一種黃麻炭疽病抗性鑒定的方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物抗病性鑒定技術(shù)領域，具體涉及一種黃麻炭疽病抗性鑒定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃麻(Jute)為椴樹科(Tiliaceae)黃麻屬(CorcAoriA?) —年生植物，是世界上僅次于棉花的第二大纖維作物，廣泛栽培于印度、孟加拉、中國、泰國等國家。近年來，其作為優(yōu)良的造紙、紡織及生物燃料原料而備受關注。同時黃麻纖維具有散熱性好、吸濕性強、易降解、產(chǎn)量高等優(yōu)良特性，因此引起了世界各國的重視。
[0003]隨著研究的不斷深入，黃麻越來越多的用途被開發(fā)出來，為了滿足人們對于天然纖維需求的增長，黃麻的種植面積也在逐漸遞增，但是由于自然與人為等因素使得黃麻病蟲害逐漸加重，這就大大降低了黃麻的產(chǎn)量與纖維品質(zhì)。在我國，黃麻病害主要有黃麻炭疽病、黃麻根結(jié)線蟲病(/feferoofera ifar1wi)、黃麻立枯病Corchorf)等。而黃麻炭疽病是影響黃麻生產(chǎn)的主要病害，它在全國均有發(fā)生，尤其在溫暖濕潤的地區(qū)發(fā)病尤為嚴重。通過對其病情調(diào)查發(fā)現(xiàn)，黃麻在苗期與成株時期均可遭到炭疽菌的危害，該病可以危害到黃麻幼苗、莖桿、葉片、果實等各個生長部位，進而直接影響到黃麻的產(chǎn)量與品質(zhì)，成為國內(nèi)外黃麻生產(chǎn)和利用上的一大瓶頸。通過對黃麻種質(zhì)資源進行炭疽病抗性鑒定，選育出高抗病性材料或品種，可提高黃麻育種水平，促進黃麻生產(chǎn)的發(fā)展，其具有重要的理論和實踐意義。
[0004]中國發(fā)明專利(CN 103399143A)公開了一種快速鑒定煙草炭疽病抗性的方法，其利用炭疽菌毒素直接浸泡葉圓片，通過測量和統(tǒng)計病斑擴展程度，衡量材料抗性，達到了簡單、高通量、快速準確的鑒定煙草種質(zhì)對炭疽病抗性的目的。中國發(fā)明專利(CN103667427A)公開了一種用于鑒定草莓種質(zhì)資源炭疽病抗性的引物序列及其鑒定方法，該方法以250份材料的基因組DNA為模板，通過對覆蓋全基因組的146對SSR引物和64對AFLP引物進行PCR擴增并結(jié)合PAGE膠電泳分析，建立了草莓炭疽病抗性的特異遺傳圖譜，成功獲得10對特異性高、在雜交后代顯性強的SSR引物。應用該發(fā)明方法獲得的引物序列進行草莓種質(zhì)資源炭疽病抗性的鑒定，其鑒定結(jié)果與田間抗病吻合率達88.4%ο中國發(fā)明專利(CN 1858248A)公開了一種用于鑒定黃瓜炭疽病抗性的引物序列及其鑒定方法，它的步驟是:提取黃瓜基因組DNA ;用序列表中所述的核苷酸序列進行PCR擴增；PCR擴增產(chǎn)物的凝膠電泳分析；依據(jù)各被鑒定樣品在凝膠上條帶的相對位置，鑒定黃瓜炭疽病的抗性，該發(fā)明鑒定結(jié)果與田間抗病吻合率達97.27%。但目前國內(nèi)外均未見涉及黃麻炭疽病抗性鑒定方法的報道和專利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種黃麻炭疽病抗性鑒定的方法，該方法操作簡便、成本低廉、可靠性高、周期短，可用于對雜交親本材料及所選育和推廣的黃麻品種進行炭疽病抗性鑒定，大大降低或避免黃麻炭疽病的危害，對黃麻抗病新品種的選育、推廣及綜合利用具有重要意義。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種黃麻炭疽病抗性鑒定的方法，包括菌株培養(yǎng)、傷口形成、菌絲接種、套袋保濕、病斑測量的步驟，其具體操作如下:
O菌株培養(yǎng):采用組織分離法獲得黃麻炭疽菌菌株，于PSA (馬鈴薯蔗糖瓊脂)培養(yǎng)基上培養(yǎng)并純化；
2)形成傷口:于上午6-8時，將長至40-50cm高的黃麻植株，用刀片將上部3_4片葉片于葉柄基部切下，形成整齊的傷口 ；
3)菌絲接種:用孔徑為5mm的打孔器在培養(yǎng)并純化好的黃麻炭疽菌菌株上切取菌塊，用接種針挑取菌塊，使其菌絲直接接觸黃麻植株上的傷口，并將菌塊按壓于傷口處進行接種，用錫箔紙纏繞包裹；
4)套袋保濕:向接種后的部位噴水，用保鮮袋將其套住，若袋內(nèi)無水珠、水汽時，則繼續(xù)向其內(nèi)噴水保濕；
5)病斑測量:套袋2-3天后去除保鮮袋，繼續(xù)侵染15天后測量黃麻植株上病斑的大小，根據(jù)病斑面積確定黃麻植株抗性的強弱。
[0007]黃麻炭疽病抗性鑒定的常用方法有針刺接種法、健株孢子噴霧法。與現(xiàn)有方法相比，本發(fā)明所提供的方法具有以下顯著優(yōu)點:(I)在人工控制的穩(wěn)定條件下進行，其發(fā)病條件一致；(2)將葉片從葉柄基部切下，形成的侵染傷口面積大，利于炭疽菌的侵染；(3)用打孔器將菌株整塊取下，并將菌絲按壓于傷口處，使得菌株與入侵傷口直接接觸，更有利于炭疽菌的快速侵染；(4)用錫箔紙將菌絲接種后的傷口固定，并套袋進行噴水保濕，給炭疽菌的侵染創(chuàng)造了更加合適的條件；(5)按照本發(fā)明方法可實現(xiàn)同一待測材料同時鑒定不同病原菌的抗性，且不影響黃麻正常生長發(fā)育和開花結(jié)實；(6)本發(fā)明操作過程簡單、鑒定周期短、接種效率高、準確率高，可達到簡單、高通量、快速準確地鑒定黃麻種質(zhì)對炭疽病抗性的目的，是黃麻炭疽病抗性鑒定和評價的優(yōu)良方法。
【具體實施方式】
[0008]為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的技術(shù)方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0009]實施例1
一種黃麻炭疽病抗性鑒定的方法，其具體操作如下:
O菌株培養(yǎng):采用組織分離法獲得黃麻炭疽菌菌株，于PSA (馬鈴薯蔗糖瓊脂)培養(yǎng)基上培養(yǎng)并純化；
2)形成傷口:于上午6時，將長至40cm高的黃麻植株，用刀片將上部3片葉片于葉柄基部切下，形成整齊的傷口 ；
3)菌絲接種:用孔徑為5mm的打孔器在培養(yǎng)并純化好的黃麻炭疽菌菌株上切取菌塊，用接種針挑取菌塊，使其菌絲直接接觸黃麻植株上的傷口，并將菌塊按壓于傷口處進行接種，用錫箔紙纏繞包裹；
4)套袋保濕:用噴壺向接種后的部位噴水，用保鮮袋將其套住，若袋內(nèi)無水珠、水汽時，則用噴壺繼續(xù)向其內(nèi)噴水保濕；
5)病斑測量:套袋3天后去除保鮮袋，繼續(xù)侵染15天后測量黃麻植株上病斑的大小，根據(jù)黃麻炭疽病病情分級標準，按病斑面積進行病情分級，即按病斑大小(mm2)為0-8、8.1-16.0、16.1-24.0、24.1-32.0、32.1-40.0，依次分為 0、1、2、3 和 4 級；
6)抗性評價:根據(jù)病情分級計算黃麻炭疽病病情指數(shù)，并