24 - 30min，就可以；固體培養(yǎng)一般在30度下要3 - 5天。 在液體培養(yǎng)基里加一小塊鮮酵母，用玻璃棒攪拌均勻；再用棉絮塞緊瓶口。然后把燒瓶 放在生化培養(yǎng)箱內(nèi)，30°C培養(yǎng)，數(shù)小時(shí)后就可見(jiàn)到溶液里有氣泡產(chǎn)生，并散發(fā)出酒味。這是 因?yàn)榻湍妇诎烟欠纸獬梢掖己投趸?。二三天后吸取溶液在顯微鏡下觀察，就可看 到已培養(yǎng)出大量酵母菌。 用無(wú)菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的〇. 1%美藍(lán)染色液中，混勻后加蓋玻片制 成水浸片，先用低倍鏡后換高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況?；罱湍妇墒姑浪{(lán) 還原，從而使菌體不著色，用此方法可判斷酵母菌的死活。 用劃線法分離酵母菌培養(yǎng)液，從而得到單個(gè)菌落。挑取單個(gè)菌落反復(fù)再次劃線分離純 化，最終可獲得純培養(yǎng)。 酵母菌是少數(shù)能在缺氧環(huán)境里生存較長(zhǎng)時(shí)間的一種微生物，它屬于兼性菌類。在一般 情況下進(jìn)行有氧呼吸。如環(huán)境中有豐富的糖類，它進(jìn)行缺氧呼吸。其過(guò)程如下： C6H1206+6026C02+6H20+2. 87103 兆焦（有氧呼吸） C6H12062C02+2C2H50H+109103 兆焦（缺氧呼吸） 酵母檢測(cè)參數(shù)如下： 菌數(shù)：顯微鏡血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法和活芽胞平板稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)法； 總糖（Ts)和殘?zhí)牵≧s) :3，52二硝基水楊酸法）； 總氮（Tn):凱氏定氮法；pH:pHS-29A型酸度計(jì)； NH4+ :PNH3-1型氨電極； 溶氧（DO) :D0-20型溶氧電極和連續(xù)顯示記錄儀； 粘度0=NDJ79-1型旋轉(zhuǎn)粘度計(jì) 對(duì)數(shù)期每?jī)蒱取樣一次觀察菌體形狀和菌體成長(zhǎng)及NH4+代謝； 每4h取樣一次觀察總糖變化。 常見(jiàn)鑒定方法如下： 手工鑒定法：沙?；仙L(zhǎng)的菌落經(jīng)涂片革蘭染色確認(rèn)為酵母菌孢子后，同時(shí)做血 清芽管、尿素分解、菌膜及蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)，芽管陽(yáng)性為白色念珠菌，芽管陰性，菌膜、蔗糖陽(yáng) 性為熱帶念珠菌，其它情況作進(jìn)一步生化鑒定。 YBC卡鑒定法：分離、染色同上，將菌液調(diào)至2.0麥?zhǔn)蠁挝?，充滿YBC卡后28C孵育 24h，放入Vitek32分析，如未鑒定出繼續(xù)孵育至48h再上機(jī)分析，自動(dòng)顯示結(jié)果。 顯色培養(yǎng)基鑒定法：在顯色基上生長(zhǎng)翠綠色菌落為白色念珠菌、蘭灰色菌落為熱帶 念珠菌，紫紅色邊緣模糊有微毛為克柔氏念珠菌，整個(gè)菌落顯紫紅色為光滑球擬酵母菌，白 至紫色為其它念珠菌。 培養(yǎng)基備注如下： 固體培養(yǎng)基---豆芽蔗糖培養(yǎng)基 配制方法： 稱新鮮豆芽l〇〇g，放入燒杯中，加水1000ml，煮沸約半小時(shí)，用紗布過(guò)濾。 用水補(bǔ)足原量，再加入蔗糖50g，煮沸溶化。 固體培養(yǎng)基---馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基： 原料：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000ml。 配制方法： 先將馬鈴薯去皮，切片，稱200克并加蒸餾水1000ml，煮沸半小時(shí)，用紗布過(guò)濾，補(bǔ)足蒸 餾水量至IOOOml，制成20%的馬鈴薯汁。 在20%的馬鈴薯汁中加入瓊脂，煮沸溶化，補(bǔ)足水分并在115攝氏度條件下高壓滅菌20 分種。 加入葡萄糖，制成馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。 液體培養(yǎng)基一乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液： 配方同上，但不加瓊脂而加乳酸，按每IOOOml培養(yǎng)液中5ml乳酸量加入，并分裝試管。 液體培養(yǎng)基 巴斯德培養(yǎng)液 原料：蔗糖150g，碳酸銨10g，磷酸氫鉀2g，磷酸鈣0.2g，硫酸鎂0.2g，蒸餾水1000ml〇 配制方法： 酵母菌需要無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)來(lái)自外界環(huán)境。如在培養(yǎng)液內(nèi)適當(dāng)增加氮、磷等元素，效果會(huì)更 好。 2.廢水理化指標(biāo)的檢驗(yàn)： 分析測(cè)定目標(biāo)廢水污水的理化指標(biāo)，包括： 重金屬離子含量：原子吸收分光光度計(jì)； 色度：雙精度SP8-300PyeUnicam分光光度計(jì)； 己烷：氣相色譜法； PH:pHS-29A型酸度計(jì)； 總氮T-N:凱氏定氮法； 總磷T-P:鑰酸銨分光光度法； 化學(xué)需氧量CODJJG975COD測(cè)定儀； 生化需要量BOD:B0D-220X測(cè)定儀； 以便找到合適的處理方法； 3. 廢水處理?xiàng)l件的摸索： 影響酵母菌廢水處理效果的因素有很多，例如菌的投放量，處理過(guò)程中的PH、溫度，離 子強(qiáng)度、滲透壓和通氣量等條件，當(dāng)然還可能會(huì)與廢水本身含有的污染物的種類及其濃度 有一定的關(guān)系。在這個(gè)階段，要根據(jù)目標(biāo)廢水污水的實(shí)際檢驗(yàn)指標(biāo)，采取單因素及其基礎(chǔ)上 的正交試驗(yàn)等手段，找到適合該廢水的最佳處理?xiàng)l件； 4. 菌株配置比例的確定： 由于微生物活水劑是由適合于各種污染水質(zhì)的不同菌株組成的，而具體的不同菌株， 因其所存在的酶系各異，在對(duì)不同類型的廢水處理過(guò)程中，所起的作用又有所不同，有的是 協(xié)同作用，有的則是互相抑制，本公司在研發(fā)階段的主要任務(wù)，是找到菌株的最佳組合，互 相協(xié)調(diào)，強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)手，逐級(jí)降解高分子有機(jī)物，最終完成整個(gè)降解過(guò)程。 5. 成品菌劑的研發(fā)推廣： 針對(duì)國(guó)內(nèi)不同水污染地區(qū)的大致水質(zhì)，或者針對(duì)不同類型的污染水質(zhì)，可以取樣分析， 或者均勻處理，然后以此為大致標(biāo)準(zhǔn)，配成適合較大范圍內(nèi)污水廢水處理的成品菌劑，從而 簡(jiǎn)化處理步驟，使應(yīng)用更加方便快捷，并可在一定程度上降低成本，提高效益； 6. 飼料酵母的烘干粉碎： 確定回收酵母的分離、提取的方法條件； 60°C恒溫，對(duì)回收的酵母進(jìn)行收率計(jì)算； 將酵母烘干、粉碎，制成飼料酵母粉，并測(cè)定其指標(biāo)： 毒性； 蛋白質(zhì)含量； 灰分； 含水量； 色澤； 氣味； 雜質(zhì)； 粒度。 主要技術(shù)：酵母培養(yǎng)技術(shù)；酵母干粉生產(chǎn)；水處理技術(shù)；土壤改良技術(shù)；環(huán)保洗滌保鮮 劑； 性能指標(biāo)： 高效凈化：每噸水中只需要投入微生物活水劑30克既可達(dá)到凈化處理功能； 高效土壤改良配出來(lái)的微生物活水劑溶液可以提供給一畝面積土地使用； 高效洗滌：有益微生物洗滌劑稀釋1000倍后仍然可以維持其消毒、滅菌、降解表面殘 留農(nóng)藥和保鮮特性； 四、項(xiàng)目技術(shù)設(shè)計(jì)思想依據(jù) 專利：自主研發(fā)出新型酵母菌-CV豆納酵母菌，正在向國(guó)家專利局申請(qǐng)新型發(fā)明專利， 已經(jīng)獲得簽發(fā)受理通知書(shū)。 參考文獻(xiàn)：
[1]鄭少奎酵母菌處理技術(shù)在色拉油加工廢水處理中的應(yīng)用研究[博士學(xué)位論 文].中國(guó)科學(xué) 院生態(tài)環(huán)境研究中心，2001
[2] 長(zhǎng)谷川真一?Technicaldetailsoftheyeastcyclesystem全國(guó)第一期水處 理技術(shù)研討班論文集，北京，1999
[3] 黑亮，楊清香，楊敏，等.利用酵母菌處理高濃度味精廢水的連續(xù)小試.環(huán)境 科學(xué)， 2002，23 (4) : 62 ?66,HeiL，YangQX，YangM,etal.Environmental Science, 2002, 23 (4) : 62 ?66
[4] 吳蘭，羅玉萍，萬(wàn)金保，等.解脂耶氏酵母菌處理含油廢水的研究.環(huán)境科學(xué) 研究， 2006，19 (5) : 122 ?125,WuL，LuoYP，WanJB，etal.Researchof EnvironmentalSciences, 2006, 19 (5) : 122 ?125
[5] ChoiMlHl,ParkYlHlGrowthofPichiagui11iermondiiA9 , anosmotolerrantyeast,inwastebrinegeneratedfromkimchi productionlBioresourceTechnology, 1999 ,70 : 231 ?236
[6] 朱一民，周東琴，魏德州.啤酒酵母菌對(duì)汞離子（II)的生物吸附.東北大學(xué) 學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版 )，2004， 25 (1) : 89 ?91 ZhuYM,ZhouDQ,WeiDZ.JournalofNortheasternUniversity(Natural Science) , 2004, 25 (I): 89 ?91
[7] LiuRX,PanJH,TangHX.BiosorptionmechanismofCu(II)onM icrococcuslateusbiomass. EnvironmentalChemistry, 2002, 21 (I) : 50 ?55
[8] 高樹(shù)芳，李斌，洪禮坤，等.熱帶假絲酵母與深紅酵母對(duì)Cd的吸附效果.福建 農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)（ 自然科學(xué)版），2004，33(1) : 100 ?103 GaoSF,LiB,HongLK,etal.BioadsorptionofCdbyCandidatropicalisand Rhodotorularubra. JournalofFujianAgriculturalUniversity(NaturalScience) . 2004, 33 (I) :100 ?103
[9] AngelisD.F.E. ,RodriguesG.SIAzodyesremovalfromindustrial effluentsusingyeastbimasslArquirosDeBiologiaE.Technologia, 1987 , 30 : 301 ?309
[10] Meehan Cl，Banat IlMl，McMullan Gl，et all Decolorization of remazol black2b using athermotolerant yeast，Kluyveromyces marxianus IMB31 Environment International，2000，26 : 75 ?79
[11] Donmez Gl Bioaccumulation of the re