專利名稱:一株丙酮丁醇梭桿菌菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株丙酮丁醇梭桿菌菌株及其應(yīng)用，具體是通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)裝置連續(xù)培養(yǎng)馴化選育得到的耐高濃度丁醇量和高溶劑產(chǎn)量的丙酮丁醇梭桿菌菌株，以及該菌株發(fā)酵丁醇工業(yè)中的應(yīng)用，屬于生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
作為燃料，丁醇具有能量密度大，對(duì)水的穩(wěn)定性高、可直接用于內(nèi)燃機(jī)、運(yùn)輸方便等優(yōu)點(diǎn)，在能源危機(jī)日益嚴(yán)峻的今天，丁醇作為燃料有著廣闊的發(fā)展前景。丁醇又是重要的有機(jī)化工原料，廣泛應(yīng)用于油漆、表面涂料、皮革處理、塑料等領(lǐng)域。
丁醇的生產(chǎn)方法主要有乙醛縮合法，丙烯羰基合成法和發(fā)酵法。乙醛縮合法工藝流程長(zhǎng)，收率低，成本較高，目前在國(guó)外已被淘汰；丙烯羰基合成法生產(chǎn)丁醇的原料為石化 下游產(chǎn)品丙烯；隨著石油價(jià)格飛漲和資源加速枯竭，發(fā)酵法生產(chǎn)丁醇受到了廣泛的重視，逐漸成為生物能源的研究熱點(diǎn)之一。
近年來(lái)，國(guó)內(nèi)對(duì)丙酮丁醇發(fā)酵的研究很多，主要圍繞著菌種誘變選育、基因工程改造、發(fā)酵工藝條件優(yōu)化和溶劑提取等發(fā)面進(jìn)行。丙酮丁醇工業(yè)發(fā)酵中溶劑對(duì)微生物細(xì)胞的毒性，是影響溶劑產(chǎn)量的一個(gè)關(guān)鍵限制因素。在所生產(chǎn)的丁醇、丙酮和乙醇三種溶劑中，丁醇是毒性最大的。當(dāng)其濃度達(dá)到13 g/L (Journal of Proteome Research2010, 9:3046 3061),利用梭菌C. acetobutylicum發(fā)酵就基本停止,造成低丁醇產(chǎn)量和低底物轉(zhuǎn)化率。據(jù)分析，如果丁醇發(fā)酵的產(chǎn)物濃度由12 g/L提高的19 g/L，產(chǎn)物分離的后續(xù)蒸餾成本將可降低一半(Curr Opin Biotechnol, 2008，19(5) : 420 429)?，F(xiàn)有技術(shù)報(bào)道 Cbeijerinckii BAlOl在MP2培養(yǎng)基以及發(fā)酵調(diào)控條件下的丁醇產(chǎn)物濃度可達(dá)到20. 9 g/L(總?cè)軇?2. 6 g/L)，是目前報(bào)道的產(chǎn)溶劑最高的菌株。為了提高產(chǎn)溶劑梭菌本身的丁醇耐受性，Tomas 等(Appl Environ Microbiol, 2003, 69(8): 4951 4965)在丙酮丁醇梭菌中過(guò)表達(dá)編碼熱激蛋白的#0萬(wàn)51基因，使丁醇對(duì)菌體細(xì)胞的抑制作用降低了 85%，并最終使產(chǎn)物濃度提高了 33%。Borden 等(Appl Environ Microbiol, 2007, 73(9): 3061 3068)在丙酮丁醇梭菌中過(guò)表達(dá)來(lái)源于基因組DNA文庫(kù)中篩選過(guò)程中確定的2個(gè)與丁醇耐受性相關(guān)的基因，即可使重組菌體細(xì)胞的丁醇耐受水平分別提高了 13%和81%。中科院微生物研究院毛紹明等(Journal of Proteome Research2010, 9: 3046 3061)利用原生質(zhì)體的方法以CZo1Striacetobutylicum DSM 1731為出發(fā)菌株篩選出一株能夠耐受19 g/L 丁醇的突變株Rh8，通過(guò)發(fā)酵調(diào)控手段，單批發(fā)酵總?cè)軇┊a(chǎn)量為19.2 g/L。
可見，提高菌株的丁醇的耐受性是提高丙酮丁醇產(chǎn)量的重要手段之一，在丙酮-丁醇發(fā)酵工業(yè)中，起著至關(guān)重要的作用，而利用連續(xù)培養(yǎng)馴化菌種是提高丁醇耐受性，增強(qiáng)發(fā)酵競(jìng)爭(zhēng)力的關(guān)鍵手段之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之一在于提供一株耐高濃度丁醇的丙酮丁醇梭菌{Clostridium aceteto),使其相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的產(chǎn)丁醇的丙酮丁醇梭菌而言具有丁醇耐受性極強(qiáng)、總?cè)軇┊a(chǎn)量極高的優(yōu)勢(shì)。
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之二在于提供所述耐高濃度丁醇的丙酮丁醇梭菌{Clostridium acetobutylicum)的應(yīng)用方法。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
一、本發(fā)明選育得到的一株丙酮丁醇梭桿菌菌株，分類命名為acetobutylicum BD 518，其保藏登記號(hào)為 CCTCC NO M 2010308。
本發(fā)明所述的高丁醇耐受丙酮丁醇梭菌ace tobu tyli cum BD 518的篩選方法是將丙酮丁醇梭菌出發(fā)菌株ace tobu tyli cum XY16 (CCTCC NO:M 2010011)經(jīng)連續(xù)培養(yǎng)馴化后，利用丁醇平板篩選得到丁醇耐受強(qiáng)的菌株，再經(jīng)厭氧瓶發(fā)酵篩選獲得丁醇比高和總?cè)軇┊a(chǎn)量高的丙酮丁醇梭菌目標(biāo)菌株，即命名為
acetobutylicum BD 518。
其具體的篩選步驟如下
a)連續(xù)培養(yǎng)馴化誘變將丙酮丁醇梭菌原始菌株CViostrit/iwffi acetobutylicumXY16 (CCTCC NO M 2010011)活化培養(yǎng)，即培養(yǎng)溫度33 37°C，在25 mL的肖特厭氧瓶裝液量為10 15 mL，培養(yǎng)時(shí)間12 18 h，得到處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液，接入含有新鮮培養(yǎng)基的自制連續(xù)培養(yǎng)裝置中連續(xù)培養(yǎng)，接種量為5% 15%(v/v)。以葡萄糖為限制因子，在培養(yǎng)基中加入10 30mL/L正丁醇馴化600 1000 h，初步篩選到耐丁醇的丙酮丁醇梭菌菌株;
b) 丁醇平板初篩將連續(xù)培養(yǎng)裝置(本發(fā)明人團(tuán)隊(duì)在先專利申請(qǐng)，專利申請(qǐng)公開號(hào)CN101709263A)中馴化篩選得到的菌液稀釋至OD6tltl=O. I I. 0涂布于含丁醇I. 7%的培養(yǎng)基平板上，33 37°C厭氧培養(yǎng)12 36 h，挑選出10 50株單菌落；
c) 丁醇平板復(fù)篩將步驟b)篩選的菌株接種于25 mL的肖特厭氧瓶裝液量10mL，充氮?dú)? min，33 37°C厭氧培養(yǎng)10 14 h，無(wú)菌生理鹽水制成濃度OD=O. I的菌懸液，吸取2 UL點(diǎn)滴到含有丁醇I. 7%的常規(guī)固體培養(yǎng)基平板上，在33 37°C溫度下厭氧培養(yǎng)12 24 h，挑選菌落較大的菌株；
d)厭氧瓶發(fā)酵篩選將步驟c)篩出的菌落接入種子培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度33 37°C，厭氧培養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間10 24 h，然后在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，接種量5% 15% (v/V)，發(fā)酵溫度33 37°C，厭氧發(fā)酵發(fā)酵時(shí)間60 80 h ;考察步驟c)篩選出的菌落發(fā)酵產(chǎn)總?cè)軇┑牧亢腿軇┲械亩〈急?，同時(shí)選出丁醇比和總?cè)軇┊a(chǎn)量最高的目標(biāo)菌株，即命名為Clostridium acetobu tylicum BD 518。
在上述篩選方法中步驟a)中所述的連續(xù)培養(yǎng)馴化方法中，優(yōu)選限制因子葡萄糖濃度為10 30g/L，馴化時(shí)間為600 IOOOh0
在上述篩選方法中步驟b)和c)所采用的常規(guī)固體培養(yǎng)基、碳源為葡萄糖、淀粉中的一種或者多種；氮源為有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物，其中無(wú)機(jī)含氮化合物為乙酸銨、氯化銨中的一種或多種，有機(jī)含氮化合物為蛋白胨、酵母粉、牛肉膏和玉米漿中的一種或多種；無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽、亞鐵鹽中的一種或多種，固體培養(yǎng)基中添加瓊脂。
在上述篩選方法中步驟d)所采用的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中，碳源為葡萄糖、木糖、蔗糖中的一種或幾種；氮源為有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物，其中無(wú)機(jī)含氮化合物為乙酸銨、氯化銨中的一種或多種，有機(jī)含氮化合物為蛋白胨、酵母粉、牛肉膏和玉米漿中的一種或多種；無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽、亞鐵鹽中的一種或多種；生長(zhǎng)因子為對(duì)氨基苯甲酸、維生素BI、生物素和玉米漿中的一種或幾種的混合。
二、本發(fā)明所述的ace tobu tyli cum BD 518在發(fā)酵生產(chǎn)丁醇中的應(yīng)用。
具體的，所述的發(fā)酵生產(chǎn)丁醇的方法包含如下步驟
I)平板培養(yǎng)將丙酮丁醇梭菌BD 518接種至平板培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度33 37°C，培養(yǎng)時(shí)間12 24 h ;
2)種子培養(yǎng)將平板培養(yǎng)的丙酮丁醇梭菌ace tobu tyli cum BD 518接種到種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度33 37°C，100 mL厭氧瓶裝液量40 60 mL，充氮?dú)? 4min，培養(yǎng)溫度33 37 °C,培養(yǎng)時(shí)間12 24h ；
3)發(fā)酵產(chǎn)丁醇將種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為體積百分比5 15%，充氮?dú)? 4 min，發(fā)酵溫度33 37°C，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為60 80 h。
其中，本發(fā)明所述的平板培養(yǎng)基應(yīng)理解為現(xiàn)有技術(shù)中任意適用于丙酮丁醇梭菌培養(yǎng)的常規(guī)平板培養(yǎng)基。例如，在本發(fā)明中所述平板培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分碳源
0.3% 1%、氮源0. 5% 1%、無(wú)機(jī)鹽0. 5% 0. 8%、瓊脂I. 5% 2%、其余為水；其中所述碳源為葡萄糖和淀粉中的一種或兩種的混合；所述氮源為有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物，其中無(wú)機(jī)含氮化合物為乙酸銨和氯化銨中的一種或兩種的混合，有機(jī)含氮化合物為蛋白胨、酵母粉、牛肉膏和玉米漿中的一種或幾種的混合；所述無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽和亞鐵鹽中的一種或幾種的混合。
本發(fā)明所述的種子培養(yǎng)基應(yīng)理解為現(xiàn)有技術(shù)中任意適用于丁酮丁醇梭菌培養(yǎng)的常規(guī)種子培養(yǎng)基。例如本發(fā)明所述種子培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分碳源0. 5% 1%、氮源0. 5% 1%、無(wú)機(jī)鹽0. 5% 0. 8%、其余為水；其中所述碳源為葡萄糖和淀粉中的一種或兩種的混合；所述氮源為有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物，其中無(wú)機(jī)含氮化合物為乙酸銨和氯化銨中的一種或兩種的混合，有機(jī)含氮化合物為蛋白胨、酵母粉、牛肉膏和玉米漿中的一種或幾種的混合；所述無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽和亞鐵鹽中的一種或幾種的混
口 o
本發(fā)明所述的發(fā)酵培養(yǎng)基應(yīng)理解為現(xiàn)有技術(shù)中任意適用于丁酮丁醇梭菌培養(yǎng)的常規(guī)發(fā)酵培養(yǎng)基。例如本發(fā)明所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分碳源4% 7%、氮源0. 1% 0. 3%、無(wú)機(jī)鹽0. 1% 0. 2%、生長(zhǎng)因子0. 05 0. 1%、其余為水；其中所述碳源為葡萄糖、木糖、蔗糖、阿拉伯糖和糖蜜中的一種或多種的混合；所述氮源為乙酸銨、氯化銨和酵母粉中的一種或多種的混合；所述無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽和亞鐵鹽中的一種或幾種的混合；所述生長(zhǎng)因子為對(duì)氨基苯甲酸、維生素BI、生物素和玉米漿中的一種或幾種的混合。
本發(fā)明的有益效果在于
本發(fā)明采用連續(xù)培養(yǎng)馴化篩選的丙酮丁醇梭菌，利用丁醇平板篩選出丁醇耐受強(qiáng)的菌株acetobutylicum BD 518,該菌株能高效地利用不同碳源發(fā)酵生產(chǎn)丁醇，丁醇耐受性強(qiáng)，糖的轉(zhuǎn)化率高、總?cè)軇┊a(chǎn)量高、丁醇的比例高；在51發(fā)酵罐中，以葡萄糖為碳源，總?cè)軇┊a(chǎn)量和丁醇產(chǎn)量分別達(dá)到了 21. lg/L和13. 2g/L，分別比出發(fā)菌提高了16. 6%和15. 8%，耐受性提高到18g/L，比出發(fā)菌株提高了 38. 5%，具有重大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。


圖I為丙酮丁醇梭菌連續(xù)培養(yǎng)馴化篩選的重要參數(shù)曲線。
本發(fā)明的微生物分類命名為丙酮丁醇梭菌命名為CViostrit/iwffi acetobutylicumBD 518，保藏單位全稱為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，簡(jiǎn)稱CCTCC，保藏日期為2010年11月23 號(hào)，保藏編號(hào)為 CCTCC NO M 2010308。
具體實(shí)施方式
根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求
書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
實(shí)施例I
本實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明所述的ace tobu tyli cum BD518的篩選方法。
將丙酮丁醇梭菌CViostrit/i應(yīng)acetobutylicum XY16原始菌株活化培養(yǎng),培養(yǎng)溫度37°C，50 mL肖特厭氧瓶裝液量為15 20 mL，充氮?dú)? min，培養(yǎng)時(shí)間12 18 h，得到生長(zhǎng)旺盛、菌體粗壯的菌液；接入裝液量100 300 mL的自制連續(xù)培養(yǎng)裝置中，接種量為5% 15%(v/v)，培養(yǎng)12 18 h后，流加含丁醇的新鮮培養(yǎng)基馴化選育。如附圖I所示，隨著丁醇濃度的不斷增加，菌株的OD逐漸下降，總馴化時(shí)間為744 h。在馴化時(shí)間為472 h，600 h，700 h時(shí)分別取樣，涂布平板，進(jìn)行高丁醇耐受性突變株的篩選。
在篩選方法中，所使用的培養(yǎng)基配方(％為質(zhì)量百分比)
(I)固體平板培養(yǎng)基酵母粉0. 3%，蛋白胨0. 5%，可溶性淀粉1%，乙酸銨0. 2%，氯化鈉0. 2%，七水合硫酸鎂0. 3%，磷酸二氫鉀0. 1%，磷酸氫二鉀0. 1%，七水合硫酸亞鐵0. 01%,瓊脂 I. 5%，pH 6。
(2) 丁醇平板培養(yǎng)基酵母粉0. 3%，蛋白胨0. 5%，可溶性淀粉1%，乙酸銨0. 2%，氯化鈉0. 2%，七水合硫酸鎂0. 3%，磷酸二氫鉀0. 1%，磷酸氫二鉀0. 1%，七水合硫酸亞鐵0. 01%,瓊脂 1.5%，丁醇 I. 7%, pH 6。
(3)種子培養(yǎng)基酵母粉0. 3%，蛋白胨0. 5%，可溶性淀粉1%，乙酸銨0. 2%，氯化鈉0. 2%，七水合硫酸鎂0. 3%，磷酸二氫鉀0. 1%，磷酸氫二鉀0. 1%，七水合硫酸亞鐵0. 01%, pH6。
(4)搖瓶發(fā)酵篩選培養(yǎng)基葡萄糖6%，乙酸銨0. 22%，磷酸二氫鉀0. 05%,磷酸氫二鉀0. 05%,氯化鈉0. 001%,七水合硫酸鎂0. 02%,七水合硫酸亞鐵0. 001%, 一水合硫酸錳
0.001%,玉米漿 0. 1%，pH 6. 6。
篩選步驟
I、丁醇平板初篩
將連續(xù)培養(yǎng)裝置中馴化篩選得到的菌液稀釋至OD6tltl=O. I I. 0涂布于含丁醇
1.7%的培養(yǎng)基平板上，33 37°C厭氧培養(yǎng)12 36 h，挑選出50株單菌落。
2、丁醇平板復(fù)篩[0044]將篩選的菌株接種于25mL的肖特厭氧瓶裝液量10 mL,充氮?dú)? min, 33 37°C厭氧培養(yǎng)10 14 h，無(wú)菌生理鹽水制成濃度OD=O. I的菌懸液，吸取2 UL點(diǎn)滴到含有丁醇
I.7%的常規(guī)固體培養(yǎng)基平板上，在33 37°C溫度下厭氧培養(yǎng)12 24 h，挑選出生長(zhǎng)好的的菌落；最終得到3株丁醇耐受性較高的菌株，分別為BD518，BD1202和BD2001。
3、搖瓶發(fā)酵篩選
將突變株BD518，BD1202，BD2001和原始菌株XY16接入種子培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度37°C，250 mL肖特厭氧瓶裝液量100 mL，充氮?dú)? min，培養(yǎng)時(shí)間16 h。然后在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，接種量10%(v/v)，發(fā)酵溫度37°C，100 mL肖特厭氧瓶裝液量50 mL，發(fā)酵時(shí)間72 h后檢測(cè)各菌株的總?cè)軇┊a(chǎn)量和丁醇產(chǎn)量如表I所示
表I篩選培養(yǎng)基中BD518，BD1202, BD2001和原始菌發(fā)酵結(jié)果
權(quán)利要求
1.一株丙酮丁醇梭桿菌菌株，其分類命名為CViostrit/itt acetobutylicum BD 518,其保藏登記號(hào)為CCTCC NO M 2010308。
2.權(quán)利要求
I所述的acetobu tyli cum BD 518在發(fā)酵生產(chǎn)丁醇中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的應(yīng)用，其特征在于具體應(yīng)用步驟如下 .1)平板培養(yǎng)將acetobu tyli cum BD 518接種至平板培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度33 37 °C,培養(yǎng)時(shí)間12 24 h ; .2)種子培養(yǎng)將平板培養(yǎng)的acetobu tyli cum BD 518接種到種子培養(yǎng)基中，100 mL的厭氧瓶裝液量40 60mL，充氮?dú)? 4min，培養(yǎng)溫度33 37で，培養(yǎng)時(shí)間.12 24 h ; .3)發(fā)酵產(chǎn)丁醇將種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為體積比5 15%，充氮?dú)?2 4min，發(fā)酵溫度33 37°C，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為60 80 h。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的平板培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分比的組分碳源0. 3% 1%、氮源0. 5% 1%、無(wú)機(jī)鹽0. 5% 0. 8%、瓊脂I. 5% 2%、其余為水；所述的碳源為葡萄糖、淀粉和纖維酸解糖液中的ー種或多種；所述氮源為有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物，其中無(wú)機(jī)含氮化合物為こ酸銨和氯化銨中的ー種或兩種的混合，有機(jī)含氮化合物為蛋白胨、酵母粉、牛肉膏和玉米漿中的ー種或幾種的混合；所述的無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽、亞鐵鹽中的ー種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的種子培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分比的組分碳源0. 5% 1%、氮源0. 5% 1%、無(wú)機(jī)鹽0. 5% 0. 8%、其余為水；所述的碳源為淀粉和葡萄糖的ー種或兩種的混合；所述氮源為有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物，其中無(wú)機(jī)含氮化合物為こ酸銨和氯化銨中的ー種或兩種的混合，有機(jī)含氮化合物為蛋白胨、酵母粉、牛肉膏和玉米漿中的ー種或幾種的混合；所述的無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽、亞鐵鹽中的ー種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分比的組分碳源4% 7%、氮源0. 1% 0. 3%、無(wú)機(jī)鹽0. 1% 0. 2%、生長(zhǎng)因子0. 05% 0. 1%、其余為水；所述的碳源為葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、木質(zhì)纖維酸解糖液和木質(zhì)纖維酶解糖液中的ー種或多種；所述的氮源為こ酸銨、氯化銨和酵母粉中的ー種或多種；所述的無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、磷酸鹽、亞鐵鹽中的ー種或多種；所述生長(zhǎng)因子為對(duì)氨基苯甲酸、維生素BI、生物素和玉米漿中的ー種或幾種的混合。
專利摘要
本發(fā)明涉及一株丙酮丁醇梭桿菌菌株及其應(yīng)用，屬于生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明的丙酮丁醇梭桿菌菌株分類命名為ClostridiumacetobutylicumBD518，其保藏登記號(hào)為CCTCCNOM2010308。本發(fā)明通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)馴化篩選得到一株高濃度丁醇耐受性菌株BD518，其丁醇耐受性達(dá)到了18g/L，比出發(fā)菌株(13g/L)提高了38.5%；以葡萄糖為碳源時(shí)，在5L發(fā)酵罐中總?cè)軇┖投〈籍a(chǎn)量分別達(dá)到21.1g/L和13.2g/L，分別比出發(fā)菌株提高了16.6%和15.8%；其丁醇耐受性強(qiáng)，溶劑產(chǎn)量高，重復(fù)性好，具有重大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
文檔編號(hào)C12R1/145GKCN102226163 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 201110161533
公開日2012年8月29日 申請(qǐng)日期2011年6月16日
發(fā)明者吳昊, 姜岷, 杜騰飛, 歐陽(yáng)平凱, 賀愛永, 郭亭, 陳可泉, 韋萍 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (3), 非專利引用 (1),