一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種鹽藻的處理方法，特別是一種能夠降低鹽藻中脫儀葉綠素含量的 脫鹽沉降方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽藻是真核生物，單細(xì)胞微藻，屬綠藻綱，團(tuán)藻目，杜氏藻屬。杜氏鹽藻含有葉綠 素，由于其對光、熱和酸敏感，性質(zhì)極不穩(wěn)定。在遇酸的時(shí)候，葉綠素中屯、金屬儀原子被氨置 換脫離成暗綠色至暗褐色的脫儀葉綠素，色澤呈暗褐色。研究發(fā)現(xiàn)，脫儀葉綠素對小鼠具有 光過敏毒性，是引起日光性皮炎的光敏性物質(zhì)。
[0003] 通常，國外一些國家的食品部口規(guī)定，食品中總脫儀葉綠素的含量不能超過 160mg/100g。在鹽藻的養(yǎng)殖和產(chǎn)品的開發(fā)中，通常采用過濾、離屯、和絮凝沉降一系列分離方 法來采收鹽藻。當(dāng)前，絮凝沉降往往是需要加入一定量的酸進(jìn)行脫鹽沉降處理，該方法具有 脫鹽率較高、沉降速度快，沉降率高的特點(diǎn)。但是正是由于酸的介入，使得藻細(xì)胞中所含的 葉綠素大部分脫儀形成了脫儀葉綠素。因此，為了開拓更廣闊的市場，怎樣能夠降低鹽藻粉 中脫儀葉綠素的含量是非常重要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種提高沉降效率，降低鹽藻中脫儀葉綠素的含量的 脫鹽沉降方法。
[0005] 技術(shù)解決方案 為了實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明一種降低鹽藻中脫儀葉綠素的脫鹽沉降方法，對液體培養(yǎng) 基培養(yǎng)后的鹽藻經(jīng)過高速離屯、后，加水稀釋脫鹽，通過控制藻液的酸堿度，在藻液中添加乙 醇，自然沉降，再低速離屯、后制成鹽藻藻糊，測量其脫儀葉綠素。
[000引所述藻液抑值5-7。
[0007] 優(yōu)選藻液抑值6。
[0008] 本發(fā)明在藻液中加入乙醇，乙醇加入量為藻液體積的0. 25%-1%。
[0009] 優(yōu)選乙醇加入量優(yōu)選為藻液體積0.25%、0.5%或0.6%。
[0010] 所述脫鹽沉降時(shí)的鹽度的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 3-2. 5%。
[0011] 優(yōu)選脫鹽沉降時(shí)的鹽度的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)選：1. 3 %、1. 4 %、1. 5 %、1. 6 %、1. 7 %、 1. 8%、1. 9%、2. 0%或 2. 5%。
[0012] 鹽藻粉中脫儀葉綠素含量的主要因素是藻液的酸堿度，影響脫鹽工序中沉降效果 的主要因素是稀釋的鹽度，通過控制抑值及鹽度，添加一定量的乙醇，可W達(dá)到降低鹽藻 中脫儀葉綠素含量為目的。
[0013] 本發(fā)明除了研究傳統(tǒng)的采收鹽藻脫鹽工藝中的抑值、鹽度對沉降效果W及脫儀 葉綠素含量的影響W外，提出了加入乙醇作為一種新的添加試劑。實(shí)驗(yàn)表明，通過加入乙醇 既降低了鹽藻中脫儀葉綠素的含量，又能達(dá)到較好的沉降效率的目的。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：選取了加入乙醇，由于乙醇是一種無毒、易被除去的溶劑，其成本 較其它溶劑相對低廉。脫儀葉綠素是由葉綠素降解形成的，葉綠素部分被乙醇提取出來，而 且胡蘿l·素是難溶于乙醇的（胡蘿l·素是鹽藻中的主要營養(yǎng)物質(zhì))，那么鹽藻中脫儀葉綠素 的含量勢必會(huì)降低。而且選取的抑值是在弱酸性的條件下，一方面可W降低脫儀葉綠素的 含量，另一方面會(huì)減少酸的加入量，同時(shí)也降低了成本。需要說明的是，本方法選取了合適 的鹽度，是為了追求在自然條件下，較好的脫鹽沉降速度，沒有引入任何絮凝劑。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合附表和實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局 限于實(shí)驗(yàn)例表述的范圍。
[0016] 藻種由內(nèi)蒙古吉蘭泰生物工程公司提供，培養(yǎng)基參照中科院水生生物研究所配 方。培養(yǎng)基配制好之后，取一定量處于生長期或穩(wěn)定期的藻種直接加到培養(yǎng)基中進(jìn)行接種。 放在陽光充足氣溫適中（常溫即可）的地方培養(yǎng)，每天早、中、晚手動(dòng)搖瓶Ξ次，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì) 和藻細(xì)胞分布均勻。每日鏡檢觀察、計(jì)數(shù)。當(dāng)細(xì)胞數(shù)目達(dá)到為1.15X106個(gè)/mLW上，離屯、 濃縮W后定量取樣。
[0017]脫鹽沉降步驟如下： 1)取離屯、濃縮后的鹽藻液體培養(yǎng)基，脫鹽加水，藻液稀釋后的鹽度為1. 3-2. 5%，本方 法選取藻液中鹽度為 1. 3%、1. 4%、1. 5%、1. 6%、1. 7%、1. 8%、1. 9%、2. 0%或 2. 5%來考 察其對脫儀葉綠素含量W及沉降效果的影響。
[0018] 2)使用鹽酸調(diào)試到一定的抑值（4、6、7或9)，交叉進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來考察抑值對脫儀 葉綠素含量W及沉降效果的影響。葉綠素不溶于水，易溶于中性有機(jī)溶劑，比如丙酬、乙醇、 甲醇。方法中選取了加入乙醇，由于乙醇是一種無毒、易被除去的溶劑。脫儀葉綠素是由 葉綠素降解形成的，如果盡可能的把葉綠素提取出來，而且胡蘿l·素是難溶于乙醇的，那么 藻粉中脫儀葉綠素的含量勢必會(huì)降低。另外，乙醇的添加量不能太大，如果運(yùn)樣的話，成本 W及乙醇的脫除也是需要考慮的。選擇了乙醇添加量藻液體積的為〇%、〇. 25%、0. 5%、1. 0%、 2. 0%、3. 0%、4. 0% 或 5. 0〇/〇。
[0019]沉降效果利用采用分光光度法來衡量。具體來說，W空白為對照，在分光光度計(jì)上 測定藻液在λ= 680nm處的吸光度ODes。，在ODes。小于1. 2單位范圍內(nèi)，鹽藻細(xì)胞的濃度和 ODes。有良好的線性關(guān)系。根據(jù)測定上清液的細(xì)胞濃度，可W反應(yīng)出沉降效果的好壞。
[0020] 脫儀葉綠素含量的測定方法使用公知的方法，具體來說，將鹽藻細(xì)胞破碎W后，用 配制好的85%丙酬溶液提取色素，重復(fù)Ξ次，定容，將其轉(zhuǎn)入無水乙酸中，并重復(fù)加入5% 的無水硫酸鋼反復(fù)洗去丙酬和水；然后加入固體硫酸鋼除去無水乙酸中少量的水，再將其 轉(zhuǎn)入17%的鹽酸中，最后再經(jīng)過飽和硫酸鋼脫去鹽酸進(jìn)入到無水乙酸層中，定容后。使用分 光光度計(jì)測定在一定波長下的吸光度值，計(jì)算出鹽藻中的脫儀葉綠素的含量。
[0021] 當(dāng)鹽度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為1. 3-1. 5%時(shí)，脫儀葉綠素的含量是均低于其它稀釋鹽度。運(yùn) 充分證明了稀釋鹽度比較低的時(shí)候，葉綠素不易形成脫儀葉綠素。但是，如果繼續(xù)降低藻液 的鹽度，藻細(xì)胞在低滲透溶液中破裂的數(shù)目越來越多，運(yùn)反而會(huì)增加鹽藻中葉綠素的降解， 從而增加了脫儀葉綠素的形成。因此，鹽度最好控制在1.4%。
[0022] 實(shí)施例1 取一定量的藻細(xì)胞達(dá)到1. 15XΙΟ6個(gè)/血的藻液離屯、脫水（40(K)r/min，20min)。然后去 除離屯、液，分別加水稀釋到鹽度為1. 4%。取藻液加入比色管中，添加的乙醇加入量為 藻液體積的0. 5%，然后加鹽酸調(diào)節(jié)抑值為6,自然沉降5min之后，吸取各支比色管中的上 清液，使用分光光度計(jì)測量其ODes。的吸光度值。將比色管中的殘留藻液進(jìn)一步低速離屯、分 離（10(K)r/min，5min)，在真空干燥器中干燥（120°C，30min)，測定其脫儀葉綠素的含量。結(jié) 果見表1。
[002引實(shí)施例2-6 : 在實(shí)施例2-6中，除了抑值不同和乙醇的加入量變更為表1中的條件外，其他的處理 方法與實(shí)例1完全相同。結(jié)果見表1。
[0024] 參考例： 在參考例中，對培養(yǎng)鹽藻沒有進(jìn)行抑調(diào)節(jié)處理和鹽度稀釋W(xué)及不加入乙醇進(jìn)行上述 的脫鹽處理步驟，經(jīng)過在真空干燥器中干燥（120°C，30min)，測定其脫儀葉綠素的含量。
[0025] 鹽藻中脫儀葉綠素的含量都隨著抑值的升高而降低；乙醇的加入對于沉降效果 影響較大，當(dāng)抑值為6時(shí)，沉降效果較好。脫儀葉綠素的含量都較低。當(dāng)抑值為9. 0時(shí)， 沉降效果不佳，但是脫儀葉綠素的含量是最低的。
[0026] 在抑為6的前提條件下，乙醇加入量為藻液體積的0. 5%的時(shí)候，有較低的脫儀葉 綠素含量和較好的沉降速度。
[0027] 通過綜合分析，脫儀葉綠素的含量和沉降速度是相互矛盾的。如果只追求降低脫 儀葉綠素的含量，應(yīng)該選擇抑為9的條件下。如果將脫儀葉綠素含量降至最低W及較好的 沉降速度，那么最佳的鹽藻脫鹽工藝參數(shù)為：抑值約為6,鹽度為1. 4%，乙醇加入量為藻液 體積的0. 5%。
[0028] 雖然，已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明做了詳細(xì)的敘述，但在本發(fā)明 基礎(chǔ)之上，可W做些修改或者改進(jìn)，運(yùn)對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏 離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)之上所做的運(yùn)些修飾或者改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征在于，對液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后的 鹽藻經(jīng)過高速離心后，加水稀釋脫鹽，通過控制藻液的酸堿度，在藻液中添加乙醇，自然沉 降，再低速離心后制成鹽藻藻糊，測量其脫鎂葉綠素。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征在于， 藻液pH值5-7。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征在于， 藻液pH值6。4. 根據(jù)權(quán)利要求1. 2或3所述的一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征 在于，在藻液中加入乙醇，乙醇加入量為藻液體積的〇. 25%-1%。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征在于， 乙醇加入量優(yōu)選為藻液體積〇. 25%、0. 5%或0. 6%。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征在于， 脫鹽沉降時(shí)的鹽度的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 3-2. 5%。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種降低鹽藻中脫鎂葉綠素的脫鹽沉降方法，其特征在 于，脫鹽沉降時(shí)的鹽度的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)選：1. 3%、1.4%、1. 5%、1.6%、1. 7%、1.8%、1.9%、 2. 0%或 2. 5%〇
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種鹽藻的處理方法，特別是一種能夠降低鹽藻中脫鎂葉綠素含量的脫鹽沉降方法。本發(fā)明對經(jīng)液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后的鹽藻經(jīng)過高速離心后，加水稀釋脫鹽，通過控制藻液的酸堿度，在藻液中添加乙醇，自然沉降，再低速離心后制成鹽藻藻糊，測量其脫鎂葉綠素。本發(fā)明選取了加入乙醇，由于乙醇是一種無毒、易被除去的溶劑，其成本較其它溶劑相對低廉。脫鎂葉綠素是由葉綠素降解形成的，葉綠素部分被乙醇提取出來，那么脫鎂葉綠素的含量勢必會(huì)降低。而且選取的pH值為弱酸性，可以降低脫鎂葉綠素的含量，同時(shí)減少了酸的加入量，降低了成本。本方法選取了合適的鹽度，是為了追求在自然條件下，較好的脫鹽沉降速度，沒有引入任何絮凝劑。
【IPC分類】C12N1/12
【公開號】CN105255737
【申請?zhí)枴緾N201510706826
【發(fā)明人】盧俊, 盧慶華, 李民君, 謝修偉, 王文華, 張冬艷
【申請人】盧俊
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年10月27日