0mg，用膠頭滴管吸取樣品液滴 至圓底燒瓶中的硅膠粉上，迅速攪拌均勻并間歇用電吹風(fēng)給圓底燒瓶加熱以使溶劑快速揮 干，使樣品呈均勻粉末狀，如此重復(fù)，直至樣品全部吸附于硅膠粉上，繼續(xù)加熱，使樣品中的 溶劑完全揮發(fā)，用濾紙封口后置于干燥器中備用；
[0041] ⑶裝柱
[0042] 采用濕法裝柱，稱取0. 2g硅膠用石油醚飽和后裝柱；
[0043] ⑷上樣
[0044] 采用干法上樣，將吸附有樣品的硅膠粉裝至層析柱中，使其均勻沉降于硅膠層表 面，待樣品沉降完全，打開閥門，收集洗脫液；
[0045] (5)樣品洗脫
[0046] 梯度洗脫：先用初始洗脫劑對樣品進(jìn)行洗脫，然后逐漸增加洗脫劑的極性，洗脫過 程中用泵加壓并用薄層層析TLC追蹤，結(jié)果如圖1所示，直至目標(biāo)點被洗脫；
[0047] (6)樣品的收集與合并
[0048] 用小試管分部收集樣品，將含有目標(biāo)點的樣品管按照出柱順序合并為幾個部分， 減壓濃縮后，繼續(xù)進(jìn)行薄層層析，根據(jù)樣品的具體情況繼續(xù)進(jìn)行分離或者合并濃縮后4°C貯 減備用。
[0049] 作為實施例的優(yōu)選方式，所述薄層層析TLC追蹤為：將GF254硅膠板于IKTC烘 箱中活化2~3h，待其自然冷卻至室溫后取出，置于干燥器中備用，用玻璃毛細(xì)管吸取適 量樣品，點于硅膠板基線上，并在樣點下端用鉛筆做好標(biāo)記，硅膠板上基線距板底端距離為 0· 8~lcm，兩樣點之間的距離不小于0· 8cm，用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后，置于裝有飽和層析液的 層析缸中展開，待溶劑前沿展至距薄層板頂端約Icm時，用鑷子取出，吹干溶劑，用紫外分 析儀和其它顯色劑進(jìn)行顯色。
[0050] 作為實施例的優(yōu)選方式，還包括對羥基苯甲醛的結(jié)構(gòu)鑒定：將過正相硅膠柱后制 得的對羥基苯甲醛裝入核磁管中，蒸干溶劑，加入氘代試劑，以TMS作為內(nèi)標(biāo)，使用400MHz 核磁共振儀測定化合物的核磁譜，測定項目包括1H-NMR、13C-NMR、DEPT 90、DEPT 135^H-1H COSY、HSQC、HMBC ;將樣品用含5%甲酸的甲醇溶液溶解后測定質(zhì)譜，質(zhì)譜條件：電離源： 電噴霧電離源；干燥氣溫度：200°C ;干燥氣壓力：20psi ;霧化氣壓力：50psi ;霧化室溫度 50°C ;針孔電壓：5000V ;屏蔽電壓：600V ;毛細(xì)管電壓：80V。對羥基苯甲醛的核磁譜數(shù)據(jù)如 表1所示。
[0051] 進(jìn)行質(zhì)譜測定后可知化合物Y3的ESI-MS :m/z = 121 [M-1]+，綜合Y3的核磁譜數(shù) 據(jù)以及質(zhì)譜數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)進(jìn)行比對，推測化合物為對羥基苯甲醛（分子式為C7H 6O2，分子量 為122. 1)，其結(jié)構(gòu)如圖2所示。
[0052] 表1化合物Y3的核磁譜數(shù)據(jù)
[0053]
[0054] 鹽漬蘿卜作為閩南地區(qū)的一種傳統(tǒng)腌制食品，在當(dāng)?shù)厝说娜粘Ｉ钪姓紦?jù)著非常 重要的地位，是閩南人智慧的結(jié)晶，是中華民族傳統(tǒng)食品文化的傳承。目前，鹽漬蘿卜的食 用價值正在被越來越多的人認(rèn)可，因此，對鹽漬蘿卜進(jìn)行各方面的研宄具有重要的意義和 應(yīng)用價值。本研宄中主要通過結(jié)合凝膠柱層析和硅膠柱層析對鹽漬蘿卜中的抗菌活性成分 進(jìn)行了分離，并首次分離出了對羥基苯甲醛，對羥基苯甲醛作為鹽漬蘿卜的抗真菌成分，對 于鹽漬蘿卜的二次開發(fā)意義重大。
[0055] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng) 認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，其特征在于：包括以下步驟： 步驟一、鹽漬蘿卜干粉的制備：將鹽漬蘿卜切成薄片，于50°C下烘干，粉碎，過20目篩， 得鹽漬蘿卜干粉，裝于密封袋中，干燥器中保存?zhèn)溆茫? 步驟二、鹽漬蘿卜粗提物的制備：稱取已烘干粉碎的5年鹽漬蘿卜粉2份，每份20g，分 別置于2個500mL三角瓶中，按料液比1:15分別加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于搖床中， 40°C，150rpm下提取6h，抽濾，收集濾液；再向殘澄中加入相應(yīng)溶劑進(jìn)行第二次提取，在同 樣的條件下提取3h，抽濾，收集濾液，待殘渣中溶劑揮干后，再交換溶劑提取1次，提取條件 同第二次提取，合并濾液，40°C減壓濃縮至圓底燒瓶中，回收溶劑，分別得乙酸乙酯和丙酮 提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到鹽漬蘿卜粗提物，4°C貯存?zhèn)溆茫? 步驟三、鹽漬蘿卜粗提物的初步分離：將鹽漬蘿卜粗提物用甲醇溶解后過濾，40°C減壓 濃縮后上含17〇g填料的SephadexLH-20凝膠柱，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，控制流速為 5~9s/drop，使用自動收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流份；合 并第48至第63管的流份，再進(jìn)行減壓濃縮，得到組分Yl; 步驟四、組分Yl的分離純化：組分Yl用適量甲醇溶解后，直接上含170g填料的SephadexLH-20凝膠柱，用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，經(jīng)若干次凝膠柱分離，最終收集得到 31管流份，合并第11至第15管流份得310mg樣品，將該部分標(biāo)記為組分1-2 ; 步驟五、組分1-2的分離純化：組分1-2加適量甲醇溶解后，過反相硅膠柱進(jìn)行分離，以 50%CH3OH進(jìn)行洗脫，洗脫體積為1L，每200mL收集1個流份，共收集得到5個流份，45°C減 壓濃縮除去溶劑后，選擇第1個流份用正相硅膠進(jìn)行分離；將正相硅膠分離后的2mg樣品 用IOmg硅膠粉拌樣，0. 08g硅膠用石油醚飽和后裝柱，樣品上柱后，用石油醚進(jìn)行洗脫，收 集第20至第32管的流份，合并流份后濃縮，蒸干溶劑后，制得對羥基苯甲醛。2. 如權(quán)利要求1所述的一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，其特征在于：所 述步驟五中采用的正相硅膠柱進(jìn)行分離的步驟為： (1) 硅膠粉活化 取200~300目硅膠粉于試劑瓶中，用扎孔的錫箔紙包好瓶口，置于IKTC烘箱中活化 2~3h，冷卻后封好瓶口置于干燥器中，備用； (2) 拌樣 根據(jù)樣品的量2mg，向干凈的圓底燒瓶中硅膠粉10mg，用膠頭滴管吸取樣品液滴至圓 底燒瓶中的硅膠粉上，迅速攪拌均勻并間歇用電吹風(fēng)給圓底燒瓶加熱以使溶劑快速揮干， 使樣品呈均勻粉末狀，如此重復(fù)，直至樣品全部吸附于硅膠粉上，繼續(xù)加熱，使樣品中的溶 劑完全揮發(fā)，用濾紙封口后置于干燥器中備用； (3) 裝柱 采用濕法裝柱，稱取0. 08g硅膠用石油醚飽和后裝柱； (4) 上樣 采用干法上樣，將吸附有樣品的硅膠粉裝至層析柱中，使其均勻沉降于硅膠層表面，待 樣品沉降完全，打開閥門，收集洗脫液； (5) 樣品洗脫 梯度洗脫：先用初始洗脫劑對樣品進(jìn)行洗脫，然后逐漸增加洗脫劑的極性，洗脫過程中 用泵加壓并用薄層層析TLC追蹤，直至目標(biāo)點被洗脫； (6)樣品的收集與合并 用小試管分部收集樣品，將含有目標(biāo)點的樣品管按照出柱順序合并為幾個部分，減壓 濃縮后，繼續(xù)進(jìn)行薄層層析，根據(jù)樣品的具體情況繼續(xù)進(jìn)行分離或者合并濃縮后4°C貯藏備 用。3. 如權(quán)利要求2所述的一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，其特征在于：所 述薄層層析TLC追蹤為：將GF254硅膠板于110°C烘箱中活化2~3h，待其自然冷卻至室 溫后取出，置于干燥器中備用，用玻璃毛細(xì)管吸取適量樣品，點于硅膠板基線上，并在樣點 下端用鉛筆做好標(biāo)記，硅膠板上基線距板底端距離為〇. 8~lcm，兩樣點之間的距離不小于 0. 8cm，用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后，置于裝有飽和層析液的層析缸中展開，待溶劑前沿展至距薄 層板頂端約Icm時，用鑷子取出，吹干溶劑，用紫外分析儀和其它顯色劑進(jìn)行顯色。4. 如權(quán)利要求1所述的一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，其特征在于：還 包括對羥基苯甲醛的結(jié)構(gòu)鑒定：將過正相硅膠柱后制得的對羥基苯甲醛裝入核磁管中，蒸 干溶劑，加入氘代試劑，以TMS作為內(nèi)標(biāo)，使用400MHz核磁共振儀測定化合物的核磁譜，測 定項目包括1H-NMR、13C-NMR、DEPT90、DEPT1355?-?COSY、HSQC、HMBC;將樣品用含 5% 甲酸的甲醇溶液溶解后測定質(zhì)譜，質(zhì)譜條件：電離源：電噴霧電離源；干燥氣溫度：200°C; 干燥氣壓力：20psi;霧化氣壓力：50psi;霧化室溫度50°C;針孔電壓：5000V;屏蔽電壓： 600V;毛細(xì)管電壓：80V。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從鹽漬蘿卜中制備對羥基苯甲醛的方法，包括以下步驟：步驟一、鹽漬蘿卜干粉的制備：將鹽漬蘿卜切成薄片，于50℃下烘干，粉碎，過20目篩，得鹽漬蘿卜干粉，裝于密封袋中，干燥器中保存?zhèn)溆?；步驟二、鹽漬蘿卜粗提物的制備，步驟三、鹽漬蘿卜粗提物的初步分離；步驟四、組分Y1的分離純化；步驟五、組分1-2的分離純化：組分1-2加甲醇溶解后，過反相硅膠柱分離，以50％CH3OH進(jìn)行洗脫，選擇第1個流份用正相硅膠分離；用石油醚進(jìn)行洗脫，收集第20至第32管的流份，合并流份后濃縮，蒸干溶劑后，制得對羥基苯甲醛。本發(fā)明首次從鹽漬蘿卜分離出了對羥基苯甲醛，對羥基苯甲醛作為鹽漬蘿卜的抗真菌有效成分，對于鹽漬蘿卜的二次開發(fā)意義重大。
【IPC分類】C07C47/565, C07C45/79, C07C45/78
【公開號】CN104892383
【申請?zhí)枴緾N201510257677
【發(fā)明人】李健, 蘇文金, 蘇國成, 劉靜雯, 何明明
【申請人】集美大學(xué)
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年5月20日