一種提高紅霉素發(fā)酵效價的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別是設(shè)及一種提高紅霉素發(fā)酵效價的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紅霉素是大環(huán)內(nèi)醋類抗生素，抗菌譜與青霉素相似，臨床上常用于對青霉素過敏 者的治療。近年來由于紅霉素衍生物的廣泛開發(fā)使用，使紅霉素的需求量不斷增加。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，W紅色糖多胞菌做出發(fā)菌株發(fā)酵生產(chǎn)紅霉素的過程中，全程補(bǔ)入含 大量遲效氮源、憐元素的混合氮源和糖水，運(yùn)種方法具有W下技術(shù)缺點：1)隨著菌絲體大 量繁殖，中后期體積增加，造成溶氧的缺乏；2)由于遲效氮源消耗慢，發(fā)酵結(jié)束殘留較大， 影響提取的效果及成品質(zhì)量；3)有些菌種全程只需補(bǔ)入糖水，只在基礎(chǔ)料中加入足夠量的 氮源，運(yùn)樣會造成前期營養(yǎng)豐富，菌絲大量繁殖，氮源消耗量大，發(fā)酵液粘度、發(fā)酵液表面張 力加大，氧的傳遞效率降低，溶解氧濃度降低，造成菌體溶氧缺乏，中后期氮源缺乏，菌絲提 前衰老，發(fā)酵周期縮短，產(chǎn)率減低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種有效提高紅霉素效價的方 法。 陽〇化]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的所采取的技術(shù)方案為：
[0006] 一種提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：在W紅色糖多胞菌做出發(fā)菌株發(fā)酵 生產(chǎn)紅霉素的過程中，緩慢流加補(bǔ)入硫酸錠溶液。
[0007] 所述硫酸錠溶液的補(bǔ)入量合計為發(fā)酵液體積的5-10%。
[0008] 所述硫酸錠溶液質(zhì)量體積濃度為2-5 %。
[0009] 所述硫酸錠溶液質(zhì)量體積濃度為2-3 %。
[0010] 在發(fā)酵到60小時時，開始緩慢流加硫酸錠溶液。
[0011] 在發(fā)酵80-140小時緩慢流加硫酸錠溶液。
[0012] 本發(fā)明通過在發(fā)酵60小時時開始流加硫酸錠溶液，由于此時期菌絲大量繁殖， 基礎(chǔ)料氮源利用較多，發(fā)酵液需氧量大，發(fā)酵液粘度大，體積增加，可通過緩慢流加硫酸錠 溶液，改變發(fā)酵液粘度，改善溶氧，調(diào)節(jié)紅霉素各組分的合成，同時可補(bǔ)充氮源，增加菌體活 力，延長紅霉素分泌期，從而提高紅霉素發(fā)酵水平。
【具體實施方式】
[0013] 本發(fā)明通過W下實施例進(jìn)一步詳述，但本實施例所敘述的技術(shù)內(nèi)容是說明性的， 而不是限定性的，不應(yīng)依此來局限本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作 的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0014] 下述實施例中
[0015] 試驗罐全程可檢測到溶氧、PH、溫度、攬拌轉(zhuǎn)速等參數(shù)。
[0016] 硫酸錠的流加量根據(jù)檢測粘度及溶氧狀況確定。
[0017] 其它補(bǔ)料按正常工藝控制進(jìn)行。
[0018] 制備方法：采用=級發(fā)酵生產(chǎn)紅霉素，具體步驟如下：
[0019] 1、斜面抱子制備：將紅色糖多胞菌在無菌條件下接種于固體培養(yǎng)基上，35°C恒溫 培養(yǎng)6-8天，接種于一級種子培養(yǎng)基中。
[0020] 2、上述斜面抱子培養(yǎng)基按照常規(guī)方法配制，配方為：淀粉8g/l，硫酸錠2. 5g/l，氯 化鋼2. 3g/l，碳酸巧2. 4g/l，玉米漿1.Og/L。
[0021] 3、一級種子培養(yǎng)：將步驟1生長好的斜面抱子無菌方式接種于一級種子培養(yǎng)基 中，35°C恒溫培養(yǎng)，通氣比為1. 5-2.Ov/v/min，攬拌轉(zhuǎn)速為400-600r/min，培養(yǎng)40-60小 時。
[0022] 4、上述一級種子培養(yǎng)基用常規(guī)方法制備，其配方為淀粉lOOg/l，糊精50g/l，豆粉 75g/l，玉米漿40g/l，硫酸錠18g/l，氯化鋼15g/l，碳酸巧35g/l，豆油20g/L。
[0023] 5、二級種子培養(yǎng)：將步驟3生長好的一級種子培養(yǎng)液無菌方式接種于二級種子培 養(yǎng)基中，35°C恒溫培養(yǎng)，通氣比為1. 5-2.Ov/v/min，攬拌轉(zhuǎn)速為400-600r/min，培養(yǎng)22-35 小時。
[0024] 6、上述二級種子培養(yǎng)基用常規(guī)方法制備，其配方為淀粉300g/l，糊精200g/l，豆 粉350g/l，玉米漿120g/l，硫酸錠20g/l，氯化鋼25g/l，碳酸巧50g/l，豆油30g/L。
[0025] 7、發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟5培養(yǎng)好的二級種子無菌條件分別接種于實施例與對照例發(fā) 酵培養(yǎng)基中，接種量為10-20%，控制培養(yǎng)溫度32-35°C，過程通氣比：0. 8-1. 5v/min，保證 過程溶氧不低于20%，培養(yǎng)6-8天。
[00%] 8、發(fā)酵培養(yǎng)基用常規(guī)方法制備。
[0027] 對照例培養(yǎng)基配方為：淀粉580g/l，糊精150g/l，豆粉525g/l，玉米漿300g/l，硫 酸錠40g/l，氯化鋼37. 5g/l，碳酸巧105g/l，豆油50g/L。
[0028] 實施例發(fā)酵培養(yǎng)基配方：淀粉580g/l，糊精150g/l，豆粉375g/l，玉米漿125g/L， 硫酸錠40g/L氯化鋼37. 5g/L碳酸巧105g/L，豆油45g/L。 陽〇29] 實施例1
[0030] 1、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的實施例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵到60小時開始緩慢流加硫酸錠 溶液，所述硫酸錠溶液濃度為3-5%，根據(jù)粘度及溶氧狀況控制每小時流加量在120-25化/ 虹，流加至140小時停止，累計流加量為發(fā)酵液體積的5-8%。
[0031] 2、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的正常對照例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，175小時停止發(fā)酵。
[0032]
陽〇3引 實施例2
[0034] 1、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制 備的實施例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵到60小時開始緩慢流加硫酸 錠溶液，所述硫酸錠溶液濃度為6%，根據(jù)粘度及溶氧狀況控制每小時流加量在120-20化/ 虹，流加至140小時停止，累計流加量為發(fā)酵液體積的5-8%。
[0035] 2、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的正常對照例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，175小時停止發(fā)酵。
[0037] 實施例3
[0038] 1、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的實施例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵到80小時開始緩慢流加硫酸錠 溶液，所述硫酸錠溶液濃度為3. 0%，根據(jù)粘度及溶氧狀況控制每小時流加量在120-20化/ 虹，流加至140小時停止，累計流加量為發(fā)酵液體積的5-6%。176小時停止發(fā)酵。
[0039] 2、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的正常對照例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，176小時停止發(fā)酵。
W41] 實施例4
[0042] 1、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制 備的實施例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵到80小時開始緩慢流加硫酸 錠溶液，所述硫酸錠溶液濃度為6%，根據(jù)粘度及溶氧狀況控制每小時流加量在120-20化/ 虹，流加至140小時停止，累計流加量為發(fā)酵液體積的5-6%。172小時停止發(fā)酵。
[0043] 2、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的正常對照例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，172小時停止發(fā)酵。
W45] 實施例5
[0046] 1、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制 備的實施例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵到80小時開始緩慢流加硫酸 錠溶液，所述硫酸錠溶液濃度為1 %，根據(jù)粘度及溶氧狀況控制每小時流加量在200-30化/ 虹，流加至140小時停止，累計流加量為發(fā)酵液體積的5-8%。172小時停止發(fā)酵。
[0047] 2、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的正常對照例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，172小時停止發(fā)酵。
W49] 實施例6
[0050] 1、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制 備的實施例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵到90小時開始緩慢流加硫酸 錠溶液，所述硫酸錠溶液濃度為4%，根據(jù)粘度及溶氧狀況控制每小時流加量在150-25化/ 虹，流加至140小時停止，累計流加量為發(fā)酵液體積的5-6%。170小時停止發(fā)酵。
[0051] 2、取上述制備方法中步驟5培養(yǎng)好的二級種子培養(yǎng)基無菌條件接種于步驟7制備 的正常對照例發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，170小時停止發(fā)酵。
[0052]
【主權(quán)項】
1. 一種提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：在以紅色糖多胞菌做出發(fā)菌株發(fā)酵生 產(chǎn)紅霉素的過程中，緩慢流加補(bǔ)入硫酸銨溶液。2. 按照權(quán)利要求1所述的提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：所述硫酸銨溶液的 補(bǔ)入量合計為發(fā)酵液體積的5-10%。3. 按照權(quán)利要求1或2所述的提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：所述硫酸銨溶 液質(zhì)量體積濃度為2-5%。4. 按照權(quán)利要求3所述的提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：所述硫酸銨溶液質(zhì) 量體積濃度為2-3%。5. 按照權(quán)利要求1所述的提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：在發(fā)酵到60小時 時，開始緩慢流加硫酸銨溶液。6. 按照權(quán)利要求1或5所述的提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：在發(fā)酵80-140 小時緩慢流加硫酸銨溶液。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種提高紅霉素發(fā)酵效價的方法，其特征是：在以紅色糖多胞菌做出發(fā)菌株發(fā)酵生產(chǎn)紅霉素的過程中，緩慢流加補(bǔ)入硫酸銨溶液。本發(fā)明通過在發(fā)酵60小時時開始流加硫酸銨溶液，由于此時期菌絲大量繁殖，基礎(chǔ)料氮源利用較多，發(fā)酵液需氧量大，發(fā)酵液粘度大，體積增加，可通過緩慢流加硫酸銨溶液，改變發(fā)酵液粘度，改善溶氧，調(diào)節(jié)紅霉素各組分的合成，同時可補(bǔ)充氮源，增加菌體活力，延長紅霉素分泌期，從而提高紅霉素發(fā)酵水平。
【IPC分類】C12R1/645, C12P19/62
【公開號】CN105296571
【申請?zhí)枴緾N201510797249
【發(fā)明人】章惠霞, 孫瑞君, 張志
【申請人】寧夏啟元藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月19日