專利名稱：一種酵母菌及其在蔬菜腌制廢水弱堿化處理中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于環(huán)境微生物技術領域，具體涉及一株假絲酵母菌
G70(C"wfefe //^wwe朋ge"w:y)，保藏編號為CGMCC No.3000。本發(fā) 明還涉及假絲酵母菌G70(Ow^V^ Aa/mwe朋ge"w'》在蔬菜腌制廢水 處理中的用途。
背景技術：
腌制蔬菜在我國民眾的飲食中有著不可取代的地位，流傳久遠而 廣泛。隨著工業(yè)化的發(fā)展，腌制蔬菜產業(yè)有了長足的發(fā)展，有了像榨 菜、東北泡菜這樣一批暢銷全國的產品；而產業(yè)規(guī)模的擴大，更是讓 腌制蔬菜產業(yè)成為了一些地方的支柱產業(yè)，重慶涪陵區(qū)搾菜產業(yè)鏈年 產值達20多億元，浙江余姚市的搾菜產業(yè)年產值也在15億元以上。
但是，蔬菜腌制會產生大量的高鹽酸性有機廢水，直接排放會造 成嚴重的環(huán)境污染； 一是導致接納水系的富營養(yǎng)化，導致水體變黑發(fā) 臭；二是破壞農田土壤結構，使土壤堿性增導致土質硬化、板塊化； 三是腌制廢水自身會散發(fā)出難聞的異味，嚴重影響周圍居民生活環(huán) 境。
目前，我國蔬菜腌制處理中遇到的問題包括以下幾個方面一，廢水含鹽量高，傳統(tǒng)的活性污泥法處理效果很差，而費用較高的物化 處理方法又很難被利潤微薄的生產企業(yè)接受；二，生產企業(yè)數量眾多 且規(guī)模普遍較小，加之分布零散，不利于采用先進技術對廢水進行集 中的大規(guī)模處理。以榨菜為例，只有涪陵地區(qū)的少數幾家龍頭企業(yè)實 現(xiàn)了對榨菜腌制液的處理和資源回收。
嗜(耐)鹽菌的生理特性使其能夠適應高鹽的生長環(huán)境，己有研 究結果表明嗜(耐)鹽菌在處理高鹽污水方面具有很大的優(yōu)勢和潛力。 目前，蔬菜腌制廢水的處理研究也已經轉向了嗜(耐)鹽菌的工程利 用，并在理論研究和工藝設計上取得了一些重大突破。但是，由于蔬 菜腌制廢水中含有較多的有機酸，廢水偏酸性且pH波動較大，不利 于嗜(耐)鹽菌的生長，使得微生物處理系統(tǒng)無法穩(wěn)定、有效地運行。
現(xiàn)有普遍通過添加化學藥劑來調節(jié)蔬菜腌制廢水的pH，但這種方法
存在以下兩個問題 一是成本高，因為蔬菜腌制廢水中含有較多的有 機酸，酸度大，需要投加大量的藥劑才能將廢水pH調節(jié)至中性；二 是產生了額外的污染，化學藥劑的大量使用不僅增加了廢水中的污染 物量，而且會產生大量的污泥，這些污泥如果處理不當會造成二次污 染。因此，迫切需要發(fā)展一種經濟可行的新方法來對蔬菜腌制廢水進 行弱堿化處理。
酵母菌因其獨特的細胞結構，對外部環(huán)境具有較強的適應能力， 具有較廣的pH生長范圍和高有機負荷耐受力；而有些被稱為耐鹽性 酵母或滲透耐性酵母的酵母菌更是能在較高鹽濃度的環(huán)境中生長。己 有的石開究發(fā)現(xiàn)尺/w，gramyces ,ag77&、 Sacc/zarawji/cay cerev&z》e 、Ca"(i油w".to (Hang Y, D., Splittstoesser D. F., Landschoot R. L. (1972), Appl. Environ. Microbiol., 24 (6):勵7-1008)和i Woto油n^ra(C.T. Shih, Y.D. Hang (1996)， Lebensm,Wiss. u,Techno., 29:570-572)不僅可
以在泡菜廢水中生長，而且可以通過自身的代謝活動將泡菜廢水的酸 度完全去除掉，同時對COD也有很好的去除效果。
因此，篩選合適的酵母菌，使其能夠在對蔬菜腌制廢水進行弱堿 化處理的同時去除廢水的部分COD，將是大幅降低蔬菜腌制廢水處 理成本的一種有效方式。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的在于克服目前用化學方法調節(jié)蔬菜腌制廢水 pH的缺陷，提供一株既可以對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理又具有 較好的COD去除效果的酵母菌。
本發(fā)明所提供的對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理的酵母菌株是 假絲酵母菌 G70(Ga"^3b Afl/mwea"ge"w; , 或簡寫為 C. ^/mwe朋ge附外該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.3000，保藏日期為2009年4 月2曰。
假絲酵母菌G70從浙江慈溪某榨菜廠污水排放口泥樣中分離得
到。富集和分離培養(yǎng)基均為榨菜廢水，將榨菜廢水過濾、12rc滅菌
30min即可，pH4.6，鹽度3.5%(以NaCl計)，固體培養(yǎng)基加6%的瓊 脂；置于培養(yǎng)箱3(TC培養(yǎng)。在液體培養(yǎng)基里，假絲酵母菌G70形成沉淀；在固體培養(yǎng)基里，該菌菌落呈米黃色，圓形，表面突起，不濕
潤，直徑約2mm;細胞顯微鏡下(01ympus,BX40)該菌株呈現(xiàn)運動 性，形態(tài)為橢圓形居多(3-5nmx2-3pm)， 一端芽殖(見圖l)。 經生物學特性研究，假絲酵母菌G70具有如下的生理特征
1) 兼性好氧；
2) 溫度生長范圍為15-40°C，最適為25-30°C;
3) pH生長范圍為3-10，最適為4-5;
4) 鹽度生長范圍(以NaCl計)為0-10%，最適為0-2%。 對假絲酵母菌G70的26S rRNA基因進行PCR擴增與序列測定，
發(fā)現(xiàn)與已知假絲酵母菌C朋^/a Aa/wwe朋gm^ NBRC 101967T的 26S rRNA基因序列相似性大于99.2%，假絲酵母菌G70的26S rRNA 基因序列如SEQIDNO.l所示。
假絲酵母菌G70可在液體發(fā)酵培養(yǎng)基如麥芽浸出粉培養(yǎng)基和察 氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)，優(yōu)選麥芽浸出粉培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度15-40°C;培養(yǎng) 后可在4-C下短期保藏，若要長期保藏，則使用甘油冷凍管或冷凍干 燥管保藏比較合適。上述麥芽浸出粉培養(yǎng)基的組成(w/V)為干麥 芽浸出粉0.3%、干酵母粉0.3%、蛋白胨0.5%、葡萄糖1%， pH約5.5， 溶劑為水，固體培養(yǎng)基加2%瓊脂。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種使用假絲酵母菌G70 (C.
CGMCC No.3000對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理 的方法，包括以下步驟
l)將假絲酵母菌G70接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中(優(yōu)選麥芽浸出粉液體培養(yǎng)基)進行活化培養(yǎng)，優(yōu)選的培養(yǎng)條件為25-3(TC活化培養(yǎng) 18-24h;
2) 將活化培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按1-10% (v/v)的接種量轉 接到蔬菜腌制廢水中進行擴大培養(yǎng)，優(yōu)選的培養(yǎng)條件為在25-3(TC培 養(yǎng)12陽24h;
3) 將擴大培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按照1-10% (v/v)的接種量 投加到蔬菜腌制廢水處理池中，悶曝培養(yǎng)，至廢水pH上升到7.0-8.0， 污泥沉降比為10-20%,完成污泥培養(yǎng)；
4) 根據實際工藝設計以連續(xù)進水或間歇進水方式對蔬菜腌制廢 水進行好氧處理，完成對廢水的弱堿化處理。具體工藝參數可根據后 續(xù)處理對廢水pH的要求來設定。
上述方法步驟2)中，可先將活化培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按 1-10% (v/v)的接種量轉接到蔬菜腌制廢水中在25-3(TC進行適應性 培養(yǎng)12-18h，再將適應性培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按1-10% (v/v) 的接種量轉接到蔬菜腌制廢水進行擴大培養(yǎng)；擴大優(yōu)選的培養(yǎng)條件為 在25-30。C培養(yǎng)12-24h。
擴大培養(yǎng)可根據實際需要進行多次重復，直至液體培養(yǎng)的假絲酵 母菌G70滿足用量要求。
上述方法步驟3)中，假絲酵母菌G70按照1-10% (v/v)的接種 量可一次性投加完成，也可在一定時間內分批投加完成。
上述方法步驟4)中，所述的間歇進水方式具體可采用SBR工藝 對步驟3)中的蔬菜腌制廢水進行處理，具體工藝參數例如處理周期、出水排水量、各段運行時問、溫度等，可根據實際情況進行設定。
為保證假絲酵母菌G70的活性及處理效果，上述方法中蔬菜腌 制廢水的pH應不小于3.0(優(yōu)選pH范圍為3.0-7.0，更優(yōu)選為3.5-5.0)， 鹽濃度以NaCl計應不大于10%。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的假絲酵母菌G70 CGMCC No.3000是一株鹽度耐受 能力強，pH生長范圍廣的菌株，生長代時短，菌體沉降性好；該菌 株可利用自身的生長代謝使蔬菜腌制廢水的pH在較短時間內由酸性 上升至弱堿性，且能有效去除蔬菜腌制廢水的部分COD。本發(fā)明提 供的蔬菜腌制廢水弱堿化處理方法工藝簡單，成本低廉，快速有效， 可應用于蔬菜腌制廢水的預處理階段，對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處 理。本發(fā)明大幅降低了蔬菜腌制廢水的處理成本，有望在蔬菜腌制廢 水處理方面發(fā)揮重大作用。


圖1為假絲酵母菌G70 CGMCCNo.3000的顯微鏡照片，放大倍 數1000倍；圖中黑點為酵母菌。
圖2為假絲酵母菌G70 CGMCC No.3000生長曲線圖，培養(yǎng)溫度 為30°C。
具體實施方式
實施例1、假絲酵母菌G70的分離篩選將采自浙江慈溪某榨菜廠污水排放口泥樣2g放在50ml經過濾的 搾菜廢水中，加入玻璃珠振蕩打散，取上清液5ml加入到50ml經過 濾的榨菜廢水中，溫度3(TC，轉速160rpm，搖床富集培養(yǎng)4天。將 富集培養(yǎng)菌液用過濾、滅菌后的榨菜廢水梯度稀釋后涂布榨菜廢水培 養(yǎng)基平板，3(TC靜置培養(yǎng)4天；根據菌落形態(tài)挑取不同的單菌落接種 到過濾、滅菌后的榨菜廢水中，溫度3(TC,轉速160rpm，搖床培養(yǎng) 48h，篩選可使搾菜廢水堿化的菌株；將可使榨菜廢水堿化的菌株進 行劃線培養(yǎng)，得到單克隆，劃線仍使用榨菜廢水培養(yǎng)基平板。挑取單 克隆轉接到過濾、滅菌后的榨菜廢水中，溫度30。C，轉速160rpm， 搖床培養(yǎng)；待菌液生長至OD6。。為0.3-0.6時，按2。/。(v/v)的接種量轉 接至裝有300ml過濾除菌榨菜廢水的錐形瓶中，溫度30°C，轉速 160rpm，搖床培養(yǎng)48h，每6h取一次樣測定菌液pH和COD (菌液 6000rpm離心10min后收集上清，用連華科技的5B-3B型COD多元 速測儀測定)，篩選得到堿化效果和COD去除效果最好的菌株假絲酵 母菌G70 (CGMCCNo.3000)。
上述榨菜廢水pH為4.6，鹽度為3.5% (以NaCl計)，固體培養(yǎng) 基加6%瓊脂；滅菌條件為121'C， O.lMPa， 30min。
實施例2、假絲酵母菌G70生長條件
1)生長溫度范圍用接種環(huán)挑取假絲酵母菌G70到麥芽浸出粉 培養(yǎng)基斜面(干麥芽浸出粉0.3%、干酵母粉0.3%、蛋白胨0.5%、葡 萄糖1%，瓊脂2%， pH自然(約5.5))' 3CTC恒溫靜置培養(yǎng)24-36h，出現(xiàn)乳白色的菌體；用接種環(huán)從斜面上挑取生長良好的菌體接種到裝
有麥芽浸出粉液體培養(yǎng)基(干麥芽浸出粉0.3%、干酵母粉0.3%、蛋 白胨0.5%、葡萄糖1%， pH自然(約5.5))的錐形瓶中，溫度3(TC， 轉速160rpm，搖床培養(yǎng)，待菌液生長至OD6o。為0.3-0.6時按2。/。(v/v) 的接種量轉接至新鮮的麥芽浸出粉培養(yǎng)基，測定假絲酵母菌G70的 生長溫度范圍。溫度梯度為10°C、 15°C、 20°C、 25°C、 30°C、 35°C、 4(TC和45'C，轉速160ipm，搖床培養(yǎng)，用紫外分光光度計測定菌液 的OD6(X)。結果表明假絲酵母菌G70生長溫度范圍為15-40°C,最適 為25-30。C。
2) 生長鹽濃度范圍(以NaCl計)分別向配制好的麥芽浸出粉 液體培養(yǎng)基中加入不等量的NaCl，配制鹽濃度梯度培養(yǎng)基，NaCl濃 度梯度(m/v)為0、 1%、 2%、 3%、 4%、 5%、 6%、 7°/。、 8%、 9%、 10%、 15%、 20%。將生長至對數期的假絲酵母菌G70按2。/。(v/v)的 接種量轉接至鹽濃度梯度培養(yǎng)基，溫度30。C，轉速160rpm，搖床培 養(yǎng)，用紫外分光光度計測定菌液的OD,。結果表明假絲酵母菌G70 的生長鹽濃度范圍(以NaCl計)為0-10%，最適為0-2%。
3) 生長pH范圍分別向配制好的麥芽浸出粉液體培養(yǎng)基中加 入鹽酸或NaOH調節(jié)其pH， pH梯度為2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10。將生長至對數期的假絲酵母菌G70按2。/。(v/v)的接種量轉接至pH 梯度培養(yǎng)基，溫度30。C，轉速160rpm，搖床培養(yǎng)，用紫外分光光度 計測定菌液的OD,。結果表明假絲酵母菌G70的生長pH范圍為 3—10，最適為4-5。將活化后的假絲酵母菌G70按2%(*)的接種量轉接至麥芽浸出
粉培養(yǎng)基，溫度30。C，轉速160rpm，搖床培養(yǎng)，12小時可至對數生 長期(見圖2)。
實施例3:假絲酵母菌G70的26S rRNA基因的PCR擴增與序列 測定
取新鮮菌液lml， 12000rpm離心lmin，棄上清；向沉淀中加入 lOO[il GTE溶液(25 mmol/LTris隱HCl (pH8.0) ， 10 mmol/L EDTA， 50 mmol/L葡萄糖)在旋渦混合器上振蕩混勻至沉淀徹底分散；再加入 650plGTE溶液，振蕩混勻。接著懸液中加入7.5^1的100mg/ml的溶 菌酶至終濃度為lmg/ml，混勻，37'C溫浴30min;然后再向懸液中加 入7.5^1的10mg/ml的蛋白酶K至終濃度為0.1mg/ml，混勻，55°C 溫浴lh，中間輕緩顛倒離心管數次。溫浴結束后向溶液中加入等體 積(750^1)的苯酚/氯仿/異戊醇，上下顛倒混勻，12000rpm離心5min; 將上清移至新的離心管中，然后再用苯酚/氯仿/異戊醇溶液抽提一次； 取上清至新的離心管中(約500pl)，加入1/10體積的3M的NaAc (pH5.2)，混勻，加入2倍體積的無水乙醇，混勻，-20"靜置30min 沉淀DNA，取出，4°C、 12000rpm離心10min;小心棄去上清液，用 lml的70%乙醇洗滌沉淀，4°C、 12000rpm離心5min，棄上清，將沉 淀放入55。C烘箱中數分鐘除去乙醇；然后用5(^1含RNaseA (終濃 度50^g/ml)的TE (pH8.0)溶解，37。C溫浴30min，除去RNA;即 可獲得用于PCR的基因組DNA。擴增26S rRNA基因的一對通用引物如下
正向(NL1): 5，-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3， 反向(NL4): 5，-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3， 上述引物根據釀酒酵母(fecc/wramycas cewWw^) 26S rRNA 基因序列做位置參照點(O'Donnell K. "The Fungal Holomorph: Mitotic, Meiotic and Pleomorphic Speciation in Fungal Systematics," 1993, 225-233, CAB International, Wallingford， UK)。 PCR反應體系 (50 pi)為10xbuffer (Mg2+free) 5^1， Mg2+ (25mM) 3^1， IO^iM 引物各lpl， dNTP (lOmM) 0.5^1，模板DNA (50ng/pl) 1^1， Taq 酶(5U/pl) 0.5^1， MiliQ水38(il。 PCR反應條件為94。C預變性 5min; 94。C變性60s、 52。C退火45s、 72。C延伸75s; 35個循環(huán)后 72"C延伸5min。 PCR產物純化與序列測定由北京諾賽基因組研究 中心有限公司完成。完成測定的26S rRNA基因部分片斷有效長度 為538bp，與菌株OwG /c/a Afl/wwea"gem/s NBRC 1019677的26S rRNA序列相似性大于99.2%，。假絲酵母菌G70 CGMCC No. 3000 的26S rRNA序列如Seq ID No.l所示。
實施例4、假絲酵母菌G70弱堿化處理榨菜廢水效果^E
按照實施例2的方法，用麥芽浸出粉體培養(yǎng)基將假絲酵母菌G70 培養(yǎng)至對數期，按照10%的接種量(v/v)轉接到過濾除菌的榨菜廢 水中進行適應性培養(yǎng)，溫度30。C，轉速160rpm，搖床培養(yǎng)18h。將 適應性培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按照2%的接種量(vAO轉接到裝有300ml過濾除菌搾菜廢水中的錐形瓶中，溫度30。C，轉速160rpm， 搖床培養(yǎng)24h;設置兩份空白對照，對照1所用樣品為過濾除菌后的 搾菜廢水，對照2所用樣品為未過濾除菌的榨菜廢水。實驗結果表明， 搖床培養(yǎng)條件下，假絲酵母菌G70可在24h內使榨菜廢水pH上升至 7.7左右，COD去除率為25-30%;對照樣的pH和COD幾乎沒變化。
上述搾菜廢水pH4.5，鹽度3.5% (以NaCl計)。
實施例5、 SBR工藝下用假絲酵母菌G70弱堿化處理榨菜廢水
按照實施例4的方法，將適應性培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按照 2%的接種量(v/v)轉接到榨菜廢水中進行擴大培養(yǎng)，溫度3(TC，轉 速160rpm，搖床培養(yǎng)18h;將擴大培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按照5% 的接種量(v/v)投加到有效容積為4L的自制SBR反應裝置中，進 行悶曝處理，至廢水pH上升到7左右，污泥沉降比為15%，完成污 泥培養(yǎng)。污泥培養(yǎng)完成后，啟動SBR反應裝置， 一個處理周期為18h， 包括進水0.5h，曝氣反應14h，沉淀lh，出水0.5h，閑置2h;每次 出水排水量為有效容積的85% (3.6L)，保持污泥沉降比在15%。連 續(xù)運行兩周，出水pH為6.7-7.3， COD去除率為30-35%。
上述榨菜廢水pH4.5，鹽度3.5% (以NaCl計)，環(huán)境溫度為 23-30°C。實施例6、 SBR工藝下用假絲酵母菌G70弱堿化處理筍干腌制廢水
按照實施例5的方法，將擴大培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70投加到 有效容積為4L的自制SBR反應裝置中，對筍干腌制廢水進行弱堿化 處理， 一個處理周期為16h，包括進水0.5h，曝氣反應14h，沉淀lh， 出水0.5h;每次出水排水量為有效容積的85% (3.6L)，保持污泥沉 降比在15%。連續(xù)運行兩周，出水pH為7-7.5， COD去除率為35-45%。
上述筍干腌制廢水pH為5-5.5，鹽度2.8% (以NaCl計)，環(huán)境 28-33 。C。
實施例7、連續(xù)進水條件下用假絲酵母菌G70弱堿化處理榨菜廢水
按照實施例5的方法，將擴大培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按照1% 的接種量(v/v)投加到有效容積為10立方的好氧處理池中，進行悶 曝處理，至廢水pH上升到7左右，污泥沉降比為15%，完成污泥培 養(yǎng)。污泥培養(yǎng)完成后，開始連續(xù)進水處理，水力停留時間為16h，污 泥齡為14d。連續(xù)檢測一個月，進水pH為3.5-5，鹽度為3-4% (以 NaCl計)；出水pH為6.7-8,COD去除率為30-35%;環(huán)境溫度25-35°C 。序列表
<110>浙江大學
<120> —種酵母菌及其在蔬菜腌制廢水弱堿化處理中的應用
<160> 1
<170> Patentln version 3.3
<210〉 1
<211> 538
<212> DNA
<213> Cawcfe/a//wf/wmeflr"gem7、 <400> Seq ID No.l
GCGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAGATTTGAMTCGTGTTTCGGCACGAGTTGTAGAG60
TGTAGGCGGGAGTGTCTGCGGCGGGCAGTGTCCMGTCCCTTGGAACAGGGCGCCACTGA120
GGGTGAGAGCCCCGTGGGACGCTGCGCAAAGCTTTGAGACCCTGCTGACGAGTCGAGTTG180
TTTGGGMTGCAGCTCCAAGCGGGTGGTAAATTCCATCTAAGGCTAAATACTGGCGAGAG240
ACCGATAGCGAACMGTACTGTGAAGGAAAGATGA嵐GCACTTTGAAAAGAGAGTGAAA300
CAGCACGTGAAATTGTTGMAGGGAAGGGTATTGGGCCCGACATGGGGAGTGCGCACCGT360
TGCCTCTTGTAGGCGGCGCTCTGGGCGCTCTCTGGGCCAGCATCGGTTCTTGCTGCAGGA420
GAAGGGGTGCCGGAACGTGGCTCTTCGGAGTGTTACAGCCGGCGCCAGATGCTGCGTGCG480
GGGGACCGAGGGCTGCGACTTATGTCTCGGATGCTGGCACAACGGCGCAATACCGCCC538
權利要求
1、一種假絲酵母菌G70(Candida thaimueangensis)，菌種保藏編號為CGMCC No.3000。
2、 根據權利要求1所述的假絲酵母菌G70(Om&^ ^n7m^a"gm^)，其特征在于所述假絲酵母菌G70(Ow^'fib f/2az,附we朋gem/力的26S rRNA序列如S叫ID NO.l所示。
3、 一種使用權利要求1所述的假絲酵母菌G70(C朋A^ ^^7m^朋gera/力對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理的方法，包括以 下步驟1) 將假絲酵母菌G70接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進行活化培養(yǎng)；2) 將活化培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按1-10% (Wv)的接種量轉接到蔬菜腌制廢水中進行擴大培養(yǎng)；3) 將擴大培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按照1-10% (v/v)的接種量 投加到蔬菜腌制廢水處理池中，悶曝培養(yǎng)，至廢水pH上升到7.0-8.0， 污泥沉降比為10-20°/。，完成污泥培養(yǎng)；4) 根據實際工藝設計以連續(xù)進水或間歇進水方式對蔬菜腌制廢 水進行好氧處理，完成對廢水的弱堿化處理。
4、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟l) 中的液體發(fā)酵培養(yǎng)基為麥芽浸出粉液體培養(yǎng)基。
5、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟l) 中培養(yǎng)條件為在25-3(TC培養(yǎng)18-24h。
6、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟2)中可先將活化培養(yǎng)好的假絲酵母菌G70按1-10。/。 (v/v)的接種量 轉接到蔬菜腌制廢水中在25-30。C進行適應性培養(yǎng)12-18h，再將適 應性培養(yǎng)好的假絲酵母菌070按1-10% (v/v)的接種量轉接到蔬菜腌制廢水進行擴大培養(yǎng)。
7、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟2) 中的擴大培養(yǎng)條件為在25-30'C培養(yǎng)12-24h。
8、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟2) 中，擴大培養(yǎng)可根據實際需要進行多次重復，直至液體培養(yǎng)的假 絲酵母菌G70滿足用量要求。
9、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟3) 中假絲酵母菌G70按照1-10% (v/v)的接種量可一次性投加完成， 也可在一定時間內分批投加完成。
10、 根據權利要求3-9任一項所述的方法，其特征在于所述 方法中蔬菜腌制廢水的pH范圍為3.0-7.0，鹽濃度以NaCl計不大 于10%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一株保藏編號為CGMCC No.3000，能對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理的假絲酵母菌G70(Candida thaimueangensis)及利用該菌株對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理的方法。假絲酵母菌G70(CGMCC No.3000)是一株鹽度耐受能力強，pH生長范圍廣的菌株，該菌株可在較短的時間內使蔬菜腌制廢水的pH由酸性上升至弱堿性并去除廢水的部分COD，極大地降低了蔬菜腌制廢水的處理成本；其培養(yǎng)方法簡單，生長速度快，易沉降，可用于對蔬菜腌制廢水進行弱堿化處理。該菌株在蔬菜腌制廢水處理方面具有較好的應用前景。
文檔編號C02F3/02GK101586084SQ200910098538
公開日2009年11月25日 申請日期2009年5月14日 優(yōu)先權日2009年5月14日
發(fā)明者敏 吳, 勇 張, 剛 鄭 申請人:浙江大學