本申請涉及生物檢測，具體涉及一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的核酸組合、包含其的試劑盒及其用途。

背景技術(shù)：

1、急性出血性結(jié)膜炎（ahc）屬于法定報告?zhèn)魅静≈械谋悅魅静?，主要通過接觸傳染傳播，極容易發(fā)生聚集性疫情。該病還具有潛伏期短、起病急、眼刺激癥狀重、結(jié)膜充血、傳染性較強、傳播易實現(xiàn)等特點，全世界范圍內(nèi)均有流行。

2、在夏秋季節(jié)一個地區(qū)、單位集中出現(xiàn)多數(shù)急性結(jié)膜炎患者或醫(yī)院門診、醫(yī)務(wù)室驟然出現(xiàn)眾多潛伏期極短、急劇發(fā)病、接觸傳播很快的急性結(jié)膜炎患者，須高度警惕急性出血性結(jié)膜炎的流行。

3、急性出血性結(jié)膜炎的診斷需依據(jù)病史、接觸史、流行病學(xué)史結(jié)合臨床癥狀、體征作出ahc臨床診斷。急性出血性結(jié)膜炎確切診斷須待實驗室病原學(xué)證實：（一）結(jié)膜拭子涂擦或結(jié)膜刮取物培養(yǎng)分離出ev70或ca24v。（二）結(jié)膜刮片間接免疫熒光技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測出病毒抗原。（三）雙相血清學(xué)檢查。病人恢復(fù)期血清抗ev70或抗ca24v?抗體比急性期血清抗體滴度升高4倍或4倍以上。（四）逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)法測出結(jié)膜標(biāo)本ev70。臨床診斷加以上實驗室病原檢查任何一項陽性者為確診病例。急性出血性結(jié)膜炎現(xiàn)有的核酸診斷方法只基于ev70和ca24v這兩種主要的病原進行核酸檢測。

4、因此亟需建立能夠同時檢測出多種急性出血性結(jié)膜炎病原體的方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、基于此，有必要至少提供一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的核酸組合、包含其的試劑盒及其用途。

2、在本申請的第一方面，提供一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的核酸組合，所述核酸組合包括選自如下構(gòu)成的群組中的一組或多組：引物探針組1：序列如seq?id?no:1~3所示用于檢測腸道病毒70型（ev70）的上下游引物和探針；引物探針組2：序列如seq?idno:?4~6所示用于檢測柯薩奇病毒a組24型變種（ca24v）的上下游引物和探針；引物探針組3：序列如seq?id?no:?7~9所示用于檢測腺病毒b亞屬（adv?b）的上下游引物和探針；以及，引物探針組4：序列如seq?id?no:?10~12所示用于檢測腺病毒d亞屬（adv?d）的上下游引物和探針。

3、在本申請的第二方面，提供一種試劑盒，其包含如第一方面所述的核酸組合。

4、在本申請的第三方面，提供一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的方法，包括如下步驟：提取待測樣本的核酸，得到核酸樣本；使用第二方面所述的試劑盒對所述核酸樣本進行pcr擴增；以及，獲得并分析結(jié)果。

5、本申請示例性提供一種高效快速低成本鑒別急性出血性結(jié)膜炎病原體的方法，可以采用熒光定量pcr方法，對患者樣本提取核酸，針對腸道病毒70型（ev70）、柯薩奇a24型變異株（ca24v）和腺病毒保守區(qū)域進行擴增，達到快速檢測和鑒別引起急性出血性結(jié)膜炎病原體的目的。該方法的優(yōu)勢至少在于檢測成本、檢測效率高的同時兼顧了靈敏度和特異性，對于急性出血性結(jié)膜炎的流行病學(xué)檢測具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的核酸組合，其特征在于，所述核酸組合包括選自如下構(gòu)成的群組中的一組或多組：

2.如權(quán)利要求1所述的核酸組合，其特征在于，其還包括引物探針組5：序列如seq?idno:?13~15所示用于檢測gapdh的上下游引物和探針。

3.一種試劑盒，其特征在于，其包含如權(quán)利要求1或2所述的核酸組合。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述引物探針組1、所述引物探針組2和用于檢測腺病毒的引物探針組均各自標(biāo)記有熒光報告基團且彼此之間互不相同且互不干擾；

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光報告基團選自由fam、hex、vic、rox、cy5和quasar?705構(gòu)成的群組。

6.如權(quán)利要求3~5中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含陽性質(zhì)控品和/或陰性質(zhì)控品；

7.一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，在進行pcr擴增的每個反應(yīng)體系中，每對所述引物對的濃度均為100?nm~500?nm，每個所述探針的濃度均為50?nm~250?nm。

9.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于，在進行pcr擴增的每個反應(yīng)體系中，所述dna聚合酶的濃度為5?u/μl~15u?/μl，所述逆轉(zhuǎn)錄酶的濃度為5?u/μl~10?u/μl，mg2+的濃度為4?mm~6?mm，dntp(u)s的濃度為0.2?mm~0.4?mm。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法滿足如下1）~2）所示條件中的一項或多項：

技術(shù)總結(jié)
本申請公開了一種用于檢測急性出血性結(jié)膜炎病原體的核酸組合、包含其的試劑盒及其用途。該核酸組合包括如下一組或多組：引物探針組1：序列如SEQ?ID?NO:1~3所示用于檢測腸道病毒70型的上下游引物和探針；引物探針組2：序列如SEQ?ID?NO:4~6所示用于檢測柯薩奇病毒A組24型變種的上下游引物和探針；引物探針組3：序列如SEQ?ID?NO:7~9所示用于檢測腺病毒B亞屬的上下游引物和探針；以及，引物探針組4：序列如SEQ?ID?NO:10~12所示用于檢測腺病毒D亞屬的上下游引物和探針。使用該核酸組合進行檢測的優(yōu)勢至少在于檢測成本、檢測效率高的同時兼顧了靈敏度和特異性。

技術(shù)研發(fā)人員：喬同,孫青芝,鄭洋,鐘禮立,柳懷湘,譚德勇,吳康,戴立忠
受保護的技術(shù)使用者：圣湘生物科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9