一種從桑葉中提取分離及純化多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物提取活性成分的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從桑葉中提取分離及純化多糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]桑為?？粕僦参铮钤缬涗浻凇对娊?jīng)》中，又名鐵扇子。桑樹在我國的歷史非常悠久，自遠祖人類出現(xiàn)養(yǎng)蠶以來，就存在桑樹的栽培。桑葉擁有降血糖、降血脂及抗病毒等藥理活性作用，為國家衛(wèi)生部公布的藥食兩用產(chǎn)品，入藥最早記錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》。桑葉中具有藥理活性的成分主要是多糖、生物堿和黃酮。21世紀(jì)以來，糖尿病、癌癥等疾病對人類產(chǎn)生巨大威脅，科學(xué)家針對桑葉降血糖、降血脂、抗病毒等生物活性進行了深入研究，對其有效成分和作用機理都已有一定的研究進展。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于桑葉多糖提取的方法較多，但現(xiàn)有技術(shù)的方法在桑葉多糖提取后，對桑葉進行測定優(yōu)化以獲得最優(yōu)提取工藝條件的方法較少，造成所提取的多糖純度不尚O

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，該方法能得到高純度多糖，且工藝簡單易操作，產(chǎn)品得率高，安全并綠色環(huán)保，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]—種從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，所述方法包括:
[0006]步驟1:在料液比為1:5?1:20，超聲功率為150?500W，超聲時間為10?10min以及超聲溫度為35?85°C的條件下，用去離子水對桑葉進行多次回流提??；
[0007]步驟2:收集合并多次回流提取得到的提取液，并將該提取液過濾后得到濾液，將所述濾液減壓濃縮至1/5?1/4體積，得到多糖濃縮液；
[0008]步驟3:在所述多糖濃縮液中加入I?6倍體積的75%?95%的乙醇，醇沉多糖，并靜置12h，過濾得到沉淀物；
[0009]步驟4:將所述沉淀物進行真空干燥，得到多糖粗產(chǎn)品；
[0010]步驟5:采用蒽酮-硫酸法測定所述多糖粗產(chǎn)品在620nm處的吸光度，并以多糖提取量為考察指標(biāo)，設(shè)定得到的多糖粗產(chǎn)品中多糖的含量在15mg/g以上；
[0011]步驟6:根據(jù)測定結(jié)果，采用響應(yīng)面分析優(yōu)化得到所述桑葉的最佳提取工藝條件；
[0012]步驟7:在所述多糖粗產(chǎn)品中加入質(zhì)量濃度為1%?10%的三氯乙酸溶液，調(diào)整pH值為2.0?6.0，并靜置過夜，以1000?4000r/min的速率離心分離5?30min，棄去沉淀，除去蛋白質(zhì)后，得到多糖上清液；
[0013]步驟8:對所述多糖上清液利用大孔樹脂法進行純化，除去色素，經(jīng)干燥后得到桑葉多糖產(chǎn)品。
[0014]由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，該方法能得到高純度多糖，且工藝簡單易操作，產(chǎn)品得率高，安全并綠色環(huán)保，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0015]為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。
[0016]圖1為本發(fā)明實施例所提供從桑葉中提取分離及純化多糖的方法流程示意圖。
【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0018]下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明實施例作進一步地詳細描述，如圖1所示為本發(fā)明實施例所提供從桑葉中提取分離及純化多糖的方法流程示意圖，所述方法包括:
[0019]步驟1:在料液比為1:5?1:20，超聲功率為150?500W，超聲時間為10?10min以及超聲溫度為35?85°C的條件下，用去離子水對桑葉進行多次回流提??；
[0020]步驟2:收集合并多次回流提取得到的提取液，并將該提取液過濾后得到濾液，將所述濾液減壓濃縮至1/5?1/4體積，得到多糖濃縮液；
[0021 ] 步驟3:在所述多糖濃縮液中加入I?6倍體積的75%?95%的乙醇，醇沉多糖，并靜置12h，過濾得到沉淀物；
[0022]在該步驟中，優(yōu)選的可加入4倍體積的乙醇進行醇沉多糖，且所述乙醇的濃度優(yōu)選為95%。
[0023]步驟4:將所述沉淀物進行真空干燥，得到多糖粗產(chǎn)品；
[0024]步驟5:采用蒽酮-硫酸法測定所述多糖粗產(chǎn)品在620nm處的吸光度，并以多糖提取量(mg/g)為考察指標(biāo)，設(shè)定得到的多糖粗產(chǎn)品中多糖的含量在15mg/g以上；
[0025]步驟6:根據(jù)測定結(jié)果，采用響應(yīng)面分析優(yōu)化得到所述桑葉的最佳提取工藝條件；
[0026]具體實現(xiàn)中，最佳提取工藝條件可以為料液比1:15.86，超聲功率為484.5W，超聲時間為58.2min以及超聲溫度為65°C，在此條件下多糖提取率為22.76mg/g。
[0027]步驟7:在所述多糖粗產(chǎn)品中加入質(zhì)量濃度為1%?10%的三氯乙酸溶液，調(diào)整pH值為2.0?6.0，并靜置過夜，以1000?4000r/min的速率離心分離5?30min，棄去沉淀，除去蛋白質(zhì)后，得到多糖上清液；
[0028]在該步驟中，所加入的三氯乙酸溶液的質(zhì)量濃度優(yōu)選為5%。
[0029]進一步的，調(diào)整pH值優(yōu)選為4.0 ;且離心分離的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為3000r/min。
[0030]步驟8:對所述多糖上清液利用大孔樹脂法進行純化，除去色素，經(jīng)干燥后得到桑葉多糖產(chǎn)品。
[0031]在該步驟中，純化所用的大孔樹脂為D152型樹脂。
[0032]下面結(jié)合具體實施對本發(fā)明所述方法進行詳細說明，但本發(fā)明方法不限于這些實施例:
[0033]實施例1、稱取桑葉粉末100g，用4倍體積的95%乙醇浸泡過夜，加入適量去離子水，50°C下80%乙醇冷凝回流提取4小時，抽濾，棄掉濾液，收集濾渣置于空氣中自然干燥，備用;
[0034]將預(yù)處理的桑葉置于超聲反應(yīng)器中，以去離子水為提取溶劑，在液料比為16:1，超聲溫度為55°C，超聲時間為80min，超聲功率為450W的條件下回流提取兩次；
[0035]合并提取液并進行減壓濃縮，多糖濃縮液中加入5 %的三氯乙酸溶液，調(diào)整pH為4.0，以3000r/min的速率離心分離20min，棄去沉淀，除去蛋白質(zhì)，得到多糖上清液；
[0036]上清液經(jīng)大孔樹脂法對其進行純化，除去色素，經(jīng)干燥得到桑葉多糖產(chǎn)品。
[0037]該多糖產(chǎn)品用蒽酮-硫酸法測定620nm處吸光度，得到的多糖含量為17.48mg/g。
[0038]實施例2、稱取桑葉粉末100g，用4倍體積的95%乙醇浸泡過夜，加入適量去離子水，50°C下80%乙醇冷凝回流提取4小時，抽濾，棄掉濾液，收集濾渣置于空氣中自然干燥，備用;
[0039]將預(yù)處理的桑葉置于超聲反應(yīng)器中，以去離子水為提取溶劑，在液料比為16:1，超聲溫度為55°C，超聲時間為60min，超聲功率為500W的條件下回流提取兩次；
[0040]合并提取液并進行減壓濃縮，多糖濃縮液中加入5 %的三氯乙酸溶液，調(diào)整pH為4.0，以3000r/min的速率離心分離20min，棄去沉淀，除去蛋白質(zhì)，得到多糖上清液；
[0041]上清液經(jīng)大孔樹脂法對其進行純化，除去色素，經(jīng)干燥得到桑葉多糖產(chǎn)品。
[0042]該多糖產(chǎn)品用蒽酮-硫酸法測定620nm處吸光度，得到的多糖含量為20.13mg/g。
[0043]實施例3、稱取桑葉粉末100g，用4倍體積的95%乙醇浸泡過夜，加入適量去離子水，50°C下80%乙醇冷凝回流提取4小時，抽濾，棄掉濾液，收集濾渣置于空氣中自然干燥，備用;
[0044]將預(yù)處理的桑葉置于超聲反應(yīng)器中，以去離子水為提取溶劑，在液料比為14:1，超聲溫度為65°C，超聲時間為60min，超聲功率為500W的條件下回流提取兩次；
[0045]合并提取液并進行減壓濃縮，多糖濃縮液中加入5 %的三氯乙酸溶液，調(diào)整pH為4.0，以3000r/min的速率離心分離20min，棄去沉淀，除去蛋白質(zhì)，得到多糖上清液；
[0046]上清液經(jīng)大孔樹脂法對其進行純化，除去色素，經(jīng)干燥得到桑葉多糖產(chǎn)品。
[0047]該多糖產(chǎn)品用蒽酮-硫酸法測定620nm處吸光度，得到的多糖含量為21.05mg/g。
[0048]綜上所述，本發(fā)明實施例所提供的方法具有如下優(yōu)點:
[0049]I)對超聲溫度、超聲時間、料液比、超聲功率等因素進行了響應(yīng)面優(yōu)化組合分析，實驗多糖提取率的最大化；
[0050]2)在多糖粗提液純化過程中所用的大孔樹脂可活化再生，生產(chǎn)成本低，本發(fā)明工藝簡單，綠色、無毒且環(huán)保，適于工業(yè)化推廣。
[0051]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護范圍為準(zhǔn)。
【主權(quán)項】
1.一種從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，其特征在于，所述方法包括: 步驟1:在料液比為1:5?1:20，超聲功率為150?500W，超聲時間為10?10min以及超聲溫度為35?85°C的條件下，用去離子水對桑葉進行多次回流提?。? 步驟2:收集合并多次回流提取得到的提取液，并將該提取液過濾后得到濾液，將所述濾液減壓濃縮至1/5?1/4體積，得到多糖濃縮液； 步驟3:在所述多糖濃縮液中加入I?6倍體積的75%?95%的乙醇，醇沉多糖，并靜置12h，過濾得到沉淀物； 步驟4:將所述沉淀物進行真空干燥，得到多糖粗產(chǎn)品； 步驟5:采用蒽酮-硫酸法測定所述多糖粗產(chǎn)品在620nm處的吸光度，并以多糖提取量為考察指標(biāo)，設(shè)定得到的多糖粗產(chǎn)品中多糖的含量在15mg/g以上； 步驟6:根據(jù)測定結(jié)果，采用響應(yīng)面分析優(yōu)化得到所述桑葉的最佳提取工藝條件； 步驟7:在所述多糖粗產(chǎn)品中加入質(zhì)量濃度為1%?10%的三氯乙酸溶液，調(diào)整pH值為2.0?6.0，并靜置過夜，以1000?4000r/min的速率離心分離5?30min，棄去沉淀，除去蛋白質(zhì)后，得到多糖上清液； 步驟8:對所述多糖上清液利用大孔樹脂法進行純化，除去色素，經(jīng)干燥后得到桑葉多糖產(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，其特征在于， 在所述步驟3中，優(yōu)選的加入4倍體積的乙醇進行醇沉多糖，且所述乙醇的濃度優(yōu)選為95%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，其特征在于，在所述步驟7中: 所加入的三氯乙酸溶液的質(zhì)量濃度優(yōu)選為5% ; 調(diào)整pH值優(yōu)選為4.0 ； 離心分離的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為3000r/min。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，其特征在于， 在所述步驟8中，純化所用的大孔樹脂為D152型樹脂。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從桑葉中提取分離及純化多糖的方法，所述方法采用超聲輔助法提取桑葉多糖，提取液濃縮后進行醇沉，將沉淀真空干燥得到桑葉粗多糖，采用蒽酮-硫酸法測定多糖含量，經(jīng)測定產(chǎn)品中多糖的含量在15mg/g以上；通過響應(yīng)面優(yōu)化分析得到桑葉多糖的最佳提取工藝條件，桑葉多糖粗提液經(jīng)三氯乙酸法除蛋白，并用大孔樹脂法對多糖進行分離純化，干燥得到桑葉多糖產(chǎn)品。該方法能得到高純度多糖，且工藝簡單易操作，產(chǎn)品得率高，安全并綠色環(huán)保，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】C08B37/00
【公開號】CN105085700
【申請?zhí)枴緾N201510527164
【發(fā)明人】李翠清, 陰新負, 彭曉明, 王騰
【申請人】北京石油化工學(xué)院
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年8月25日