一種來源于肇慶的橙皮素腙類化合物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于地方中草藥資源開發(fā)利用、提取物結(jié)構(gòu)改造和藥物研究領(lǐng)域，涉及一 種來源于肇慶的橙皮素腙類化合物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 橙皮為常用傳統(tǒng)中藥，為蕓香料植物柑橘（Citrus reticulate Blanco)及其栽培 變種的干燥成熟果皮，具有理氣健脾、燥濕化痰作用。橙皮主含揮發(fā)油、黃酮類化合物等化 學(xué)成分，具有抗腫瘤、抗休克、抗動脈硬化、疏肝利膽、抗過敏、抗腫瘤、避孕、抗血檢形成及 抗菌等藥理作用。已受到人們的青睞。故研究開發(fā)橙皮類化合物抗癌制劑將具有重要的理 論意義和實(shí)踐意義。
[0003] 廣橙皮和橙皮是因產(chǎn)地和栽培種不同而分為兩個藥材品種。廣橙皮為廣東特產(chǎn)藥 材之一，是橙皮中質(zhì)量最好、數(shù)量最少且價格最貴的一個品種。過去銷售給大城市里有名望 的中藥店，并有專營廣幫藥材的字號販賣經(jīng)營。上等規(guī)格供出口及江、浙、上海等省市。20 世紀(jì)50年代后，橙皮藥用量大增，而廣橙皮產(chǎn)少價高，供不應(yīng)求，逐漸以使用橙皮為主。廣 橙皮隨之淡忘，現(xiàn)在大多數(shù)地區(qū)不復(fù)經(jīng)營。但廣東及出口，仍以廣橙皮為主要品種。
[0004] 普通橙皮主要產(chǎn)于福建、四川、浙江等地。廣橙皮作為廣東省的道地藥材，主要產(chǎn) 于廣東江門新會、肇慶，約占90%。申請地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)的地域范圍為北煒22° 05'~ 22° 35'，東經(jīng)112° 46'~113° 15'，由于產(chǎn)地的氣溫、濕度、地形等因素影響到橙皮的 產(chǎn)量和質(zhì)量。
[0005] 從化學(xué)成分比較：廣橙皮與橙皮揮發(fā)油的成分有明顯差異。與普通橙皮比 較，廣橙皮中揮發(fā)油的含量更高，所含的化學(xué)成分更多，含檸檬烯、β -月桂烯、α - 松油烯等藥理活性較強(qiáng)的成分，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗菌等重要作用。另外，廣橙皮還 含有黃酮類成分，例如橙皮戒、新橙皮戒（neohesperidin)、柑橘素（tangeretin， 5, 6, 7, 8, 4' -pentamethoxyflavone)、二氫川澄皮素（citromitin，5, 6, 7, 8, 3'，4' -he xamethoxyflavanone)及 5_ 去甲二氛川澄皮素（5-〇-desmethyl_citromitin)。有報 道，川橙皮含橙皮甙約8. 4%，川橙皮素（nobiletin)約0. 15%。另含辛弗林（對羥福 林）0· 28% -2. 54%〇
[0006] 廣橙皮苷和橙皮素是柑橘類果皮的主要藥效成分。近年的研究表明，二者在抗氧 化和清除自由基、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)功能、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)、抗過敏、抗皮炎、抗菌抗癌及基因毒 性等方面表現(xiàn)出較好的生物活性。由于橙皮腙物質(zhì)中C = N雙鍵上的N原子有孤對電子， 具有重要的化學(xué)與生物學(xué)意義，近年來，對其在抗腫瘤、抗氧化和抗菌活性研究方面取得了 很大進(jìn)展。
[0007] 自由基是生物體生命活動過程中由機(jī)體生物化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，對機(jī)體 的衰老和疾病、正常的免疫代謝和細(xì)胞信號傳導(dǎo)等過程均起著重要作用。近年來，人們普遍 認(rèn)為生命過程中氧化代謝反應(yīng)產(chǎn)生的各種過量自由基與許多疾病，如腫瘤、炎癥和衰老等 密切相關(guān)，因此尋找低毒或無毒的抗氧化物質(zhì)已成為熱點(diǎn)研究課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種來源于肇慶的橙皮素腙類化合物。
[0009] 本發(fā)明所述的來源于肇慶的橙皮素腙類化合物，是以肇慶地產(chǎn)柑桔皮為原材料， 提取橙皮苷，制備橙皮素，以橙皮素為先導(dǎo)化合物，通過對氯苯肼縮合反應(yīng)得到的廣橙皮素 對氯苯甲酰腙化合物。
[0010] 本發(fā)明還提供了所述的來源于肇慶的橙皮素腙類化合物的用途。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明所述的來源于肇慶的橙皮素腙類化合物可用于制備抗腫瘤的藥物。
[0012] 本發(fā)明通過UV、IR等圖譜對目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)行確證，并對橙皮素腙化合物進(jìn) 行抗腫瘤的研究。
[0013] 本發(fā)明通過對肺癌A549細(xì)胞、肝癌SMMC-7721細(xì)胞、人結(jié)腸癌L0V0細(xì)胞、小鼠肺 LLC細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證廣橙皮素腙類化合物制劑對各種腫瘤細(xì)胞的抑制能力，并研究證實(shí)抗 癌藥物治療個體化為目的的藥物敏感試驗(yàn)的重要性。研究證明，廣橙皮苷、廣橙皮素、對橙 皮酰腙類均具有清除自由基的活性，并且隨濃度增大而增大，實(shí)驗(yàn)表明，由于對氯苯甲酰腙 是經(jīng)過化學(xué)修飾的配合物，實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)修飾后，表現(xiàn)出活性基團(tuán)具有協(xié)同作用，提高了其 清除自由基的能力，故其活性明顯比相同量的橙皮苷、橙皮素的活性高。本發(fā)明的抗腫瘤研 究結(jié)果表明，經(jīng)化學(xué)修飾改造得到的對氯苯甲酰腙具有良好的抗腫瘤效應(yīng)。
【附圖說明】
[0014] 圖1是本發(fā)明所述的橙皮素腙類化合物的制備流程圖。
[0015] 圖2是本發(fā)明所述的橙皮素腙類化合物對不同腫瘤細(xì)胞株的作用圖。
[0016] 圖3是本發(fā)明所述的橙皮素腙類化合物對A549細(xì)胞的生長抑制曲線圖。
[0017] 圖4是本發(fā)明所述的橙皮素腙類化合物對SMMC-7721細(xì)胞的生長抑制曲線圖。
[0018] 圖5是本發(fā)明所述的橙皮素腙類化合物對人結(jié)腸癌L0V0的生長抑制曲線圖。
[0019] 圖6是本發(fā)明所述的橙皮素腙類化合物對小鼠肺癌LLC細(xì)胞的生長抑制曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 實(shí)施例一：本發(fā)明所述的廣橙皮素腙類化合物的制備
[0021] 本發(fā)明所述的廣橙皮素腙類化合物的制備流程詳述如下：
[0022] 1、橙皮苷的提取分離與純化
[0023] 流程如下：肇慶柑桔橙皮收集，烘干，粉碎，蒸餾水浸泡，飽和氫氧化鈣浸提，提取 液酸化，得到粗制橙皮苷；將粗品溶解于含1% NaOH的50 %乙醇溶液中，過濾除去不溶物， 濾液中加入稀鹽酸，收集沉淀，蒸餾水洗至中性，甲醇重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶，為橙皮 苷，產(chǎn)率1. 3%，熔點(diǎn)260~262°C。
[0024] 2、橙皮素的制備
[0025] 將橙皮苷1. 50g(2. 46mmol)加到無水乙醇90mL中，劇烈攪拌下加入濃硫酸3mL，加 熱回流7. 5h。停止反應(yīng)，減壓蒸除大部分乙醇，剩余物倒入蒸餾水中，乙酸乙酯（3X90mL) 萃取，將萃取液合并，蒸餾水洗至中性，分出乙酸乙酯層，減壓蒸餾，得黃色殘渣，粗品用乙 醇/水重結(jié)晶。得到淡黃色針狀結(jié)晶，為橙皮素，產(chǎn)率52. 1 %，熔點(diǎn)224~226°C。
[0026] 3、廣橙皮素腙類化合物的制備和結(jié)構(gòu)鑒定
[0027] 廣橙皮素腙類化合物的制備流程參見圖1。
[0028] 將上述提取的lmmol橙皮素和1. lmmol含氨基化合物（氫氧化氨）溶于20ml無 水乙醇中并滴加少量冰醋酸或1滴濃鹽酸，混合液攪拌回流24-60小時，薄層層析檢測反應(yīng) 進(jìn)程，得棕黃色溶液，減壓除去部分乙醇，有黃色固體析出，抽濾，蒸餾水洗滌固體，再用少 量乙醇洗滌，室溫晾干，無水乙醇/二甲亞砜重結(jié)晶，得到相應(yīng)的橙皮素腙類化合物，即廣 橙皮素對氯苯甲酰腙，產(chǎn)率為12. 35%。
[0029] 廣橙皮素腙類化合物為棕色粉末，易溶于甲醇、乙醇、二甲基亞砜，N，N_二甲基甲 酰胺等溶劑。廣橙皮素腙類化合物與1 % A1C13的紙斑反應(yīng)顯鮮黃色，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈紅 色，這兩個顯色實(shí)驗(yàn)表明結(jié)構(gòu)中含有黃酮母體。結(jié)合熔點(diǎn)測定和TLC測定其純度。用熔點(diǎn) 測定儀測得實(shí)驗(yàn)所得樣品的熔點(diǎn)為159°C，且樣品熔程較短，說明經(jīng)分離、純化得到的黃酮 樣品純度伽高。同時，用樣品的乙溶液跑TLC，石油醚/乙酸乙酯（1:1)為展開劑，三次平行 測定后。樣品在薄層板上均呈現(xiàn)一點(diǎn)，說明樣品純度較高。
[0030] 4、廣橙皮素腙類化合物紫外吸收光譜的測定
[0031] 將廣橙皮素及其腙溶于無水甲醇，配成濃度為IX 105mol/l的溶液，測定紫外一可 見吸收光譜，測定其波長為200- 600nm，結(jié)果如下表1。
[0032] 表1、廣橙皮素腙類化合物的紫外吸收光譜數(shù)據(jù)
[0033]
[0034] 廣橙皮素在325、288nm處有兩個強(qiáng)吸收峰，腙與母體相比，峰I由325nm紅移至 339nm，強(qiáng)度略增，這是由于形成腙后，次氨基氮原子的孤對電子與亞氨基雙鍵形成了共輒 體系，使得橙皮素母體的共輒體系延長，導(dǎo)致吸收波長向長波方向移動。
[0035] 5、廣橙皮素腙類化合物的紅外光譜測定
[0036] 用KBr壓片法掃描對通過氯苯肼縮合反應(yīng)得到的廣橙皮素對氯苯甲酰腙化合物 的紅外吸收光譜。測量范圍400- 4000cm \結(jié)果見如下表2。
[0037] 表2、廣橙皮素腙類化合物的紅外吸收光譜
[0038]
[0039] 廣橙皮素的振動頻率v(c = 0)位于1635cm 1處出現(xiàn)C = N特征吸收峰，3326cm 1 出現(xiàn)了 NH伸縮振動，1587cm 1處出現(xiàn)NNH彎曲振動，這均說明合成了廣橙皮素對氯苯甲酰 腺。
[0040] 實(shí)施例二、廣橙皮苷、橙皮素和橙皮素對氯苯甲酰腙清除超氧自由基（0 -)的活 性
[0041 ] 本實(shí)施例檢測了橙皮苷、橙皮素及通過氯苯肼縮合反應(yīng)得到的廣橙皮素對氯苯甲 酰腙化合物清除自由基能力，包括由Fe2+-H202-亞