一種selaginellin N的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及卷柏中selaginellinN的制備方法，其含量采用HPLC法檢測(cè)應(yīng)在 95%以上。屬于中藥提取分離、純化領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】：
[0002] 中國(guó)藥典2005年版中規(guī)定卷柏為卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina(Beauv. )Spring或墊狀卷柏Selaginellapulvinata(Hook,etGrev. )Maxim. 的干燥全草。全年均可采收，除去須根及泥沙，曬干。辛，平。歸肝、心經(jīng)。具有活血通經(jīng)。 用于經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕痞塊，跌撲損傷。卷柏炭化瘀止血。用于吐血，崩漏，便血，脫肛。卷柏 中含有多種化學(xué)成分，如黃酮類(lèi)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)卷柏中含有芹菜素（apigenin)、穗花杉雙黃酮 (amentoflavone)、扁柏雙黃酮（hinokiflavone)、異柳杉素（isocryptomerin)及阿曼托黃 色（amentoflavone)等；苯丙素類(lèi)、生物堿類(lèi)、酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等化合物。藥理作用顯示具 有：免疫及抗腫瘤作用、對(duì)血液系統(tǒng)的作用、抗病毒、抑菌與抗炎作用、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜等作用。本 發(fā)明提供了一種方便、簡(jiǎn)便、快速的制備高純度selaginellinN的方法。目前現(xiàn)有技術(shù)中 未見(jiàn)此selaginellinN的提取方法。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種從中藥卷柏中提取一種含量在95%以 上的selaginellinN的制備方法，目的是通過(guò)簡(jiǎn)單的工藝過(guò)程得到含量較高（含量大于 95% )的selaginellinN〇
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：從中藥卷柏中提取一種含量在95%以上的selaginellin N的制備方法，其具體方法步驟為：
[0005]a)將卷柏科植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv. )Spring或墊狀卷柏 Selaginellapulvinata(Hook.etGrev. )Maxim.的干燥全草原料切成寸段；
[0006] b)用乙醇、甲醇、水中的一種或甲醇-7jc、乙醇-水按比例（1 :9~9 :1)混合溶劑 回流提取，加入相當(dāng)于藥材重量的2-16倍溶劑，回流提取1-5次，每次0. 5至6小時(shí)，合并 提取液，濾過(guò)，得提取液；
[0007]c)將提取液回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 05 - 1. 40 (60°C)的清膏或稠膏，按 比例（1 :10~10 :1)加入水，混懸，得混懸液。
[0008]d)將混懸液吸附于D101或各種極性、弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用乙醇-水或 甲醇-水（按比例10 :1~1 :1)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/100~1/20總量洗脫劑 的體積量收集洗脫液流份，以三氯甲烷：甲醇（10 :1~1 :1)為展開(kāi)劑采用TLC檢查斑點(diǎn)， 合并相同的棕褐色斑點(diǎn)洗脫流份。
[0009]e)將合并的相同棕褐色斑點(diǎn)洗脫流份回收溶劑，得棕褐色固體粉末。
[0010] f)將棕褐色固體粉末用2-100倍量的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙 醇、甲醇中的一種或兩種（1 :1〇~10 :1)混合的混合有機(jī)溶劑溶解。
[0011] g)將棕褐色固體粉末的有機(jī)溶劑或混合有機(jī)溶劑加入以SephadexLH-20為吸附 劑的層析柱上吸附。
[0012] h)將吸附棕褐色固體粉末的S印hadexLH-20層析柱用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、 丙酮、三氯甲烷中的一種或兩種（1 :1〇~10 :1)混合的混合溶劑分別與乙醇或甲醇（10 : 1~1 :1)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/100~1/20總量洗脫劑的體積量收集Sephadex LH-20層析柱的黃色色帶，直至完全。以三氯甲烷：甲醇（10 :1~1 :1)為展開(kāi)劑采用TLC 跟蹤檢查斑點(diǎn)，合并相同的棕褐色斑點(diǎn)洗脫流份。
[0013]i)將合并的相同棕褐色斑點(diǎn)洗脫流份回收溶劑，得棕褐色固體粉末，即 selaginellinN精制品，其含量采用HPLC法檢測(cè)應(yīng)在95%以上，轉(zhuǎn)移率可達(dá)75%以上。
[0014] 所述的甲醇-水、乙醇-水的濃度為30-75% ;所述的大孔樹(shù)脂柱優(yōu)選D101。
[0015] 步驟⑷中三氯甲烷：甲醇優(yōu)選3 :1。
[0016] 步驟（h)中，三氯甲烷：甲醇=3 :1_4 :1。
[0017] 步驟（f)中，所述的有機(jī)溶劑為固體粉末的10-30倍量。
[0018]
[0021]
[0022] 紅色粉末，易溶于甲醇及DMS0,不溶于水。10%硫酸顯桃紅色，碘熏出現(xiàn)棕黃色斑 點(diǎn)，提示該化合物為selaginellin類(lèi)化合物。
[0023]UV入nax (MeOH)nm:299, 274 和 264nm〇
[0024]ESI-TOF-MS圖譜中給出m/z:495. 1607[M-H]，計(jì)算值 495. 1602。結(jié)合1H-NMR和 13c-nmr推測(cè)分子式為c34h24o4。
[0025]iH-NMlUeOOMHz，DMS0-d6)顯示24個(gè)質(zhì)子信號(hào)，與化合物1比較，缺少了羥甲基的 氫信號(hào)；13C-NMR(150MHz，DMS0-d6)與化合物1比較，羥甲基碳信號(hào)消失，因此，可以推斷該 化合物是在化合物1的母核上缺少一個(gè)羥甲基。
[0026]iH-NMlUeOOMHzJMSO-df；)中S6. 79 (2H,d,J=8. 5Hz)，S6. 56 (2H,d,J= 8. 5Hz); S6. 96 (2H,d,J= 8. 7Hz)，S6. 64 (2H,d,J= 8. 7Hz) ;S6. 82 (4H,d,J= 8. 4Hz)顯示有三 個(gè)苯環(huán)對(duì)位取代時(shí)形成的AA'BB'偶合系統(tǒng)。根據(jù)HSQC與HMBC推測(cè)化合物2存在兩個(gè)相 同的結(jié)構(gòu)片段A。
[0027]
[0028]iH-NMR/^-NMR由信號(hào)S3.71(3H，s)，S55.4推測(cè)為一個(gè)甲氧基信號(hào)，結(jié)合HSQC 與HMBC推測(cè)化合物2存在一個(gè)結(jié)構(gòu)片段B。
[0029]
[0030]由信號(hào)S7. 62 (1H,d,J=7. 7Hz)，S7. 55 (1H,t,J=7. 8Hz)，S7. 33 (1H,d,J= 7. 7Hz)判斷化合物2存在一個(gè)苯環(huán)上的鄰三取代結(jié)構(gòu)片段C。
[0031]
[0032] 13〇匪1?(15011抱，01^0-(16)顯示，5 185.8為〇=0的碳信號(hào)，111-匪1?(6001抱， DMS0-d6)顯示，5 7.42 (lH，dd，J= 10. 0, 2.6Hz)，5 7.23 (lH，dd，J= 10.0, 2.6Hz)， S6. 36 (1H,dd,J= 10. 0, 2. 1Hz)，S6. 32 (1H,dd,J= 10. 0, 2. 1Hz)結(jié)合HSQC與HMBC，和文 獻(xiàn)[19]比對(duì)，推測(cè)化合物2結(jié)構(gòu)中可能存在結(jié)構(gòu)片段D。
[0033]
[0034]另外，13C-NMR(150MHz，DMS0-d6)信號(hào)顯示：S86. 6，S93. 7 的碳信號(hào)應(yīng)為Ce c 的信號(hào)；HMBC顯示，56. 96(H-28)與593. 7(C-27)有相關(guān)峰，推出C-27與C-33相連； S142. 4(C-18)與S6. 79(H-20,H-24)相關(guān)，則C-18 與C-25 相連；S93. 7(C-27)與 S6. 96 (H-28, 32)有相關(guān)峰，故推測(cè)化合物2存在結(jié)構(gòu)片段E。
[0035]
[0036] 綜合1H-NMR，13C-NMR，HSQC和HMBC數(shù)據(jù)分析，將以上片段組合連接，確定化合物 為
[0037] (R,S)-4-[[4' -hydroxy-3 -[2 -(4-hydroxyphenyl)ethynyl] [1, 1' -biphenyl]-2-yl](4-methoxyphenyl)methylene]_2, 5-cyclohexadien_l-〇ne，該 化合物為未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，命名為selaginellinN。該化合物的重要遠(yuǎn)程相關(guān)見(jiàn) Fig.iH-NMR，13C-NMR，HSQC和HMBC數(shù)據(jù)歸屬見(jiàn)（Table)。
[0038]TableNMRspectraldataandHMBCCorrelationofselaginellinN(600MHz, DMS0-d6)
[0039]

[0041] 本發(fā)明的經(jīng)濟(jì)效益是：
[0042] (1)工藝操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，產(chǎn)率高，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0043] (2)本產(chǎn)品的純度較高，其含量采用HPLC法檢測(cè)在95%以上。
[0044]selaginellinN的應(yīng)用：
[0045] (1)本發(fā)明的selaginellinN適合于制備臨