細菌分選酶抑制劑及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及細菌分選酶SrtA抑制劑和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 以金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus)為代表的各種革蘭氏陽性細菌是 重要的人類病原菌，可引發(fā)多種嚴重疾病，如皮膚和軟組織感染、心內(nèi)膜炎、骨髓炎、肺炎、 敗血癥，以及一系列與毒素相關(guān)的病癥等。分選酶（S 〇rtaSe，Srt)是金黃色葡萄球菌及 其它革蘭氏陽性菌細胞發(fā)育、生長所必需的酶，其功能是將細菌表面蛋白、糖蛋白等連到 細菌的細胞膜上。研究證實Srt的缺失可以使細菌的致病性顯著降低，使其逃避免疫殺 傷的能力受到嚴重破壞（?仰(：.恥七1.厶〇3(1.5(^.1]5厶，2000,97,5510-5515 ;了.厶11衍1111(^〇13. Chemother.，2004, 53, 480-483)。現(xiàn)有的研究表明分選酶A(SrtA)抑制劑可以減少感染，降 低小鼠死亡率（Mol. Microbiol.，2002, 43, 869-881 J. Infect. Dis.，2002, 185, 1417-1424 ; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002, 99, 2293-2298 ；Infect. Immun.，2002, 70, 1382-1390)。此 外，由于人類不表達Srt，其抑制劑對人體基本無危害。因此，有關(guān)SrtA的抑制劑的研究成 為抗革蘭氏陽性致病菌感染藥物研究中備受關(guān)注的熱點。
[0003]目前，有關(guān)SrtA抑制劑的研究主要集中在兩方面。一是通過分離提取方法從自然 界中獲得天然分子，比如皂苷、黃酮純、姜黃色素以及生物堿類化合物等，來發(fā)展SrtA抑制 劑。其缺點在于分離純化步驟繁瑣以及產(chǎn)物含量低且不均一性。二是通過化學合成法制 備系列有機小分子，比如噠嗪類化合物等，采用高通量技術(shù)來盲篩獲得SrtA抑制劑。這種 方法雖然具有快速簡捷的優(yōu)點，然而具有盲目性且受限于小分子化合物庫數(shù)量。鑒于此，發(fā) 展基于SrtA活性作用靶點的新型抑制劑具有重要意義。SrtA是一組膜結(jié)合的巰基轉(zhuǎn)肽酶。 它可以選擇性地識別和結(jié)合一個LPKTG五肽結(jié)構(gòu)（其中K也可以是其他任意氨基酸），切斷 此肽N-末端的肽鍵而失去一個甘氨酸殘基，并與SrtA蛋白形成活化硫代羧酸酯，然后將羧 基端轉(zhuǎn)移到親核性底物上去（Trends microbial.，2004, 12, 89-95 ;Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell Res.，2004, 1694, 269-278 ;Microbiol. Mol. Biol. Rev.，2006, 70, 192-221)。上述 SRTA蛋白轉(zhuǎn)肽反應(yīng)的催化位點為設(shè)計和發(fā)展新型SrtA抑制劑提供了新的理論依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種可以抑制細菌SrtA的活性，降低細菌感染的細菌分 選酶抑制劑及其用途。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：
[0006]-種細菌分選酶抑制劑，其特征是：為通式I、II化合物；
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[0008]
[0009] 通式 I 中，X 為 NH、NHCH2CH20H、NHCH2C6H 4-p-OH 或者 0, R1為 H 或 CH 3C0, R2為 OH、 NH2、NMe2、NHCH2C02H 或者 CH2NMe2;
[0010] 通式II中，X為NH或0。
[0011] 通式 I 中 X 為 NH，R1 為 H，R2為 OH、NH 2、NMe2、NHCH2C02H 或者 CH2NMe2。
[0012] 通式 I 中 X 為 NH，R1 為 Ac，R2為 NH2。
[0013] 通式 I 中 X 為 NCH2CH20H，R1為 H，R2為 OH、NH 2、NMe2、NHCH2C02H 或 CH2NMe2。
[0014] 通式 I 中 X 為 NCH2CH20H，R1 為 Ac，R2為 NH 2。
[0015] 通式 I 中 X 為 NCH2C6H4-p-OH，R1 為 H，R 2為 OH、NH 2、NMe2、NHCH2C02H 或 CH2NMe2。
[0016] 通式 I 中 X 為 NCH2C6H4-p-OH，R1 為 Ac，R 2為 NH 2。
[0017] 通式 I 中 X 為 0, R1為 H，R2為 OH、NH 2、NMe2、NHCH2C02H 或 CH2NMe2。
[0018] 通式 I 中 X 為 NH，R1 為 Ac，R2為 NH2。
[0019] -種細菌分選酶抑制劑在制備抗炎癥藥物中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明以SRTA蛋白轉(zhuǎn)肽反應(yīng)的催化位點為出發(fā)點，化合物可以用來抑制細菌 SrtA的活性，降低細菌感染，有助于開發(fā)抗炎藥物。
[0021] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0022] 圖1是流程1. LPG三肽片段中間體（A1-2)的固相合成路線圖。
【具體實施方式】
[0023] 實施例1 :Fm〇C/Ac-LPG三肽片段中間體（A1-2)的制備
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[0026] Fmoc-Gly-Wang 樹脂脫 Fmoc 基團保護
[0027] 取Fmoc-Gly-Wang樹脂（1. 0g)置于25mL多肽固相反應(yīng)管中，加入DMF溶劑 (15mL)，通氮氣鼓泡使樹脂溶脹0. 5h，然后過濾除去DMF溶劑。之后向該固相反應(yīng)管中加 入20 %哌啶/DCM溶液15mL，通氮氣鼓泡反應(yīng)5min后過濾，并用DMF與MeOH溶劑交替洗滌 5次后，再加入15mL的20%哌啶/DCM溶液，繼續(xù)反應(yīng)15min后過濾，并在此用DMF與MeOH 溶劑交替洗滌5次，得H-Gly-Wang樹脂。
[0028] Fmoc-Pro-OH 與 H-Gly-Wang 樹脂的鍵連
[0029] 取一 50mL 單口瓶，分別加入 DMF 溶劑（15mL)、Fmoc-Pr〇-OH(0. 185g，0? 555mmol)、 HBTU(0. 209g，0. 555mmol)、H0Bt(0. 072g，0. 555mmol)、DIPEA(0. 217g，1. 665mmol)，室 溫攪拌0. 5h。然后將該體系加入到上述所得H-Gly-Wang樹脂中，通氮氣鼓泡反應(yīng)2h 后，Kaiser試劑檢測反應(yīng)完全。過濾除去溶劑，并用DMF與MeOH溶劑交替洗滌5次，得 Fmoc-Pro-Gly-Wang 樹脂。
[0030] Fmoc-Pro-Gly-Wang 樹脂脫 Fmoc 基團保護
[0031 ] 向上述洗滌后的Fmoc-Pro-Gly-Wang樹脂中加入50 %哌啶/DCM溶液15mL，通 氮氣鼓泡反應(yīng)lmin后過濾，并用DMF與MeOH溶劑交替洗滌5次后，再加入15mL的50 % 哌啶/DCM溶液，繼續(xù)反應(yīng)5min后過濾，并在此用DMF與MeOH溶劑交替洗滌5次，得 H-Pro-Gly-Wang 樹脂。
[0032] Fmoc (Ac) -Leu-OH 與 Pro-Gly-Wang 樹脂的鍵連
[0033] a :Fmoc-Leu-〇H 與 Pro-Gly-Wang 樹脂的鍵連：取 50mL 單口瓶，分別加入 15mL DMF 溶劑、Fmoc-Leu-OH(0. 523g，1. 48mmol)、HBTU(0. 563g，1. 48mmol)、H0Bt(0. 201g， 1. 48mmol)、DIPEA(0. 571g，4. 44mmol)，室溫攪拌 0? 5h，之后加入到上述 H-Pro-Gly-2-CTC 樹脂中，通氮氣鼓泡反應(yīng)3h后，Kaiser試劑和四氯苯醌測試法檢測反應(yīng)完全。過濾除去溶 劑，并用DMF與MeOH溶劑交替洗滌5次，得Fmoc-Leu-Pro-Gly-Wang樹脂。
[0034] b :Ac-Leu_0H 與 Pro-Gly-Wang 樹脂的鍵連：實驗操作同 a :Fmoc-Leu_0H 與 Pro-Gly-2-CTC 樹脂的鍵連，將 Fmoc-Leu-OH(0. 523g，1. 48mmol)換為 Ac-Leu-OH(0. 257g， 1. 48mmo1)，反應(yīng)后得 Ac-Leu-Pro-Gly-Wang 樹脂。
[0035] Fmoc (Ac) -Leu-Pro-Gly-Wang 樹脂的裂解
[0036] 向上述所得 Fmoc-Leu-Pro-Gly-Wang 樹脂中加入 15mL 裂解液（TFA:DCM = 90:10)，通氮氣鼓泡反應(yīng)lh后過濾，并用少量裂解液洗滌樹脂三次，將洗滌液和裂解液合 并，加入到300mL無水乙醚中，放置于冰箱中過夜，過濾得粗肽0. 24g，之后制備液相色譜分 離得純肽 Fmoc-Leu-Pro-Gly-OH，為 0? 152g，產(chǎn)率為 85 %。
[0037] 實施例2 :丁二酸衍生物（B1-5)的合成
[0038] (1) 丁二酸衍生物（B1)的合成
[0039]
[0040] a.化合物Bl-b的合成：取一個50mL單口瓶，向該反應(yīng)瓶中依次加入20mL 無水 DCM 溶劑、化合物 2'（0? 5g，1. 72mmol)，丁 二酸酐（0? 26g，2. 58mmol)，40 °C 下加 熱回流，5h后TLC檢測反應(yīng)完全，將體系加水洗滌，之后硅膠柱層析分離得0.53g化 合物 Bl-a，產(chǎn)率為 87 %。4 NMR(400MHz，CDC13) Sl2.11(s，lH)，7.75-7.74(d，J = 4. 0Hz, 2H), 7. 60-7. 59 (d, J = 4. 0Hz, 2H), 7. 38-7. 36 (t, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 29-7. 27 (t, J = 8. 0Hz, 2H), 4. 39-4. 38 (d, J = 4. 0Hz, 2H), 4. 24 (s, 1H), 3. 48 (s, 1H), 3. 08 (s, 1H), 2. 47-2. 4 3 (t, J = 8. OHz, 2H), 2. 47-2. 43 (t, J = 8. OHz, 2H).
[0041] b.化合物B1的合成：取一個50mL單口瓶，加入50 %哌啶/DCM溶液20mL，之 后加入化合物II -2'（0. 5g，1.41mmol)，室溫水浴下反應(yīng)2h后，TLC檢測反應(yīng)完全，將體 系用稀鹽酸洗滌三次，并將DCM層減壓濃縮，硅膠柱層析分離純化得0. 18g化合物B1， 產(chǎn)率為 97 %。4 NMR(400MHz，CDC13) S l〇.89(s, lH)，7.26(s, lH)，3.01-2.91(d, J = 4. 0Hz, 2H), 2. 68-2. 66 (t, J = 4. 0Hz, 2H), 2. 51-2. 49 (t, J = 4. 0Hz, 2H).
[0042] (2) 丁二酰衍生物（B2)的合成
[0043]
[0044] 取一個250mL單口瓶，依次加入lOOmL無水DCM溶劑和丁二酰亞胺（20. 0g， 88. 9mm