專利名稱：產(chǎn)酸克雷伯氏菌mow-02-05及其篩選方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于染料廢水凈化處理技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05及其篩選方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
偶氮染料是合成染料的最主要的品種，廣泛應(yīng)用在印染、紡織和造紙等行業(yè)。偶氮染料具有-N=N-發(fā)色基團，需要得到電子才能將偶氮鍵脫色還原，但是由于空氣中氧氣的存在，它們穩(wěn)定的存在自然環(huán)境中很難被微生物降解。偶氮染料的排放一方面會引起水體色度的增加，抑制水體中光合作用的過程，進而影響到生物鏈各級生物的生長，破壞區(qū)域的水體生態(tài)系統(tǒng)；另一方面染料降解的中間產(chǎn)物(多為芳香胺類化合物)對動植物、人類和生態(tài)環(huán)境具有嚴重的危害。目前能夠有效處理染料廢水，且經(jīng)濟、環(huán)保、可持續(xù)的方法是微生物處理法。在微生物法處理染料廢水工藝中，染料的降解效率是衡量反應(yīng)器處理能力的一個重要指標，如何有效的將復(fù)雜有機碳源的化學能轉(zhuǎn)化為生物能(產(chǎn)氫、產(chǎn)乙醇、產(chǎn)甲烷等)則是微生物處理廢水和可再生能源技術(shù)的另一個重要指標。因此，篩選能同時高效降解染料和產(chǎn)能的細菌具有重要的現(xiàn)實意義。實驗室規(guī)模的間歇式厭氧污泥反應(yīng)器中微生物對染料的降解專一性強，馴化程度高，有利于篩選出高效降解染料與產(chǎn)氫的細菌。目前報道的很多細菌都具有染料降解或發(fā)酵產(chǎn)氫能力，但同時具有上述作用的細菌還未見報道。本發(fā)明因此而來。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)M0W-02-05，解決了現(xiàn)有技術(shù)中染料廢水難以進行生物降解、難以進行凈化處理等問題。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02_05,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC No. 5237。優(yōu)選的,所述細菌菌落圓點狀,淡黃色,表面光滑。優(yōu)選的，所述細菌的16S rRNA序列為SEQ No.1。本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05的培養(yǎng)篩選方法，其特征在于所述方法包括將間歇式厭氧污泥反應(yīng)器中污泥樣品進行稀釋后按照常規(guī)培養(yǎng)形成菌落，然后挑單菌落分離純化得到純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05 的步驟。優(yōu)選的,所述方法中還包括將所述純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)M0W-02-05菌株按照3 5%的接種量接入液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基的pH值控制在6. 8 7. 2范圍內(nèi)，培養(yǎng)溫度為33 38°C，培養(yǎng)時間為24h 48h，得到擴大培養(yǎng)的產(chǎn)酸克雷伯氏菌 M0W-02-05 菌株。

優(yōu)選的，所述方法中所述的液體培養(yǎng)基以其組分的配比計包括蛋白胨10重量份數(shù)，酵母膏5重量份數(shù)，氯化鈉10重量份數(shù)，水1000重量份數(shù)，且液體培養(yǎng)基的pH值控制在 6. 8 7. 2。本發(fā)明的又一目的在于提供一種所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05在染料廢水凈化處理以及生物產(chǎn)氫中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用中以所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株為菌種，碳源為電子供體，偶氮染料為電子受體，同時進行脫色和產(chǎn)氫作用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用中所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組分為蔗糖6. 84重量份數(shù)，染料O. 327重量份數(shù)，K2HPO41. O重量份數(shù)，KH2PO4 O. 5重量份數(shù)，(NH4)2SO4 2. O重量份數(shù)，MgSO4 · 7H20 O.1重量份數(shù)，微量元素溶液I重量份數(shù)。本發(fā)明的又一目的在于提供一種染料廢水凈化處理方法，其特征在于所述方法中以權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株為菌種，碳源為電子供體，偶氮染料為電子受體，進行脫色凈化處理。使用的微生物產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05菌株分離自中國科學技術(shù)大學蘇州研究院的環(huán)境科學技術(shù)實驗室的間歇式厭氧污泥反應(yīng)器，現(xiàn)在已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，分類命名為Klebsiella oxytoca M0W-02-05,保藏編號為CGMCC No. 5237，保藏日期為2011年9月9日。該菌株的篩選方法是使用常規(guī)的分離、純化和篩選過程，活化培養(yǎng)基(IL):蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g, pH 7 ;篩選培養(yǎng)基(IL):葡萄糖l.Og,甲基橙0. 5g，K2HPO41.llg, KH2PO4 2. 09g, NaHCO3 0. 5g，NH4Cl 0. 28g，MgSO4 · 7H20 0. lg，酵母膏 0.1g ;厭氧脫色和生物產(chǎn)氫培養(yǎng)基(IL): 蔗糖6. 84g，甲基橙0.327g，K2HPO41. Og，KH2PO4 0. 5g,(NH4) 2S042. 0g, MgSO4 · 7H20 0. lg,微量元素溶液 Iml ;微量元素溶液(IL)FeSO4 · 7H205g，ZnSO4 · 7H20 0. Ollg, MnCl2 · 4H20 0. lg, CuSO4 · 5H20 0. 392g, Co (NO3)2 · 6H20 0. 248g,NaB4O7 · IOH2O 0. 177g, NiCl2 · 6H20 0. 025g。本發(fā)明提供的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)菌株，命名為M0W-02-05，此菌經(jīng)過Biolog微生物鑒定系統(tǒng)鑒定以及此菌16S rDNA序列分析，其屬于產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)中的成員。產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05的16S rDNA全基因序列已向美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的Genebank基因序列數(shù)據(jù)庫遞交，登錄號為FJ816026。產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05的微生物學特性1、形態(tài)學方面的特性微生物本身形態(tài)學特性菌體為革蘭氏陰性短桿狀，大小為(0.2 0.4)μ mX (2. O 2. 3) μ m，無鞭毛，有動力，無芽孢，無莢膜。2、培養(yǎng)學方面的特性培養(yǎng)基用的是Luria-Bertani (LB)培養(yǎng)基。其在LB固體培養(yǎng)基上的微生物學特性菌落呈圓形，光滑，濕潤，表面凸起，中心不透明，邊緣規(guī)則，大小為l_3mm，有輕微異味。該菌為兼性厭氧菌。3、生理生化特征( I)桿狀；
(2)革蘭氏陰性；(3)氧化/發(fā)酵(0/F) :F發(fā)酵型；(4)氧化酶陰性；(5) DNA 酶(37° C):陰性；(6)檸檬酸陽性；(7)乳糖陽性;(8)蔗糖陽性；(9)苯丙氨酸脫氨酶陰性；(10) D-葡萄糖，產(chǎn)酸陽性；(11) D-葡萄糖，產(chǎn)氣陽性；(12)甘露醇陽性；(13)尿素陽性；(14)丙二酸鹽陽性；(15)半乳糖陽性;(16)硝酸鹽還原 陽性；(17)木糖陰性；(18)蜜二糖陽性；(19)鼠李糖陽性；(20)纖維二糖陽性；(21)肌醇陽性；(22)吲哚陰性;(23)甲基紅陰性(24) V-P 實驗陽性；通過生理生化檢測、Biolog微生物鑒定系統(tǒng)鑒定以及此菌16S rDNA序列分析均表明此菌為產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)中的成員，因此可以精確地將本發(fā)明的M0W-02-05分類為產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)，從而建立了分類鑒定微生物的一種快速(利用Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，16h內(nèi)即可得到鑒定結(jié)果)、可靠、準確的途徑。本發(fā)明的細菌經(jīng)鑒定為Klebsiella oxytoca M0W-02-05，實驗表明該菌株能在24小時能將培養(yǎng)基中的327mg/l的甲基橙染料全部降解。并且，該細菌對多種染料如活性黑-5、甲基紅、消散橙_3、酸紅-88等均具有良好的脫色能力，同時產(chǎn)氫量可達到1. 6mol/mol glucose。充分說明該菌株可用于各種含染料廢水的生物系統(tǒng)，具有廣泛的實際應(yīng)用前
旦
-5^ O一株脫色、產(chǎn)氫細菌，命名為產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05 (KlebsiellaoxytocaM0W-02-05)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo. 5237。所述的Klebsiella oxytoca MOff-O2-O5菌落圓點狀，淡黃色，表面光滑，GenBank注冊號為FJ816026，它的16SrRNA序列為SEQ No.1所示的序列，即GCAGTCGACGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCAGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGCGATAAGGTTAATAACCTTGTCGATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCTGTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCGAAACTGGCAGGCTGGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTCCCTTGAGGAGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGGGAACTTAGCAGAGATGCTTTGGTGCCTTCGGGAACTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGGTTCGGCCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCAGTGATAAACTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCATATACAAAGAGAAGCGACCTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCATAAAGTATGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGCTA。
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所述的菌株Klebsiella oxytoca M0W-02-05使用常規(guī)的分離、純化的培養(yǎng)方法，其特征是用接種環(huán)挑取活化平板培養(yǎng)基上的細菌菌株接到裝有菌種活化培養(yǎng)基的三角瓶中，在設(shè)置溫度設(shè)置為35°C、轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床里震蕩8小時，所得菌體離心(8，OOOg)20分鐘，菌體用磷酸鹽緩沖液洗滌，再離心，反復(fù)3次，即可獲得乳白色無污染的菌株細胞。所述培養(yǎng)基組成成分為蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至1L，pH 7。所述菌株Klebsiella oxytoca M0W-02-05的用途,能使多種偶氮染料脫色,且能利用溶液中的有機碳源(葡萄糖、蔗糖等進)產(chǎn)氫，厭氧脫色和生物產(chǎn)氫培養(yǎng)基組成成分為蔗糖 6. 84g,染料 0. 327g，K2HPO41. 0g, KH2PO4O. 5g，(NH4)2SO4 2. 0g, MgSO4 · 7H20 0.1g,微量元素溶液1ml。微量元素溶液(IL)=FeSO4 · 7H20 5g, ZnSO4 · 7H20 0. Ollg, MnCl2 · 4Η200· lg,CuSO4 · 5Η20 O. 392g, Co (NO3) 2 · 6Η20 O. 248g, NaB4O7 · IOH2O O. 177g, NiCl2 · 6Η20 O. 025g,加水至lL，pH7.0。以該菌株為菌種，葡萄糖為碳源(電子供體)，偶氮染料為電子受體，同時進行脫色和產(chǎn)氫作用。相對于現(xiàn)有技術(shù)中的方案，本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明的目的是提供一株分離自間歇式厭氧污泥反應(yīng)器的能夠高效降解染料且生物產(chǎn)氫的菌株，并利用該菌株對染料廢水進行脫色處理同時回收氫氣。該細菌是一株具有極高活力，對染料具有廣譜的脫色能力，同時對葡萄糖等有機碳源具有高效的產(chǎn)氫能力，其培養(yǎng)方法簡單，生長速度快，不易變異，可以用作研究細菌對染料脫色和生物產(chǎn)氫機制雙重作用的模式菌株，具有在染料廢水處理以及生物產(chǎn)氫的工業(yè)化應(yīng)用前景。


下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步描述圖1為本發(fā)明篩選所得的染料降解與產(chǎn)氫細菌的電鏡圖。
圖2為本發(fā)明細菌的產(chǎn)氫動力學實驗圖。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對上述方案做進一步說明。應(yīng)理解，這些實施例是用于說明本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實施例中采用的實施條件可以根據(jù)具體廠家的條件做進一步調(diào)整，未注明的實施條件通常為常規(guī)實驗中的條件。實施例1菌體的篩選I)待間歇式厭氧污泥反應(yīng)器間歇停止時，取反應(yīng)器的底泥Iml ；2)加入充滿氮氣且裝有IOOml篩選培養(yǎng)基的血清瓶中，在設(shè)置溫度為35° C、轉(zhuǎn)速為120rpm的搖床中震蕩至血清瓶內(nèi)液體無色；3)取此時血清瓶中的菌液1ml，再重復(fù)步驟2，得到篩選5次后的菌液；4)取Iml篩選5次的菌液，用無菌水稀釋5000倍后涂布到固體LB培養(yǎng)基平板上，在通過平板劃線分離法得到單個菌株；5)用接種環(huán)挑取平板培養(yǎng)基上的單個菌株，接入到LB液體培養(yǎng)基中好氧生長8小時，離心，收集菌體；6)將收集得到的菌體，重復(fù)步驟2后，利用目視比色法，選取脫色效果最佳的一株菌株。如前所述，所用的 篩選培養(yǎng)基組成成分為葡萄糖l.Og，甲基橙0.5g，K2HPO4
1.1 lg，KH2PO4 2. 09g，NaHCO3 O. 5g，NH4Cl 0. 28g，MgSO4 · 7Η200· lg，酵母膏 0. lg，加水至 1L，pH7。LB培養(yǎng)基平板組成成分為蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，加水至1L,pH 7。實施例2菌體的培養(yǎng)用接種環(huán)挑取活化平板培養(yǎng)基上的細菌菌株Klebsiella oxytocaM0W-02_05接到裝有菌種活化培養(yǎng)基的三角瓶中，在設(shè)置溫度為35°C、轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床里震蕩8小時，所得菌體離心(8，OOOg) 20分鐘，菌體用磷酸鹽緩沖液洗滌，再離心，反復(fù)3次，即可獲得乳白色無污染的菌株細胞。如前所述，培養(yǎng)該菌株的培養(yǎng)基組成成分為蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g，加水至lL，pH7。實施例3菌體形態(tài)學觀察細菌的光學顯微鏡觀察按照實施例2的方法收集菌體，采用常規(guī)的火焰固定法固定細菌，后放入光學顯微鏡下進行染色實驗觀察。細菌的掃描電子顯微鏡(SEM)觀察按照實施例2的方法收集菌體，用50mM磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌三次，然后用
2.5%戊二醛固定過夜，再用PBS洗滌三次，最后用乙醇依次脫水、真空干燥制成樣本，噴金后用SEM進行觀察。實施例4菌株的鑒定按照實施例2的步驟收集菌體，根據(jù)細菌DNA提取試劑盒的方法步驟提取出菌株的總DNA，并通過瓊脂糖凝膠電泳驗證。取50ml的DNA樣品進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增，用于擴增的PCR反應(yīng)弓丨物為通用引物正向引物27F 5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ；反向引物 1492R5-GGTTACCTTGGTTACGACTT-3 ;擴增條件95。C 5min ;60。C 30S ;72。Clmin,30個循環(huán)；72° C 9min。得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳驗證后進行16S rRNA基因測序,將序列輸入到GenBank核酸數(shù)據(jù)庫中利用BLAST軟件進行序列比對，得到菌株的序列與M0W-02-05的相似性達到99%。實施例5菌株對偶氮染料的脫色和生物產(chǎn)氫效果1、在250ml的厭氧脫色和生物產(chǎn)氫培養(yǎng)基中接種實施例2得到的純菌株，調(diào)整溶液中細菌濃度為O. 3g細胞干重/I ;以不加菌株的培養(yǎng)基作為對照組。將裝置放入35°C恒溫搖床中，以180rpm轉(zhuǎn)速震蕩脫色、產(chǎn)氫。如前所述，厭氧脫色和生物產(chǎn)氫培養(yǎng)基組成成分為蔗糖6. 84g,染料O.1mol,K2HPO41. 0g, KH2PO4 O. 5g，(NH4)2SO4 2. 0g, MgSO4 · 7H20 O.1g,微量元素溶液 Iml ;微量元素溶液(IL) =FeSO4 · 7H20 5g, ZnSO4 · 7H20 O. Ollg, MnCl2 · 4Η200· lg, CuSO4 · 5Η20 O. 392g,Co (NO3) 2 · 6Η20 O. 248g, NaB4O7 · IOH2O O. 177g, NiCl2 · 6Η200· 025g，加水至 1L, ρΗ7· O。2、每隔10分鐘取氣體樣一次，用注射器排出血清瓶的氣體體積，并用氣體取樣針抽取Iml排出的氣體，供氣相色譜GC-TCD測定氫氣量；色譜條件為sA分子篩為單體，高純氬氣作為載氣，流速30ml/min，進樣口、柱溫、檢測器溫度分別為100°C、5(TC和100°C。每隔30分鐘取液體樣一次，樣品經(jīng)過離心，取上清液利用紫外-可見分光光度計測定培養(yǎng)基在染料的最大吸收峰處的吸收值。脫色率(％)= (A-B)/AX 100%，其中A為脫色前培養(yǎng)基的OD值，B為脫色后的培養(yǎng)基OD值。在該培養(yǎng)條件下，菌株Klebsiella oxytoca M0W-02-05對327mg/L甲基橙染料脫色率24小時內(nèi)達99%以上，產(chǎn)氧量可達1. 6mol/mol glucose。上述實例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所做的等效變換或修飾 ，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
< 110>中國科學技術(shù)大學蘇州研究院
<120>產(chǎn)酸克雷伯氏菌MOW-02-05及其篩選方法和應(yīng)用< 30>
<160>I
<170>PAT E NTIN V E RSION 3.5
<210> I<211> 1404
<212> RNA
<213> Klebsiella oxytoca<400> I
gcagtcgacg qftaqrcacaqfa qfaqrcttgctctcggqftgacg agtgqfcgqfac ggqftqragtaa60 tgtctgggaa actgcctgat ggagggggataactact.gga aaccfgtagct aataccgcat120
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tcccggqcct tgtacacacc gcccgtcacaccatggcragt gcrgttgcaaa agaagtagqt1330agcttaacct tc^fgagggfc qfcta 丄4U權(quán)利要求
1.一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02_05,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCCNo. 5237。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05，其特征在于所述細菌菌落圓點狀，淡黃色，表面光滑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05，其特征在于所述細菌的16S rRNA 序列為 SEQ No.1。
4.一種權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05的培養(yǎng)篩選方法，其特征在于所述方法包括將間歇式厭氧污泥反應(yīng)器中污泥樣品進行稀釋后按照常規(guī)培養(yǎng)形成菌落，然后挑單菌落分離純化得到純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中還包括將所述純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05菌株按照3 5%的接種量接入液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基的PH值控制在6. 8 7. 2范圍內(nèi)，培養(yǎng)溫度為33 38°C，培養(yǎng)時間為24h 48h， 得到擴大培養(yǎng)的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述方法中所述的液體培養(yǎng)基以其組分的配比計包括蛋白胨10重量份數(shù)，酵母膏5重量份數(shù)，氯化鈉10重量份數(shù)，水1000重量份數(shù)，且液體培養(yǎng)基的pH值控制在6. 8 7. 2。
7.—種權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05在染料廢水凈化處理以及生物產(chǎn)氫中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用中以權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株為菌種，碳源為電子供體，偶氮染料為電子受體，同時進行脫色和產(chǎn)氫作用。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用中權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組分為蔗糖6. 84重量份數(shù)，染料O. 327重量份數(shù)，K2HPO41. O 重量份數(shù)，KH2PO4 O. 5 重量份數(shù)，(NH4)2SO4 2. O 重量份數(shù)，MgSO4 · 7H20 O.1 重量份數(shù)，微量元素溶液I重量份數(shù)。
10.一種染料廢水凈化處理方法，其特征在于所述方法中以權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株為菌種，碳源為電子供體，偶氮染料為電子受體，進行脫色凈化處理。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌MOW-02-05及其篩選方法和應(yīng)用，該菌分離自間歇式厭氧污泥反應(yīng)器，能夠高效降解染料和生物產(chǎn)氫，利用該菌株對偶氮染料進行脫色和對有機碳源進行生物產(chǎn)氫。經(jīng)鑒定這株菌為Klebsiella oxytoca MOW-02-05，并將其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，保藏編號為CGMCC No.5237。本發(fā)明得到的菌株可解決傳統(tǒng)厭氧反應(yīng)器處理偶氮染料廢水時存在的反應(yīng)器酸化的問題，適合應(yīng)用于印染染料廢水的生物處理。
文檔編號C02F3/34GK103045499SQ201210427588
公開日2013年4月17日 申請日期2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月31日
發(fā)明者虞磊, 俞漢青, 李文衛(wèi) 申請人:中國科學技術(shù)大學蘇州研究院