失調(diào)、或機(jī)能障礙的一種藥物配置品的共聚物的效能、特異性、穩(wěn)定性、和/或生物活性的水平相關(guān)聯(lián)的一個(gè)值)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該參考值是對(duì)于一種上市的醋酸格拉默的藥物制劑的對(duì)于效能、特異性、穩(wěn)定性、和/或生物活性的一種細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布、等價(jià)范圍、或藥物規(guī)格。在其他實(shí)施方案中，該參考值是通過(guò)直接測(cè)量一種參比化合物(例如，一種參比的醋酸格拉默制劑)的一種特性所確定的一個(gè)值。在一個(gè)實(shí)施方案中，這個(gè)測(cè)試值如果在該參考值的25%、20%、15%、10%、5%、2%、1%或更小之內(nèi)則被認(rèn)為與這個(gè)參考值是可比的。在一個(gè)實(shí)施方案中，在該測(cè)定中所使用的細(xì)胞是一個(gè)白細(xì)胞，例如一個(gè)髓樣細(xì)胞，例如一個(gè)髓樣細(xì)胞系或原代細(xì)胞，例如血液?jiǎn)魏思?xì)胞(例如，T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、等等)、血液多形核細(xì)胞(例如，嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞、巨核細(xì)胞、等等)、樹(shù)突細(xì)胞、以及胸腺細(xì)胞。這個(gè)細(xì)胞可以是一個(gè)致瘤性髓樣細(xì)胞系，如THP-1、U937、SiHa、或HL-60。另外地，可以使用哺乳動(dòng)物的外周血單核細(xì)胞、連同衍生自骨髓的單核細(xì)胞以及單核細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種促炎分子是一種促炎細(xì)胞因子，例如選擇下組，其構(gòu)成為腫瘤壞死因子a(TNFa)、干擾素Y(IFNy)、白細(xì)胞介素_1P(IL-1P)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、以及白細(xì)胞介素-8(IL_8)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這種促炎分子是LPS。在一個(gè)實(shí)施方案中，由這種促炎分子所調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(在測(cè)定中檢測(cè)了它的誘導(dǎo)、產(chǎn)生、分泌、存在或水平)是一種趨化因子，例如一種由IFN-y調(diào)節(jié)的趨化因子。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種趨化因子是選擇下組，其構(gòu)成為y-干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)、干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞a-化學(xué)吸引物(I-TAC)、由y-干擾素誘導(dǎo)的單核因子(MIG)。由IFN-y所誘導(dǎo)的其他可溶性蛋白質(zhì)或細(xì)胞因子，包括那些在表l中所顯示的。受調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)、產(chǎn)生、分泌、存在或水平可直接(例如)通過(guò)一種基于抗體的方法(如ELISA)，或間接的(例如)通過(guò)領(lǐng)域內(nèi)已知的檢測(cè)對(duì)于這種蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄物的技術(shù)或通過(guò)使用一種受體基8因測(cè)定來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。在一些實(shí)施方案中，將這個(gè)或這些細(xì)胞暴露至這種氨基酸共聚物以及這種促炎細(xì)胞因子導(dǎo)致了這些由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)中的一種或多種的協(xié)同誘導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)例中，將髓樣細(xì)胞暴露至這種氨基酸共聚物(例如，醋酸格拉默)并且IFNY導(dǎo)致了由一種或多種由IFNy誘導(dǎo)的趨化因子或細(xì)胞因子(例如，IP-IO、I-TAC、MIG、和/或其他CXCR3)的協(xié)同誘導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，受調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子的誘導(dǎo)可以是超過(guò)對(duì)照值(例如，超過(guò)陰性對(duì)照，其中沒(méi)有促炎分子和/或沒(méi)有共聚物)至少5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、75倍、100倍、150倍、200倍、300倍或更多。本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備醋酸格拉默的一種藥物組合物的方法，包括制備一個(gè)批次的醋酸格拉默，通過(guò)在此說(shuō)明的一種方法來(lái)評(píng)價(jià)這種組合物的效能、特異性、生物活性和/或穩(wěn)定性，并且如果檢測(cè)到預(yù)先確定的水平的一種或多種由該細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)和/或如果將這種受調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)到參考值的80%至125%之內(nèi)(例如，至少80%、85%、90%、95%、98%、100%、110%、115%、120%、125%)的水平，則確定這種醋酸格拉默克對(duì)于藥物用途是可接受的。還說(shuō)明了用于制備包含醋酸格拉默的一種藥物組合物的方法，包括將L-丙氨酸、受芐基保護(hù)的L-谷氨酸、受三氟乙酸(TFA)保護(hù)的L-賴(lài)氨酸以及L-酪氨酸的N-羧基酸酐進(jìn)行聚合，以產(chǎn)生一種受保護(hù)的共聚物；對(duì)這種受保護(hù)的共聚物進(jìn)行處理以使這種受保護(hù)的共聚物部分地解聚并且使受芐基保護(hù)的基團(tuán)脫保護(hù)，并且使受TFA保護(hù)的賴(lài)氨酸脫保護(hù)以產(chǎn)生醋酸格拉默；并且將該醋酸格拉默分離出，其中這種改進(jìn)包括在一種細(xì)胞因子以及所分離的醋酸格拉默的樣品的存在下對(duì)一個(gè)髓樣細(xì)胞或一個(gè)原代髓樣細(xì)胞系中的由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行測(cè)量，并且將這種表達(dá)與參考值進(jìn)行比較。在本制備方法的不同實(shí)施方案中這種細(xì)胞因子是IFNY;如果所測(cè)量的表達(dá)與該參考值之間的差異在一個(gè)預(yù)先確定的范圍之內(nèi)，則這項(xiàng)改進(jìn)進(jìn)一步包括選擇這種經(jīng)純化的醋酸格拉默用于一種藥物組合物的制備；并且這項(xiàng)改進(jìn)進(jìn)一步包括制備一種藥物組合物，該組合物包括所選擇的經(jīng)純化的醋酸格拉默中的至少一部分。以上已經(jīng)對(duì)在此所披露的主題中的某些方面進(jìn)行了敘述，它們通過(guò)本披露的主題而全部或部分得以解決，在如以下在此進(jìn)行最佳說(shuō)明與所附的實(shí)例和附圖相聯(lián)系時(shí)，隨著說(shuō)明的進(jìn)行其他方面將變得明顯。附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1展示了在大概24小時(shí)內(nèi)在不同包含血清或無(wú)血清的培養(yǎng)基中在恒定的IFNY的濃度下(10ng/ml)IP-10、I-TAC、以及MIG的分泌。在50、10、2、以及0yg/ml醋酸格拉默(GA)下對(duì)10%FBS條件進(jìn)行測(cè)試。在50和0iig/mlGA下對(duì)2%FBS、0%FBS、以及X-VIV015條件進(jìn)行了分析。M表示在100iig/ml下所測(cè)定的甘露糖對(duì)照載體。柱條上方的數(shù)字表示超過(guò)該對(duì)照值(0yg/ml)的增加倍數(shù)。詳細(xì)說(shuō)明現(xiàn)在將在下文中參照附圖對(duì)在此披露的主題進(jìn)行更全面的說(shuō)明，在附圖中顯示了在此披露的主題中的實(shí)施方案中的一些、而非其全部。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)想起在此所給出的在此披露的主題中的多個(gè)變更以及其他實(shí)施方案，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言在此披露的主題涉及具有在上述說(shuō)明和附圖中所呈現(xiàn)的傳授內(nèi)容的益處。因此，應(yīng)當(dāng)理9解的是在此披露的主題不應(yīng)當(dāng)限于所披露的特定額實(shí)施方案，并且變更和其他實(shí)施方案旨在包含在所附的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。雖然在此采用了特定的術(shù)語(yǔ)，但是它們僅在屬類(lèi)和說(shuō)明性的意義上進(jìn)行使用，并且不用于限制性的目的。在長(zhǎng)期的專(zhuān)利法律條約之后，術(shù)語(yǔ)"一種"、"一個(gè)"、以及"該"當(dāng)在本申請(qǐng)(包括這些權(quán)利要求)中使用時(shí)是指"一個(gè)或多個(gè)"。因此(例如)，提及"一個(gè)樣品"包括多個(gè)樣品，除非內(nèi)容明確地指向相反處(例如，多個(gè)樣品)，以及等等。通過(guò)引用將所有公開(kāi)文獻(xiàn)、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利、以及其他參考文件全部結(jié)合在此，其程度就如同對(duì)每個(gè)單獨(dú)的公開(kāi)文獻(xiàn)、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利、以及其他參考文獻(xiàn)專(zhuān)門(mén)地以及單獨(dú)地指明通過(guò)引用進(jìn)行結(jié)合。應(yīng)當(dāng)理解的是，盡管在此參考了多個(gè)專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利、以及其他參考文獻(xiàn)，但是這種參考文獻(xiàn)并不構(gòu)成一種承認(rèn)，即這些文件中的任何一個(gè)形成了本領(lǐng)域內(nèi)通常的大體知識(shí)的部分。概況本發(fā)明提供了用于評(píng)價(jià)一種共聚物制備品的一個(gè)或多個(gè)特性的方法和組合物，該制備品可用作一種治療性制備品，例如用于治療一種自身免疫性、神經(jīng)退行性、脫髓鞘性或炎性病癥。在此說(shuō)明的這些測(cè)定可以是在本領(lǐng)域中已知的任何一種形式，包括細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定、器官培養(yǎng)測(cè)定、或離體測(cè)定。如在此所使用，"共聚物"、"氨基酸共聚物"、或"氨基酸共聚物配制品"是多肽的異質(zhì)性混合物，這些多肽由限定的多個(gè)不同的氨基酸所構(gòu)成(典型地在2至10個(gè)之間的不同的氨基酸，如在3至6個(gè)之間)。共聚物可從單獨(dú)的氨基酸的聚合作用中得以制備，或可進(jìn)行重組生產(chǎn)。術(shù)語(yǔ)"氨基酸"不局限于自然發(fā)生的氨基酸，而可以包括氨基酸的衍生物和/或氨基酸的類(lèi)似物。例如，在包括酪氨酸氨基酸的氨基酸共聚物中，這些氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)可以是高酪氨酸。而且，在兩個(gè)相鄰的殘基之間具有一個(gè)或多個(gè)非肽鍵或模擬肽的鍵的氨基酸共聚物包括在這一定義之內(nèi)?？紤]到在這種混合物中每種多肽的分子量，共聚物是不一致的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，這種氨基酸共聚物是多肽的混合物，這些多肽包括氨基酸Y、E、A、以及K;Y、F、A、以及K;V、Y、A、以及K;V、W、A、以及K;V、E、A、以及K;Y、F、A、以及K;V、W、A、以及K;W、E、A以及K，或F、E、A、以及K。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，這種氨基酸聚合物包含四種不同的氨基酸，每一個(gè)均來(lái)自以下組中的不同的一個(gè)(a)賴(lài)氨酸和精氨酸；(b)谷氨酸和天冬氨酸；(c)丙氨酸和甘氨酸；(d)酪氨酸和色氨酸。根據(jù)本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案的特定的共聚物包括多肽的混合物，這些多肽包括丙氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸、以及酪氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種共聚物包括多肽的混合物，這些多肽由氨基酸Y、E、A、以及K所構(gòu)成，也被稱(chēng)為共聚物l(Cop1)或醋酸格拉默。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這種氨基酸共聚物含有三個(gè)不同的氨基酸，每一個(gè)均來(lái)自三個(gè)以上提及的組(a)至(d)中的不同的一個(gè)，例如Y、A、以及K;Y、E、以及K;K、E、以及A;或者Y、E、以及A。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這種氨基酸共聚物包括選自下組的氨基酸，該組的構(gòu)成為丙氨酸_谷氨酸_賴(lài)氨酸_酪氨酸_丙氨酸(A-E-K-Y-A)、丙氨酸-谷氨酸-賴(lài)氨酸-纈氨酸_丙氨酸(A-E-K-V-A)、丙氨酸-谷氨酸-賴(lài)氨酸-苯丙氨酸_丙氨酸(A-E-K-F-A)、丙氨酸_賴(lài)氨酸_酪氨酸_丙氨酸_谷氨酸(A-K-Y-A-E)、谷氨酸-丙氨酸-賴(lài)氨酸-酪氨酸_丙氨酸(E-A-K-Y-A)、丙氨酸-賴(lài)氨酸-纈氨酸-丙氨酸-谷氨酸(A-K-V-A-E)、以及谷氨酸_丙氨酸_賴(lài)氨酸_纈氨酸_丙氨酸(E-A-K-V-A)、丙氨酸_賴(lài)氨酸_苯丙氨酸_丙氨酸_谷氨酸(A-K-F-A-E)、以及谷氨酸-丙氨酸-賴(lài)氨酸-苯丙氨酸_丙氨酸(E-A-K-F-A)。"促炎分子"是剌激了白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞的激活的分子，或?qū)е铝搜仔悦庖叻磻?yīng)的擴(kuò)增或傳播的基質(zhì)細(xì)胞。促炎分子可誘導(dǎo)產(chǎn)生激活標(biāo)記物(例如，CD69、CD25、CD54、CD40配體、CDllb、CD62L、CD83、CD95)、和/或其他促炎細(xì)胞因子的分泌、和/或來(lái)自免疫細(xì)胞的趨化因子的分泌(如CD4T細(xì)胞、CD8T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、以及肥大細(xì)胞)。促炎細(xì)胞因子是一種小的、分泌的蛋白質(zhì)，它具有如在此說(shuō)明的促炎分子的特性，例如IFN-y。這種定義不排除還可能在一些背景中具有抗炎性活性的分子。"趨化因子"是一種具有趨化活性的細(xì)胞因子。趨化因子的實(shí)例包括IL-8、RANTES、MIP-la、MCP-l、IP-10、Mig、I-TAC、TARC、1-309。在此說(shuō)明的不同方法可用于通過(guò)將一種測(cè)定共聚物制備品與一種或多種預(yù)先確定的參考值(如對(duì)于醋酸格拉默的效能、特異性、穩(wěn)定性、以及生物活性的藥物規(guī)格值)進(jìn)行比較來(lái)評(píng)價(jià)這種測(cè)試共聚物制備品的一種或多種特性，如效能、特異性、穩(wěn)定性、純度、以及生物活性。在一些例子中，可以通過(guò)與一種已知的藥劑進(jìn)行比較來(lái)確定參考值。這種已知的藥劑在此是指"參比藥劑"或"參比化合物"。本發(fā)明的一種優(yōu)選的參比藥劑是一種氨基酸共聚物(例如，醋酸格拉默的一種藥物制劑)，它適宜作為一種藥物配制品來(lái)進(jìn)行使用，例如它已顯示出在一種或多種自身免疫性、退行性、脫髓鞘性、和/或炎性病癥或病況中具有治療效果。提及"治療效果"旨在指該藥劑能夠預(yù)防、治療、或減輕與這種病癥或病況相關(guān)聯(lián)的癥狀。在一個(gè)實(shí)施方案中，這個(gè)參考值是對(duì)于醋酸格拉默的一種預(yù)先確定的藥物規(guī)格值。在一個(gè)實(shí)施方案中，這個(gè)參考值是醋酸格拉默的藥物制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)與外源性提供的細(xì)胞因子和共聚物1進(jìn)行共同給藥時(shí)，在不同細(xì)胞類(lèi)型中觀察到由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的協(xié)同誘導(dǎo)。如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"協(xié)同的"是指以下兩種或多種藥劑(例如，醋酸格拉默和一種細(xì)胞因子)，與每個(gè)單一藥劑單獨(dú)用的各自的效果之和相比，它們?cè)诮M合中要更加有效。這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的協(xié)同誘導(dǎo)作用可用于對(duì)一種測(cè)定共聚物制備品進(jìn)行包括生物活性的多種特性的篩選，這些特性與醋酸格拉默是可比的。醋酸格拉默已被批準(zhǔn)用于減少患有復(fù)發(fā)_緩解的多發(fā)性硬化癥的病人中復(fù)發(fā)的頻度。多發(fā)性硬化癥已被歸于一種自身免疫性疾病。醋酸格拉默已被披露用于治療其他自身免疫疾病、炎性非自身免疫疾病，并且促進(jìn)神經(jīng)再生，和/或防止或抑制原發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)損傷之后的繼發(fā)性變性。此外，醋酸格拉默已被披露為用于免疫介導(dǎo)性疾病連同與脫髓鞘相關(guān)的疾病的治療。在此披露的這些方法可用于就作為用于這些病癥中任何一種的藥物制劑的穩(wěn)定性來(lái)評(píng)價(jià)一種醋酸格拉默制劑的活性。體外測(cè)定本發(fā)明的這些方法和組合物包括用于評(píng)價(jià)一種候選藥劑(例如，一種氨基酸共聚物)的一種或多種特性的測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用體外測(cè)定對(duì)一種測(cè)試共聚物制備物進(jìn)行篩選，以評(píng)價(jià)這種共聚物制備對(duì)由一種促炎細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)的生產(chǎn)和/或分泌的作用。將在一種測(cè)試共聚物制備物的存在下由促炎細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的這種或這些蛋白質(zhì)的水平與在一種參比藥劑的存在下在相同的細(xì)胞類(lèi)型中由促炎細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的那種或那些蛋白質(zhì)的水平進(jìn)行比較。誘導(dǎo)的水平(即，定性或定量的水平)和本質(zhì)(即，蛋白質(zhì)的種類(lèi))在此是指"細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布"。這種細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布能用于評(píng)估一種氨基酸共聚物的一種或多種特性，如效能、穩(wěn)定性、特異性、以及生物活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)一種測(cè)試共聚物制備物的細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布(例如，誘導(dǎo)的水平或相似的被誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的數(shù)目、或二者皆有)在對(duì)于一種共聚物藥物組合物(例如，多個(gè)COPAXONE)的一個(gè)參考值或特性分布的大約80%與大約125%之間，包括大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%、大約100%、大約105%、大約110%、大約115%、大約120%、達(dá)到大約125%時(shí)，則將這種測(cè)定共聚物制備物說(shuō)明為是適宜作為一種藥物組合物的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)一種測(cè)試共聚物制備物的細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布(例如，誘導(dǎo)的水平或相似的被誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的數(shù)目、或二者皆有)在一種參比共聚物制備物(例如，COPAXONE)的大約80%與大約125%之間，包括大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%、大約100%、大約105%、大約110%、大約115%、120%、達(dá)到大約125%時(shí)，則將這種測(cè)試共聚物制備物說(shuō)明為是具有與這種參比共聚物制備物基本上相同的特性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種參考物是一種氨基酸共聚物，該氨基酸共聚物在一種或多種自身免疫性或炎性病癥方面具有已知的治療效果。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，這種參比藥劑是醋酸格拉默。這個(gè)參考值可以是一個(gè)預(yù)先確定的值，該值對(duì)應(yīng)于醋酸格拉默的某個(gè)水平的效能、純度、穩(wěn)定性或其他活性。將一個(gè)或多個(gè)能夠產(chǎn)生或分泌由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的細(xì)胞與一種候選藥劑或一種參比藥劑在一個(gè)濃度以及一個(gè)時(shí)間段內(nèi)相接觸，該濃度以及該時(shí)間段足以誘導(dǎo)這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)。這種測(cè)定可包括兩種或多種細(xì)胞類(lèi)型，它們可以是原代細(xì)胞、細(xì)胞系、或它們的組合。對(duì)于誘導(dǎo)由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)所足夠的這種濃度和時(shí)間是以下情況，即這導(dǎo)致了這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的可檢測(cè)的產(chǎn)生或分泌高于缺失這種候選或參比藥劑時(shí)該蛋白質(zhì)的水平(例如，高于由這種細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的基線(xiàn)水平)。這種候選藥劑的濃度可以按照以下濃度存在于測(cè)定培養(yǎng)基中至少約0.05iig/mL、至少約1yg/mL、至少約2iig/mL、至少約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約15、約20、約25、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、約110、約125、約150、約175、約200、約225、約250、約275、約300、約375、約400、約425、約450、約475、至少約500iig/mL或更大，只要該濃度沒(méi)有達(dá)到細(xì)胞毒性的濃度?？梢杂媚軌蚍置诨虍a(chǎn)生這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)將這種候選藥劑或參比藥劑孵育(即，"接觸")至少約1小時(shí)、至少約1.5小時(shí)、至少約2小時(shí)、至少約3小時(shí)、至少約4小時(shí)、約5小時(shí)、約6小時(shí)、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約40、約45、約48或更多小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，可外源性地將以上說(shuō)明的調(diào)節(jié)這種蛋白質(zhì)表達(dá)的促炎細(xì)胞因子的量加至這種測(cè)定培養(yǎng)基中?？梢栽诩尤脒@種測(cè)試或參比共聚物制備物之前、同時(shí)、或之后加入這種細(xì)胞因子。在一個(gè)實(shí)施方案中，在這種測(cè)試或參比共聚物制備物加入的同時(shí)加入這種細(xì)胞因子。這種細(xì)胞因子可以按照以下濃度存在于測(cè)定培養(yǎng)基中至少約lng/ml、12至少約2ng/ml、至少約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約15、約20、約25、約30、約40、至少約50ng/ml或更大，只要該濃度沒(méi)有達(dá)到細(xì)胞毒性的濃度。在一些實(shí)施方案中，這種細(xì)胞因子異源性地表達(dá)于這種測(cè)定的宿主細(xì)胞中。這種異源性的基因可在一種組成型或一種可誘導(dǎo)性的啟動(dòng)子的控制之下。在本發(fā)明的不同方面，在此說(shuō)明的調(diào)節(jié)一種或多種蛋白質(zhì)的產(chǎn)生和分泌的細(xì)胞因子是一種促炎細(xì)胞因子。促炎細(xì)胞因子典型地與一種ThlT細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)聯(lián)。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種促炎細(xì)胞因子選自下組，該組包括但不局限于TNFa、干擾素Y(IFNY)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-113(IL-113)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、白細(xì)胞介素-IO(IL-IO)、白細(xì)胞介素-13(IL-13)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)、白細(xì)胞介素-18(IL-18)、白細(xì)胞介素-23(IL-23)、以及淋巴毒素-a。在此處說(shuō)明的這些測(cè)定中，這種細(xì)胞因子按照以下濃度而存在，該濃度足以誘導(dǎo)由那種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)的產(chǎn)生或分泌。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)包括由干擾素Y調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(例如，趨化因子)，包括Y-干擾素-誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)、干擾素誘導(dǎo)的T細(xì)胞a化學(xué)吸引物(I-TAC)、以及由Y_干擾素誘導(dǎo)的單核因子(MIG)。在CNS損傷中IP-10、MIG、以及I-TAC表達(dá)于實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎(EAE)以及多發(fā)性硬化癥(MS)，并且結(jié)合這些配體(CXCR3)的受體表達(dá)于浸潤(rùn)EAE和MS損傷的T細(xì)胞上連同在處于惡化過(guò)程中MS患者的腦脊液和外周的T細(xì)胞上(綜述于Kleinetal.(2004)JImmunol172:550-559)。細(xì)胞在本發(fā)明的這些方法中使用多種細(xì)胞類(lèi)型，只要它們能夠產(chǎn)生由在此說(shuō)明的這些細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)。包括在內(nèi)(沒(méi)有限制)的是以下細(xì)胞涉及炎癥反應(yīng)的細(xì)胞，例如髓樣細(xì)胞系或原代細(xì)胞(例如，血液?jiǎn)魏思?xì)胞(例如，T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、等等)、血液多形核細(xì)胞(例如，嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞、巨核細(xì)胞、等等)、以及樹(shù)突細(xì)胞)；以及胸腺上皮細(xì)胞。致瘤細(xì)胞系如THP-1、U937、SiHa、以及HL-60也包括在內(nèi)。其他有用的細(xì)胞可包括上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、以及內(nèi)皮細(xì)胞(例如，原代微脈管系統(tǒng)、HUVEC、主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞)。額外地，還可使用哺乳動(dòng)物的外周血單核細(xì)胞連同衍生自骨髓的單核細(xì)胞以及通過(guò)淘洗或負(fù)性磁珠分離而分離的單核細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)條件細(xì)胞培養(yǎng)基的配方在文獻(xiàn)中是熟知的，并且多種是可商購(gòu)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，將這些測(cè)定中的細(xì)胞培養(yǎng)于沒(méi)有血清的培養(yǎng)基中。用于制備沒(méi)有血清的培養(yǎng)基的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。這些成分可包括氨基酸(D和/L-氨基酸)，如谷氨酰胺、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴(lài)氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、以及纈氨酸以及它們的衍生物；酸性可溶的亞基團(tuán)如硫胺素、抗壞血酸、三價(jià)鐵化合物、二價(jià)鐵化合物、嘌呤、谷胱甘肽以及磷酸二氫鈉。額外地成分可包括糖類(lèi)、脫氧核糖、核糖、核苷酸、水溶性維生素、核黃素、鹽類(lèi)、痕量金屬、脂類(lèi)、醋酸鹽、磷酸鹽、HEPES、酚紅、丙酮酸鹽以及緩沖劑。經(jīng)常在培養(yǎng)基配方中使用的其他組分包括脂溶性維生素(包括維生素A、D、E和K)、類(lèi)固醇和它們的衍生物、膽固醇、脂肪酸和脂類(lèi)、Tween80、2_巰基乙醇、連同多種補(bǔ)充物，包括血清(胎、馬、小牛、等等)、蛋白質(zhì)(胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長(zhǎng)因子、激素、等等)、抗生素(慶大霉素、青霉素、鏈霉素、兩性霉素B、等等)、全蛋超濾物、以及附著因子(纖連蛋白、玻連蛋白、膠原、層粘連蛋白、生腱蛋白、等等)。確定對(duì)在本發(fā)明的這些方法中有用的細(xì)胞進(jìn)行繁殖的適當(dāng)條件是普通技術(shù)人員所充分熟知的。這些細(xì)胞可以按照本領(lǐng)域內(nèi)任何一種已知的方式進(jìn)行培養(yǎng)，包括懸浮培養(yǎng)、單層培養(yǎng)、在珠子上培養(yǎng)或立體培養(yǎng)。細(xì)胞和組織培養(yǎng)的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，并且將其說(shuō)明于(例如)Cell&TissueCulture-LaboratoryProcedures;Freshney(1987)，CultureofAnimalCells:AMa皿alofBasicTechniques中。本發(fā)明的實(shí)踐將采用(除非另外指明)細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)、轉(zhuǎn)基因生物學(xué)、微生物學(xué)、重組DNA、以及免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些技術(shù)史是在本領(lǐng)域之內(nèi)。此類(lèi)技術(shù)在文獻(xiàn)中進(jìn)行了充分地解釋。參見(jiàn)例如Sambrooketal.，ed.(2001)MolecularCloningALaboratoryManual(3dLabEdition;ColdSpringHarborLaboratoryPress);Wuetal.，eds.，MethodsInEnzymology，Vols.154and155;MayerandWalker,eds.(1988)ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology(AcademicPress,London);Herzenberg，WeirandBlackwell，eds.，Q996)Weir'sHandbookOfExperimentalImmunology,VolumesI_IV。蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的測(cè)量如在此說(shuō)明的由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)可按照多種不同的方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，這些方法中的每一種對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是已知的。這種測(cè)量可以是定性或定量的，只要這種測(cè)量能夠指明在樣品中所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的水平是處于、高于、或低于參考值。可以將這種由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)中的一種或多種的誘導(dǎo)的水平、連同被誘導(dǎo)的特定的蛋白質(zhì)(在此是指"細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布")與一種參比細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布(例如，預(yù)先確定的對(duì)應(yīng)于一種特定活性或活性的水平的特性分布)或與一種參比藥劑以及一種陰性對(duì)照藥劑中的一種或多種的細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布進(jìn)行比較。陰性對(duì)照藥劑可以是例如，不具有效能或活性的藥劑，或在所利用的測(cè)定的細(xì)胞類(lèi)型中不誘導(dǎo)由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)生產(chǎn)的藥劑、或二者皆有。這種細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布可以被用作一種生物特性或活性的一種量度。諸如效能、特異性、以及穩(wěn)定性的特性可使用這種細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于本發(fā)明的目的，通過(guò)評(píng)價(jià)一種或多種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)水平對(duì)效能和生物活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如，基于這些結(jié)果通過(guò)鑒定或區(qū)分這種經(jīng)測(cè)定的制備物是否為醋酸格拉默對(duì)"特異性"進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)將這種候選藥劑的細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布與這種參比藥劑隨時(shí)間進(jìn)行比較來(lái)對(duì)穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。在一些實(shí)施方案中，這種細(xì)胞誘導(dǎo)特性分布可作為一種參比藥劑的等效度量方式而進(jìn)行使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用一種免疫學(xué)的方法對(duì)這種由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)進(jìn)行檢測(cè)。可用于檢測(cè)由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的免疫學(xué)方法包括但不限于，使用基于免疫學(xué)技術(shù)的競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定系統(tǒng)，如蛋白質(zhì)免疫印跡法、放射性免疫測(cè)定、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)、多重ELISA、"三明治"免疫測(cè)定、免疫沉淀測(cè)定、沉淀素反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀素反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測(cè)定、凝集測(cè)定、補(bǔ)體結(jié)合測(cè)定、免疫放射測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、蛋白A免疫測(cè)定、以及類(lèi)似物。此類(lèi)測(cè)定在本領(lǐng)域是例行并已知的(參見(jiàn)例如，Ausubeletal，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.l，JohnWiley&Sons,14Inc.，NewYork,通過(guò)引用將其全文結(jié)合在此)。以下對(duì)示例性的免疫測(cè)定進(jìn)行簡(jiǎn)要說(shuō)明(但并不旨在進(jìn)行限制)。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)方案通常包括從測(cè)定培養(yǎng)基中獲得上清液(可任選地補(bǔ)充有蛋白磷酸鹽和/或蛋白酶抑制劑，例如乙二胺四乙酸(EDTA)、苯甲基磺酰氟化物(phenylmethanesulphonylfluoride)(PMSF)、抑肽酶、釩酸鈉)、將所感興趣的結(jié)合分子(即，一種分子，如一種抗體，它與所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合)加至該上清液中、在大約4t:孵育一段時(shí)間(例如，1至4小時(shí))、將蛋白A和/或蛋白G瓊脂糖凝膠珠加至細(xì)胞裂解液中，在大約4t:孵育約1小時(shí)或更多、在緩沖液中對(duì)這些珠子進(jìn)行洗滌并且將這些珠子懸浮于十二烷基硫酸鈉(SDS)/樣品緩沖液中。結(jié)合所感興趣的分子以便使一種特定的抗原發(fā)生沉淀的能力可通過(guò)例如，蛋白質(zhì)免疫印跡法分析進(jìn)行評(píng)估。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道以下參數(shù)，這些參數(shù)可被修改以增加這種結(jié)合分子與一種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的結(jié)合并且減小背景(例如，用瓊脂糖凝膠珠子對(duì)上清液進(jìn)行預(yù)清除)。對(duì)于有關(guān)免疫沉淀的實(shí)驗(yàn)方案的進(jìn)一步討論，參見(jiàn)例如Ausubeletal，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1，JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork在10.16.l，通過(guò)引用將其全文結(jié)合在此。蛋白質(zhì)免疫印跡法通常包括從測(cè)定上清液中制備蛋白質(zhì)樣品、在聚丙烯酰胺凝膠(例如，8%-20%SDS-PAGE，取決于抗原的分子量)中對(duì)這些蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行電泳、將這種蛋白質(zhì)樣品從聚丙烯酰胺凝膠轉(zhuǎn)移至一張膜(如硝酸纖維素、PVDF或尼龍)上、在封閉液(例如，具有3XBSA或脫脂奶粉的PBS)中對(duì)這張膜進(jìn)行封閉、在洗滌緩沖液(例如，PBS-Tween20)中對(duì)這張膜進(jìn)行洗滌、用經(jīng)封閉緩沖液稀釋的所感興趣的結(jié)合蛋白(例如，對(duì)于所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)特異的一種抗體)對(duì)這張進(jìn)行封閉、在洗滌緩沖液中對(duì)這張膜進(jìn)行洗滌、用經(jīng)封閉緩沖液稀釋的偶聯(lián)有一種酶底物(例如，辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶)或放射性分子(如，32P或1251)的抗體(該抗體識(shí)別所結(jié)合的分子，如二抗)對(duì)這張膜進(jìn)行封閉、在洗滌緩沖液中對(duì)這張膜進(jìn)行洗滌、并且檢測(cè)這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的存在。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該知道以下參數(shù)，這些參數(shù)可被修改以增加所檢測(cè)的信號(hào)或降低背景噪音。對(duì)于有關(guān)蛋白質(zhì)免疫印跡法的實(shí)驗(yàn)方案的進(jìn)一步的討論，參見(jiàn)例如Ausubeletal，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1，JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork在10.8.1，通過(guò)引用將其全文結(jié)合在此。ELISA包括制備由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)、用所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)或一種包括所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的測(cè)定上清液對(duì)96孔微量滴定板的空進(jìn)行包被、將偶聯(lián)有一種可檢測(cè)的化合物(如一種酶底物(例如，辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶)的所感興趣的結(jié)合分子加至孔中并孵育一段時(shí)間、并檢測(cè)這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的存在。在ELISA中，這種所感興趣的結(jié)合蛋白不必與一種可檢測(cè)的化合物相偶聯(lián)；相反，可將偶聯(lián)至一種可檢測(cè)的化合物的抗體(它識(shí)別所感興趣的結(jié)合分子)加至孔中。此外，不同于用所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)或一種包括所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的測(cè)定上清液對(duì)該孔進(jìn)行包被，可將這種結(jié)合分子包被至該孔中。在此情況下，可以在將所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)或一種包括所感興趣的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的測(cè)定上清液加至經(jīng)包被的孔中之后加入偶聯(lián)有一種可檢測(cè)的化合物的抗體。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道以下參數(shù)，這些參數(shù)可被修改以增加所檢測(cè)的信號(hào)連同本領(lǐng)域15已知的其他ELISA的變化。對(duì)于有關(guān)ELISA的進(jìn)一步討論，參見(jiàn)例如Ausubeletal，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vol.1，JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork，在11.2.l通過(guò)引用將其全文結(jié)合在此。不同的ELISA試劑盒可以從多個(gè)商業(yè)來(lái)源中獲得，如BioSourceInternational(Montreal,Canada)、BDBiosciences(SanJose，CA)、R&DSystems(Minneapolis,MN)、MilliporeCorp.(Bedford,MA)以及Pierce(Rockville，IL)。還可以使用基于親和力的利用與正在進(jìn)行測(cè)量的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(一種"親和試劑"，如一種抗體或適體)進(jìn)行特異性結(jié)合的分子的測(cè)量，連同其他技術(shù)，如基于光譜學(xué)的技術(shù)(例如，基質(zhì)輔助激光解吸離子化_飛行時(shí)間(或MALDI-T0F)光譜學(xué))?；谟H和力的技術(shù)包括基于抗體的測(cè)定(如以上說(shuō)明的免疫測(cè)定)以及利用適體(與其他分子特異性結(jié)合的核酸分子)(如EL0NA)的測(cè)定。額外地，還可以考慮利用抗體和適體的測(cè)定(例如，一種三明治式的測(cè)定，利用抗體進(jìn)行捕獲并利用適體進(jìn)行檢測(cè))。一般而言，在幾乎所有形式的免疫測(cè)定中適體可被抗體代替，盡管適體允許其他測(cè)定形式，如使用核酸擴(kuò)增技術(shù)(如PCD(U.S.Pat.No.4，683，202)或帶有復(fù)合引物的等溫?cái)U(kuò)增(U.S.Pat.Nos.6，251，639和6，692，918))的結(jié)合適體的擴(kuò)增?；谟H和力的測(cè)定可以處于競(jìng)爭(zhēng)或直接反應(yīng)的形式，利用三明治型的形式，并且可進(jìn)一步是異質(zhì)性(例如，利用固體支持物)或同質(zhì)性的(例如，發(fā)生在一個(gè)單一的相中)和/或利用免疫沉淀反應(yīng)。大多數(shù)測(cè)定涉及使用經(jīng)標(biāo)記的親和力試劑(例如，抗體、多肽、或適體)；這些標(biāo)記物可以是，例如酶性的，熒光的、化學(xué)發(fā)光的、放射性的、或染料性的分子。將這些信號(hào)從探針中進(jìn)行擴(kuò)增的測(cè)定也是已知的；它們的實(shí)例是利用生物素和抗生物素蛋白、以及經(jīng)酶標(biāo)記的以及介導(dǎo)性免疫測(cè)定(如，ELISA和EL0NA測(cè)定)的測(cè)定。在一個(gè)異質(zhì)性的形式中，這種測(cè)定利用了兩相(典型地是水性液體和固體)。典型地，一種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)特異的親和力試劑與一種固體支持物相連接以便促進(jìn)這種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)與樣品的主體分開(kāi)。在反應(yīng)一段時(shí)間(該時(shí)間足以允許形成親和力試劑/由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的復(fù)合物)之后，在檢測(cè)所結(jié)合的多肽之前典型地對(duì)包含這種抗體的固體支持物或表面進(jìn)行洗滌。在這種測(cè)定中用于測(cè)量由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的親和力試劑可提供在一個(gè)支持物(例如，固體或半固體)上；替代性地，樣品中的多肽可被固定在一種支持物或表面上?？墒褂玫闹С治锏膶?shí)例是硝酸纖維素(例如，以膜或微量滴定孔的形式)、聚氯乙烯(例如，在薄片或微量滴定孔中)、聚苯乙烯膠乳(例如，在珠子或微量滴定板中)、聚偏二氟乙烯、重氮化的紙、尼龍膜、活化的珠子、玻璃以及蛋白A珠。用于這些測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)的以及競(jìng)爭(zhēng)性形式在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。陣列型的異質(zhì)性測(cè)定適宜于在利用多種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)來(lái)實(shí)施本發(fā)明的這些方法時(shí)測(cè)量由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的水平。在本發(fā)明的這些方法的實(shí)施中所使用的陣列型測(cè)定一般會(huì)利用具有兩種或多種捕獲試劑的固體底物，這些捕獲試劑對(duì)于與處于預(yù)先測(cè)定的模式(例如，網(wǎng)格)的底物相結(jié)合的不同的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)而言是特異的。將這種樣品(例如，測(cè)定上清液)施用至底物上并且通過(guò)這些捕獲試劑將樣品中的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)合。在去除該樣品(并進(jìn)行適當(dāng)洗滌)之后，使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)試劑的混合物對(duì)所結(jié)合的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，這些檢測(cè)試劑與不同的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合。這種檢測(cè)試劑的結(jié)合一般使用一種可視系統(tǒng)(如一種基于熒光染色的系統(tǒng))來(lái)完成。因?yàn)檫@些捕獲試劑被安置在處于預(yù)先測(cè)定的模式的底物上，所以陣列型測(cè)定提供了檢測(cè)多種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的優(yōu)勢(shì)，而不需多重性檢測(cè)系統(tǒng)。在一種均質(zhì)性形式中，這種測(cè)定發(fā)生在一個(gè)單一的相(例如，水性液相)中。典型地，用一種親和力試劑對(duì)這種樣品進(jìn)行孵育，這種親和力試劑對(duì)于處于溶液中的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)而言是特異的。例如，可能正是處于將所形成的任何一種親和力試劑/抗體復(fù)合物進(jìn)行沉淀的條件之下。用于這些測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)的以及競(jìng)爭(zhēng)性的形式在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的(直接反應(yīng))形式中，直接對(duì)由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)/親和力試劑的復(fù)合物進(jìn)行監(jiān)測(cè)。這可以通過(guò)以下方法來(lái)完成，例如確定一種經(jīng)標(biāo)記的檢測(cè)試劑的量，該檢測(cè)試劑與由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)/親和力試劑的復(fù)合物相結(jié)合。在一種競(jìng)爭(zhēng)性的形式中，通過(guò)監(jiān)測(cè)對(duì)該復(fù)合物中已知量值的經(jīng)標(biāo)記的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(或其他競(jìng)爭(zhēng)性配體)的結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性作用來(lái)推導(dǎo)出樣品中由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的量值。結(jié)合或復(fù)合物形成的量值可進(jìn)行定性或定量地確定。除了免疫測(cè)定，可通過(guò)評(píng)價(jià)編碼了這些由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的基因的表達(dá)、或報(bào)告基因的表達(dá)的模式而對(duì)誘導(dǎo)進(jìn)行測(cè)量。例如，可通過(guò)Northern分析、PCR、RT-PCR、TaqMan分析、核糖核酸酶保護(hù)測(cè)定、FRET檢測(cè)、監(jiān)測(cè)一種或多種分子信標(biāo)、與一個(gè)寡核苷酸陣列進(jìn)行雜交、與一個(gè)cDNA陣列進(jìn)行雜交、與一個(gè)多核苷酸陣列進(jìn)行雜交、與一個(gè)液態(tài)的微陣列進(jìn)行雜交、與一個(gè)微電陣列(microelectricarray)進(jìn)行雜交、cDNA測(cè)序、克隆雜交、cDNA片段指紋圖譜、以及類(lèi)似物而對(duì)表達(dá)的模式進(jìn)行評(píng)價(jià)。所選擇的特定的方法將取決于以下因素，如所回收的RNA的量值、技術(shù)人員的偏好、可供使用的試劑和設(shè)備、檢測(cè)器、以及類(lèi)似物。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，檢測(cè)這種信號(hào)的模式將取決于在測(cè)定中所利用的確切的檢測(cè)系統(tǒng)。例如，如果利用了一種經(jīng)放射性標(biāo)記的檢測(cè)試劑，則使用以下技術(shù)將對(duì)該信號(hào)進(jìn)行測(cè)量，這種技術(shù)能夠?qū)?lái)自該樣品的信號(hào)進(jìn)行定量或能夠?qū)?lái)自該樣品的信號(hào)與來(lái)自參比樣品的信號(hào)進(jìn)行比較，如閃爍計(jì)數(shù)法、放射自顯影法(典型地與掃描光密度測(cè)定法相組合)、以及類(lèi)似方法。如果使用了一種化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)系統(tǒng)，于是典型地使用一個(gè)光度計(jì)來(lái)測(cè)量該信號(hào)。用于檢測(cè)來(lái)自檢測(cè)系統(tǒng)的信號(hào)的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的并且不需要在這里進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。在對(duì)多于一種的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)量時(shí)，這個(gè)樣品被分成多個(gè)等分部分，其中將分開(kāi)的等分部分用于測(cè)量不同的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(盡管考慮了將這種樣品分成多個(gè)等分部分以便允許對(duì)一個(gè)特定樣品中的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的水平進(jìn)行多重確定)。替代性地，可對(duì)該樣品(或來(lái)自其中的一個(gè)等分部分)進(jìn)行測(cè)試以便使用一種測(cè)定來(lái)確定在單一反應(yīng)中多個(gè)由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的水平，這種測(cè)定能夠測(cè)量在一個(gè)單一的測(cè)定(如一種陣列類(lèi)型的測(cè)定或利用多重性檢測(cè)技術(shù)的測(cè)定(例如，一個(gè)利用標(biāo)記有不同的熒光染料標(biāo)記物的測(cè)定試劑的測(cè)定)中不同的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的逐個(gè)的水平。進(jìn)行"重復(fù)的"測(cè)量在本領(lǐng)域內(nèi)是常見(jiàn)的。重復(fù)的測(cè)量通常通過(guò)以下方法而獲得將一個(gè)樣品分解成多個(gè)等分部分，并分開(kāi)地測(cè)量相同的測(cè)定系統(tǒng)中的分開(kāi)的反應(yīng)中的這種或這些生物標(biāo)記物。重復(fù)的測(cè)量對(duì)于本發(fā)明的這些方法而言不是必需的，但本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方案會(huì)利用重復(fù)的測(cè)試，特別是二重或三重測(cè)定。在一些實(shí)施方案中，使用從相同的細(xì)胞培養(yǎng)物中獲得的細(xì)胞的分開(kāi)的等分部分來(lái)對(duì)這種參比試劑和候選試劑進(jìn)行測(cè)定。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用同一批次的細(xì)胞對(duì)這種參比試劑(和/或陰性對(duì)照)或候選試劑進(jìn)行測(cè)定。在這個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)每種試劑測(cè)定不同的次數(shù)，在多次測(cè)量之間替換測(cè)定培養(yǎng)基，并且允許這些細(xì)胞在每次測(cè)量之后恢復(fù)到適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度?？梢允褂萌魏我环N能夠執(zhí)行這些方法和/或記錄這些結(jié)果的裝置來(lái)執(zhí)行在此說(shuō)明的這些方法和/或?qū)@些結(jié)果進(jìn)行記錄?？蛇M(jìn)行使用的裝置的實(shí)例包括但不限于電子計(jì)算性裝置，包括所有類(lèi)型的計(jì)算機(jī)。在執(zhí)行在此說(shuō)明的這些方法和/或?qū)⑵溆涗浻谟?jì)算機(jī)時(shí)，可進(jìn)行使用以便將該計(jì)算機(jī)配置為執(zhí)行這些方法的步驟的計(jì)算機(jī)程序可被包含在任何一種能夠包含該計(jì)算機(jī)程序的計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)中?？蛇M(jìn)行使用的計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)的實(shí)例包括但不限于磁盤(pán)、CD-R0M、DVD、R0M、RAM、以及其他記憶或計(jì)算機(jī)存儲(chǔ)裝置?？蛇M(jìn)行使用以便將該計(jì)算機(jī)配置為執(zhí)行這些方法的步驟和/或?qū)@些結(jié)果進(jìn)行記錄的計(jì)算機(jī)程序還可提供于整個(gè)電子網(wǎng)絡(luò)中，例如整個(gè)英特網(wǎng)、一個(gè)內(nèi)部網(wǎng)、或其他網(wǎng)絡(luò)。將一個(gè)測(cè)量值與一個(gè)參考值進(jìn)行比較的方法可以按照對(duì)于所討論的由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的任何一種適合于該測(cè)量值和參考值的類(lèi)型的常規(guī)方式來(lái)進(jìn)行。如以上所討論，"測(cè)量"可使用定性或定量的測(cè)量技術(shù)來(lái)進(jìn)行，并且將一個(gè)測(cè)量值與一個(gè)參考值進(jìn)行比較的方式可根據(jù)所采用的測(cè)量技術(shù)而進(jìn)行變化。例如，當(dāng)將一個(gè)定性的比色測(cè)定用于測(cè)量由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的水平時(shí)，可通過(guò)對(duì)已著色的反應(yīng)產(chǎn)物的強(qiáng)度進(jìn)行視覺(jué)比較、或通過(guò)將來(lái)自這種已著色的反應(yīng)的產(chǎn)物的密度測(cè)量或光譜測(cè)量的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(例如，將衍生自該測(cè)量裝置的數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)或圖像數(shù)據(jù)(如直方圖)進(jìn)行比較)來(lái)對(duì)這些水平進(jìn)行比較。然而，預(yù)期的是在本發(fā)明的這些方法中所使用的測(cè)量值最常見(jiàn)地將會(huì)是定量值(例如，濃度的定量測(cè)量，如每毫升樣品中由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的納克數(shù)、或絕對(duì)量)。在其他實(shí)例中，測(cè)量值是定性的。如對(duì)于定性測(cè)量，可通過(guò)審查這些數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)、或通過(guò)審查這些數(shù)據(jù)的表述(例如，審查圖像表述，如柱形圖或線(xiàn)形圖)來(lái)進(jìn)行這種比較。測(cè)量值如果它是一個(gè)參考值的大約80%至大約125%，則通常被認(rèn)為是與該參考值基本上相似。進(jìn)行比較的方法可以是手動(dòng)過(guò)的(如，由該方法的實(shí)施者進(jìn)行視覺(jué)觀察)或者它可以是自動(dòng)的。例如，測(cè)定裝置(如，用于測(cè)量化學(xué)發(fā)光信號(hào)的光度計(jì))可包括電路或軟件，它使測(cè)量裝置能夠?qū)τ谝环N由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)來(lái)對(duì)一個(gè)測(cè)量值與一個(gè)參考值進(jìn)行比較。替代性地，分開(kāi)的裝置(例如，一種數(shù)字計(jì)算機(jī))可用于對(duì)這種或這些測(cè)量值與這種或這些參考值進(jìn)行比較。用于比較的自動(dòng)裝置可包括對(duì)于正在測(cè)量的這種或這些由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的所儲(chǔ)存的參考值，或者它們可將這種或這些測(cè)量值與衍生于同時(shí)進(jìn)行測(cè)量的參比樣品(例如，醋酸格拉默樣品)的參考值進(jìn)行比較。如對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言應(yīng)當(dāng)是明顯的，在對(duì)于所測(cè)試的這種或這些生物標(biāo)記物而進(jìn)行測(cè)量時(shí)，與該參考值進(jìn)行比較的測(cè)量值是考慮了這些重復(fù)測(cè)量的一個(gè)值。通過(guò)將這些測(cè)量值的平均值或中位值作為"測(cè)量值"進(jìn)行使用而考慮了這些重復(fù)的測(cè)量。制備醋酸格拉默的方法本發(fā)明的這些方法和組合物用于評(píng)價(jià)一個(gè)批次的醋酸格拉默的一種或多種特性。這些方法包括制備一個(gè)批次的醋酸格拉默、使用在此說(shuō)明的測(cè)定來(lái)評(píng)價(jià)穩(wěn)定性、特異性、效能、以及生物活性中的一種或多種、并且將該批次的醋酸格拉默的特性與一個(gè)參比化合物(例如，一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化批次的醋酸格拉默，例如已被批準(zhǔn)用于治療性用途的醋酸格拉默)的特性或?qū)τ谝环N參比化合物的參考值(例如，一種用于醋酸格拉默的藥物規(guī)格)進(jìn)行比較。如果檢測(cè)到一個(gè)預(yù)先確定水平的一種或多種由細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的蛋白值，則將這批次的醋酸格拉默說(shuō)明為是對(duì)于藥物用途是可接受的。"預(yù)先確定的水平"是使用該參比化合物所檢測(cè)到的或在一種對(duì)于醋酸格拉默的藥物規(guī)格中所限定的水平。已經(jīng)包含了以下實(shí)例以便為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員提供實(shí)施在此披露的主題的代表性實(shí)施方案。鑒于本披露以及本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的總體水平，普通技術(shù)人員能夠理解以下實(shí)例旨在僅僅是說(shuō)明性的，并且可采用多種變化、變更、以及替代，而沒(méi)有偏離在此披露的主題的范圍。因此，通過(guò)例證并且沒(méi)有通過(guò)限制來(lái)提供以下實(shí)例。實(shí)例實(shí)例1:共聚物測(cè)定方法THP-1細(xì)胞(ATCC，TIB-202)接收自美國(guó)種質(zhì)保存中心(theAmericanTypeCultureCollection)(ATCC)。使用一種多重_培養(yǎng)基直接培養(yǎng)的測(cè)定結(jié)合一種指示物細(xì)胞_DNA熒光色素染色測(cè)定(cat.#M_250，BioniqueTestingLaboratories,Inc.，SaranacLake,NY)，THP-1細(xì)胞已顯示出沒(méi)有支原體污染。細(xì)胞生長(zhǎng)于完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并且在37°C、5%C02的培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵育。在測(cè)定當(dāng)天對(duì)測(cè)定培養(yǎng)基進(jìn)行新鮮制備。該測(cè)定培養(yǎng)基由處于X-VIVO15無(wú)血清培養(yǎng)基(Cambrex，04-418Q)的2mMGlutamaxISu卯lement(Invitrogen，35050-79)構(gòu)成。將這些試劑過(guò)濾至一個(gè)O.2微米的醋酸纖維素過(guò)濾器單位(Nalgene，156-4020)中。過(guò)濾之后，用箔片將瓶子蓋住以便使培養(yǎng)基避光。在4。C下將COPAXONE⑧(醋酸格拉默；TevaPharmaceuticals)儲(chǔ)存于生產(chǎn)商的注射器中。在無(wú)菌的、硅化的微量離心管(microfugetube)中在2XIFN-y測(cè)定中按照2X濃度來(lái)制備樣品。在測(cè)定中測(cè)試了終濃度(從0iig/ml至400iig/ml)。用處于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中的無(wú)菌的0.2%牛血清白蛋白(BSA)(Chemicon，3225-80)對(duì)人類(lèi)IFN-y(R&DSystems,285-IF-100)進(jìn)行重組。在測(cè)定之前的那天，以2xl05個(gè)細(xì)胞/ml(20ml終體積)對(duì)THP-1細(xì)胞進(jìn)行接種。通過(guò)在400xg、18t:下離心5min來(lái)收集這些細(xì)胞。用測(cè)定培養(yǎng)基(無(wú)IFN-y)將細(xì)胞洗滌一次，并將細(xì)胞懸浮于測(cè)定培養(yǎng)基(無(wú)IFN-y)中，并進(jìn)行計(jì)數(shù)。將THP-1細(xì)胞以5xl05個(gè)細(xì)胞/ml懸浮于測(cè)定培養(yǎng)基(具有0、1、10、以及100ng/ml的IFN,y的終濃度)中。用多通道移液器以每孔50iU從低濃度到高濃度的醋酸格拉默(50、10、2、以及0ng/ml)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行接種。將測(cè)定板在37°C、5%C02培養(yǎng)箱中孵育0至23小時(shí)。將所限定的培養(yǎng)基收集在未消毒的硅化的管子中。將管子以400xg、4t:離心5min。將這些上清液轉(zhuǎn)移至新的硅化的管子中并且在液氮中進(jìn)行快速冷凍。將經(jīng)冷凍的限定的培養(yǎng)基儲(chǔ)存在-8(TC下，直到它們被交付用于Searchlight多重細(xì)胞因子分析(PierceEndogen，Woburn，MA)。結(jié)果19COPAXONE⑧對(duì)一大組蛋白質(zhì)的作用檢查了COPAXONE⑧連同IFN-y.對(duì)一大組來(lái)自THP-1細(xì)胞的細(xì)胞因子、趨化因子、可溶性受體、以及蛋白酶的作用。除了COPAXONE⑧之夕卜，在趨化因子，IP-10(表1)的分泌方面誘導(dǎo)了顯著性增加。IP-10是一種由IFN-y調(diào)節(jié)的趨化因子，它與CXCR3受體相結(jié)合。有趣的是，COPAXONE⑧治療還導(dǎo)致在24hr在培養(yǎng)基中觀察到較高水平的IFN-y，即使在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)外源性地加入了IFN-y。COPAXONE⑧對(duì)IFN-y產(chǎn)生的作用部分解釋了其對(duì)ip-io分泌的協(xié)同作用。其他趨化因子，如mcp-1和mdc(它們分別于CCR2和CCR4相結(jié)合)，也顯示出對(duì)于COPAXONE⑧的牢固的分泌反應(yīng)，盡管這種誘導(dǎo)的幅值并不與用IP-10(表1)觀察到的幅值一樣高。類(lèi)似地，其他細(xì)胞因子(如IL6)顯示出對(duì)于COPAXONE⑧和IFN-y的協(xié)同反應(yīng)。一些趨化因子(如RANTES和TARC)和細(xì)胞因子(如IL-10、IL12、p70、TNFa、TIMP1、以及匪P9)顯示出用COPAXONE⑧治療的小量增加。表1.COPAXONE⑧治療對(duì)來(lái)自THP-1細(xì)胞的趨化因子和細(xì)胞因子分泌的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*pg/ml協(xié)同效應(yīng)這種測(cè)定的一些實(shí)施方案顯示出一種協(xié)同效應(yīng)。圖1展示了COPAXONE⑧和IFN-y對(duì)IP-IO以及其他趨化因子的分泌的協(xié)同效應(yīng)。單獨(dú)用IFN-y進(jìn)行處理的THP-l細(xì)胞僅顯示適度產(chǎn)生IP-IO、I-TAC、以及MIG(所有CXCR3配體)。將COPAXONE⑧連同IFN-y加入誘導(dǎo)了對(duì)所有三種趨化因子的分泌的顯著性、濃度依賴(lài)性的作用。在50yg/mlCOPAXONE以及10ng/mlIFN-y的存在下所分泌的IP-IO、I-TAC、以及MIG的水平與單獨(dú)包含IFN-y相比，分別增加了329、412、以及573倍。在24小時(shí)所測(cè)量的IFN-y水平也顯示出用COPAXONE⑧處理的一種濃度依賴(lài)性增加。在不同濃度的胎牛血清(FBS)的存在下對(duì)這些THP-l細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或?qū)⑵渑囵B(yǎng)于X-VIV015無(wú)血清的培養(yǎng)基中。COPAXONE⑧誘導(dǎo)了所有三種趨化因子(IP-10、MIG和I-TAC)的可靠的分泌，連同在所有條件下分泌IFN-y;然而，在X-VIV015無(wú)血清的限定性培養(yǎng)基中所培養(yǎng)的細(xì)胞顯示出超過(guò)基線(xiàn)的最高倍數(shù)的誘導(dǎo)。用其他兩種人類(lèi)髓樣細(xì)胞系(U-937和HL-60);并且用原代的人類(lèi)樹(shù)突細(xì)胞看到了一種類(lèi)似的反應(yīng)。表2顯示了用COPAXONE⑧和IFN-y處理在23小時(shí)超過(guò)單獨(dú)使用IFN-y的對(duì)于IP-10、I-TAC、以及MIG的誘導(dǎo)倍數(shù)。超過(guò)基線(xiàn)的誘導(dǎo)倍數(shù)在1至10ng/mlIFN-y為最大。重要的是，當(dāng)在IFN-y的缺失下用COPAXONE⑧進(jìn)行處理時(shí)THP-l細(xì)胞沒(méi)有產(chǎn)生任何顯著量的IP-10，并且單獨(dú)使用IFN-y(在COPAXONE⑧的缺失下)僅誘導(dǎo)了少量的趨化因子的分泌。COPAXONE⑧和IFN-y的協(xié)同效應(yīng)清楚地展示于表2中。早在用COPAXONE⑧以及這些較高的IFN-y濃度處理3至6小時(shí)就可在測(cè)定中檢測(cè)到較低水平的IP-IO、I-TAC和MIG;然而，這種動(dòng)態(tài)的范圍在18至24小時(shí)(此時(shí)可使用較低的IFN-y濃度)是較好的。表2在23小時(shí)處的趨化因子誘導(dǎo)(表達(dá)成超過(guò)對(duì)照值(0)的增加的倍數(shù))<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>劑量依賴(lài)性表3顯示了該測(cè)定的濃度依賴(lài)性。對(duì)于在每個(gè)濃度的醋酸格拉默(GA)下由IFN-y(10ng/ml)所介導(dǎo)的IP_10、I_TAC、以及MIG的誘導(dǎo)，顯示了帶有標(biāo)準(zhǔn)偏差的pg/ml值。每個(gè)值代表了來(lái)自6個(gè)獨(dú)立的THP-l測(cè)定的12個(gè)樣品(帶有兩個(gè)重復(fù)點(diǎn))，每個(gè)孵育了22至24小時(shí)來(lái)進(jìn)行測(cè)量。在此情況下，該讀數(shù)為EndogenSearchlight多重ELISA測(cè)定值。這些絕對(duì)的pg/ml數(shù)值將根據(jù)測(cè)定方法而有所不同。例如，可在EndogenSearchlight多重ELISA檢測(cè)儀與標(biāo)準(zhǔn)的ELISA之間看到5至10倍的差異。絕對(duì)數(shù)目還根據(jù)孵育的時(shí)間以及IFN-Y的濃度而有所不同。但是，在同一測(cè)定形式和方法中，這種測(cè)定可用于將兩種或多種共聚物制備物進(jìn)行比較和/或確定一個(gè)參考值(例如，一個(gè)等量范圍)用于對(duì)用一種測(cè)試制備物而獲得的數(shù)值進(jìn)行比較。表3.醋酸格拉默(GA)的劑量依賴(lài)tng/mlIP-10pg/mlj;Std.Dev.I-TACpg/ml±Std.Dev.MIGpg/ml土Std.Dev.013.52.83.20.82.30.78259.269.116.55.2149.733.21.56483.78742.112.8345.669.33.13580.810782.69.1933.6132.96.25581.4124.7105.9152704.5650.912.5782.6179.9179.221.93608635.225829135.2247.1414480.6726.4502150.8840.1532.6129.413771.2569410012865.11839.52444238.445353.38983.7200108991933.72091.2250.937897.58052.14006111.3976.71560.5220.827574—54725.5概述這個(gè)實(shí)例顯示了響應(yīng)于來(lái)自一種促炎細(xì)胞因子(例如，IFN-Y)的剌激的由醋酸格拉默介導(dǎo)的細(xì)胞因子(例如，趨化因子IP-10、MIG和I-TAC)可用于評(píng)價(jià)醋酸格拉默的活性(例如，效能、純度、隨時(shí)間的穩(wěn)定性、生物活性或與一種參考標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)中的一種或多種)。通常，在一個(gè)相當(dāng)?shù)臏y(cè)定中具有更大增強(qiáng)的樣品與更大的效能或穩(wěn)定性相關(guān)。在IFN-Y的存在下由醋酸格拉默介導(dǎo)的IP-10、MIG、和I-TAC的分泌的增強(qiáng)是一個(gè)意外的結(jié)果。這四種可溶性因子典型地與一種Thl促炎細(xì)胞因子反應(yīng)相關(guān)，并且醋酸格拉默被認(rèn)為部分地通過(guò)使Thl反應(yīng)減弱并使Th2反應(yīng)增強(qiáng)而起效。醋酸格拉默的作用的精確機(jī)制是復(fù)雜的，并且仍然沒(méi)有得到充分理解，但是本發(fā)明的這些方法提供了一種方式，該方式針對(duì)一種測(cè)試物的或候選的共聚物制備物的活性、效能、穩(wěn)定性、特異性(例如，對(duì)于COPAXONE⑧的等效性或?qū)τ谝环N藥物規(guī)格的范圍的等效性)來(lái)測(cè)量樣品共聚物制備物。2權(quán)利要求評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物的一種特性的一種方法，該方法包括(a)提供至少一個(gè)細(xì)胞，該細(xì)胞能夠表達(dá)由一種細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的一種蛋白質(zhì)；(b)將該至少一個(gè)細(xì)胞與一定量的該氨基酸共聚物以及該細(xì)胞因子在一個(gè)濃度以及一個(gè)時(shí)間段內(nèi)相接觸，該濃度以及該時(shí)間段足以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)由該細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的一種或多種蛋白質(zhì)；并且(c)檢測(cè)所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)以評(píng)價(jià)該氨基酸共聚物的一種特性。2.用于評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物的一種方法，該方法包括(a)提供至少一個(gè)細(xì)胞，該細(xì)胞能夠表達(dá)由一種細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的一種蛋白質(zhì)；(b)將該至少一個(gè)細(xì)胞與一定量的該氨基酸共聚物以及該細(xì)胞因子在一個(gè)濃度以及一個(gè)時(shí)間段內(nèi)相接觸，該濃度以及該時(shí)間段足以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)；(c)測(cè)量所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的表達(dá)、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平；并且(d)將所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的經(jīng)測(cè)量的表達(dá)、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平與對(duì)于一種上市的醋酸格拉默的藥物制劑的一個(gè)參考值、一種細(xì)胞誘導(dǎo)特性分布或的一種藥物規(guī)格進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)該氨基酸共聚物的一種特性。3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該細(xì)胞因子是一種促炎細(xì)胞因子。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中該細(xì)胞因子是選擇下組，其構(gòu)成為腫瘤壞死因子a(TNFa)、干擾素Y(IFNy)、白細(xì)胞介素_1P(IL-1P)、白細(xì)胞介素_6(IL-6)、以及白細(xì)胞介素-8(IL-8)。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中該細(xì)胞因子是IFNy。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中一種或多種IFNY調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)是一種由IFNY-調(diào)節(jié)的趨化因子。7.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該共聚物是包括以下氨基酸的一種共聚物丙氨酸、賴(lài)氨酸、谷氨酸、以及酪氨酸。8.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該細(xì)胞因子是醋酸格拉默。9.如權(quán)利要求l所述的方法，進(jìn)一步包括一個(gè)步驟(d)，該步驟將對(duì)于所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平的一個(gè)值與對(duì)于一種已上市的醋酸格拉默的藥物制劑的一個(gè)參考值、細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布或藥物規(guī)格進(jìn)行比較。10.如權(quán)利要求2或權(quán)利要求9所述的方法，其中對(duì)于該上市的醋酸格拉默的藥物制劑的參考值、細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布或藥物規(guī)格特性是對(duì)應(yīng)于與選自下組的一種特性的一個(gè)值，該組的構(gòu)成為效能、特異性、穩(wěn)定性、活性、以及它們的組合。11.如權(quán)利要求2或權(quán)利要求9所述的方法，其中該步驟(d)包括將該值記錄在一種印刷的或計(jì)算機(jī)可讀的媒質(zhì)之中。12.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該至少一個(gè)細(xì)胞是選自下組，其構(gòu)成為一個(gè)髓樣細(xì)胞系以及一個(gè)原代髓樣細(xì)胞。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中該至少一個(gè)細(xì)胞是一個(gè)人類(lèi)髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞系。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中該人類(lèi)髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞系是選自下組，其構(gòu)成為一個(gè)人類(lèi)急性單核細(xì)胞性白血病細(xì)胞系(THP-1)、一個(gè)人類(lèi)白血病性單核細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系(U937)、以及一個(gè)人類(lèi)前髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系(HL-60)。15.如權(quán)利要求12所述的方法，其中該至少一個(gè)細(xì)胞是一個(gè)原代細(xì)胞，該細(xì)胞是選擇下組，其構(gòu)成為一個(gè)人類(lèi)外周血單核細(xì)胞(PBMC)以及一個(gè)單核細(xì)胞衍生的樹(shù)突細(xì)胞。16.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該至少一個(gè)細(xì)胞是衍生自一位受試者，該受試者具有一種自身免疫性、炎性、神經(jīng)退行性、或脫髓鞘性的疾病、病癥或機(jī)能障礙。17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中該疾病是選自下組，其構(gòu)成為多發(fā)性硬化癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、以及炎癥性腸病。18.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中將該一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞懸浮于一種無(wú)血清的測(cè)定培養(yǎng)基中。19.如權(quán)利要求1所述的方法，其中由所述細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)是選自下組，其構(gòu)成為Y-干擾素-誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)、干擾素-誘導(dǎo)T細(xì)胞a-化學(xué)吸引物(I-TAC)、以及由Y-干擾素所誘導(dǎo)的單核因子(MIG)。20.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該氨基酸共聚物的濃度是在0.05iig/mL與lmg/mL之間。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中該氨基酸共聚物的濃度是在0.lyg/mL與500iig/mL之間。22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中該氨基酸共聚物的濃度是在0.5yg/mL與100iig/mL之間。23.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中在步驟(b)中該細(xì)胞因子的濃度將該蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)至一個(gè)水平，該水平大于以下各項(xiàng)之和i)當(dāng)該細(xì)胞在該細(xì)胞因子的缺失下與該氨基酸共聚物相接觸時(shí)該蛋白的表達(dá)，并且ii)當(dāng)該細(xì)胞在該氨基酸共聚物的缺失下與該細(xì)胞因子相接觸時(shí)該蛋白的表達(dá)。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中細(xì)胞因子的濃度是在0.01ng/mL與100ng/mL之間。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中細(xì)胞因子的濃度是在lng/mL與50ng/mL之間。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述細(xì)胞因子的濃度是大約10ng/mL。27.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該段時(shí)間是在1小時(shí)與48小時(shí)之間。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中該段時(shí)間是在6小時(shí)與36小時(shí)之間。29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中該段時(shí)間是在12小時(shí)與24小時(shí)之間。30.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該氨基酸共聚物的濃度是在0.5iig/mL與100iig/mL之間，該細(xì)胞因子以在lng/mL與50ng/mL而存在，并且該段時(shí)間是在12小時(shí)與24小時(shí)之間，該細(xì)胞是THP-1細(xì)胞，該共聚物是醋酸格拉默、并且該細(xì)胞因子是IFNy。31.如權(quán)利要求l或權(quán)利要求2所述的方法，其中在步驟(c)中的所述檢測(cè)包括一種基于抗體的方法。32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中該基于抗體的方法包括免疫沉淀反應(yīng)。33.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述基于抗體的方法包括一種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)。34.—種用于比較氨基酸共聚物的至少兩個(gè)樣品的方法，該方法包括(a)提供一種類(lèi)型的至少一個(gè)細(xì)胞，該細(xì)胞能夠表達(dá)由一種細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的一種蛋白質(zhì)；(b)將該細(xì)胞類(lèi)型的至少一個(gè)細(xì)胞與以下各項(xiàng)分開(kāi)地進(jìn)行接觸(i)一定量的一種氨基酸共聚物的一個(gè)第一樣品，該第一樣品是在足以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)由該細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的一種濃度下以及一段時(shí)間中進(jìn)行該接觸；以及(ii)一定量的一種氨基酸共聚物的一個(gè)第二樣品，該第二樣品是在以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)由該細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的一種濃度下以及一段時(shí)間中進(jìn)行該接觸；c)檢測(cè)在步驟(b)(i)中由該至少一個(gè)細(xì)胞所表達(dá)的由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)以評(píng)估該氨基酸共聚物的第一樣品的一種特性；(d)檢測(cè)在步驟(b)(ii)中由該至少一個(gè)細(xì)胞所表達(dá)的由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)以評(píng)估該氨基酸共聚物的第二樣品的一種特性；并且，(e)將該氨基酸共聚物的第一樣品的特性與該氨基酸共聚物的第二樣品的特性進(jìn)行比較以便確定該第一與第二樣品之間的一種相似性。35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中這些氨基酸共聚物樣品中的至少一個(gè)是一個(gè)參比標(biāo)準(zhǔn)品。36.如權(quán)利要求34所述的方法，其中這些氨基酸共聚物樣品中的至少一個(gè)是醋酸格拉默。37.如權(quán)利要求34所述的方法，其中該至少一個(gè)細(xì)胞是選自下組，其構(gòu)成為一個(gè)髓樣細(xì)胞系以及一個(gè)原代髓樣細(xì)胞。38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中該髓樣細(xì)胞系包括一個(gè)人類(lèi)髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系。39.如權(quán)利要求37所述的方法，其中該人類(lèi)髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞系是選自下組，其構(gòu)成為一種人類(lèi)急性單核細(xì)胞性白血病細(xì)胞系(THP-1)、一種人類(lèi)白血病性單核細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系(U937)、以及一種人類(lèi)前髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系(HL-60)。40.如權(quán)利要求37所述的方法，其中該原代髓樣細(xì)胞是選擇下組，其構(gòu)成為一個(gè)人類(lèi)外周血單核細(xì)胞(PBMC)以及一個(gè)單核細(xì)胞衍生的樹(shù)突細(xì)胞。41.如權(quán)利要求34所述的方法，其中該至少一個(gè)細(xì)胞是衍生自一位受試者，該受試者具有一種自身免疫性、炎性、神經(jīng)退行性、或脫髓鞘性的疾病。42.如權(quán)利要求41所述的方法，其中該疾病是選自下組，其構(gòu)成為多發(fā)性硬化癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、以及炎癥性腸病。43.如權(quán)利要求34所述的方法，其中將該一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞懸浮于一種測(cè)定的培養(yǎng)基中。44.如權(quán)利要求42所述的方法，其中該測(cè)定的培養(yǎng)基是一種無(wú)血清的測(cè)定培養(yǎng)基。45.如權(quán)利要求35所述的方法，其中由所述細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)是選自下組，其構(gòu)成為Y-干擾素-誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)、干擾素-誘導(dǎo)T細(xì)胞ci-化學(xué)吸引物(I-TAC)、以及由Y-干擾素所誘導(dǎo)的單核因子(MIG)。46.如權(quán)利要求35所述的方法，其中一種氨基酸共聚物的第一樣品與一種氨基酸共聚物的第二樣品的濃度是在0.05iig/mL與lmg/mL之間。47.如權(quán)利要求46所述的方法，其中該氨基酸共聚物的濃度是在0.1iig/mL與500iig/mL之間。48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中該氨基酸共聚物的濃度是在0.5iig/mL與lOOiig/mL之間。49.如實(shí)施方案35所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是一種促炎細(xì)胞因子。50.如權(quán)利要求49所述的方法，其中該細(xì)胞因子是選擇下組，其構(gòu)成為腫瘤壞死因子a(TNFa)、干擾素Y(IFNy)、白細(xì)胞介素_1P(IL-1P)、白細(xì)胞介素_6(IL-6)、以及白細(xì)胞介素_8(IL-8)。51.如權(quán)利要求50所述的方法，其中該細(xì)胞因子是IFNy。52.如權(quán)利要求34所述的方法，其中該細(xì)胞因子的濃度是在0.01ng/mL與100ng/mL之間。53.如權(quán)利要求52所述的方法，其中該細(xì)胞因子的濃度是在lng/mL與50ng/mL之間。54.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述細(xì)胞因子的濃度是大約10ng/mL。55.如權(quán)利要求34所述的方法，其中該段時(shí)間是在1小時(shí)與48小時(shí)之間。56.如權(quán)利要求55所述的方法，其中該段時(shí)間是在6小時(shí)與36小時(shí)之間。57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中該段時(shí)間是在12小時(shí)與24小時(shí)之間。58.如權(quán)利要求34所述的方法，其中在步驟(d)中的所述檢測(cè)包括一種基于抗體的方法。59.如權(quán)利要求58所述的方法，其中該基于抗體的方法包括免疫沉淀反應(yīng)。60.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述基于抗體的方法包括一種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)。61.如權(quán)利要求34所述的方法，其中一種氨基酸共聚物的第一樣品與一種氨基酸共聚物的第二樣品中的至少一個(gè)具有一種已知的功效，用于在需要治療一種自身免疫性、脫髓鞘性、神經(jīng)退行性或炎性疾病的一種受試者體內(nèi)治療該疾病。62.如權(quán)利要求61所述的方法，其中該疾病是選自下組，其構(gòu)成為多發(fā)性硬化癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、以及炎癥性腸病。63.如權(quán)利要求34所述的方法，其中一種氨基酸共聚物的第一樣品的特性是在一種氨基酸共聚物的第二樣品的特性的80%至120%的范圍之內(nèi)。64.—種制備醋酸格拉默的藥物組合物的方法，該方法包括(a)提供一個(gè)批次的醋酸格拉默；(b)根據(jù)權(quán)利要求1至31中任何一項(xiàng)評(píng)價(jià)該批次的一種特性，并且(c)如果由該細(xì)胞因子所調(diào)節(jié)的一種或多種蛋白質(zhì)的水平與對(duì)于醋酸格拉默的一個(gè)參考值相匹配，則確定該批次對(duì)于藥物用途是可接受的。65.如權(quán)利要求64所述的方法，其中該參考值是對(duì)于一種上市的醋酸格拉默的藥物制劑的對(duì)于效能、特異性、穩(wěn)定性、和/或生物活性的一種細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布、等價(jià)范圍或藥物規(guī)格。66.評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物制備品的活性、效能、特異性或穩(wěn)定性的一種方法，該方法包括(a)提供一種髓樣細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與(i)一定量的該氨基酸共聚物以及(ii)IFNY進(jìn)行接觸，IFNY是在足以誘導(dǎo)該細(xì)胞表達(dá)一種由IFNY-誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的一個(gè)濃度下以及一段時(shí)間中進(jìn)行接觸；并且(c)將該由IFNY-誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的存在、水平、生產(chǎn)、分泌、誘導(dǎo)與對(duì)于醋酸格拉默的一個(gè)參考值進(jìn)行比較。67.如權(quán)利要求66所述的方法，其中該參考值是對(duì)于一種上市的醋酸格拉默的藥物制劑的對(duì)于活性、效能、特異性或穩(wěn)定性的一種細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布、等價(jià)范圍或藥物規(guī)格。68.如權(quán)利要求2或權(quán)利要求8所述的方法，其中該比較步驟包括確定在所測(cè)量的該一種或多種所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的表達(dá)、分泌、誘導(dǎo)、存在或水平與對(duì)于一種上市的醋酸格拉默的藥物制劑的參考值、細(xì)胞因子誘導(dǎo)特性分布或藥物規(guī)格之間的差異是否在一個(gè)預(yù)先確定的范圍之內(nèi)。69.如權(quán)利要求67所述的方法進(jìn)一步包括，如果該差異是在一個(gè)預(yù)先確定的范圍之間則對(duì)該共聚物進(jìn)行分類(lèi)、選擇、接受、放棄、發(fā)貨、或扣留；將共聚物加工成藥物產(chǎn)品、將包括該共聚物的一種產(chǎn)品進(jìn)行運(yùn)送、將該共聚物移至一個(gè)新的位置；或在商業(yè)中對(duì)該共聚物進(jìn)行配制、標(biāo)記、包裝、銷(xiāo)售、提供銷(xiāo)售、或發(fā)貨。70.—種用于制備包含醋酸格拉默的藥物組合物的方法將L-丙氨酸、受芐基保護(hù)的L-谷氨酸、受三氟乙酸(TFA)保護(hù)的L-賴(lài)氨酸以及L-酪氨酸的N-羧基酸酐進(jìn)行聚合，以產(chǎn)生一種受保護(hù)的共聚物；將該受保護(hù)的共聚物進(jìn)行處理以使該受保護(hù)的共聚物部分地解聚并且使受芐基保護(hù)的基團(tuán)脫保護(hù)，并且使受TFA保護(hù)的賴(lài)氨酸脫保護(hù)以產(chǎn)生醋酸格拉默；并且將該醋酸格拉默分離出，其中該改進(jìn)包括在一種細(xì)胞因子以及所分離的醋酸格拉默的一個(gè)樣品的存在下對(duì)一個(gè)髓樣細(xì)胞或一個(gè)原代髓樣細(xì)胞系中的一種由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行測(cè)量，并且將該表達(dá)與參考值進(jìn)行比較。71.如權(quán)利要求69所述的方法，其中該細(xì)胞因子是IFNY。72.如權(quán)利要求69所述的方法，其中該項(xiàng)改進(jìn)進(jìn)一步包括如果在所測(cè)量的表達(dá)與該參考值之間的差異在一個(gè)預(yù)先確定的范圍之內(nèi)，選擇該純化的醋酸格拉默用于一種藥物組合物的制備。73.如權(quán)利要求71所述的方法，其中該項(xiàng)改進(jìn)進(jìn)一步包括制備一種藥物組合物，該組合物包括該選擇的經(jīng)純化的醋酸格拉默的至少一部分。全文摘要本發(fā)明提供了用于評(píng)價(jià)一種氨基酸共聚物的一種或多種特性的方法和組合物。文檔編號(hào)G01N33/50GK101743470SQ200880021173公開(kāi)日2010年6月16日申請(qǐng)日期2008年6月19日優(yōu)先權(quán)日2007年6月21日發(fā)明者約瑟芬·S·達(dá)歷山德羅,艾琳·希利,隆史·敬·岸本申請(qǐng)人:動(dòng)量制藥公司