一種玉竹多糖和平菇多糖的同步提取方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用雙水相萃取技術(shù)同步高收率提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，以玉竹和平菇為原料得到玉竹和平菇的混合粗提取液，將其經(jīng)過低分子醇/鹽雙水相體系提取分離，再經(jīng)分離純化得到玉竹多糖和平菇多糖萃取液。以及將玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液應(yīng)用于皮膚外用劑中，以起到美容、保濕的護(hù)膚作用。
【專利說明】
一種玉竹多糖和平菇多糖的同步提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取及化妝品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從玉竹和平菇中同步 提取玉竹多糖和平菇多糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 平燕（？16111"〇1：118 ostreatus)，又名側(cè)耳，糙皮側(cè)耳，蛇燕等，屬擔(dān)子菌亞門 (Basidiomycotina)，是一種相當(dāng)常見的灰色食用燕。平燕中平燕多糖含量較高，現(xiàn)有技術(shù) 中也有限地公開了一些平菇多糖的提取方法（CN103202864A, 20130717 ; CN104342467A, 20150211; CN101492705A，20090729; "平菇多糖的提取及其抗氧化保濕功效研究"，董銀 卯等，《香料香精化妝品》，2008年8月第4期）。
[0003] 玉竹(polygonatum odoratum)，為百合科多年生草本植物，主要含有玉竹多糖、甾 體皂苷、黃酮、鞣質(zhì)、留醇、粘液質(zhì)、生物堿和強心苷等成分。現(xiàn)有技術(shù)中也有限地公開了一 些玉竹多糖的提取方法（CN103479875A,20140101; CN101585885A,20091125)。
[0004] 目前，玉竹多糖和平菇多糖的提取采用的是超聲波或者微波輔助的水溶醇沉法。 由于分離沉淀后獲得的多糖提取物中，常會有蛋白質(zhì)、色素等雜質(zhì)，必須繼續(xù)采用吸附法做 進(jìn)一步分離純化，這種提取方法操作復(fù)雜，對設(shè)備的性能要求高，生產(chǎn)成本也高。雙水相體 系(ATPE)以其具有操作方便，分離效率高，對分離物質(zhì)零破壞等諸多特性，被廣泛應(yīng)用于生 物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化工等領(lǐng)域的產(chǎn)品分離和提取。尤其是低分子醇/鹽雙水相體系 具有價廉、低毒、粘度較小等優(yōu)勢，可以用于天然產(chǎn)物的提取和分離。目前利用雙水相體系 分離純化玉竹多糖和平菇多糖的研究尚未見報道。為此，我們通過對低分子醇與鉀鹽、鈉鹽 和銨鹽的雙水相體系的穩(wěn)定性以及對體系中的醇鹽比進(jìn)行研究，建立簡單高效同步分離純 化玉竹多糖和平菇多糖的提取方法，并將玉竹多糖和平菇多糖的混合萃取液用于保濕面膜 的制備。該方法通過雙水相技術(shù)將玉竹多糖和平菇多糖萃取物直接進(jìn)入水層，避免了現(xiàn)行 玉竹多糖提取工藝中有機溶劑的殘留，同時將多糖混合萃取物直接用于保濕面膜的制備， 克服了已有面膜制備技術(shù)中溶解多糖操作的繁瑣。該技術(shù)操作簡便，綠色高效，經(jīng)濟省時、 易于放大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種利用雙水相萃取技術(shù)同步 高收率提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，以玉竹和平菇為原料得到玉竹和平菇的混合粗提 取液，將其經(jīng)過低分子醇/鹽雙水相體系提取分離，再經(jīng)分離純化得到玉竹多糖和平菇多糖 萃取液。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液直接應(yīng)用于保 濕面膜的制備，克服了已有面膜制備技術(shù)中溶解多糖操作的繁瑣。
[0007] 所述的一種同步分離純化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：室溫下配制 低分子醇與鹽雙水相體系并繪制相圖，根據(jù)成相穩(wěn)定性確定適宜的雙水相體系。
[0008] 所述的一種同步分離純化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于:繪制雙水相 圖所用的低分子醇類為C1-C5的直鏈或支鏈的烷基醇。特別優(yōu)選為乙醇、異丙醇或丙醇，所 述的鹽類為堿土金屬鹽、堿金屬鹽或銨鹽。可以選自鉀鹽、鈉鹽和銨鹽。具體而言，所述鉀鹽 可以為:碳酸鉀、磷酸氫二鉀;鈉鹽為檸檬酸三鈉、碳酸鈉、硫酸鈉;銨鹽為硫酸銨、碳酸銨。
[0009] 所述的一種同步分離純化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于:室溫下配制 低分子醇與無機鹽雙水相體系，將玉竹和平菇混合粗提取液加入到該雙水相體系，在10~ 50°C，300r/min條件下恒溫磁力攪拌30~60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，靜置60~ lOOmin，經(jīng)1000~2000rpm離心20~40min，分離出玉竹多糖和平菇多糖富集相，將雙水相萃 取的多糖液經(jīng)4°C冰箱放置一段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析得玉竹多糖和平 菇多糖混合萃取液。
[0010] 所述的玉竹和平燕按質(zhì)量比0.01:1~1〇〇:1配比進(jìn)行粗提;優(yōu)選為按0.1:1~20:1 配比。
[0011] 本發(fā)明利用低分子醇/鹽雙水相萃取技術(shù)同步分離純化玉竹和平菇混合粗提取 液，經(jīng)分離純化后得到玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。該方法不僅開創(chuàng)了雙水相萃取技 術(shù)同步提取玉竹多糖和平菇多糖的應(yīng)用，而且操作簡單，綠色高效，經(jīng)濟省時，易于放大。
[0012] 按上述方法得到的含有保濕功效的混合多糖萃取液可以作為面膜添加成分使用， 取5~50g萃取液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干凈面部后，均勻涂抹于面 部，保留15~45分鐘后，溫水洗干凈即可。
[0013] 本發(fā)明協(xié)同增效作用明顯，玉竹多糖具有較強的吸水能力和抗氧化能力，并且協(xié) 同平菇多糖增強保濕效果，補充皮膚水分。
【具體實施方式】
[0014] 下面通過具體實施例對本發(fā)明的方法進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0015] 下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法;所述試劑和材料，如 無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0016] 實施例1 將玉竹和平菇按質(zhì)量比1:1(玉竹和平菇共l〇〇g)混合進(jìn)行粗提并濃縮至50mL，室溫下 按碳酸鈉與乙醇質(zhì)量百分比10%配制雙水相體系20mL，將濃縮的粗提液5mL加入到該雙水相 體系，恒溫磁力攪拌（1〇°(：，30(^/1^11)4〇1^11，使玉竹多糖和平菇多糖富集，靜置8〇1^11，經(jīng) 1500rpm離心30min，分離出多糖混合物富集相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4°C冰箱放置一段 時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液;取l〇g萃取 液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干凈面部后，均勻涂抹于面部，保留15分鐘 后，溫水洗干凈即可。
[0017] 經(jīng)苯酚-濃硫酸法測定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量為11.6%，將 萃取液經(jīng)濃縮冷凍干燥得多糖固體，提取率為30.7%。
[0018] 實施例2 將玉竹和平菇按質(zhì)量比10:1(玉竹和平菇共l〇〇g)混合進(jìn)行粗提并濃縮至50mL，室溫下 按碳酸鈉與異丙醇質(zhì)量百分比30%配制雙水相體系20mL，將濃縮的粗提液5mL加入到該雙水 相體系，恒溫磁力攪拌(35°C，300r/min)30min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，靜置60min，經(jīng) lOOOrpm離心20min，分離出多糖混合物富集相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4 °C冰箱放置一 段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液;取l〇g萃 取液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干凈面部后，均勻涂抹于面部，保留30分 鐘后，溫水洗干凈即可。
[0019] 經(jīng)苯酚-濃硫酸法測定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量為16.1%，將 萃取液經(jīng)濃縮冷凍干燥得多糖固體，提取率為41.6%。
[0020] 實施例3 將玉竹和平菇按質(zhì)量比4:1(玉竹和平菇共100g)混合進(jìn)行粗提并濃縮至50mL，室溫下 按硫酸銨與異丙醇質(zhì)量百分比30%配制雙水相體系20mL，將濃縮的粗提液5mL加入到該雙水 相體系，恒溫磁力攪拌(50°(：，30(^/1^11)601^11，使玉竹多糖和平菇多糖富集，靜置1001^11， 經(jīng)2000rpm離心40min，分離出多糖混合物富集相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4 °C冰箱放置 一段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液;取l〇g 萃取液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干凈面部后，均勻涂抹于面部，保留30 分鐘后，溫水洗干凈即可。
[0021 ]經(jīng)苯酚-濃硫酸法測定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量為15.8%，將 萃取液經(jīng)濃縮冷凍干燥得多糖固體，提取率為36.2%。
[0022] 實施例4 將玉竹和平菇按質(zhì)量比10:1(玉竹和平菇共l〇〇g)混合進(jìn)行粗提并濃縮至50mL，室溫下 按磷酸氫二鉀與丙醇質(zhì)量百分比30%配制雙水相體系20mL，將濃縮的粗提液5mL加入到該雙 水相體系，恒溫磁力攪拌(35°(：，300以1^11)3〇1^11，使玉竹多糖和平菇多糖富集，靜置6〇1^11， 經(jīng)lOOOrpm離心20min，分離出多糖混合物富集相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4 °C冰箱放置 一段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液;取l〇g 萃取液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干凈面部后，均勻涂抹于面部，保留30 分鐘后，溫水洗干凈即可。
[0023]經(jīng)苯酚-濃硫酸法測定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量為12.9%，將 萃取液經(jīng)濃縮冷凍干燥得多糖固體，提取率為29.7%。
[0024]進(jìn)行單組分對照，分別設(shè)置玉竹多糖單品、平菇多糖單品作為對照。
[0025] 對照例1 將玉竹100g洗凈進(jìn)行粗提并濃縮至50mL，室溫下按碳酸鈉與乙醇質(zhì)量百分比10%配制 雙水相體系20mL，將濃縮的粗提液5mL加入到該雙水相體系，恒溫磁力攪拌（50°C，300r/ min)60min，使玉竹多糖富集，靜置lOOrnin，經(jīng)2000rpm離心40min，分離出多糖混合物富集 相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4 °C冰箱放置一段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析 得玉竹多糖萃取液;取10 g萃取液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干凈面部 后，均勻涂抹于面部，保留30分鐘后，溫水洗干凈即可。
[0026]經(jīng)苯酚-濃硫酸法測定，萃取液中玉竹多糖含量為9.5%，將萃取液經(jīng)濃縮冷凍干燥 得多糖固體，提取率為21.2%。
[0027] 對照例2 將平菇l〇〇g洗凈進(jìn)行粗提并濃縮至50mL，室溫下按檸檬酸鈉與異丙醇質(zhì)量百分比10% 配制雙水相體系20mL，將濃縮的粗提液5mL加入到該雙水相體系，恒溫磁力攪拌（50 °C， 3001'/111；[11)60111；[11，使平燕多糖富集，靜置100111；[11，經(jīng)2000印1]1離心40111；[11，分離出多糖混合物 富集相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4 °C冰箱放置一段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng) 透析得平菇多糖混合萃取液;取10 g萃取液，加入面粉、雞蛋等調(diào)制成糊狀;初步溫水洗干 凈面部后，均勻涂抹于面部，保留30分鐘后，溫水洗干凈即可。
[0028] 經(jīng)苯酚-濃硫酸法測定，萃取液中平菇多糖含量為10.3%，將萃取液經(jīng)濃縮冷凍干 燥得多糖固體，提取率為28.1%。
[0029] 保濕效果的檢測：測量受試者皮膚角質(zhì)層水合率，測試原理是以電容器為儀器探 頭，由于水是皮膚上介質(zhì)常數(shù)最大的物質(zhì)，當(dāng)皮膚水分含量發(fā)生變化時，皮膚的電容值也發(fā) 生變化，所以可以通過測定皮膚電容值，分析皮膚表面水分含量；常用的儀器是 C〇rne〇meterCM825水分測試儀，通過測量使用產(chǎn)品前后皮膚角質(zhì)層電容值的變化來衡量角 質(zhì)層含水量的變化，從而來評價化妝品的保濕功效，此種方法對皮膚角質(zhì)層的水分含量進(jìn) 行定量化，能夠靈敏地反應(yīng)皮膚水分含量的變化，且重現(xiàn)性好，是目前保濕化妝品功效評價 常用的方法之一。
[0030] 實驗方法 按照自愿原則選擇20-40歲之間無皮膚病史及化妝品過敏史的人員作為受試者。
[0031] 試驗樣品如上述所示共6個，每個樣品隨機選用10名受試者，每名受試者只使用一 個樣品，每次使用樣品約20 g均勻涂抹于面部，試驗期間不再使用其他保濕產(chǎn)品，采用定 位膜標(biāo)記好測試點位置。
[0032] 用水分測試儀測定受試者使用樣品前和連續(xù)使用15d后的含水量變化，每個測 試點平行測5次取平均值，結(jié)果用水分含量表示，單位為a.u.。
[0033] 保濕效果的檢測結(jié)果，如表1所示：
由表1可以看出，本發(fā)明玉竹多糖和平菇多糖單品單獨使用時，對皮膚具有一定的保濕 作用(對照例1-2)，而本發(fā)明所得的組合樣品（實施例1-4)顯示出協(xié)同保濕效果明顯增強。 [0034]試驗過程均無過敏等不良反應(yīng)。
【主權(quán)項】
1. 一種化妝品組合物，其特征在于所述化妝品組合物含有玉竹多糖和平菇多糖混合萃 取液，所述的玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液按以下方法制備得到： (1) 室溫下配制低分子醇與無機鹽雙水相體系； (2) 將玉竹和平菇混合粗提取液加入到該雙水相體系，在10~50°C，300r/min條件下恒 溫磁力攪拌30~60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，靜置60~lOOmin，經(jīng)1000~2000rpm離 心20~40min，分離出玉竹多糖和平菇多糖富集相，將雙水相萃取的多糖液經(jīng)4 °C冰箱放置 一段時間，結(jié)晶析出大部分無機鹽后再經(jīng)透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。2. 如權(quán)利要求1所述的化妝品組合物，其特征在于所述的玉竹和平菇混合粗提取液按 如下方法制備獲得:將玉竹和平菇按質(zhì)量比0.01:1~100:1配比進(jìn)行粗提;優(yōu)選為按0.1:1 ~20:1配比進(jìn)行粗提。3. 如權(quán)利要求1所述的化妝品組合物，其特征在于所述的低分子醇為為C1-C^直鏈或 支鏈的烷基醇。4. 如權(quán)利要求1所述的化妝品組合物，其特征在于所述的無機鹽為堿土金屬鹽、堿金屬 鹽或銨鹽。5. 如權(quán)利要求3或4任一項所述的化妝品組合物，其特征在于所述的低分子醇為乙醇、 異丙醇或丙醇;所述的無機鹽為鉀鹽、鈉鹽、銨鹽或其混合物。6. 如權(quán)利要求5所述的化妝品組合物，其特征在于所述的鉀鹽為:碳酸鉀、磷酸氫二鉀； 鈉鹽為檸檬酸三鈉、碳酸鈉、硫酸鈉;銨鹽為硫酸銨、碳酸銨。7. -種權(quán)利要求1-6任一項所述的化妝品組合物的應(yīng)用，其特征在于將所述的化妝品 組合物用于制備保濕面膜。
【文檔編號】A61K8/73GK105949340SQ201610531365
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年7月6日
【發(fā)明人】張紅萍
【申請人】邵陽學(xué)院