專利名稱：在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞樣品的工具和方法
技術領域：
本發(fā)明涉及在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞樣品(例如，卵、卵母細胞和晶胚)所用工具的領域。更具體地講，本發(fā)明的工具提供了一種樣品載荷部分，該部分可縮入保護套管，使樣品在進一步操作和保存期間得到保護。
背景技術：
發(fā)育細胞，如卵、精子、卵母細胞、胚泡、桑椹胚及其它早期胚細胞，其冷凍保存是輔助繁殖技術的一個強有力工具。例如，冷凍保存人的卵或卵母細胞對由于骨盆疾病、外科或放射/化療有失去卵巢功能風險的婦女而言是一個有用的處理選擇，也可以避免由胚胎冷凍造成的一些道德和倫理方面的問題。雖然已報告利用人卵冷凍保存妊娠和活產(chǎn)的例子，但由冷凍技術保存卵的過程還被認為是處于早期發(fā)展階段。因此，在本領域提高冷凍和解凍過程中發(fā)育細胞的存活率仍是一個主要問題。
現(xiàn)在已經(jīng)用慢冷凍從鼠的卵母細胞冷凍保存產(chǎn)生出存活的子代，然而，此方法對其它物種則成功有限。已證明哺乳動物卵母細胞比分裂階段的晶胚更難以冷凍保存，除鼠外，大多數(shù)物種的卵母細胞冷凍保存效率還很低。
限制卵母細胞冷凍保存的一個重要問題是在冷凍和解凍后存活率低。已報告利用玻璃化在冷凍保存人卵母細胞后妊娠和活產(chǎn)，說明玻璃化技術大有前途。
玻璃化為一種過程，在此過程中于冷卻期間發(fā)生玻璃狀固化，而在溶液內(nèi)包含的活細胞內(nèi)沒有冰晶生成。增加冷凍速度可誘導發(fā)育細胞玻璃化。冷凍速度可通過將樣品浸入適于玻璃化的液體(例如，液氮)來增加。大多數(shù)玻璃化方法利用使細胞或晶胚脫水的冷凍保護劑，以進一步減少冰晶產(chǎn)生，從而盡量增加樣品的存活能力。
被認為降低冷存發(fā)育細胞存活能力的另一個因素為，它們很脆弱，并且可能被操作傷害。在其中操作樣品并且隨后將樣品浸入數(shù)種不同溶液的冷凍方案中尤其如此。
在本領域已知有多種工具用于在冷凍保存過程期間操作樣品。一些技術提出了吸管式工具，其中將樣品吸入一個中空的管中，然后將此中空管插入溶液或液氮。這是在已公開的美國專利申請US 2004/0259072中的情況。其它技術提出利用“環(huán)”式工具，其中將尼龍或金屬線的閉合環(huán)固定在桿端，并用其拾取樣品。在國際專利申請WO00/21365中討論了這種工具的使用。兩種類型工具均顯示為本領域所熟悉的一些特點和限制。
另一類型工具公開在國際專利申請WO 02/085110中。此工具具有一種桿，一種由耐液氮材料制成的撓性條帶連接到該桿上，用于拾取待玻璃化的樣品，并將具有樣品的工具插入液氮中。該條帶被固定到桿上，所以，使用者能夠手握工具，并操作其轉移冷凍保存各步驟的條帶。該條帶載有樣品，并且用于保護目的，隨后將其插入一個其基部固定到桿上的細長薄蓋中。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將條帶插入蓋是一個特別精細的步驟，因為蓋與樣品接觸可能導致傷害，并且使存活率降低。插入步驟類似于將線插入針眼，不同的是還有另一項挑戰(zhàn)，條帶必須不接觸蓋的周邊。最經(jīng)常的是，在試圖進行此步驟時，條帶和所載樣品與帽蓋周邊接觸，并且損害樣品。這降低了用此工具玻璃化的樣品的存活能力。
因此，在本領域仍需要一種工具，該工具能夠使載荷條帶或部分以降低樣品損傷風險的方式進入受保護位置，并且需要較小的操作靈巧性?？梢哉J為，這種進步將產(chǎn)生更高存活率，并因此非常有益于發(fā)育細胞冷凍保存和輔助繁殖技術領域。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個目的為提供一種用于在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞的工具，該工具能夠克服在現(xiàn)有技術中突出的一些缺陷。
一方面，本發(fā)明提供了一種用于在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞樣品的工具。該工具具有一個細長的桿和在桿一端的樣品載荷部分，其特征在于，其進一步包括一個安裝在桿上的套管，載荷部分可縮入套管內(nèi)，在載荷部分縮入套管時，載荷部分上的樣品由套管覆蓋。
另一方面，本發(fā)明提供了一種用于玻璃化和保存發(fā)育細胞樣品的工具。該工具包括兩個可滑動接合的構件，兩構件包括一個具有套管部分的保護性構件和一個具有用于接收樣品的載荷部分的操作構件。該操作構件與所述保護性構件接合，并且可滑動操作該載荷部分延伸出套管部分，還可以滑動操作該載荷部分縮入套管部分，以分別暴露和保護樣品。
另一方面，本發(fā)明提供了一種用于在冷凍保存過程中保護發(fā)育細胞樣品的方法。該方法包括將樣品載荷到樣品操作工具的載荷部分上，并且使該工具的載荷部分縮回到保護性套管內(nèi)。
在本說明書中，所用術語“發(fā)育細胞”是指有能力發(fā)育成能夠獨立存活的新生物個體的生物繁殖體。術語“發(fā)育細胞”以包括單數(shù)的復數(shù)形式使用，包括但不限于精子、卵母細胞、晶胚、桑椹胚、囊胚泡及其它早期胚胎細胞。此定義在國際專利申請WO 00/21365中提出。


通過以下說明并結合附圖，本發(fā)明的特征和優(yōu)點將更加便于理解，其中圖1為根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的工具透視圖，該工具被顯示處于延伸狀態(tài)，并且?guī)в羞x用的套筒。
圖2為圖1的工具的透視圖，其中該工具以縮回構型顯示。
圖3為縮回并且插入套筒內(nèi)的圖1工具的透視圖。
圖4為圖1的工具和套筒的分解透視圖，其中工具被拆開顯示。
圖5包括圖5A、5B、5C和5D，顯示用于圖1工具的凹槽的可替代實施方案的透視圖。
具體實施例方式
現(xiàn)在參考附圖描述用于在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞的工具10的實施方案，尤其參考圖1。工具10包括伸縮安裝在套管14內(nèi)側的操作構件12。所示工具10帶有一個選用的套筒構件16，可為了保護在此構件中插入整個工具。在使用時，使操作構件12載有發(fā)育細胞的樣品，隨后使其縮入用于保護的套管14內(nèi)，如圖2中所示。然后，如圖3中所示，將縮回構型的整個工具10插入套筒16內(nèi)。根據(jù)以下說明，本領域的技術人員可了解按照本發(fā)明方法應用工具的各種可能性。然而，圖中所描繪的實施方案特別適用于在以下進一步描述的玻璃化過程中操作人卵母細胞所用的輔助人繁殖技術。
如圖4所示，工具10(圖1)的操作構件12和套管14在圖4中被拆開顯示。操作構件12包括細長的桿18，該桿較佳為圓柱形，并且具有兩個相反的端面。我們將遠側端面20稱為載荷端20，而將近側端22稱為操作端22。載荷端20連接到載荷發(fā)育細胞樣品的載荷部分24，而操作端連接22較佳連接到適于接合套筒16的帽蓋26上。出于說明目的，此較佳實施方案的桿18長約80mm，并且具有1.5mm的直徑，而套管14長約60mm。
將發(fā)育細胞載荷到作為載荷部分的條帶24上。條帶24連接到桿18的載荷端20上，并且以軸向向外延伸離開桿18約8mm。條帶24最好細長、平坦且具有柔韌性。條帶24具有大致長方形形狀，且較佳具有約1mm寬度，可將其做得很薄，以便其適配于顯微鏡的透鏡下，除了為柔韌性外，還應透明，以更容易地對樣品進行操作。條帶24的較佳厚度為0.15mm。
套管14為一個具有兩個開口端的圓筒形構件，因此類似于一根麥桿。轉回到圖1和2，可以看到操作構件12為了操作已插在套管14內(nèi)。桿18和套管14因此分別具有相配的外徑和內(nèi)徑，以允許發(fā)生伸縮移動。套管14作為縮回載荷部分24的保護性構件。在此較佳實施方案中，桿18的外徑略小于套管14的內(nèi)徑，以分別在套管14和桿18的內(nèi)徑和外徑之間產(chǎn)生足夠間隙，從而使桿18在套管14內(nèi)以縱向移動自由滑動或伸縮。套管14的較佳內(nèi)徑為2mm，而桿18的較佳外徑為1.5mm。
較佳使套管14短于桿18，以便當載荷端20與套管14的對應端達到齊平時，允許操作該桿18離開端22(或處于選用的帽蓋26上)。通過自套管14的一端拉推所述操作構件20的操作端22，使用者可使載荷部分24分別縮入和伸出套管14的另一端。
為阻止操作構件12不理想地移位或處于其自身的重量下，提供限制伸縮移動的構件?？墒褂猛蛊?8和凹槽30(圖1)，或者可使桿18的至少一部分與套管14的至少內(nèi)側部分配合產(chǎn)生摩擦。實際上，操作構件12的伸縮移動不必超過所述載荷部分24完全縮入和伸出套管14所需的位移。工具10具有縱向限定于套管14內(nèi)的凹槽30，并且具有限定于桿18上且與凹槽30緊密配合的凸起28。凸起28緊密配合凹槽30的尺寸。一旦將操作構件12裝配到套管14(見圖1和2)，凸起28即貼入凹槽30，因此將其限定并與其配合，以便使操作構件12的軸向位移受限于凹槽30的尺寸和形狀。因此，凸起28和凹槽30之間的配合作用限制所述操作構件12相對于套管14在預定范圍內(nèi)滑動或伸縮移動。
凹槽30的長度限定所述操作構件12相對于套管14的總位移能力，因此，凹槽30的長度應至少與條帶24一樣長，以允許其完全伸出和縮回。凸起28和凹槽30的相對縱向位置決定了條帶24的延伸位置和縮回位置。圖5A顯示凹槽30包括延伸端38和縮回端36。如果凹槽30只是略長于條帶24，則應選擇凸起28和凹槽30的位置，使得在凸起28鄰接凹槽的延伸端38時，條帶24完全延伸，而在凸起28鄰接凹槽30的縮回端36時，條帶24完全縮回。在一種可供選擇的構型中，凸起28鄰接所述延伸端38的定位應對應于條帶24至少部分伸出套管14，以允許載荷樣品；而凸起28鄰接所述縮回端36的定位應對應于條帶24至少完全縮入套管14內(nèi)，以防止縮回時樣品受到潛在傷害。
圖5B、5C和5D表達了圖5A中的凹槽的選擇性方案。圖5B圖示一種選擇性凹槽130，所述凹槽包括徑向凹口140和140′，以便在凸起28通過使桿18旋轉置入其中時，阻止所述操作構件12伸縮移入相對于套管14的預定位置。凹口140和140′分別設置在凹槽130的相反端136和138。凹口140特別用于阻止所述縮回的操作構件(圖2)在直立狀態(tài)時在自身重量下落下，從而潛在防止對所載樣品的傷害?？蓪较虬伎?40和140′稱為“簡單凹口”或簡稱為“凹口”。
圖5C中所描繪的凹槽230是一種更佳選擇方案。凹槽230包括處于縮回端236的倒“L”型鎖口244和處于延伸端238的倒“L”型鎖口244′。鎖口244和244′通過迫使所述操作構件12軸向與徑向位移，凸起28自縮回端236移到延伸端238或者相反，得以保證操作構件12在預定位置伸縮移動。這允許使用者在條帶暴露以載荷樣品時使條帶24(圖4)安全進入所需延伸位置，并且在保存期間安全保護條帶進入所需的縮回位置。鎖口244和244′包括簡單凹口144和144′的徑向部分，還包括縱向部分。圖5D所描繪的實施方案圖示一種選擇性凹槽330，其中只使用一個鎖口348，而不是兩個，并且位于凹槽330的縮回端336。該鎖口348為曲線形，而不是方形，并且具有倒“J”形狀。
在此較佳實施方案中使用圖5C所示的凹槽230，盡管為了清楚起見，此凹槽未在圖1至4中描繪。凹槽230具有0.8mm寬度。相應凸起28為0.6mm寬，并且徑向伸出桿18外0.5mm。凸起28近似設置在所述桿18的兩端20，22之間的中部。
如圖1所示，可以看到工具10與套筒16的組合。套筒16是中空的，并且具有開口端32和閉合端34。其較佳為與工具10相同的橫截面形狀，因此為圓筒形?？蓪⒐ぞ?0插在套筒16內(nèi)，以對其進一步保護(見圖3)。帽蓋26用于在工具插入套筒16時將套筒的開口端32封閉。帽蓋26較佳作為操作構件12的部分提供，并且連接到桿18的載荷端22。這是優(yōu)選的，因為其允許使用者在單一步驟將工具10插入套筒16并將套筒16封閉，并且準備使工具100容易地自套筒抽回。
較佳的方式是將操作構件12與桿18、條帶24、凸起28和帽蓋26澆鑄成一個整件。如果澆鑄桿，則可設計該模件入口在澆鑄期間形成凸起28。本領域的技術人員應了解，組件24、28和26可與桿18分開提供，并且可通過任何適用方法固定或另外連接到桿18。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，以一體澆鑄操作構件12降低生產(chǎn)成本，并且潛在提高產(chǎn)品的實際收益。套管14和套筒16也可澆鑄，并且工具的各組件可由相同材料制成。
構成所述工具的很多適合材料對本領域的技術人員而言應沒有什么問題?，F(xiàn)已確定，利用略微柔韌性且稍透明的材料的優(yōu)點是，如果在相同操作中澆鑄，條帶24將由于其厚度比其它組件更柔韌且更透明。操作構件12和套管14的柔韌性也為在操作構件12裝配到套管14時將凸起28插到凹槽230內(nèi)的桿部分18上做了準備。如果使包括凸起28的桿18的部分和套管14之間的間隙緊密，使得在組裝工具時阻止凸起28自由離開凹槽30，則特有幫助。此外，較佳材料優(yōu)選具有低膨脹系數(shù)，以防止工具組件由于室溫和冷凍溫度之間的快速和高溫度變化而裂開或破裂。該材料還必須對冷凍過程有耐性，并且稍具不滲透性。它應耐液氮。已發(fā)現(xiàn)聚丙烯為制造工具10的適合材料?？蓪⑻砑觿?、填料和增強材料加入聚丙烯中，以取得所需性能。制造工具所用的較佳材料為購自Basell聚烯烴的Pro-faxTMPD626-H12樹脂。
一種較佳操作方式如下為了用工具10拾取樣品，操作所述操作端22，以使條帶24自套管14完全伸到圖1所示的構型。通過操作所述桿18，使用者可將條帶24鎖入延伸載荷或“暴露”構型(圖1)，以便凸起28利用桿18的操作端22(或帽蓋26)處于倒″L″形244′(圖5)中，同時保留套管14。使用者可通過使條帶24接近可能處于介質中(例如，溶液)和處于顯微鏡的載片上的樣品來載荷樣品。一旦包括一些介質(其中包含樣品)的樣品載荷到條帶24上，使用者即可使已載樣的條帶24縮入套管14，以便樣品受到套管14保護。為了做這項工作，使用者應拉、擰和拉所述操作端22，使凸起28離開倒″L″形244′。條帶24可通過扭動和推動所述操作端22鎖在縮回保護位置(圖2)，以便將相關的凸起28驅入倒“J”形狹槽244(圖5)。在要將樣品自存器移出時，將凸起28移出倒“J”形狹槽244，并且使載樣的條帶24自套管14伸回成暴露構型。
在一種示例玻璃化方法中，首先使人的卵母細胞在室溫于平衡溶液中懸浮3至5分鐘。然后在室溫將它們轉移到玻璃化溶液45-60秒，并立即浸入液氮中。一旦處于液氮中，即如上所述使具有所載卵母細胞的條帶24縮入套管14，并且仍在使所載卵母細胞保持于液氮的同時，如上所述將處于縮回位置的工具10插在套筒16內(nèi)保存(至少一星期)。在此可以看到，使套筒帽蓋26成為工具10的一部分非常有利。在所需保存階段后，自套筒16移出工具10，使條帶自套管14伸出，并從液氮拉出。隨后將卵母細胞直接插入一種解凍溶液，在37℃歷1分鐘。然后將溫熱的卵母細胞轉移到稀溶液3分鐘，并且在清洗溶液中清洗5分鐘，清洗兩次，對于示例性溶液組合物，請參閱錢日承(Ri-Cheng CHIAN)等人的“玻璃化后體外成熟的牛卵母細胞之高存活率”(″High Survival Rate of Bovine Oocytes Matured In VitroFollowing Vitrification″)，繁殖與發(fā)育雜志(Journal of Reproduction andDevelopment)，Vol.50，No.6，2004。以下表1顯示根據(jù)本發(fā)明利用工具的玻璃化和解凍步驟的結果。
表1.利用工具玻璃化和解凍后體外培養(yǎng)的人卵母細胞的存活率

*由形態(tài)學鑒別利用本發(fā)明工具對產(chǎn)生表1所示結果進行的隨后實驗得到人妊娠的結果。這些結果簡要列于以下表2中。表2.利用30工具由隨后實驗得到的胚胎學概括說明


本發(fā)明的工具也可用于其它類型發(fā)育細胞的冷凍保存。例如，以下表3和4中顯示用牛晶胚玻璃化和解凍得到的存活結果。
表3.在用工具玻璃化和溫熱后(第8天)囊胚泡中凋亡細胞的數(shù)量

*各組之間沒有差異。
表4.在溫熱及培養(yǎng)后的玻璃化牛囊胚泡的存活和孵化率.


*各組之間沒有差異。
本文對工具所給的尺寸僅用于說明，但已發(fā)現(xiàn)，這些尺寸和比例適于容易地進行操作，更具體而言是對人的卵母細胞進行操作，可鑒于此應用在保持工具10一般功能性的同時略做變化。例如，條帶24可為約1mm寬，0.15mm厚，但可略長于或短于8mm?？稍诒３謼l帶24薄于桿18的同時，改變條帶24的寬度和桿18的寬度。例如，套管14的長度可在40mm和120mm之間變化，而桿18應保持長于套管15mm至40mm，以便容易地在操作端22操作，并且避免在延長保存期間工具10難以處理。通過對所提出的實施方案做出某些修改，可更佳地操作其它類型發(fā)育細胞。例如，為適應其它類型發(fā)育細胞的大小，可適當改變其尺寸，以其它不同構型呈現(xiàn)與另一種類型載荷部分互換的條帶24或工具。
本文所做描述僅為在應用時實現(xiàn)本發(fā)明的理解方式的說明?？稍诒景l(fā)明范圍內(nèi)對本文所揭示的說明性實施例做出很多替代和改進。因此，本發(fā)明的范圍旨在由附加權利要求的內(nèi)涵決定。
權利要求
1.一種用于在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞樣品的工具，所述工具具有一個細長的桿和設在桿一端的樣品載荷部分，其特征在于其進一步包括一個安裝在桿上的套管，載荷部分可縮入套管內(nèi)，在載荷部分縮入套管時，載荷部分上的樣品由套管覆蓋。
2.一種用于玻璃化和保存發(fā)育細胞樣品的工具，所述工具包括兩個可滑動接合的構件，其包括一個具有套管部分的保護性構件，以及一個具有用于接收樣品的載荷部分的操作構件，所述操作構件與所述保護性構件接合，并且可滑動操作，以使載荷部分伸出套管部分，并且使載荷部分縮入套管部分，以便分別暴露和保護所述樣品。
3.如權利要求1所述的工具，其特征在于所述桿具有自其軸向延伸的凸起，并且所述套管具有適于凸起插入凹槽并且限定于其內(nèi)的一定寬度的縱向凹槽，所述套管的伸縮移動的范圍受相互配合的凸起和凹槽限制。
4.如權利要求1所述的工具，其特征在于所述桿具有自其軸向延伸的凸起，并且所述套管具有適于凸起插入其內(nèi)并且通過與凹槽配合而引導伸縮移動的一定寬度的縱向凹槽；進一步，所述凹槽在沿凹槽的預定縱向位置設有一個徑向凹口，使得通過桿的旋轉在徑向凹口內(nèi)置入凸起防止伸縮移動，并因此將載荷部分鎖入相對于套管的適合位置。
5.如權利要求1、3和4中任一項所述的工具，其特征在于所述工具組合一個可在其中插入該工具的套筒，其進一步特征在于在與載荷部分相對的一個桿端設有適于套筒的帽蓋，因此允許在單一步驟將該工具插入套筒內(nèi)并且將該套筒封閉。
6.如權利要求1所述的工具，其特征在于所述的細長桿具有相反的操作端和載荷端，所述套管比桿的長度短，所述載荷部分處于桿的載荷端并且用于承載所述發(fā)育細胞的樣品，所述工具的載荷部分可縮入和可伸出套管，以便通過操作所述操作端分別保護和暴露樣品，同時保留套管。
7.如權利要求1和3至6中任一項所述的工具，其特征在于其進一步包括限制所述桿相對于所述套管伸縮移動的構件。
8.如權利要求7所述的工具，其特征在于所述限制伸縮移動的構件包括至少一部分一定寬度的所述桿，該桿與限定于所述套管內(nèi)的內(nèi)部通道的至少一部分配合，以在其間提供摩擦。
9.如權利要求7所述的工具，其特征在于所述限制伸縮移動的構件包括限定于所述套管中的凹槽，和限定于所述桿上的配合凸起，所述凸起在工具操作期間限定于所述凹槽內(nèi)，并且與凹槽配合限制伸縮移動。
10.如權利要求9所述的工具，其特征在于所述桿的外徑比套管的內(nèi)徑略小，因此允許桿相對于套管自由伸縮。
11.如權利要求9和10中任一項所述的工具，其特征在于所述凹槽至少與所述載荷部分的長度一樣長，并且具有相反的縮回端和延伸端；所述凸起位于凹槽的延伸端時，對應于相關載荷部分至少部分伸出套管的定位，所述凸起位于凹槽的縮回端時，對應于所述載荷部分至少完全縮回到套管內(nèi)。
12.如權利要求11所述的工具，其特征在于所述凹槽在其縮回端設定一個倒“J”形，從而允許在桿分別旋轉和縱向位移后，所述凸起與倒“J”形的末端接合；所述“J”形凹槽將載荷部分鎖定在套管內(nèi)的所述至少完全縮回位置，以在保存期間保持于該位置上。
13.如權利要求11和12中任一項所述的工具，其特征在于所述凹槽在其延伸端設定一個倒“L”形，從而允許在桿分別旋轉和縱向位移后，所述凸起與倒“L”形的末端接合；所述“L”形凹槽允許載荷部分被鎖定在離開套管的所述至少部分伸出位置，以在承載樣品期間將其保持于該位置上。
14.如權利要求6至13中任一項所述的工具，其特征在于所述工具與一個套筒組合提供，并且適于插入用于保護的所述套筒內(nèi)，所述工具進一步包括連接到桿的操作端的帽蓋，所述帽蓋適于在所述工具插入時在單一步驟將套管封閉。
15.如權利要求1至14中任一項所述的工具，其特征在于所述樣品載荷部分為一個平的條帶，該條帶具有柔韌性，并且具有適于操作卵母細胞樣品的尺寸。
16.如權利要求15所述的工具，其特征在于所述條帶為透明條帶。
17.如權利要求1和3至16中任一項所述的工具，其特征在于所述桿與載荷構件以一體式澆鑄。
18.如權利要求1至17中任一項所述的工具，其特征在于所述工具由耐液氮且具有低熱膨脹系數(shù)的材料制成。
19.如權利要求1和3至17中任一項所述的工具，其特征在于所述載荷部分為一個平條帶，該條帶具有約1mm的寬度，約0.15mm的厚度及約8mm的長度，因此為適于操作卵母細胞樣品的尺寸；所述套管具有約2mm的內(nèi)徑，所述桿具有約1.5mm的外徑，因此允許套管自由伸縮；所述套管的長度在40mm和120mm之間，并且所述桿長于所述套管15mm至40mm。
20.如權利要求1至19中任一項所述的工具，其特征在于所述工具的組件由聚丙烯制成。
21.一種在冷凍保存過程中保護發(fā)育細胞樣品的方法，所述方法包括將樣品載荷到樣品操作工具的載荷部分上，并且使所述工具的載荷部分縮回到保護性套管內(nèi)。
22.如權利要求21所述的方法，其特征在于所述方法進一步包括將具有所載樣品的載荷部分插入適于使樣品玻璃化的液體中；并且，其中所述縮回步驟在樣品保持于所述液體內(nèi)的同時進行。
23.如權利要求21所述的方法，其特征在于所述方法進一步包括在至少所載樣品保持于液體內(nèi)同時將所述工具插入套筒內(nèi)；并且，在所述插入步驟中將容器蓋上。
全文摘要
一種用于在冷凍保存過程中操作發(fā)育細胞(如卵母細胞或晶胚)的樣品的工具(10)。工具(10)包括細長的桿(18)，該桿具有在一端(20)連接的樣品載荷部分(24)和在另一端的操作部分(22)。工具(10)還包括伸縮性安裝到桿(18)上的套管(14)，并且操作部分(22)自套管(14)延伸出其第一開口端，而載荷部分(24)可自套管(14)延伸出第二開口端。通過在保留套管(14)時使用者拉拔所述操作部分(22)，可很容易地使載荷到所述載荷部分(24)上的樣品縮回到套管(14)內(nèi)，以保護其中的樣品。
文檔編號B01L3/00GK101087658SQ200580043672
公開日2007年12月12日 申請日期2005年9月21日 優(yōu)先權日2004年12月21日
發(fā)明者錢日承, 譚祥林 申請人:麥吉爾大學