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一種李斯特菌選擇培養(yǎng)基的制作方法

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一種李斯特菌選擇培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及檢驗(yàn)微生物培養(yǎng)領(lǐng)域,具體設(shè)及一種李斯特菌選擇培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 微生物培養(yǎng)是一種用人工方法使微生物生長(zhǎng)繁殖的技術(shù),而選擇性培養(yǎng)基是用來(lái) 促進(jìn)或抑制一定類(lèi)型的生物體(如細(xì)胞或細(xì)菌等)而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,利用運(yùn)種培養(yǎng)基可W將 所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來(lái)。李斯特菌化isteria monocytogenes)為革 蘭陽(yáng)性桿菌,是一種兼性厭氧細(xì)菌,廣泛分布在自然環(huán)境中,如±壤、污水、飼料、動(dòng)物、健康 人及各種生食和即食食品中,可引起人類(lèi)李斯特菌病,李斯特菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌,多數(shù) 感染李斯特菌病的健康人沒(méi)有癥狀或有自限性的流感樣癥狀和胃腸道癥狀,如頭痛、發(fā)熱、 寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、腹痛、腹瀉、惡屯、、嘔吐等。部分患者會(huì)發(fā)展為神經(jīng)系統(tǒng)感染(如腦膜炎、腦 膜腦炎、腦干腦炎等)、敗血癥及局灶感染(如屯、內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎、肝炎、皮炎等)和菌血癥等。 神經(jīng)系統(tǒng)的感染可能造成后遺癥。孕婦感染后多無(wú)癥狀或癥狀輕微,但可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、 早產(chǎn)及嚴(yán)重的新生兒感染。
[0003] 近年來(lái)李斯特菌感染患者呈上升趨勢(shì),在新生兒、妊娠婦女、40歲W上及免疫功能 受損的人群中均可發(fā)生,尤其是妊娠婦女感染李斯特菌的風(fēng)險(xiǎn)是普通人群的30~100倍。早 期診斷并早期治療,可100%治愈。若診斷延誤,病死率可達(dá)20~30%,因此作為確診唯一依據(jù) 的臨床細(xì)菌檢查的正確與快速鑒定極為重要。目前,該菌屬的鑒定金標(biāo)準(zhǔn)為巧光定量PCR鑒 定,但是PCR檢測(cè)設(shè)備要求和操作成本均較高,因此臨床檢驗(yàn)手段主要是革蘭染色法,但有 1/3的李斯特菌無(wú)法陽(yáng)性檢出,而且如果要辨別李斯特菌的種類(lèi)就需要細(xì)菌培養(yǎng),并就其菌 落形態(tài)特征進(jìn)行鑒別。目前培養(yǎng)多用膜酪腺大豆瓊脂(TSA-YE)。但是李斯特菌培養(yǎng)陽(yáng)性率 低,僅為36%左右,主要是臨床培養(yǎng)過(guò)程中該菌容易被認(rèn)為是污染的雜菌而遭丟棄,且標(biāo)本 中的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎球菌等在目前的培養(yǎng)基上比李斯特菌生長(zhǎng)更快,很快 覆蓋了培養(yǎng)基,李斯特菌無(wú)法生長(zhǎng),結(jié)果延誤診療時(shí)間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對(duì)W上現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種適合于李斯特菌的選擇 培養(yǎng)基。
[0005] 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是:一種李斯特菌的選擇培養(yǎng)基,其特征為,配 審iJlOOOml培養(yǎng)基的配方中含有: 酵母浸出粉5~8g; 牛肉粉6~lOg; 酪蛋白腺6~lOg; 瓊脂15~20g; 葡萄糖3~5g; 氯化鋼5~5.5g; 酵母鋒0.01~0.05g; 憐酸二氨鋼1~3g; 丫-?基精氨酸0.1~〇.5g; N-乙酷-D-葡萄糖胺0.01~0.05g; 桿菌膚0.001~0.003g; 光谷甘膚0.1~〇.5g; 無(wú)菌馬血蛋白20~50g; 蒸饋水加至1000ml。
[0006] 其中:所述的牛肉粉、酪蛋白腺、葡萄糖提供碳源、氮源,酵母浸出粉富含蛋白質(zhì)、 氨基酸、多膚、核巧酸、維生素、生長(zhǎng)因子、微量元素等營(yíng)養(yǎng)成分,為李斯特菌的繁殖和生長(zhǎng) 提供均衡的營(yíng)養(yǎng)元素;氯化鋼維持均衡的滲透壓;瓊脂為培養(yǎng)基的凝固劑;酵母鋒為營(yíng)養(yǎng) 劑,發(fā)明人發(fā)現(xiàn),在培養(yǎng)基中加入一定濃度的鋒離子,目標(biāo)菌的生長(zhǎng)狀態(tài)好于對(duì)照組,因此 推論鋒離子有助于該菌的生長(zhǎng),同時(shí)母體酵母含微生物必需氨基酸含量豐富、配比合理,具 有促進(jìn)細(xì)菌繁殖的功效;憐酸二氨鋼為緩沖劑;N-乙酷基-D-葡萄糖胺是營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑,基礎(chǔ) 實(shí)驗(yàn)證實(shí),將同一李斯特菌菌株接種到2個(gè)TSA-YE培養(yǎng)基上,其中一個(gè)TSA-YE配方中加入N- 乙酷-D-葡萄糖胺0.05g/L,37°C下大氣條件下培養(yǎng),48小時(shí)后觀察菌株,發(fā)現(xiàn)添加 N-乙酷- D-葡萄糖胺的TSA-YE培養(yǎng)基有小的李斯特菌菌落,沒(méi)有添加 N-乙酷-D-葡萄糖胺的TSA-YE 培養(yǎng)基未發(fā)現(xiàn)李斯特菌菌落,N-乙酷-D-葡萄糖胺促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化,是李斯特菌的生長(zhǎng) 因子;桿菌膚(Bacitracin),實(shí)驗(yàn)室研究表明桿菌膚可W抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌和陰性球菌、肺 炎雙球菌、葡萄球菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌等雜菌的生長(zhǎng),但該濃度下由于對(duì)李斯特菌屬 無(wú)抗菌抑菌作用,因此提高了李斯特菌的分離率。T-徑基精氨酸為激活劑,可W促進(jìn)李斯 特菌對(duì)礦物質(zhì)的攝取;無(wú)菌馬血蛋白提供能量環(huán)境。
[0007] 此外,光谷甘膚可W降低培養(yǎng)基氧化還原電勢(shì),促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化,是李斯特菌 的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。蒼術(shù)酬抑制大腸桿菌、腸炎沙口菌、金黃色葡萄球菌、沙口氏菌、銅綠假單胞 等細(xì)菌生長(zhǎng),但該濃度下對(duì)李斯特菌菌落的生長(zhǎng)沒(méi)有影響;山英肉為山榮英科植物山榮英 的果實(shí),現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,山英肉含山榮英較毛,山榮英裂武,鐵、侶、銅、鋒、棚、憐等21種 元素,蘇氨酸、鄉(xiāng)氨酸、亮氨酸等14種氨基酸,維生素 A,葡萄糖、果糖、薦糖、熊果酸、沒(méi)食子 酸、蘋(píng)果酸、酒石酸等糖類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi),山英肉水提液是良好的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑,并且對(duì)金黃色 葡萄球菌、奈氏卡他球菌、結(jié)核桿菌、肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌、脊髓灰質(zhì)炎病毒等均有不 同程度的抑菌作用。
[0008] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較,具有檢出可靠、李斯特菌分離率高的特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0009] W下結(jié)合實(shí)際情況,對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說(shuō)明。
[0010]實(shí)施例1,配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 6g;瓊脂15g;葡萄糖4g;氯化鋼5g;憐酸二氨鋼Ig; 丫 -徑基精氨酸0.3g;酵母鋒0.0Ig;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.0 lg;桿菌膚0.003g;無(wú)菌馬血蛋白20g,蒸饋水加至1000ml。制備方法:稱(chēng) 取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;瓊脂;葡萄糖;氯化鋼;憐酸二氨鋼;γ -徑基精氨酸;酵母 鋒,混勻蒸饋水溶解,210°C,滅菌15min,冷卻到45°C,加入滅菌Ν-乙酷-D-葡萄糖胺;滅菌桿 菌膚;無(wú)菌馬血蛋白混勻,滅菌蒸饋水定容到1000ml后分裝。
[0011]實(shí)施例2,配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉6g;酪蛋白腺 8g;瓊脂15g;葡萄糖3g;氯化鋼5g;憐酸二氨鋼3g; 丫 -徑基精氨酸0.1 g;酵母鋒0.05g;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.03g;桿菌膚O.OOlg;光谷甘膚0.1 g;無(wú)菌馬血蛋白40g,蒸饋水加至 1000ml。制備方法:稱(chēng)取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;瓊脂;葡萄糖;氯化鋼;憐酸二氨鋼; T-徑基精氨酸;酵母鋒,混勻蒸饋水溶解,210°C,滅菌15min,冷卻到45°C,加入滅菌光谷甘 膚;滅菌N-乙酷-D-葡萄糖胺;滅菌桿菌膚;無(wú)菌馬血蛋白混勻,滅菌蒸饋水定容到1000ml后 分裝。
[0012]實(shí)施例3,配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉8g;酪蛋白腺 6g;瓊脂18g;葡萄糖5g;氯化鋼5.5g;憐酸二氨鋼2g; 丫 -?基精氨酸0.5g;酵母鋒0.03g; N- 乙酷-D-葡萄糖胺0.05g;桿菌膚O.OOlg;蒼術(shù)酬0.003g;無(wú)菌馬血蛋白50g,蒸饋水加至 1000ml。制備方法:稱(chēng)取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;瓊脂;葡萄糖;氯化鋼;憐酸二氨鋼; 丫-徑基精氨酸;酵母鋒;蒼術(shù)酬,混勻蒸饋水溶解,210°C,滅菌15min,冷卻到45°C,加入滅 菌N-乙酷-D-葡萄糖胺;滅菌桿菌膚;無(wú)菌馬血蛋白混勻,滅菌蒸饋水定容到1000ml后分裝。 [001引實(shí)施例4,配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:酵母浸出粉6g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 8g;瓊脂18g;葡萄糖4g;氯化鋼5g;憐酸二氨鋼2g; 丫 -徑基精氨酸0.1 g;酵母鋒0.03g;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.05g;桿菌膚0.002g;無(wú)菌馬血蛋白30g; 200g化山榮英肉水提液200ml;蒸 饋水加至1000ml。制備方法:(1)取40g山榮英肉加水煮沸30min,過(guò)濾,取濾液,根據(jù)濾液體 積,采取濃縮或者加水調(diào)整體積到濃度為200g/L,得山榮英肉水提液200m
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