松茸多肽、松茸提取物以及它們的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種松茸多肽、含有該松茸多肽的松茸提取物以及它們的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 國(guó)際衛(wèi)生組織（WHO) 2014年更新的數(shù)據(jù)顯示，心血管疾病引起的死亡人口在全球 十大導(dǎo)致死亡疾病中排名第一，引起心血管疾病的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素是高血壓。隨著生 活水平的提高和人們生活方式的改變，高血壓不僅患病率越來(lái)越高，而且趨向年輕化，中 國(guó)心血管疾病報(bào)告表明，我國(guó)現(xiàn)有高血壓超2億，發(fā)病率17%左右（高血壓個(gè)體化治療進(jìn) 展一一中國(guó)衛(wèi)生年鑒2009)。除高血壓疾病本身對(duì)人健康的危害之外，高血壓并發(fā)癥引起的 健康損壞更嚴(yán)重，其并發(fā)癥主要有冠心病、視網(wǎng)膜相關(guān)疾病、腦卒中和腎病等。高血壓大型 隨機(jī)臨床試驗(yàn)已充分說(shuō)明降壓可減少心血管并發(fā)癥和死亡率。
[0003] 動(dòng)脈血壓由很多代謝途徑參與調(diào)控，腎素-血管緊張素調(diào)節(jié) 系統(tǒng)（renia-angiotensin system, RAS)和激肽釋放酶-激肽系統(tǒng) (kallikrein-kininsystem，KKS)是人體內(nèi)兩種重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)，RAS與KKS的平衡失調(diào)是 高血壓發(fā)病的重要原因之一，其中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)是系統(tǒng)調(diào)節(jié)過(guò)程中起關(guān)鍵作用 的酶，是使血壓升高的主要因素。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶是一種含鋅二肽-羧肽酶，相對(duì)分子質(zhì) 量為12-15kDa。在RAS中，ACE通過(guò)催化血管緊張素-I轉(zhuǎn)換為血管緊張素-II。血管緊張 素-II是RAS中所知道的活性最強(qiáng)的血管收縮劑，使血管平滑肌收縮從而引起升壓效應(yīng)。此 外，血管緊張素-II還能刺激醛固酮的分泌和直接對(duì)腸胃作用，引起鈉貯量和血容量的增 加，也能使血壓升高。KKS中，緩激肽是一種降壓物質(zhì)，ACE從緩激肽的C末端脫去2個(gè)氨基 酸殘基而使其失活，引起血壓升高。因此，抑制ACE的活性，是有效預(yù)防和治療高血壓的一 種手段。從1981年第一個(gè)口服有效的人工合成ACE抑制劑卡托普利（Captorip)批準(zhǔn)使用 以來(lái)，現(xiàn)在應(yīng)用于臨床上的ACE抑制劑已經(jīng)非常普遍，但是人工合成的ACE抑制劑在臨床應(yīng) 用過(guò)程中往往會(huì)產(chǎn)生副作用，如咳嗽、味覺(jué)功能紊亂、皮瘆等。食物來(lái)源的ACE抑制肽因其 獨(dú)特的安全性高，無(wú)副作用的優(yōu)點(diǎn)引起了人們的極大關(guān)注。
[0004] 松鸞（Tricholomama tsutake)又名松口蘑、松蕈、合菌、臺(tái)菌，隸屬擔(dān)子菌門(mén)，口蘑 科，是松櫟等樹(shù)木外生的菌根真菌，具有獨(dú)特的濃郁香味，是世界上珍稀名貴的天然食藥用 菌，被譽(yù)為"菌中之王"，在宋代《經(jīng)史證類(lèi)務(wù)急本草》中有過(guò)記載。新鮮松茸子實(shí)體粗壯，形 若傘狀，色澤鮮明，菌蓋呈球形，展開(kāi)為扁半球形，直徑為5-20cm，具有纖維狀茸毛鱗片，表 面干燥，邊緣內(nèi)卷；菌柄較粗壯，呈圓柱形，長(zhǎng)6-14cm，菌環(huán)以上為乳白色，菌環(huán)以下為土黃 色至栗褐色；菌肉白嫩肥厚，質(zhì)地細(xì)密，菌褶白色至淡褐色。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供松茸多肽、松茸提取物以及它們的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供的多肽，來(lái)源于松茸，將其命名為松茸多肽，如序列表的序列1所示。
[0007] 含有所述松茸多肽的松茸提取物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0008] 所述松茸提取物，其制備方法可包括如下步驟：
[0009] (1)將松茸子實(shí)體加入水中，勻漿后提??；
[0010] (2)完成步驟（1)后，離心并收集上清液。
[0011] 所述方法還包括將步驟（2)得到的上清液進(jìn)行冷凍干燥的步驟。
[0012] 所述步驟（1)中，松茸子實(shí)體與水的配比可為：2質(zhì)量份松茸子實(shí)體：1質(zhì)量份水。
[0013] 所述步驟（1)中，所述水具體可為蒸餾水。
[0014] 所述步驟（1)中，所述提取具體可為4°C靜置12小時(shí)。
[0015] 所述步驟（2)中，所述離心的參數(shù)具體可為：8000g離心15分鐘。
[0016] 本發(fā)明還保護(hù)一種松茸提取物的制備方法，包括如下步驟：
[0017] (1)將松茸子實(shí)體加入水中，勻漿后提?。?br>[0018] ⑵完成步驟⑴后，離心并收集上清液。
[0019] 所述方法還包括將步驟（2)得到的上清液進(jìn)行冷凍干燥的步驟。
[0020] 所述步驟（1)中，松茸子實(shí)體與水的配比可為：2質(zhì)量份松茸子實(shí)體：1質(zhì)量份水。
[0021] 所述步驟（1)中，所述水具體可為蒸餾水。
[0022] 所述步驟（1)中，所述提取具體可為4°C靜置12小時(shí)。
[0023] 所述步驟（2)中，所述離心的參數(shù)具體可為：8000g離心15分鐘。
[0024] 本發(fā)明還保護(hù)所述松茸多肽或所述松茸提取物在制備藥物中的應(yīng)用；所述藥物的 功能為如下（a)和/或（b)和/或（c) : (a)降血壓；(b)治療高血壓；（c)預(yù)防高血壓。所 述（a)中，所述血壓具體可為收縮壓。
[0025] 本發(fā)明還保護(hù)一種藥物，其活性成分為所述松茸多肽或所述松茸提取物；所述藥 物的功能為如下（a)和/或（b)和/或（c) : (a)降血壓；(b)治療高血壓；（c)預(yù)防高血壓。 所述（a)中，所述血壓具體可為收縮壓。
[0026] 本發(fā)明提供的多肽是食品來(lái)源，不僅豐富了降血壓藥物篩選庫(kù)，更為松茸的進(jìn)一 步開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。本發(fā)明對(duì)于高血壓的治療具有重大的應(yīng)用價(jià)值。
【附圖說(shuō)明】
[0027] 圖1為實(shí)施例1分組給藥后原發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓變化；*，與陰性組相比 p〈0. 05 ;·代表陰性組，代表陽(yáng)性組，▲代表高劑量試驗(yàn)組，□代表低劑量試驗(yàn)組。
[0028] 圖2為實(shí)施例3分組給藥后原發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓變化；*，與陰性組相比 p〈0. 05 ;·代表陰性組，代表陽(yáng)性組，▲代表高劑量試驗(yàn)組，Λ代表低劑量試驗(yàn)組。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平 均值。
[0030] 松茸，又稱(chēng)松口蘑，分布于黑龍江、吉林、安徽、四川、甘肅、山西、貴州、云南、西藏 等地。參考文獻(xiàn)：中國(guó)大型真菌，卯曉嵐主編，河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000. 10, Ρ130。本實(shí)施 例中的松鸞（Tricholomamatsutake)采集自云南德欽。
[0031] 原發(fā)性高血壓大鼠 （Spontaneous Hypertensive Rat, SHR):北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物技術(shù)有限公司。SHR屬于自發(fā)性高血壓大鼠，高血壓發(fā)生率高，且無(wú)明顯原發(fā)性腎臟或腎 上腺損傷，可作為高血壓動(dòng)物模型，用于降壓藥物的篩選。
[0032] 大鼠收縮壓（SBP)的測(cè)定使用BP-100A全自動(dòng)大小鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)（成都泰 盟科技有限公司）。
[0033] 卡托普利：北京曙光藥業(yè)有限責(zé)任公司，產(chǎn)品目錄號(hào)國(guó)藥準(zhǔn)字H11020833。
[0034] HHL(Hip - His - Leu) :Sigma Aldrich 公司，產(chǎn)品目錄號(hào) H1635。
[0035] 實(shí)施例1、松茸粗提取物及其降壓作用
[0036] -、松茸粗提取物的制備
[0037] 將1質(zhì)量份蒸餾水與2質(zhì)量份松茸子實(shí)體充分?jǐn)囁槌蓜驖{，4°C靜置12小時(shí)，然后 8000g離心15分鐘，收集上清液，凍干，即為松茸提取物。
[0038] 每14. 52g松茸子實(shí)體可得到400mg松茸粗提取物。
[0039] 二、松茸提取物對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用（單劑量短期實(shí)驗(yàn)）
[0040] 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0041] 原發(fā)性高血壓大鼠，雄性，12周齡，體重240-270g。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施持續(xù)保持屏障 環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)。主要環(huán)境指標(biāo)的控制范圍：溫度25±2°C，相對(duì)濕度55±5%，光照明：暗= 12h:12h。動(dòng)物飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)盒內(nèi)，大鼠每盒2只。每周2次更換消毒后的墊料和籠具，保持 盒內(nèi)環(huán)境清潔和干燥，每日添加飼料和飲水，保持動(dòng)物自由飲食活動(dòng)。檢疫及馴化過(guò)程：新 領(lǐng)到的動(dòng)物檢疫期3-6天。在檢疫期間所有動(dòng)物飲水、攝食及健康狀況良好。動(dòng)物反應(yīng)靈 敏、無(wú)異常分泌物。提前適應(yīng)性測(cè)定血壓，一周4次。
[0042] 2、分組處理
[0043] 取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分成4組，每組4只，分別處理如下：
[0044] 陰性組：?jiǎn)未喂辔附o予生理鹽水，每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予2毫升；
[0045] 陽(yáng)性組：?jiǎn)未喂辔附o予卡托普利溶液（將卡托普利溶于生理鹽水，得到卡托普利 溶液），每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予2毫升，給藥劑量為100mg/kg (即每千克動(dòng)物體重給予IOOmg卡 托普利）；
[0046] 高劑量試驗(yàn)組：?jiǎn)未喂辔附o予松茸粗提取物溶液（將松茸粗提取物溶于生理鹽 水，得到松茸粗提取物溶液），每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予2毫升，給藥劑量為400mg/kg (即每千克動(dòng) 物體重給予400mg松茸粗提取物）；
[0047] 低劑量試驗(yàn)組：?jiǎn)未喂辔附o予松茸粗提取物溶液（將松茸粗提取物溶于生理鹽 水，得到松茸粗提取物溶液），每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予2毫升，給藥劑量為200mg/kg (即每千克動(dòng) 物體重給予200mg松茸粗提取物）。
[0048] 3、收縮壓檢測(cè)
[0049] 分別于給藥0h、給藥0. 5h、給藥2h、給藥4h、給藥6h和給藥8h之后測(cè)定大鼠的收 縮壓。處理數(shù)據(jù)組間比較采用t檢驗(yàn)。
[0050] 結(jié)果見(jiàn)圖1。給藥0. 5h后，陽(yáng)性組和高劑量試驗(yàn)組大鼠的血壓都有所下降。給藥2h 后，陽(yáng)性組和高劑量試驗(yàn)組大鼠的血壓下降到了最低值，分別下降了約38mmHg和36mmHg， 并且可以在此最低血壓處維持2個(gè)小時(shí)。給藥4h后，陽(yáng)性組和高劑量試驗(yàn)組大鼠的血壓都 開(kāi)始回升。低劑量試驗(yàn)組大鼠的血壓水平與陰性組大鼠相比處于同等水平，沒(méi)有顯著性差 異。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，大鼠沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)敏和咳嗽等不良反應(yīng)。這為松茸