鑒定生物標(biāo)記物、治療靶點(diǎn)或治療試劑的高通量篩選方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種利用包括候選分子、示蹤物和對所述分子具有特異性的唯一DNA 標(biāo)簽的納米顆粒篩選感興趣的分子的方法。本發(fā)明還涉及一種利用所述納米顆粒篩選疾病 和/或表型性狀，更具體是癌癥或感染的疾病標(biāo)記物的方法。本發(fā)明最后涉及這樣的納米 顆粒，以及所述納米顆粒的庫。
【背景技術(shù)】
[0002] 反向遺傳工程（reversegeneticengineering)試圖通過分析給定基因突變的表 型結(jié)果來確定該基因的功能。該途徑與傳統(tǒng)途徑"相對"（相反），其中傳統(tǒng)途徑試圖鑒定 造成給定表型突變體的基因。因此，反向遺傳篩選已經(jīng)例如允許鑒定酵母中的細(xì)胞周期的 關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子（Hartwelletal.，1974,Science, 183:46-51)，或果繩中的多細(xì)胞生物體的 發(fā)育機(jī)制的基本原理（NussleinvolhardetWieschaus, 1980,Nature, 287:795-801)。
[0003] 反向遺傳篩選可以基于功能獲得（利用表達(dá)載體、微小RNA(microRNA)類似物等 等進(jìn)行基因的過表達(dá)），或基于由蛋白的化學(xué)抑制劑或干擾RNA(iRNA)導(dǎo)致的功能喪失。化 學(xué)篩選（有時(shí)被命名為化學(xué)基因組（chemogenome)途徑）已經(jīng)允許經(jīng)由蛋白抑制來發(fā)現(xiàn)現(xiàn) 今在臨床試驗(yàn)中測試的或者甚至已經(jīng)在市場上作為藥物存在的很多分子。
[0004]RNA干擾（iRNA)是在進(jìn)化過程中保留下來的天然過程，根據(jù)RNA干擾，將雙鏈RNA 引入細(xì)胞中導(dǎo)致mRNA同源序列的特定的降解（Fireetal.，1998,Nature391:806-811)。 而且，微小RNA(miRNA)是存在于基因組中的小的內(nèi)源性非編碼RNA，它特異性調(diào)節(jié)少數(shù)靶 基因的表達(dá)。存在很多其它參與基因表達(dá)調(diào)節(jié)的小的非編碼RNA(piRNA、natsiRNA等）。
[0005] 總而言之，應(yīng)牢記，通過化學(xué)抑制劑特異性抑制蛋白，基因的"功能喪失"性突變， 或通過內(nèi)源性iRNA(miRNA)或外源性RNA(siRNA)阻抑蛋白表達(dá)是功能等效的。
[0006] 因此，iRNA特別為傳統(tǒng)遺傳學(xué)在其中難以進(jìn)行的生物體（如人類體 內(nèi)）提供了極其強(qiáng)大的反向遺傳方法。從人類基因組的序列開發(fā)出靶向全部基 因的iRNA集合，允許對人類細(xì)胞系或者甚至對人類原代細(xì)胞進(jìn)行反向遺傳篩選 (BoutrosandAhringer, 2008,NatureReviewsGenetics9:554-566)〇 最近的幾 項(xiàng)研究已經(jīng)示出了大規(guī)模iRNA篩選在用于表征特定基因與患者對治療的個(gè)體響應(yīng) 的臨床相關(guān)性中的能力。進(jìn)一步地，隨著最近對諸如"鎖核酸（LNA)"修飾的寡核苷 酸（Orometal.，2006,Gene, 372:137-141)、抗miRNA的寡核苷酸（AMO)(Weileret al.，2〇〇6,GeneTherapy,I3:4%-5。2)和"安塔勾妙（antagomirs)"（Krutzfeldtet al.，2005,Nature, 438:685-689)等的miRNA抑制劑的開發(fā)，還可以基于miRNA的功能喪失 進(jìn)行遺傳篩選。此外，miRNA、piRNA等的類似物的開發(fā)還允許使用這些分子進(jìn)行功能獲得， 來進(jìn)行功能性高通量篩選。
[0007] 迄今，很大一部分的高通量細(xì)胞篩選使用96孔或384孔的微量滴定板或芯片，其 中使用自動(dòng)化顯微鏡或分光光度計(jì)（UV、可見光、IR)讀板器讀出（捕獲）該96孔或384孔 的微量滴定板或芯片。
[0008] 但是，這種板或芯片途徑有很多限制。首先，如芯片的板需要對候選分子（化學(xué)試 劑或核酸的集合）進(jìn)行初級排序，這將在篩選和追蹤該排序以在所研究的表型的來源處再 次發(fā)現(xiàn)這些分子的過程中使用。第二，在懸浮細(xì)胞（如血細(xì)胞）、3D培養(yǎng)細(xì)胞、混合細(xì)胞群、 共培養(yǎng)的細(xì)胞或需要營養(yǎng)層（滋養(yǎng)層）的細(xì)胞上難以進(jìn)行這些篩選。第三，難以追蹤已經(jīng) 并入了候選分子的細(xì)胞，因?yàn)樾枰跫墭?biāo)記這些化學(xué)或遺傳分子中的每一個(gè)，這種標(biāo)記可 能改變它們的功效。第四，這些方式在算法水平，以及儲(chǔ)存和保存數(shù)據(jù)時(shí)都需要復(fù)雜的圖像 分析方法。第五，分析之后重獲細(xì)胞非常困難或甚至是不可能的。第六，并且作為前述限制 的必然結(jié)果，板或芯片中可用的培養(yǎng)表面積限制了研究的表型（不超過72h)。在不能重獲 細(xì)胞并將它們轉(zhuǎn)移至另一培養(yǎng)形式中的情況下，不可能對需要更長時(shí)間的表型（諸如例如 特定細(xì)胞系中的分化）進(jìn)行分析。
[0009] 為了回應(yīng)這些限制中的少數(shù)幾個(gè)，提出了由病毒載體攜帶的核條形碼系統(tǒng) (nucleicbarcodesystem)的應(yīng)用，該應(yīng)用用于在使用專用的DNA芯片下游鑒定造成所研 究的表型的核酸（Bernsetal.，2004,Nature, 428:431-7)。從那時(shí)起，已經(jīng)提出了該觀念 的幾項(xiàng)開發(fā)（Verzijlbergenetal.，2011，PLoSGenet，10:el002284)。但是，這種途徑自 身也具有幾種限制。首先，它不能被考慮用于化學(xué)分子。第二，通過細(xì)胞機(jī)構(gòu)轉(zhuǎn)錄和加工干 擾RNA的開發(fā)，它不能使用不是由細(xì)胞加工的其它類型的核酸（如LNA或miRNA的類似物、 piRNA的類似物等）運(yùn)行。第三，它基于病毒的使用，因此需要至少L2型和理想地L3型的 實(shí)驗(yàn)室操作。第四，使用經(jīng)條碼（即DNA標(biāo)簽）修飾的序列具有干預(yù)干擾RNA加工的風(fēng)險(xiǎn)， 并且不確定iRNA的加工和消光效率受到這些病毒構(gòu)建體系統(tǒng)性保護(hù)。第五，病毒感染自身 可能誘導(dǎo)獨(dú)立于候選分子的表型改變。
[0010] 因此，需要開發(fā)可以克服這些限制的篩選方法。
[0011] 因此，發(fā)明人開發(fā)了一種無需候選分子初級排序（preliminaryordering)的途 徑，該途徑基于納米顆粒的使用，與在單個(gè)細(xì)胞水平上讀出表型并且與感興趣的細(xì)胞的非 常高通量分選相關(guān)聯(lián)，該納米顆?？梢栽诩?xì)胞內(nèi)同時(shí)"遞送"候選分子，允許特異性追蹤已 經(jīng)并入了的候選分子的細(xì)胞的示蹤物，及允許在讀出表型之后通過唯一DNA標(biāo)簽的去卷積 后驗(yàn)（posteriori)鑒定出候選分子的對候選分子具有特異性的唯一DNA標(biāo)簽。納米顆粒 同時(shí)遞送候選分子、示蹤物和DNA標(biāo)簽的能力尤其應(yīng)歸功于納米顆粒的大?。ㄐ∮?微米， 優(yōu)選小于200nm)和電荷（優(yōu)選正電荷），這給予納米顆粒進(jìn)入細(xì)胞的顯著穿透效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 為了這一目的，根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供了一種篩選感興趣的分子的方法，該方 法包括以下步驟：
[0013]a)在允許細(xì)胞整合至少一個(gè)納米顆粒的條件下，使所述細(xì)胞與所述納米顆粒的庫 接觸，每一個(gè)納米顆粒都包括候選分子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA 標(biāo)簽，
[0014]b)選擇已經(jīng)整合了所述示蹤物并且具有感興趣的表型的細(xì)胞，
[0015]c)通過鑒定所述唯一DNA標(biāo)簽的序列，鑒定作為感興趣的分子的候選分子，該候 選分子已經(jīng)被整合到在步驟b)選擇的細(xì)胞中。
[0016] 本發(fā)明還涉及一種篩選疾病或表型性狀的生物標(biāo)記物的方法，該方法包括以下步 驟：
[0017]a)在允許細(xì)胞整合至少一個(gè)納米顆粒的條件下，使所述細(xì)胞與所述納米顆粒的庫 接觸，每一個(gè)納米顆粒都包括候選分子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA 標(biāo)簽，
[0018]b)選擇已經(jīng)整合了所述示蹤物并且具有感興趣的表型的細(xì)胞，
[0019]c)通過鑒定所述唯一DNA標(biāo)簽的序列，鑒定已經(jīng)被整合到在步驟b)選擇的細(xì)胞中 的候選分子，
[0020]d)鑒定作為疾病和/或表型特征的生物標(biāo)記物的，在步驟c)鑒定的所述分子的靶 點(diǎn)。
[0021] 可選地，所述篩選感興趣的分子的方法，或篩選疾病或表型特征的生物標(biāo)記物的 方法，在步驟a)之前包括用于制備納米顆粒庫的步驟a0)，每一個(gè)納米顆粒都包括候選分 子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA標(biāo)簽。
[0022] 本發(fā)明還涉及包括候選分子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA標(biāo) 簽的納米顆粒在篩選感興趣的分子，和/或疾病和/或表型的生物標(biāo)記物中的應(yīng)用。
[0023] 根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明涉及一種納米顆粒，包括候選分子、示蹤物和對所述候選分 子具有特異性的唯一DNA標(biāo)簽。
[0024] 本發(fā)明還涉及一種納米顆粒庫，每一個(gè)所述納米顆粒都包括候選分子、示蹤物和 對所述候選分子具有特異性的唯一DNA標(biāo)簽。
[0025] 包括候選分子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA標(biāo)簽的納米顆粒
[0026] 本發(fā)明涉及一種包括候選分子、示蹤物和對所述候選分子具有特異性的唯一DNA 標(biāo)簽的納米顆粒。
[0027] 納米顆粒可以是中性、陰離子或陽離子納米顆粒。優(yōu)選地，所述納米顆粒是陽離 子納米顆粒。納米顆粒尤其是合成的納米顆粒。與應(yīng)用微生物或病毒的操作相比，使用合 成的納米顆?？梢赃M(jìn)行限制性不是非常高的操作。在特定實(shí)施方式中，所述納米顆粒是無 機(jī)納米顆粒，諸如例如金納米顆粒、磁性納米顆粒（氧化鐵納米顆粒）或半導(dǎo)體材料的納米 晶體（"量子點(diǎn)"）。在特定實(shí)施方式中，所述納米顆粒是有機(jī)納米顆粒，諸如例如陽離子載 體?？梢栽诒景l(fā)明中使用的納米顆粒的實(shí)例尤其描述在Morilleetal.，2008，Biomateri als, 29:3477-3496,Bruno, 2011,AdvancedDrugDeliveryReviews, 63:1210-1226,Zhang etal. , 2012,BioorganicChemistry, 40:10-18中。在特定實(shí)施方式中，所述納米顆粒是混 雜納米顆粒，即包含由聚合物層覆蓋的無機(jī)核的納米顆粒。
[0028] 在一種實(shí)施方式中，所述陽離子載體由至少一種聚合物配制。聚合物的實(shí)例是 聚乙烯亞胺（PEI)，聚（L-賴氨酸）（PLL)，聚（a- [4-氨基-丁基]-L-乙醇酸），殼聚糖， 諸如半乳糖基化殼聚糖、半乳糖基化殼聚糖-接枝-聚（乙烯吡咯烷酮）（PVP)、三甲基殼 聚糖低聚物、N-十二烷基殼聚糖、經(jīng)修飾的殼聚糖脫氧膽酸，聚酰胺-胺（PAMAM)，聚（乳 酸）（PLA)，聚（乳酸-共-乙醇酸）（PLGA)，聚氰基丙烯酸烷酯（PACA)，氰基丙烯酸鹽衍 生物，諸如聚氰基丙烯酸丁酯（PBCA)、聚氰基丙烯酸異丁酯（PIBCA)、聚氰基丙烯酸異己酯 (PIHCA)、聚氰基丙烯酸己酯（PHCA)或氰基丙烯酸異丁酯（IBCA)?？蛇x地，所述載體可以進(jìn) 一步包括至少一種聚乙二醇（PEG)。
[0029] 在一種實(shí)施方式中，所述陽離子載體是陽離子脂質(zhì)載體，即能夠經(jīng)由靜電效應(yīng)與 帶負(fù)電荷的候選分子相互作用的脂質(zhì)性質(zhì)的陽離子或多聚陽離子衍生物。優(yōu)選地，所述陽 離子脂質(zhì)載體是脂質(zhì)體，或以包括連續(xù)的水相和至少一種分散相的納米乳劑形式的制劑微 滴。
[0030] 優(yōu)選地，所述脂質(zhì)體包括以下物質(zhì)或由以下物質(zhì)組成：至少一種單價(jià)脂肪族 月旨、多價(jià)脂肪族類脂或者膽固醇的陽離子衍生物，其中所述單價(jià)脂肪族脂諸如1，2-二油 酰-3-三甲胺-丙烷（D0TAP)、N[l-(2,3-二油酰氧）丙基]-N，N，N-三甲胺（D0TMA)或 1(2-羥乙基）4，^二甲基-2,3-雙（十四烷氧基-1-丙胺）（01?此）；所述多價(jià)脂肪 族類脂諸如雙十八烷基酰胺基甘氨?；罚―OGS);所述膽固醇的陽離子衍生物，諸如 3 0-[N-(N'，N' -二甲基-氨基乙烷）-氨甲酰]膽固醇（DC-Chol)或雙-胍-tren-膽固 醇（bis-guanidium-tren-cholesterol，BGTC)?？蛇x地，所述脂質(zhì)體可以進(jìn)一步包括可以 通過破壞內(nèi)涵體膜的穩(wěn)定來促使細(xì)胞內(nèi)釋放的膜融合脂質(zhì)（fusogeniclipid)(-種所謂 的輔助脂質(zhì)（helperlipid))，諸如二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE)或膽固醇。所述脂質(zhì)體 可以包括如上所述的至少2、3、4、5種脂質(zhì)。因此作為非限制性的實(shí)例，所述脂質(zhì)體可以是 D0TMA/D0PE或D0TAP/膽固醇脂質(zhì)體?？蛇x地，所述載體可以進(jìn)一步包括至少一種聚乙二醇 (PEG)。進(jìn)一步包括至少一種PEG的脂質(zhì)體的實(shí)例是由N，N-二油酰-N，N-二甲基氯化胺組 成、由DOPE組成和由共輒的神經(jīng)酰胺組成、由PEG組成的脂質(zhì)體，由以摩爾比為2:40:10:48 的3-N-[甲氧基聚（乙二醇）2。。。）氨甲酰基]-1，2-二肉顯蔻酰氧基-丙胺（PEG-C-DMA)、 1，2-二亞油醇氧基-N-N-二甲基-3-氨基丙烷（DLinDMA)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油 基-3-磷酸膽堿（DSPC)和膽固醇組成的脂質(zhì)體，由0-L-精氨酰基-2, 3-L-二氨基丙 酸-N-棕櫚基-N-油基-酰胺三鹽酸鹽、1，2-二植烷酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DphyPE) 和PEG化的N-(羰基甲氧基聚乙二醇-2000)-1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸-乙醇 胺鈉鹽（DSPE-PEG)組成的脂質(zhì)體，由氫化大豆磷脂酰膽堿、DSPE-PEG2000和D0TAP組成的 脂質(zhì)體。
[0031] 優(yōu)選地，包括連續(xù)的水相和至少一種分散相的納米乳劑形式的所述制劑微滴如申 請F(tuán)R12 58115中所限定的。根據(jù)這一實(shí)施方式，包括連續(xù)的水相和至少一種分散相的納 米乳劑形式的所述制劑微滴包括：
[0032]a)至少5%摩爾的兩親性脂質(zhì)，
[0033]b) 15%摩爾至70%摩爾的至少一種陽離子表面活性劑，包括：
[0034]i)至少一種選自以下基團(tuán)的親脂性基團(tuán)：
[0035] 基團(tuán)R或R_(C= 0)-，其中，R代表含11至23個(gè)碳原子的直鏈烴鏈，含12至24 個(gè)碳原子的脂肪酸和磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺，以及聚（環(huán)氧丙烷），以及
[0036] ii)至少一種選自以下基團(tuán)的包括至少一種陽離子基團(tuán)的親水性基團(tuán)：
[0037] 含1至12個(gè)碳原子的、并且經(jīng)至少一種陽離子基團(tuán)間斷和/或取代的直鏈或支鏈 烷基，以及
[0038] 包括至少一種陽離子基團(tuán)的親水性聚合基團(tuán)，以及
[0039]c) 10%摩爾至55%摩爾的包括至少一種聚（環(huán)氧乙烷）鏈的助表面活性劑，該聚 (環(huán)氧乙烷）鏈包括至少25個(gè)乙撐氧單元，
[0040]d)包括至少一種脂肪酸甘油酯的增溶脂質(zhì)，
[0041]e)可選地，膜融合脂質(zhì)，
[0042] 其中，兩親性脂質(zhì)、陽離子表面活性劑和助表面活性劑的摩爾百分比是相對于 (兩親性脂質(zhì)/陽離子表面活性劑/助表面活性劑/可選的膜融合脂質(zhì)）的集合。
[0043] 如下面所解釋的，物質(zhì)：兩親性脂質(zhì)/陽離子表面活性劑/助表面活性劑/可選 的膜融合脂質(zhì)是所述制劑微滴的冠部的主要成分。
[0044] 因此，乳劑是水包油型乳劑。它可以是簡單的，或者尤其通過在分散相中包含第二 水相而是復(fù)合型的。優(yōu)選，它是簡單的。
[0045] 進(jìn)一步地，所述制劑有利地是穩(wěn)定的：它可以被儲(chǔ)存幾個(gè)小時(shí)或幾個(gè)星期，且不會(huì) 觀察到任何降解。
[0046] 所述制劑特別適于與帶負(fù)電荷的分子（諸如例如可以調(diào)節(jié)干擾RNA內(nèi)源性機(jī)制的 核苷酸序列）復(fù)合。
[0047] ?陽離子表面活性劑
[0048] 在本發(fā)明中使用的制劑包括陽離子表面活性劑，該陽離子表面活性劑包括：
[0049] a)至少一種選自以下基團(tuán)的親脂性基團(tuán)：
[0050] i)基團(tuán)R代表含11至23個(gè)碳原子的直鏈烴鏈，
[0051] ii)含12至24個(gè)碳原子和磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺，諸如二硬酯酰磷脂酰乙醇胺 (DSPE)，以及
[0052]iii)聚（環(huán)氧丙烷），以及
[0053] b)至少一種選自以下基團(tuán)的包括至少一種陽離子基團(tuán)的親水性基團(tuán)：
[0054] i)含1至12個(gè)碳原子的、并且經(jīng)至少一種陽離子基團(tuán)間斷和/或取代的直鏈或支 鏈烷基，以及
[0055] ii)包括至少一種陽離子基團(tuán)的親水性聚合基團(tuán)，所述聚合基團(tuán)尤其選自：
[0056] 典型地包括3至500個(gè)乙撐氧單元，優(yōu)選20至200個(gè)乙撐氧單元，并且包括至少 一種陽離子基團(tuán)的聚（環(huán)氧乙烷），
[0057] 多糖，諸如葡聚糖、纖維素或殼聚糖，尤其具有在0.5至20kDa之間，例如在1至 12kDa之間的分子量，
[0058] 聚胺，諸如殼聚糖或聚賴氨酸，尤其具有在0. 5至20kDa之間，例如在1至12kDa 之間的分子量。
[0059] "含12至24個(gè)碳原子的脂肪酸和磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺"指以下化學(xué)式的基 團(tuán)：
[0060]
[0061]其中，
[0062] 私和R4獨(dú)立地代表含11至23個(gè)碳原子的直鏈烴鏈，
[0063]A#PA4代表0或NH，以及
[0064]M代表H或陽離子。
[0065] 所述陽離子表面活性劑的陽離子基團(tuán)典型地是：
[0066] 選自錢、味唑鐵、吡陡鐵、吡略燒鐵、呢陡鐵、憐鐵或疏基團(tuán)的絡(luò)合陽尚子，或者
[0067] 單-或多-元螯合有機(jī)基團(tuán)的原子團(tuán)之間的金屬絡(luò)合物，例如與無機(jī)陽離子， 諸如Ca2+、Al3+、Ni+、Zn2+、Fe2+、Fe3+或Cu2+絡(luò)合的菲咯啉（phenantroline)、吡啶、乙二 胺四乙酸（EDTA)、二乙三胺五乙酸（DTPA)、卟啉、酞菁（phtalocyanins)、氯、菌綠素 (bacteriochlorines)，
[0068]銨基，尤其為_+NMe3、_+NHMe2、_+NH2Me和_+NH3，特別是_+NH3，是特別優(yōu)選的。
[0069] 當(dāng)然，陰離子可以與陽離子相關(guān)聯(lián)，這樣制劑是電中性的。陰離子的性質(zhì)不受到限 制，為例證，可以是鹵化物，尤其是氯化物或溴化物，或三氟乙酸鹽。
[0070] 在陽離子表面活性劑中，使親脂性基團(tuán)與包括至少一種陽離子基團(tuán)的親水性基團(tuán) 結(jié)合的合基團(tuán)的性質(zhì)不受到限制。下面提供鍵合基團(tuán)的實(shí)例（基團(tuán)L)。
[0071] 在一種實(shí)施方式中，陽離子表面活性劑具有下式（A):
[0072][ (Lipo)「L_ (Hydro)Jn+，（n/m) [A]m (A)
[0073]其中：
[0074]I和h代表1至4之間的獨(dú)立的整數(shù)，
[0075]n是大于或等于1的整數(shù)，通常在1至50之間，
[0076]Lipo代表如上限定的親脂性基團(tuán)，
[0077]Hydro代表如上限定的包括至少一種陽離子基團(tuán)的親水性基團(tuán)，
[0078]L代表鍵合基團(tuán)，
[0079]A代表陰離子，
[0080] m是代表陰離子的電荷的整數(shù)，
[0081]n是代表陽離子[(Lipo)fL-(Hydro)J的電荷的整數(shù)。
[0082] 在上述式⑷中，優(yōu)選L為：
[0083]a)當(dāng)I和h代表1時(shí)，L是選自如下基團(tuán)的二價(jià)鍵合基團(tuán)：
[0084]單鍵，
[0085]基團(tuán)Z，選自-0-、-NH-、-0 (0C) -、- (C0) 0-、- (CO)NH-、-NH(C0) -、-0- (C0) -0-、-NH- (C0) (CO) -NH-和-NH- (CO) -NH、-0-P0 (0H) -0-或 5 至 6 個(gè)原子的環(huán)狀二價(jià)原子團(tuán)，
[0086]Aik基團(tuán)，為包括1至6個(gè)碳原子的亞烷基，以及
[0087]Z-Alk、Alk-Z、Alk-Z-Alk或Z-Alk-Z基團(tuán)，其中Aik和Z如上所述，并且，其中基 團(tuán)Z-Alk-Z中的兩個(gè)基團(tuán)Z是相同或不同的，
[0088]b)當(dāng)基團(tuán)I或h中的一個(gè)代表1，并且另一個(gè)代表2時(shí)，L是選自如下基團(tuán)的三價(jià) 基團(tuán)：磷酸基團(tuán)0P- (〇-) 3，衍生自甘油的式-0-CH2-CH- (0-)CH2-0-基團(tuán)和5至6個(gè)原子的 環(huán)狀三價(jià)原子團(tuán)，
[0089] 對于I和h為其它值的，L是5至6個(gè)原子的環(huán)狀多價(jià)原子團(tuán)。
[0090] 更優(yōu)選地，L為：
[0091]a)當(dāng)I和h代表1時(shí)，L是選自如下基團(tuán)的二價(jià)鍵合基團(tuán)：
[0092]單鍵，
[0093] Z基團(tuán)，選自-0-、-NH-、-0 (0C) -、- (CO) 0-、- (CO)NH-、-NH(CO) -、-0- (CO) -0-、-NH-(CO) -0-、-o- (CO)-NH-和-NH-(CO)-NH或-O-PO(