一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 表皮生長(zhǎng)因子是由Cohen等人在上世紀(jì)60年代從小鼠頌下腺發(fā)現(xiàn)的一種生長(zhǎng) 調(diào)節(jié)蛋白，由53個(gè)氨基酸組成，研究證實(shí)它具有廣泛的刺激細(xì)胞增殖的作用。1975年， Starkey、Cohen等人從人尿中提取了人表皮生長(zhǎng)因子（humanEpidermalGrowthFactor， hEGF)，與鼠表皮生長(zhǎng)因子具有高度一致的結(jié)構(gòu)，并具有一致的生物學(xué)活性。表皮生長(zhǎng)因子 廣泛存在于人體各種組織中，可刺激多種細(xì)胞增殖，主要是上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，這 是通過結(jié)合細(xì)胞膜上的表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR)而起作用的。EGF通過與細(xì)胞受體的膜外 部分結(jié)合，激活其酪氨酸激酶活性，誘導(dǎo)蛋白磷酸化，啟動(dòng)DNA合成，激活RNA、蛋白質(zhì)合成， 促進(jìn)細(xì)胞增生、移行。
[0003] 表皮生長(zhǎng)因子廣泛存在于人體內(nèi)各種組織，含量極微，對(duì)于維持人體各種組織器 官（如角結(jié)膜、皮膚、各種黏膜、腺體等）的正常生理功能具有重要作用。隨著年齡的增長(zhǎng)， 體內(nèi)表皮生長(zhǎng)因子水平逐漸下降，表現(xiàn)為相關(guān)組織器官的衰老和退化，特別是上皮組織的 衰老，因此，及時(shí)向人體補(bǔ)充表皮生長(zhǎng)因子，可維護(hù)人體正常功能并延緩衰老，這是表皮生 長(zhǎng)因子在美容保健行業(yè)的應(yīng)用基礎(chǔ)。另外，在肌體受損等的情況下，內(nèi)源性表皮生長(zhǎng)因子不 能滿足組織修復(fù)的大量需要，及時(shí)向受損部位補(bǔ)充表皮生長(zhǎng)因子，可促進(jìn)受損肌體組織的 修復(fù)，在臨床上應(yīng)用非常廣泛，如用于創(chuàng)傷、炎癥、手術(shù)、化學(xué)燒傷及干眼癥等各種原因引起 的角膜上皮缺損修復(fù)，燒傷、創(chuàng)傷、外科手術(shù)、炎癥、潰瘍等各種皮膚和黏膜缺損的修復(fù)。
[0004] 目前，對(duì)表皮生長(zhǎng)因子和重組表皮生長(zhǎng)因子已有研究，例如中國(guó)專利97115284. 5， 公開了表皮生長(zhǎng)因子工程菌及使用該菌制備表皮生長(zhǎng)因子的方法，研究人員通過表皮生長(zhǎng) 因子可以得到重組人表皮生長(zhǎng)因子（或者稱為重組人表皮生長(zhǎng)因子原液）?？萍荚诓粩噙M(jìn) 步，對(duì)于表皮生長(zhǎng)因子和重組表皮生長(zhǎng)因子的研究也在不斷的進(jìn)行當(dāng)中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下重 量比例成分制成：
[0006] 甘袖? 5.0-7.0%、
[0007] 酵母堿基（ΥΝΒ) 3.0-3. 5%、 微量金屬離子：1.8-2. 2%、 仆:物素 0. 5-1,0%、 促進(jìn)劑 0. 5-1. 0%、 水 余里；
[0008] 所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中 的一種；
[0009] 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為5. 5-6. 5 ;
[0010] 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備：
[0011] 1)原料處理：將穿心蓮洗凈、干制、粉碎；
[0012] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa， 保壓時(shí)間維持在150-200s;
[0013] 3)蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0014] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度 30-40m/s，時(shí)間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選的，該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：
[0016] 甘油： 6.0%、 酵母堿基（YNB) 3. 44%, 微量金屬離子； 2.0%、 十.物素 1.0%、 促進(jìn)劑 0.8%、 水 余量；
[0017] 所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中 的一種；
[0018] 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為6. 0 ;
[0019] 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備：
[0020] 1)原料處理：將穿心蓮洗凈、干制、粉碎；
[0021] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa， 保壓時(shí)間維持在150-200s;
[0022] 3)蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0023] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度 30-40m/s，時(shí)間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0024] 本發(fā)明所述用水符合制藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
[0025] 本發(fā)明所述培養(yǎng)基按照現(xiàn)有技術(shù)制備。
[0026] 本發(fā)明所述穿心蓮的使用量，優(yōu)選粉碎后的體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐體積的 1/4-1/3〇
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0028] 1、本發(fā)明使用的植物原料成分經(jīng)過了蒸汽爆破、蒸餾、高剪切均質(zhì)機(jī)處理，得到納 米乳狀的植物油性成分，和培養(yǎng)基中其他配方的相容性好。
[0029] 2、本發(fā)明通過在培養(yǎng)基中添加植物原料成分作為促進(jìn)劑，和現(xiàn)有技術(shù)相比，表達(dá) 產(chǎn)量會(huì)提高20-30%。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0031] 實(shí)施例1 :
[0032] -種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：
[0033] 甘油5.0%、 酵母堿基（ΥΝΒ) 3.5%、 微量金屬離子.· 1.8%、 ζ|:物素 0.5%、 促進(jìn)劑 1.0%、 水 余量；
[0034] 所述微量金屬離子為三氯化鐵；
[0035] 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為5. 5 ;
[0036] 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備：
[0037] 1)原料處理：將穿心蓮洗凈、干制、粉碎；
[0038] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐 體積的1/3,爆破壓力3. 5Mpa，保壓時(shí)間維持在150s;
[0039] 3)蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0040] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度40m/ s，時(shí)間3min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0041] 實(shí)施例2:
[0042] -種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：
[0043] 甘油7. 0%、 酵母堿基（YNB) 3.0%、 微量金屬離子： 2.2%、
[0044] /:l·:物素 1.0%、 促進(jìn)劑 0.5%、 水 余量；
[0045] 所述微量金屬離子為氯化鈣；
[0046] 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為6. 5 ;
[0047] 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備：
[0048] 1)原料處理：將穿心蓮洗凈、干制、粉碎；
[0049] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐 體積的1/4,爆破壓力3.OMpa，保壓時(shí)間維持在200s;
[0050] 3)蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0051] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度30m/ s，時(shí)間5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0052] 實(shí)施例3 :
[0053] -種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：
[0054] 甘_; 6.0%、 酵母堿基（YNB) 3.44%、 微星金)禹尚子： 2.0%、 物素 1.0%、 促進(jìn)劑〇· 8%、 水余量；
[0055] 所述微量金屬離子為鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中；
[0056] 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為6. 0 ;
[0057] 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備：
[0058] 1)原料處理：將穿心蓮洗凈、干制、粉碎；
[0059] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐 體積的1/3,爆破壓力3.OMpa，保壓時(shí)間維持在180s;
[0060] 3)蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0061] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度35m/ s，時(shí)間4min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，其特征在于，該培養(yǎng)基由W下重量比例成 分制成： 甘油； 5.Q-7.0%、 酵母堿基 3. 0-3. 5%、 微量金屬離子；1.8-2. 2%、 '心闖崇 0. 5-1.0%、 促進(jìn)劑 0.5-1.0%、 水. 余重； 所述微量金屬離子為Ξ氯化鐵、氯化巧、鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中的一 種； 用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為5. 5-6. 5 ; 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備： 1) 原料處理：將穿屯、蓮洗凈、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3.0-3.5Mpa，保壓 時(shí)間維持在150-200S ; 3) 蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入蒸汽， 當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分離器， 收集精油； 4) 高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度30-40m/ S，時(shí)間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，其特征在于，該培 養(yǎng)基由W下重量比例成分制成： 甘油： 6.0%、 酵母堿基 3. 44%、 微重金屬窩子： 2. 0%、 化物袁 1.0%、 促進(jìn)劑 0.8%、 水 余富； 所述微量金屬離子為Ξ氯化鐵、氯化巧、鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中的一 種； 用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為6. 0 ; 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備： 1) 原料處理：將穿屯、蓮洗凈、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3.0-3.5Mpa，保壓 時(shí)間維持在150-200S ; 3) 蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入蒸汽， 當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分離器， 收集精油； 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度30-40m/S，時(shí)間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，其特征在于： 所述穿屯、蓮的使用量，粉碎后的體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐體積的1/4-1/3。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種重組人表皮生長(zhǎng)因子發(fā)酵用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：甘油5.0-7.0％、酵母堿基(YNB)3.0-3.5％、微量金屬離子1.8-2.2％、生物素0.5-1.0％、促進(jìn)劑0.5-1.0％、水余量；所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一種；用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為5.5-6.5。本發(fā)明使用的植物原料成分經(jīng)過了蒸汽爆破、蒸餾、高剪切均質(zhì)機(jī)處理，得到納米乳狀的植物油性成分，和培養(yǎng)基中其他配方的相容性好。本發(fā)明通過在培養(yǎng)基中添加植物原料成分作為促進(jìn)劑，和現(xiàn)有技術(shù)相比，發(fā)酵液的產(chǎn)量會(huì)提高20-30％。
【IPC分類】C12P21/02
【公開號(hào)】CN105238832
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510845161
【發(fā)明人】韋忠明, 黃啟斌, 莫冬海, 馬沖, 宮猛, 包能創(chuàng)
【申請(qǐng)人】桂林華諾威基因藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年11月26日