時(shí)、65小時(shí)、60小時(shí)、55小時(shí)、50小時(shí)、49小 時(shí)、48小時(shí)、47小時(shí)、46小時(shí)、45小時(shí)、44小時(shí)、43小時(shí)、42小時(shí)、41小時(shí)、40小時(shí)、39小時(shí)、 38小時(shí)、37小時(shí)、36小時(shí)、35小時(shí)、34小時(shí)、33小時(shí)、32小時(shí)、31小時(shí)、30小時(shí)、29小時(shí)、28 小時(shí)、27小時(shí)、26小時(shí)、25小時(shí)、24小時(shí)、23小時(shí)、22小時(shí)、21小時(shí)、20小時(shí)或小于20小時(shí)。 陽(yáng)0巧]在另一個(gè)實(shí)施方式中，W下列或W上的體積執(zhí)行發(fā)酵：1化、100^20化、500^ 1000L、2000L、5000L、10, 000L、25, 000L、50, 000L、55, 000L、60, 000L、65, 000L、70, 000L、 75, 000U80, 000U85, 000U90, 000U95,OOOL、100,OOOL、110,OOOL、120,OOOL、130,OOOL、 140,000L、150,000L、160,000L、170,000L、180,000L、190,000L、200,000g/L或大于 200,OOOLo
[00%] 在一個(gè)實(shí)施方式中，細(xì)胞內(nèi)表達(dá)系統(tǒng)為革蘭氏陰性細(xì)菌。在另一個(gè)實(shí)施方式中，革 蘭氏陰性細(xì)菌為假單胞菌。在另一個(gè)實(shí)施方式中，假單胞菌為巧光假單胞菌。
[0027] 在一個(gè)實(shí)施方式中，W大約35.Og/L生產(chǎn)具有肌醇六憐酸酶活性的多膚。在另一 個(gè)實(shí)施方式中，W大于7.Og/L生產(chǎn)具有肌醇六憐酸酶活性的多膚。在另一個(gè)實(shí)施方式中， 將在小于144小時(shí)內(nèi)表達(dá)肌醇六憐酸酶。在另一個(gè)實(shí)施方式中，將在小于84小時(shí)、74小時(shí)、 64小時(shí)、54小時(shí)、44小時(shí)、34小時(shí)或24小時(shí)內(nèi)生產(chǎn)肌醇六憐酸酶。
[0028] 在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)生產(chǎn)的編碼肌醇六憐酸酶的核酸源自下列 或是源自下列的核酸的改性形式：大腸桿菌、桿菌屬、哈夫尼菌屬（化化iasp.KPerni O地oralycii、布丘氏菌屬度Uttiauxellasp.)、巧樣酸桿菌屬或黑曲霉。在另一個(gè)實(shí)施 方式中，肌醇六憐酸酶為在PCT公開(kāi)號(hào)W01999/008539、W02000/071728、W02001/090333、 W02002/095003、W02006/028684、W02008/036916 或W02010/135588 中公開(kāi)的任意肌醇六憐 酸酶。
[0029] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，核酸為分離的、合成的或重組的核酸。在另一個(gè)實(shí)施方式 中，分離的、重組的或合成的核酸序列編碼具有肌醇六憐酸酶活性的多膚。在另一個(gè)實(shí)施 方式中，核酸序列選自：SEQIDN0:1、沈QIDN0:2、沈QIDN0:4、沈QIDN0:5和沈QID NO:7的核酸序列。
[0030] 在一個(gè)實(shí)施方式中，編碼具有肌醇六憐酸酶活性的核酸為SEQIDNO: 1、SEQID N0:2、沈QIDN0:4、沈QIDN0:5或沈QIDN0:7的變體，其中該變體至少70%、71%、 72%、73%，74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98. 5%、98. 6%、98. 7%、 98. 8%、98. 9%、99. 0%、99. 1%、99. 2%、99. 3%、99. 4%、99. 5%、99. 6%、99. 7%、99. 8%、 99. 9%或完全（100% )與沈QIDN0:1、沈QIDN0:2、沈QIDN0:4、沈QIDN0:5 和 / 或 SEQIDNO:7或其片段同一，其中該變體編碼具有肌醇六憐酸酶活性的多膚。
[0031] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，分離的、合成的或重組的核酸序列編碼選自下列的多膚： 沈QIDN0:3、SEQIDN0:6和沈QIDN0:8。在另一個(gè)實(shí)施方式中，SEQIDN0:1的核酸或 SEQIDNO: 1的變體編碼SEQIDNO: 3的多膚。在另一個(gè)實(shí)施方式中，SEQIDNO: 2的核酸 或SEQIDNO: 2的變體編碼SEQIDNO: 3的多膚。在另一個(gè)實(shí)施方式中，SEQIDNO: 4的核 酸或SEQIDNO: 4的變體編碼SEQIDNO: 6的多膚。在另一個(gè)實(shí)施方式中，SEQIDNO: 5的 核酸或SEQIDNO: 5的變體編碼SEQIDNO: 6的多膚。在另一個(gè)實(shí)施方式中，SEQIDNO: 7 的核酸或SEQIDN0:7的變體編碼SEQIDN0:8的多膚。
[0032] 在一個(gè)實(shí)施方式中，核酸序列與沈QIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQID NO:5、SEQIDNO:7或其變體的全長(zhǎng)序列互補(bǔ)。
[0033] 在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶是分離的、重組的或合成的具有肌醇六憐酸酶 活性的多膚，其中該多膚選自：SEQIDN0:3、SEQIDN0:6和SEQIDN0:8的氨基酸序列。
[0034] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶為沈QIDNO:3、SEQIDNO:6、或沈QIDNO:8 的變體，其中該變體至少 70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96 %、97 %、98. 5 %、98. 6 %、98. 7 %、98. 8 %、98. 9 %、99. 0 %、99. 1 %、99. 2 %、99. 3 %、 99. 4%、99. 5%、99. 6%、99. 7%、99. 8%、99. 9%或完全（100%)與沈QIDN0:3、沈QID N0:6或SEQIDN0:8或其酶活性片段同一，其中該變體具有肌醇六憐酸酶活性。在另一個(gè) 實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶為由包含沈QIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和/或SEQIDNO:7的核酸序列編碼的氨基酸序列。
[0035] 在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶為缺少信號(hào)序列、原蛋白（proprotein)序列、 啟動(dòng)子序列或其組合的氨基酸序列。
[0036] 在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶是進(jìn)一步包含選自下列的異源序列的氨基酸序 列：信號(hào)序列、標(biāo)記物、表位、交配因子、調(diào)節(jié)序列、啟動(dòng)子序列、N端延伸、C端延伸和其任意 組合。
[0037] 在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶具有在從大約lOOOU/mg至大約1，600U/mg范 圍內(nèi)的任何值的比活性。在另一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶具有1000U/mg、1100U/mg、 1200U/mg、1300U/mg、1400U/mg、1500U/mg或 1600U/mg的比活性。
[0038] 在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶在從大約抑I. 0至大約抑9. 0范圍內(nèi)的任何 pH下是活性的。在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶在1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、 5. 0、5. 5、6. 0、6. 5、7. 0、7. 5、8. 0、8. 5、9. 0、9. 5 或更堿性條件的抑下是活性的。
[0039] 在一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶在從大約50°C至大約100°C的范圍內(nèi)的任何溫 度下是活性的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，肌醇六憐酸酶在從大于37°C至大約95°C、或大約 55°C至大約85°C之間、或大約70°C至大約75°C之間，或大約70°C至大約95°C之間、大約 90°C至大約95°C之間、大約95°C至大約105°C之間、或大約95°C至大約110°C之間的范圍內(nèi) 的溫度下是活性的。
[0040] 在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的肌醇六憐酸酶包含在組合物中。在另一個(gè)實(shí)施方式 中，組合物為制劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，組合物為包含肌醇六憐酸酶的食品、飼料、補(bǔ)充 物、動(dòng)物飼料添加物、或膳食助劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，組合物為包含肌醇六憐酸酶的藥 品。
[0041] 本文中所使用的"克隆"是用于形成DM片段、細(xì)胞或有機(jī)體的復(fù)制品的方法，其 中DNA被引入生產(chǎn)重組DNA的復(fù)制品的宿主有機(jī)體。
[0042] 本文中所使用的"克隆載體"為諸如細(xì)菌質(zhì)?；蛩砭w的載體，其用于將基因序 列，諸如脫氧核糖核酸值NA)片段或完整的基因插入宿主細(xì)胞W便外來(lái)基因材料能夠被復(fù) 制。
[0043] 本文中所使用的"混合物（cocktail)"為包含本發(fā)明的肌醇六憐酸酶結(jié)合一種或 多種另外的酶的組合物。一種或多種另外的酶可W為任何酶，例如，乳糖酶、脂肪酶、蛋白 酶、過(guò)氧化氨酶、木聚糖酶、纖維素酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、淀粉酶、酷胺酶、環(huán)氧化物酶、 醋酶、憐脂酶、轉(zhuǎn)氨酶、胺氧化酶、纖維二糖水解酶、脫氨酶或其任意組合。
[0044] "密碼子"是指定待被加入蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)（identity)的=個(gè)多核巧酸序 列。 W45] 本文中所使用的"互補(bǔ)DNA或cDNA"為在由逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶催化的反應(yīng)中 由信使RNA模板合成的DNA。
[0046] 本文中所使用的"培養(yǎng)"包括使用改性為適于在包含編碼肌醇六憐酸酶的多核巧 酸的宿主細(xì)胞內(nèi)激活啟動(dòng)子、選擇轉(zhuǎn)化體或擴(kuò)增基因的常規(guī)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件，諸如 溫度、抑等，是與選擇的用于表達(dá)的宿主細(xì)胞一起使用的那些，并且對(duì)普通技術(shù)人員將是明 顯的。
[0047] 本文所使用的"宿主細(xì)胞"是包含編碼肌醇六憐酸酶的核酸序列，或包含本發(fā)明 的表達(dá)盒、載體、克隆媒介（vehicle)、表達(dá)載體、克隆載體的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。宿主細(xì)胞可W是為 本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的任何宿主細(xì)胞，包括原核細(xì)胞或真核細(xì)胞，諸如細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì) 胞、酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞或植物細(xì)胞。選擇適合的宿主在本領(lǐng)域技術(shù)人員的 能力范圍內(nèi)。
[0048] 可WW常規(guī)方式使用宿主細(xì)胞W生產(chǎn)由重組的序列編碼的基因產(chǎn)品。取決于重組 生產(chǎn)過(guò)程中采用的宿主，由宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多膚可為糖基化的或可為非糖基化的。本發(fā)明 的多膚還可能包括或可不包括初始甲硫氨酸氨基酸殘基。 W例本文中所使用的"同一的"為序列同一性（同源性）的程度，其可使用本領(lǐng)域已知 的任何計(jì)算機(jī)程序和相關(guān)參數(shù)，諸如具有缺省參數(shù)的BLAST2. 2. 2.或FASTA版本3.化78 來(lái)測(cè)定。
[0050] 蛋白和/或核酸序列同一性（同源性）可使用任何一種本領(lǐng)域已知的多種序 列比較算法和程序估計(jì)。運(yùn)種算法和程序包括但不限于BLAST程序（化tionalCenter forBiologicalInformation的基本局部比對(duì)捜索工具，諸如BLAST、BLAST2、BLASTN和 BLASTX)、TBLASTN、BLASTP、FASTA、TFASTA和CLUSTALW任earson和Lipman，Proc.化tl. Acad.Sci.USA85 (8) : 2444-2448, 1988;Altschul等人，J.Mol.Biol. 215 (3) : 403-410, 1990 ; Thompson等人，NucleicAcidsRes. 22(2):4673-4680, 1994 巧iggins等人，Methods Enzymol. 266:383-402, 1996;Altschul等人，J.Mol.Biol. 215(3) :403-410, 1990 ; Altschul等人，化UireGenetics3:266-272, 1993。BLAST、BLAST2.0 和BLAST2. 2. 2 算法 還被用于實(shí)踐本發(fā)明。它們被描述在例如Altschul(1977)Nuc.AcidsRes. 25:3389-3402 ; Altschul(1990)J.Mol.Biol. 215:403-410 中。用于執(zhí)行BLAST分析的軟件是通過(guò)化tional CenterforBiologicalInformation公開(kāi)地可獲得的。
[0051] 在兩個(gè)或更多個(gè)核酸或多膚的情況下，術(shù)語(yǔ)"同源性"和"同一性"指的是相同的 兩個(gè)或更多個(gè)序列或子序列，或當(dāng)與在比較窗口或使用任意數(shù)目的序列比較算法或通過(guò)人 工比對(duì)和視覺(jué)檢查測(cè)量的指定區(qū)域