本技術(shù)涉及對(duì)蝦分子免疫學(xué)的領(lǐng)域，尤其是涉及一種抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、中國(guó)對(duì)蝦是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，自1993年對(duì)蝦白斑癥病毒?。╳hitespot?syndrome?virus，wssv）爆發(fā)以來(lái)，該病一直是我國(guó)養(yǎng)蝦業(yè)發(fā)展的嚴(yán)重制約因素。因此，研究中國(guó)對(duì)蝦的免疫機(jī)理變得尤為迫切和需要。

2、對(duì)蝦血藍(lán)蛋白（shrimp?hemocyanin，shc）是甲殼動(dòng)物血淋巴的重要組成部分，具有多種生理功能。除了攜帶氧氣外，血藍(lán)蛋白還具有酚氧化物酶活性、抗細(xì)菌和抗病毒活性、金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)儲(chǔ)存、滲透壓調(diào)節(jié)、蛻皮激素的運(yùn)輸以及參與表皮的固化等作用。因此，甲殼動(dòng)物血藍(lán)蛋白的研究成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)領(lǐng)域。

3、甲殼動(dòng)物通過(guò)調(diào)節(jié)血藍(lán)蛋白的濃度和特性來(lái)執(zhí)行各種生理功能。因此，利用抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體可以方便快捷地檢測(cè)和監(jiān)測(cè)中國(guó)對(duì)蝦體內(nèi)血藍(lán)蛋白濃度的波動(dòng)變化規(guī)律。

4、目前文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體主要是通過(guò)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，但是雜交瘤細(xì)胞表達(dá)存在表達(dá)不穩(wěn)定的技術(shù)問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本技術(shù)的目的是為了解決上述的雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的不穩(wěn)定問(wèn)題而提供一種抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體，該抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞expi293中穩(wěn)定表達(dá)，且具有很好的特異性，可以作為抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體檢測(cè)的陽(yáng)性內(nèi)參應(yīng)用。

2、本技術(shù)的技術(shù)方案

3、第一方面，本技術(shù)提供一種抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體，所述的抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體為anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3或anti-shc-6d6；

4、編碼所述anti-shc-2b3的輕鏈的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，所述anti-shc-2b3的輕鏈的核苷酸序列含有輕鏈可變區(qū)vl和輕鏈恒定區(qū)cl；編碼所述anti-shc-2b3的重鏈的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，所述anti-shc-2b3的重鏈的核苷酸序列含有重鏈可變區(qū)vh和重鏈恒定區(qū)ch1；上述seq?id?no.1對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.3所示，seq?idno.2對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.4所示；

5、編碼所述anti-shc-5c8的輕鏈的核苷酸序列如seq?id?no.5所示，所述anti-shc-5c8的輕鏈的核苷酸序列含有輕鏈可變區(qū)vl和輕鏈恒定區(qū)cl；編碼所述anti-shc-5c8的重鏈的核苷酸序列如seq?id?no.6所示，所述anti-shc-5c8的重鏈的核苷酸序列含有重鏈可變區(qū)vh和重鏈恒定區(qū)ch1；上述seq?id?no.5對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示，seq?idno.6對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.8所示；

6、編碼所述anti-shc-1a1的輕鏈的核苷酸序列如seq?id?no.9所示，所述anti-shc-1a1的輕鏈的核苷酸序列含有輕鏈可變區(qū)vl和輕鏈恒定區(qū)cl；編碼所述anti-shc-1a1的重鏈的核苷酸序列如seq?id?no.10所示，所述anti-shc-1a1的重鏈的核苷酸序列含有重鏈可變區(qū)vh和重鏈恒定區(qū)ch1；上述seq?id?no.9對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.11所示，seqid?no.10對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.12所示；

7、編碼所述anti-shc-14b3的輕鏈的核苷酸序列如seq?id?no.13所示，所述anti-shc-14b3的輕鏈的核苷酸序列含有輕鏈可變區(qū)vl和輕鏈恒定區(qū)cl；編碼所述anti-shc-14b3的重鏈的核苷酸序列如seq?id?no.14所示，所述anti-shc-14b3的重鏈的核苷酸序列含有重鏈可變區(qū)vh和重鏈恒定區(qū)ch1；上述seq?id?no.13對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?idno.15所示，seq?id?no.14對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.16所示；

8、編碼所述anti-shc-6d6的輕鏈的核苷酸序列如seq?id?no.17所示，所述anti-shc-6d6的輕鏈的核苷酸序列含有輕鏈可變區(qū)vl和輕鏈恒定區(qū)cl；編碼所述anti-shc-6d6的重鏈的核苷酸序列如seq?id?no.18所示，所述anti-shc-6d6的重鏈的核苷酸序列含有重鏈可變區(qū)vh和重鏈恒定區(qū)ch1；上述seq?id?no.17對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.19所示，seq?id?no.18對(duì)應(yīng)的氨基酸序列如seq?id?no.20所示；

9、上述的anti-shc-2b3的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.21所示、cdr2如seq?id?no.22所示、cdr3如seq?id?no.23所示；anti-shc-2b3的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.24所示、cdr2如seq?id?no.25所示、cdr3如seq?id?no.26所示；

10、anti-shc-5c8的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.27所示、cdr2如seq?id?no.28所示、cdr3如seq?id?no.29所示；anti-shc-5c8的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.30所示、cdr2如seq?id?no.31所示、cdr3如seq?id?no.32所示；

11、anti-shc-1a1的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.33所示、cdr2如seq?id?no.34所示、cdr3如seq?id?no.35所示；anti-shc-1a1的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.36所示、cdr2如seq?id?no.37所示、cdr3如seq?id?no.38所示；

12、anti-shc-14b3的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.39所示、cdr2如seq?id?no.40所示、cdr3如seq?id?no.41所示；anti-shc-14b3的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.42所示、cdr2如seq?id?no.43所示、cdr3如seq?id?no.44所示；

13、anti-shc-6d6的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.45所示、cdr2如seq?id?no.46所示、cdr3如seq?id?no.47所示；anti-shc-6d6的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列中的cdr1如seq?id?no.48所示、cdr2如seq?id?no.49所示、cdr3如seq?id?no.50所示。

14、通過(guò)采用上述技術(shù)方案，該抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3和anti-shc-6d6的抗原決定簇均位于對(duì)蝦血藍(lán)蛋白分子量為73kda和75kda的兩個(gè)亞基上，因此均具有很好的特異性。

15、第二方面，一種表達(dá)抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3或anti-shc-6d6的雜交瘤細(xì)胞。

16、第三方面，本技術(shù)提供一種含有編碼上述的抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3或anti-shc-6d6的基因的重組質(zhì)粒pcdna3.1。

17、第四方面，本技術(shù)提供一種含有重組質(zhì)粒pcdna3.1的重組大腸桿菌dh5α。

18、第五方面，本技術(shù)提供一種含有重組質(zhì)粒pcdna3.1的重組expi293細(xì)胞。

19、第六方面，本技術(shù)提供一種上述的抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體作為陽(yáng)性內(nèi)參，用于定性判斷經(jīng)中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白免疫的動(dòng)物免疫成功與否、或定量檢測(cè)經(jīng)中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白免疫的動(dòng)物中抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體的含量。

20、本技術(shù)的有益技術(shù)效果

21、本技術(shù)的一種抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3和anti-shc-6d6，均可以通過(guò)重組expi293細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，且得到的抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體經(jīng)純化后純度均≥90%。

22、進(jìn)一步，本技術(shù)的一種抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3和anti-shc-6d6均具有很好的特異性，與抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體特異性結(jié)合的抗原決定簇均位于對(duì)蝦血藍(lán)蛋白分子量為73kda和75kda的兩個(gè)亞基上。

23、進(jìn)一步，本技術(shù)的一種抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體anti-shc-2b3、anti-shc-5c8、anti-shc-1a1、anti-shc-14b3和anti-shc-6d6，均可作為陽(yáng)性內(nèi)參，用于定性判斷經(jīng)中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白免疫的動(dòng)物免疫成功與否、或定量檢測(cè)經(jīng)中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白免疫的動(dòng)物中抗中國(guó)對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體的含量。