一種從紅豆杉樹根中提取紫杉醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從紅豆杉樹根中提取紫杉醇的方法，屬于精煉加工領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇是從紅豆杉植物上提取的一種化合物，主要適用于治療卵巢癌和乳腺癌，以及肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤等，是繼阿霉素后最有效的抗癌新藥之一，總有效率達(dá)75%以上。長期以來，紫杉醇是從紅豆杉的樹皮中提取的，由于紅豆杉的樹皮為不可再生資源，導(dǎo)致紫杉醇的獲取原料非常有限；加之，紅豆杉是世界上公認(rèn)的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物，在自然條件下生長速度緩慢，再生能力差，世界范圍內(nèi)還沒有形成大規(guī)摸的紅豆杉原料林基地，中國已將其列為一級珍稀瀕危保護(hù)植物，聯(lián)合國也明令禁止采伐，從而使得紫杉醇的獲取原料更為匱乏。
[0003]所有種類的紅豆杉中都含有極有限量的紫杉醇。例如短葉紅豆杉和云南紅豆杉樹的樹皮中含有約0.02%的紫杉醇，直立曼地亞紅豆杉灌木地針葉和根中含有約0.005%至約0.1%的紫杉醇。因此，開發(fā)有效的從植物材料中提取高純度紫杉醇的方法引發(fā)了人們極大的興趣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對目前技術(shù)雖能從紅豆杉的枝葉中有效分離提取紫杉醇，但其純化效果非常不理想，無法直接達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行后續(xù)的純化操作，從而增加紫杉醇的提取成本，提取效率低，不能適宜規(guī)模批量化生產(chǎn)的現(xiàn)狀，提供了一種從云南紅豆杉樹根中提取紫杉醇的方法。該方法以云南紅豆杉樹根為原料，打碎后用有機(jī)溶劑溶解，萃取并脫脂，再進(jìn)行梯度淋洗，將含有紫杉醇的淋洗液濃縮干燥，再次提純，得到高純度的紫杉醇。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)取I?5kg紅豆杉樹根，放入粉碎機(jī)中粉碎成I?2cm的碎片，加入濃度為70?80%的異丙醇溶液，放入發(fā)酵罐中，設(shè)置溫度為28?38°C，密封發(fā)酵24?36h ;
(2)將上述發(fā)酵液過濾，讓得到的濾液通過活性炭柱，進(jìn)行脫色，得到脫色液，再用二氯甲烷對脫色液進(jìn)行萃取，常壓升溫回收溶劑后得到萃取物；
(3)按乙醇和石油醚體積比為1:1?1:3配制混合液，再將萃取物與混合液體積比為1:0.1?1:0.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，放入高壓脫脂罐，溶劑脫脂處理2?5h，脫脂溫度為50?80°C，壓力為0.1?0.5MPa，脫脂完成后冷卻至室溫，排出脫脂廢液，排完廢液后，通入120?130°C的過熱蒸汽，處理I?2h，然后冷卻至室溫卸壓取出，過濾，放入烘箱中，烘干，烘箱溫度為105?110°C，得到紫杉醇粗品；
(4)將紫杉醇粗品與其10?20倍的硅膠進(jìn)行攪拌，裝柱，進(jìn)行梯度淋洗，淋洗流速為200?250L/h，淋洗液為三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合體積比為100:5:2，用色譜分離法分離紫杉醇，其保留時(shí)間為14min,在流動(dòng)相流出13?15min內(nèi)收集紫杉醇，將收集到的紫杉醇減壓至900?100Pa進(jìn)行減壓濃縮，將濃縮物放入烘箱，烘干，烘箱溫度為100?105°C，得到紫杉醇半成品；
(5)將半成品用其5?10倍重量的異丙醇溶解，邊攪拌邊加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置15?20h，過濾，放入烘箱烘干，烘箱溫度為105?110°C，即得到純度80%以上的的紫杉醇。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:
(O紫杉醇提取純化率增高，降低了提純成本；
(2)紫杉醇根可以再生，獲取原料更加豐富；
(3)操作容易、分離徹底、能直接達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)。
具體實(shí)施方案
[0007]取I?5kg紅豆杉樹根，放入粉碎機(jī)中粉碎成I?2cm的碎片，加入濃度為70?80%的異丙醇溶液，放入發(fā)酵罐中，設(shè)置溫度為28?38°C，密封發(fā)酵24?36h ;
將上述發(fā)酵液過濾，讓得到的濾液通過活性炭柱，進(jìn)行脫色，得到脫色液，再用二氯甲烷對脫色液進(jìn)行萃取，常壓升溫回收溶劑后得到萃取物；按乙醇和石油醚體積比為1:1?1:3配制混合液，再將萃取物與混合液體積比為1:0.1?1:0.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，放入高壓脫脂罐，溶劑脫脂處理2?5h，脫脂溫度為50?80°C，壓力為0.1?0.5MPa，脫脂完成后冷卻至室溫，排出脫脂廢液，排完廢液后，通入120?130°C的過熱蒸汽，處理I?2h，然后冷卻至室溫卸壓取出，過濾，放入烘箱中，烘干，烘箱溫度為105?110°C，得到紫杉醇粗品；將紫杉醇粗品與其10?20倍的硅膠進(jìn)行攪拌，裝柱，進(jìn)行梯度淋洗，淋洗流速為200?250L/h，淋洗液為三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合體積比為100:5:2，用色譜分離法分離紫杉醇，其保留時(shí)間為14min,在流動(dòng)相流出13?15min內(nèi)收集紫杉醇，將收集到的紫杉醇減壓至900?100Pa進(jìn)行減壓濃縮，將濃縮物放入烘箱，烘干，烘箱溫度為100?105°C，得到紫杉醇半成品；將半成品用其5?10倍重量的異丙醇溶解，邊攪拌邊加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置15?20h，過濾，放入烘箱烘干，烘箱溫度為105?110°C，即得到純度80%以上的的紫杉醇。
[0008]經(jīng)檢測，所提取的紫杉醇含量可達(dá)80%以上。
[0009]取Ikg云南紅豆杉樹根，放入粉碎機(jī)中粉碎成Icm的碎片，加入濃度為70%的異丙醇溶液，浸泡15h ;將上述浸泡液過濾，讓得到的濾液通過活性炭柱，進(jìn)行脫色，得到脫色液，再用二氯甲烷對脫色液進(jìn)行萃取，常壓升溫回收溶劑后得到萃取物；按乙醇和石油醚體積比為1:1配制混合液，再將萃取物與混合液體積比為1:0.1進(jìn)行混合并攪拌均勻，放入高壓脫脂罐，溶劑脫脂處理2h，脫脂溫度為50°C，壓力為0.1MPa，脫脂完成后冷卻至室溫，排出脫脂廢液，排完廢液后，通入120°C的過熱蒸汽，處理lh，然后冷卻至室溫卸壓取出，過濾，放入烘箱中，烘干，烘箱溫度為105°C，得到紫杉醇粗品；將粗紫杉醇與其10倍的硅膠進(jìn)行攪拌，裝柱，進(jìn)行梯度淋洗，淋洗流速為200L/h，淋洗液為三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合體積比為100:5:1，用高效液相色譜法檢測洗脫流分中的紫杉醇，當(dāng)檢測到紫杉醇流分時(shí)，收集含有紫杉醇的淋洗流分，將含有紫杉醇的淋洗流分減壓至900Pa進(jìn)行減壓濃縮，將濃縮物放入烘箱，烘干，烘箱溫度為100°C，得到紫杉醇半成品；將半成品用其5倍重量的異丙醇溶解，邊攪拌邊加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置15h，過濾，放入烘箱烘干，烘箱溫度為105°C，即得到高純度的紫杉醇。
[0010]經(jīng)檢測，所提取的紫杉醇含量達(dá)82%。
[0011]取3kg云南紅豆杉樹根，放入粉碎機(jī)中粉碎成1.5cm的碎片，加入濃度為75%的異丙醇溶液，浸泡18h ;將上述浸泡液過濾，讓得到的濾液通過活性炭柱，進(jìn)行脫色，得到脫色液，再用二氯甲烷對脫色液進(jìn)行萃取，常壓升溫回收溶劑后得到萃取物；按乙醇和石油醚體積比為1:2配制混合液，再將萃取物與混合液體積比為1: 0.3進(jìn)行混合并攪拌均勻，放入高壓脫脂罐，溶劑脫脂處理3h，脫脂溫度為60°C，壓力為0.3MPa，脫脂完成后冷卻至室溫，排出脫脂廢液，排完廢液后，通入125°C的過熱蒸汽，處理1.5h，然后冷卻至室溫卸壓取出，過濾，放入烘箱中，烘干，烘箱溫度為108°C，得到紫杉醇粗品；將粗紫杉醇與其15倍的硅膠進(jìn)行攪拌，裝柱，進(jìn)行梯度淋洗，淋洗流速為230L/h，淋洗液為三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合體積比為100:6:1，用高效液相色譜法檢測洗脫流分中的紫杉醇，當(dāng)檢測到紫杉醇流分時(shí)，收集含有紫杉醇的淋洗流分，將含有紫杉醇的淋洗流分減壓至950Pa進(jìn)行減壓濃縮，將濃縮物放入烘箱，烘干，烘箱溫度為103°C，得到紫杉醇半成品；將半成品用其8倍重量的異丙醇溶解，邊攪拌邊加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置18h，過濾，放入烘箱烘干，烘箱溫度為108°C，即得到高純度的紫杉醇。
[0012]經(jīng)檢測，所提取的紫杉醇含量達(dá)90%。
[0013]取5kg云南紅豆杉樹根，放入粉碎機(jī)中粉碎成2cm的碎片，加入濃度為80%的異丙醇溶液，浸泡20h ;將上述浸泡液過濾，讓得到的濾液通過活性炭柱，進(jìn)行脫色，得到脫色液，再用二氯甲烷對脫色液進(jìn)行萃取，常壓升溫回收溶劑后得到萃取物；按乙醇和石油醚體積比為1:3配制混合液，再將萃取物與混合液體積比為1:0.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，放入高壓脫脂罐，溶劑脫脂處理5h，脫脂溫度為80°C，壓力為0.5MPa，脫脂完成后冷卻至室溫，排出脫脂廢液，排完廢液后，通入130°C的過熱蒸汽，處理2h，然后冷卻至室溫卸壓取出，過濾，放入烘箱中，烘干，烘箱溫度為110°C，得到紫杉醇粗品；將粗紫杉醇與其20倍的硅膠進(jìn)行攪拌，裝柱，進(jìn)行梯度淋洗，淋洗流速為250L/h，淋洗液為三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合體積比為100: 7: 2，用高效液相色譜法檢測洗脫流分中的紫杉醇，當(dāng)檢測到紫杉醇流分時(shí)，收集含有紫杉醇的淋洗流分，將含有紫杉醇的淋洗流分減壓至100Pa進(jìn)行減壓濃縮，將濃縮物放入烘箱，烘干，烘箱溫度為105°C，得到紫杉醇半成品；將半成品用其10倍重量的異丙醇溶解，邊攪拌邊加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置20h，過濾，放入烘箱烘干，烘箱溫度為110°C，即得到高純度的紫杉醇。
[0014]經(jīng)檢測，所提取的紫杉醇含量達(dá)88%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從紅豆杉樹根中提取紫杉醇的方法，其特征在于具體制備步驟為: (1)取I?5kg紅豆杉樹根，放入粉碎機(jī)中粉碎成I?2cm的碎片，加入濃度為70?80%的異丙醇溶液，放入發(fā)酵罐中，設(shè)置溫度為28?38°C，密封發(fā)酵24?36h ; (2)將上述發(fā)酵液過濾，讓得到的濾液通過活性炭柱，進(jìn)行脫色，得到脫色液，再用二氯甲烷對脫色液進(jìn)行萃取，常壓升溫回收溶劑后得到萃取物； (3)按乙醇和石油醚體積比為1:1?1:3配制混合液，再將萃取物與混合液體積比為1:0.1?1:0.5進(jìn)行混合并攪拌均勻，放入高壓脫脂罐，溶劑脫脂處理2?5h，脫脂溫度為50?80°C，壓力為0.1?0.5MPa，脫脂完成后冷卻至室溫，排出脫脂廢液，排完廢液后，通入120?130°C的過熱蒸汽，處理I?2h，然后冷卻至室溫卸壓取出，過濾，放入烘箱中，烘干，烘箱溫度為105?110°C，得到紫杉醇粗品； (4)將紫杉醇粗品與其10?20倍的硅膠進(jìn)行攪拌，裝柱，進(jìn)行梯度淋洗，淋洗流速為200?250L/h，淋洗液為三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合體積比為100:5:2，用色譜分離法分離紫杉醇，其保留時(shí)間為14min，在流動(dòng)相流出13?15min內(nèi)收集紫杉醇，將收集到的紫杉醇減壓至900?100Pa進(jìn)行減壓濃縮，將濃縮物放入烘箱，烘干，烘箱溫度為100?105°C，得到紫杉醇半成品； (5)將半成品用其5?10倍重量的異丙醇溶解，邊攪拌邊加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置15?20h，過濾，放入烘箱烘干，烘箱溫度為105?110°C，即得到純度80%以上的的紫杉醇。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從云南紅豆杉樹根中提取紫杉醇的方法，屬于精煉加工領(lǐng)域。該方法以云南紅豆杉樹根為原料，打碎后用有機(jī)溶劑溶解，萃取并脫脂，再進(jìn)行梯度淋洗，將含有紫杉醇的淋洗液濃縮干燥，再次提純，得到高純度的紫杉醇。紫杉醇提取純化率增高，降低了提純成本，紫杉醇根可以再生，獲取原料更加豐富，操作容易、分離徹底、能直接達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)。
【IPC分類】C07D305/14
【公開號】CN105153076
【申請?zhí)枴緾N201510492051
【發(fā)明人】雷春生, 林大偉
【申請人】江蘇振宇環(huán)?？萍加邢薰?br>【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年8月12日