一種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)療實驗領域，具體為一種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法。
【背景技術】
[0002] 目前，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，到現(xiàn)在為止已有數(shù)億人感染乙肝病毒 (h印atitiSBvirus，HBV)或者成為病毒攜帶者，而我國人群乙肝帶毒率人群高達10%左 右，而且隨著時間的推移，這個數(shù)量也在增加中。而在研究的實驗數(shù)據(jù)中表明：乙型肝炎 病變轉(zhuǎn)為慢性并出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象與患病機體的免疫狀態(tài)有關，而機體細胞免疫應答的產(chǎn) 生，在機體清除乙肝病毒過程中發(fā)揮重要作用。重組乙肝疫苗可以很好的誘導Thl反應，打 破免疫耐受，上調(diào)細胞免疫功能，但必須增大劑量及多次免疫。因此，尋找有效的免疫佐劑 來增強疫苗的免疫原性，及提高與保護性免疫應答相關的免疫細胞活性具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所解決的技術問題在于提供一種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法，以解 決上述【背景技術】中的缺點。
[0004] 本發(fā)明所解決的技術問題采用以下技術方案來實現(xiàn)： 一種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法，其步驟如下， (1) 無菌條件下取健康人外周血10mL，用肝素抗凝，淋巴細胞分離液常規(guī)分離PBMC，調(diào) 細胞濃度為4. 5-5. 5*109/L備用， (2) 通過常規(guī)的方法培養(yǎng)出五種細胞，分別是QSG7701細胞、HepG2細胞、K562細胞、 A549細胞和5-8F細胞，然后對每種細胞的濃度進行調(diào)整，取4-5*103個細胞/孔加入培養(yǎng) 基板中，以新鮮分離的健康人PBMC細胞為效應細胞，在每孔中加入1. 5-2. 0*105個PBMC，使 其與靶細胞的比例為50 :1 ; (3) 在上述五種細胞的另外對照組中加入正常人體的淋巴細胞； (4) 在培養(yǎng)基板的每個孔中加入0DN，使其終濃度為4-5g/mL，效應細胞對照孔加入 95-105uL的培養(yǎng)基； (5) 將上述五種細胞和對照組置于37°C、5%二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。每孔加 入濃度為4-4. 5mg/mL新鮮配制的無菌MTT15-25uL，繼續(xù)培養(yǎng)5h，置于2000r/min的離 心培養(yǎng)板上離心IOmin; (6) 收集上清液，通過全自動化分析儀檢測ALT和LDH的含量，經(jīng)表明加入ODN的細胞 組的殺傷活性均高于空白對照組。
[0005] 本發(fā)明的有益效果：經(jīng)ODN活化的PBMC對HepG2細胞、K562細胞、5-8F細胞和 A549細胞等細胞的殺傷活性均明顯高于與相應空白對照組和淋巴細胞對照組。
[0006]
【具體實施方式】
[0007] 為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面進 一步闡述本發(fā)明。
[0008] -種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法，其步驟如下， (1) 無菌條件下取健康人外周血10mL，用肝素抗凝，淋巴細胞分離液常規(guī)分離PBMC，調(diào) 細胞濃度為4. 5-5. 5*109/L備用， (2) 通過常規(guī)的方法培養(yǎng)出五種細胞，分別是QSG7701細胞、HepG2細胞、K562細胞、 A549細胞和5-8F細胞，然后對每種細胞的濃度進行調(diào)整，取4-5*103個細胞/孔加入培養(yǎng) 基板中，以新鮮分離的健康人PBMC細胞為效應細胞，在每孔中加入1. 5-2. 0*105個PBMC，使 其與靶細胞的比例為50 :1 ; (3) 在上述五種細胞的另外對照組中加入正常人體的PBMC，實驗組一為0DN01，實驗組 二為 0DN02 ; (4) 在培養(yǎng)基板的每個孔中加入0DN，使其終濃度為4-5g/mL，效應細胞對照孔加入 95-105uL的培養(yǎng)基； (5) 將上述五種細胞和對照組置于37°C、5%二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。每孔加 入濃度為4-4. 5mg/mL新鮮配制的無菌MTT15-25uL，繼續(xù)培養(yǎng)5h，置于2000r/min的離 心培養(yǎng)板上離心IOmin; (6) 收集上清液，通過全自動化分析儀檢測ALT和LDH的含量，經(jīng)表明加入ODN的細胞 組的殺傷活性均高于空白對照組。
[0009] 上表為各個靶細胞中ALH和LDH的含量表 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征及本發(fā)明的優(yōu)點，本行業(yè)的技術人員 應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明 的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和 改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效 物界定。
【主權項】
1. 一種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法，其特征是：其步驟如下， (1) 無菌條件下取健康人外周血10mL，用肝素抗凝，淋巴細胞分離液常規(guī)分離PBMC，調(diào) 細胞濃度為4. 5-5. 5*109/L備用， (2) 通過常規(guī)的方法培養(yǎng)出五種細胞，分別是QSG7701細胞、HepG2細胞、K562細胞、 A549細胞和5-8F細胞，然后對每種細胞的濃度進行調(diào)整，取4-5*10 3個細胞/孔加入培養(yǎng) 基板中，以新鮮分離的健康人PBMC細胞為效應細胞，在每孔中加入1. 5-2. 0*105個PBMC，使 其與靶細胞的比例為50 :1 ; (3) 在上述五種細胞的另外對照組中加入正常人體的淋巴細胞； (4) 在培養(yǎng)基板的每個孔中加入0DN，使其終濃度為4-5g / mL，效應細胞對照孔加入 95-105uL的培養(yǎng)基； (5) 將上述五種細胞和對照組置于37°C、5%二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h ; 每孔加入濃度為4-4. 5mg / mL新鮮配制的無菌MTT15-25uL，繼續(xù)培養(yǎng)5h，置于 2000r / min的離心培養(yǎng)板上離心10min ; (6) 收集上清液，通過全自動化分析儀檢測ALT和LDH的含量，經(jīng)表明加入ODN的細胞 組的殺傷活性均高于空白對照組。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種增強重組乙肝疫苗免疫效應的方法，通過取出QSG7701細胞、HepG2細胞、K562細胞、A549細胞和5—8F細胞這五種細胞分別進行對照實驗和ODN活化實驗，然后對各個實驗組進行全自動化分析儀檢測ALT和LDH的含量，經(jīng)表明加入ODN的細胞組的殺傷活性均高于空白對照組。本發(fā)明證實經(jīng)ODN、活化的PBMC對HepG2細胞、K562細胞、5—8F細胞和A549細胞等細胞的殺傷活性均明顯高于與相應空白對照組和淋巴細胞對照組。
【IPC分類】C12N5/0781, C12Q1/02, C12N5/0786, C12N5/0783
【公開號】CN105002259
【申請?zhí)枴緾N201510408996
【發(fā)明人】高峰, 馮輝
【申請人】高峰
【公開日】2015年10月28日
【申請日】2015年7月14日